Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Long-koodaavaa RNA: t (lncRNAs) pelata laajaa rooleja geenisäätelyn ja solujen prosesseja. Kuitenkin toiminnalliset roolit lncRNAs kolorektaalisyövässä (CRC) ei ole vielä täysin selvitetty. Tavoitteena tässä tutkimuksessa oli mitata tasoa lncRNA 91H ilmaisun CRC ja arvioida sen kliinistä merkitystä ja biologisia rooleja kehittymistä ja etenemistä CRC.

Methods

91H ilmaisun ja kopio numero vaihtelu (CNV) mitattiin 72 CRC kasvain kudosten ja viereisten normaaleissa kudoksissa reaaliaikaisella PCR: llä. Biologinen roolit 91H arvioitiin MTT, naarmu haava määritys, muuttoliike ja invaasio määrityksiä, ja virtaussytometria.

Tulokset

91H oli merkittävästi yli-ilmennetään syöpäkudoksen ja CRC solulinjoissa verrattuna viereisten normaalin kudoksen ja normaalin ihmisen suoliston epiteelisolulinja. Lisäksi 91H yliekspressio oli tiiviisti etäinen etäpesäke ja huonon ennusteen potilailla, joilla on CRC, paitsi CNV on 91H. Monimuuttuja-analyysi osoitti, että 91H ilme oli itsenäinen prognostinen indikaattori sekä kaukainen etäpesäke. Meidän in vitro viittasivat siihen, että knockdovvn 91H estivät proliferaatiota, migraatiota, ja invasiivisuus CRC soluja.

Johtopäätökset

91H ollut tärkeä rooli molekyyli etiologiassa CRC ja voidaan pitää uusi ennuste indikaattori potilailla, joilla on CRC.

Citation: Deng Q, hän B, Gao T, Pan Y, Sun H, Xu Y, et al. (2014) Up-asetus 91H Edistää tuumorimetastaasin ja ennustaa huono ennuste for Potilaat, joilla on peräsuolen syövän. PLoS ONE 9 (7): e103022. doi: 10,1371 /journal.pone.0103022

Editor: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 15 huhtikuu 2014; Hyväksytty: 23 Kesäkuu 2014; Julkaistu: 24 heinäkuu 2014

Copyright: © 2014 Deng et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Hanke tukivat avustuksia National Nature Science Foundation of China (no. 81172141, 81200401), Nanjing Science and Technology komitea Project ( no.201108025), Nanjing Medical Technology Development Project (no. ZKX11025), Nanjing Health Young Talent Project, Jiangsun maakunnan Key Medical kykyjä SKW, Nanjing lääketieteen ja Technique Development Foundation on YQP (No. QRX11255) ja B.S.H. (No. QRX11254). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on yleinen syy syövän kuoleman maailmassa takia myöhässä kasvaimen esitys ja nopea eteneminen, noin 14,1 miljoonaa uutta syöpätapausta ja 8,2 miljoonaa syöpäkuolemista 2012 maailmanlaajuisesti [1]. Taloudellisesti kehitysmaissa, CRC on yhä yleisempää, erityisesti Kiinassa [2]. Huolimatta saavutettu merkittävää edistymistä diagnoosi ja hoito CRC viime vuosina, koko 5 vuoden pysyvyys on edelleen epätyydyttävä johtuen etäpesäkkeiden johtavat huonoihin tuloksiin [3]. Siksi etsiä uusia molekyylimarkkereina tai tekijät on välttämätön ja kiireellinen varhaistoteamiseen ennen etäinen etäpesäke ilmestyy ja ennustaa ennusteen potilailla, joilla on CRC.

Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että lncRNAs, 200 nukleotidin pituisia, leikkiä on ratkaiseva rooli syövän kehittymisen ja etenemisen. Huolimatta huonommin ymmärrystä lncRNAs verrattuna MikroRNA [3], [4], [5], varaamiseen todisteet osoittavat, että lncRNAs välittämä biologian voisi olla mukana sääntelyn erilaisten solun prosesseja, kuten solun kasvua ja apoptoosin, kantasolujen pluripotenttisuus ja kehittäminen, meioottisiin merkintä ja telomeeripituuden [6], [7], [8], [9], [10], [11]. Kuitenkin samanlainen proteiinia koodaavan geenien ja micorRNAs, lncRNAs voi toimia onkogeenien tai tuumorisuppressiogeeneksi, ja poikkeava ilmentyminen niistä liittyi syövän synnyn. Korkea ilmentyminen PVT-1 ilmentymisen syöpäkudokset oli pidettävä itsenäisenä riskitekijänä eloonjäämisaste CRC potilaista [12], ja hotair, toimii onkogeenin tai tuumorisuppressorina, oli mukana epigeneettisellä asetuksessa syöpiin [7], [13], jota pidettiin vahvan ennuste maker jotka vaikuttivat ennustaa etäpesäkkeitä ja potilaiden eloonjäämisen ensisijainen rintasyövän [7].

91H, H19 antisense-RNA, oli uusi lncRNA joka sijaitsi asentoa H19 /IGF2 lokuksen (Liittymisnumero NC_000011.9) kanssa 119,329 kbs pitkä. Transkriptio 91H yliekspressoitui ihmisen rintasyövän joka osallistui säätelyyn IGF2 ilmentymisen trans [14]. Kuitenkin vain harvat tutkimukset ovat tutkineet toimintoja 91H muissa muodoissa ihmisen syövän, mukaan lukien CRC. Tutkia mahdollisuuksia biologisen toiminnot 91H kehittämiseen ja etenemiseen CRC, nykyinen tutkimus tehtiin tutkimalla ekspressiokuviota 91H CRC kasvain kudosten ja viereisten normaaleista kudoksista ja tutkimalla biologisia toimintoja arviointi invasiivisuus, muuttoliike, ja apoptoosin CRC solujen 91H knockdown in vitro.

Materiaalit ja menetelmät

Kliiniset näytteet ja solulinjoissa

72 kasvain kudosten ja sovitettu viereisten normaaleissa kudoksissa saatiin kirjoilla CRC potilaat, joille tehtiin leikkaus Nanjing ensimmäinen sairaala Affiliated Nanjing Medical University, välillä 2011 ja 2014. erityisesti viereisen normaaleissa kudoksissa otettiin 5-10 cm: n päässä kasvainkudoksessa. Kaikki näytteet jäädytettiin välittömästi nestemäisessä typessä leikkauksen jälkeen ja säilytettiin -80 ° C: ssa, kunnes DNA: n ja RNA: n uutto. Ei potilaat saivat kemoterapiaa tai sädehoitoa ennalta toiminta. Kliiniset tiedot näistä potilaista kerättiin kuten ikä, sukupuoli, kasvaimen sijainti, TNM vaiheessa kasvaimen ja microstellite epävakaus (MSI) asemaa edellisessä tutkimuksessa [15] raportoitu. Seurannan pituus vaihteli 2 kuukaudesta 3 vuoteen, ja keskiarvo oli 26,6 kuukautta. Kaikki näytteet saatiin potilaiden kirjallisen tietoisen suostumuksen ja histologisesti vahvistettu. Lääketieteellinen eettinen komitea on Nanjing ensimmäinen sairaala Affiliated Nanjing Medical University hyväksyi tutkimuksen.

Solulinjat HCT8, HT29, HCT116, SW620 (ihmisen paksusuolen syöpä solulinjoja) ja FHC (normaali ihmisen suoliston epiteelisolujen linja) saatiin Shanghai Cell Collection, Kiinan tiedeakatemia. Kaikki edellä mainitut solulinjoja pidettiin DMEM (Hyclone, USA), joka sisälsi 10% naudan sikiön seerumia (FBS; Hyclone), ja viljeltiin 37 ° C: ssa kostutetussa ilmakehässä, jossa oli 5% CO

2.

Extraction kokonais-RNA: n ja genomisen DNA: n, cDNA-synteesi ja qRT-PCR

kokonais-RNA: n ja genomisen DNA: n (gDNA) uutettiin kudoksista ja solulinjoissa käyttämällä Trizol-reagenssia (Invitrogen, CA) ja EZNA Tissue DNA Kit (Omega, USA) seuraten valmistajan protokollaa erikseen. cDNA syntetisoitiin käyttäen PrimeScript RT reagenssi Kit gDNA Eraser (Takara, Kiina) ja käytettiin 91H ekspressiotason analyysi kvantitatiivinen reaaliaikainen PCR (qRT-PCR) seuraavilla alukkeilla: eteenpäin, 5’GCTTGTCAGTAGAGTGCGCC-3; ja kääntää, 5-CATCCAGTTGACCGAGCTTG-3. β-aktiini käytettiin sisäisenä kontrollina seuraavat sekvenssit: eteenpäin, 5-CAAGATCATTGCTCCTCCTGA-3; reverse: 5-AGTCCGCCTAGAAGCATTTG-3. 2

-ΔΔCt-menetelmä suoritettiin laskea suhteellinen määrä 91H verrattuna β-aktiinin ilmentymistä. qRT-PCR suoritettiin käyttäen SYBR Esisekoite Ex TagTM II (Takara, Kiina) ja ABI 7500 System (Applied Biosystems, USA).

Kopioi numero vaihtelu tunnistaminen 91H

analyysi CNV varten gDNA suoritettiin myös qRT-PCR: llä, joka on kuvattu edellä menetelmän. RNaasi P käytettiin viite-geenin. Kopioluvun 91H laskettiin seuraavan yhtälön 2 x 2

-ΔΔCT.

transfektio siRNA

RNA-interferenssi suoritettiin käyttäen synteettistä siRNA-dupleksit, kuten on kuvattu aiemmissa tutkimuksissa [ ,,,0],16], [17]. Kaksi synteettistä siRNA-dupleksit (si-91H: si91H1, 5′-GGCGUCAUUCUGAUGGGACTT-3 ’ja si91H2, 5’UUCAGGAGCUUAAGAUGCUTT-3′), joka vastaa 91H RNA-sekvenssit, ja negatiivinen kontrolli (si-NC, 5’-CGUGGGUGGAUGCAUGGAUTT-3 ’) transfektoitiin HCT-116-solujen kanssa 400 pmol vastaavasti käyttäen Lipofectamine 2000 transfektioreagenssia (Invitrogen, CA) 6-kuoppaiselle levylle. 48 tunnin kuluttua, 91H ilmentymistasot tutkittiin kautta qRT-PCR: llä.

Soluproliferaatiomääritys

transfektion jälkeen 48 tuntia kuten edellä on kuvattu, infektoitiin HCT-116-solut myöhemmin korjattu soluproliferaatiomääritys (MTT-määritys) seuraten valmistajan protokollaa. Infektoidut solut (1 x 10

4) maljattiin tasapohjaisille 96-kuoppaisille maljoille 100 gl DMEM per kuoppa. Kun oli inkuboitu 6, 24, 48, 72 ja 96 tuntia vastaavasti, 10 ui MTT lisättiin kuhunkin kuoppaan, sitten väliaine poistettiin 4 tunnin kuluttua viljelyn ja sen jälkeen täydennetty 150 ui DMSO: kuoppaa kohti. Kolorimetrinen analyysi suoritettiin mikrolevylukijalla 490 nm: n aallonpituudella. Kukin alaryhmä toistettiin viisi kaivoja.

Muuttoliike ja Invasion määritykset

migraatiokokeessa, tartunnan HCT-116-solut (1 x 10

5 200 ui: aan seerumitonta DMEM) , kuten aiemmin on kuvattu, ympättiin ylempään kammioon transwell maljoja 24-kuopan formaatissa 8 mm halkaisijaltaan (Corning Costar, USA). 600 ui DMEM, joka sisälsi 5% FBS: ää lisättiin alaosaan kuin kemoattraktantti. 24 tunnin kuluttua viljelyn, solut kiinnitettiin metanolilla ja värjättiin kristalli- violetilla. Jäljelle jääneet solut poistettiin yläosasta kalvon pumpulipuikolla. Sitten solut, jotka vaelsivat läpi ylemmän kammion laskettiin viidellä satunnaisesti aloilla valomikroskoopilla, ja keskimääräinen arvo viidellä ilmaistiin.

invaasiomääritys, ylä- kammiot päällystettiin tyvikalvon Matrigel (40 mg /ml, Becton-Dickinson, USA) 37 ° C: ssa 30 minuutin ajan. Infektoidut solut (3 x 10

5) seerumittomalla DMEM lisättiin ylempään kammioihin, alhaalta kammiot täytettiin DMEM, joka sisälsi 10% FBS: ää. 24 tunnin inkubaation jälkeen solut, jotka tunkeutuivat kääntöpuolelle alkuun kammioiden kiinnitettiin, värjättiin ja laskettiin valomikroskoopilla. Kukin invaasiomääritys suoritettiin kolmen tai useamman rinnakkaista.

Scratch haava määritys

Six-kuoppaisia ​​levyjä päällystettiin tartunnan HCT-116-soluissa. Haavat luotiin konfluenteissa soluissa käyttäen 10 pl pipetin kärki 48 tuntia transfektion jälkeen. Tämän jälkeen vapaasti kelluvat solut ja jätteet poistettiin käyttäen PBS: ää, ja FBS-väliainetta lisättiin. Sitten havaittiin haavan paranemista eri aikaväleillä ja valokuvattiin edustava kaapia ratoihin valomikroskoopilla. Kukin koe toistettiin kolme kertaa.

Apoptosis analyysi

Solun apoptoosia määritettiin käyttämällä virtaussytometriaa värjäyksen jälkeen anneksiini V-FITC: llä ja propidiumjodidilla (PI, BD Bioscience, CA). HCT-116-solut infektoitiin si-91H tai si-NC 6-kuoppalevylle. Apoptoosi analysoitiin 48 tunnin kuluttua tartunnasta. Kaikki apoptoosin määritykset suoritettiin kolmena kappaleena.

Tilastollinen

Optimal cut-off tasoa 91H syöpäsoluissa /noncancerous laskettiin soveltamalla vastaanotin toimii ominaiskäyrä analyysi (ROC) [18], [19]. Vertailu jatkuvan analysoitiin käyttäen itsenäistä

t

-testi, ja kategorisen datan analysoitiin chi-neliö testi. Samaan aikaan, eloonjäämisluvut laskettiin Kaplan-Meier selviytymisen analyysin ja Log-rank-testi. Coxin suhteellisen vaarat malli yhden ja usean analyysi määrittämiseksi tehtiin vaikutusten 91H ilmaisun ja ennusteeseen viittaavia parametreja eloonjäämiseen (OS). Nomogram OS perustettiin soveltamalla R ohjelmisto. Harrell’in vastaavuutta indeksi (c-indeksi) käytettiin arvioitaessa ennakoivan tarkkuutta sitä. Tilastot jossa

P

-arvo 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä. Kaikki nämä tilastolliset laskelmat tehtiin käyttämällä IBM SPSS 20.0 ohjelmisto (IBM, USA), R 3.0.3 ohjelmisto (Tilastoinstituutin ja matematiikan, Wien, Itävalta), OriginLab 8.5.1 ohjelmistot (OriginLab Corp, Northampton, USA) ja GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, USA).

tulokset

Korrelaatio 91H suhteellinen ilmaisun ja ennusteeseen viittaavia tekijöitä CRC

91H ilmaisun tasot määritettiin qRT-PCR 72 syöpä ja viereisten noncancerous kudokset CRC potilaista. 91H tasot syöpäkudokset olivat ilmeisesti suuremmat kuin vuonna noncancerous kudoksissa (

P

0,001; Kuva 1). ROC-käyrä-analyysi osoitti, että optimaalinen raja-tasot 91H ilmentyminen oli 2.86-kertainen OS syöpäsoluissa /noncancerous (kuva 2). Sitten 72 potilaalla on CRC jaettiin korkean 91H lauseke (n = 42), 91H ilmaisun suhteen ≥2.86 ja matalan 91H lauseke (n = 30), jotka 91H ilmaisu suhde 2,86 (kuva 3), mukaan cut-off tasoa. Ennusteeseen viittaavia tekijöitä verrattiin kahden 91H ilmentymisen ryhmässä (taulukko 1). 91H ilmentyminen korreloi merkitsevästi kaukaisten etäpesäkkeitä (

P

= 0,027). Kuitenkin 91H ilmentyminen tuskin korreloi potilaiden sukupuolen, iän, kasvaimen sijainti, TNM vaiheessa N vaiheessa tai arvosana. Edelleen arvioida korrelaatio 91H ilmaisun ja ennusteen potilaita, joilla on CRC, Kaplan-Meier selviytymisen analyysin ja log-rank suoritettiin käyttäen potilaiden postoperatiivista elinaika. Tulokset osoittivat, että potilailla, joilla on korkea 91H ilme oli ilmeisesti huonompi ennuste kuin ne, joilla on alhainen 91H ilme (

P

0,001, kuva 4).

Unvariate analyysi yleinen analyysi osoitti, että 91H suhteellinen ilmaisu, TNM, kaukainen etäpesäke tai arvosana oli ennustetekijöitä indikaattoreita (taulukko 2). Lisäksi 91H suhteellinen ilmaisu ja etäpesäkkeiden olivat riippumattomia ennustetekijöitä indikaattorit yleisestä eloonjäämisaste potilaalla on CRC (HR: 3,66,

P

= 0,001; HR: 8.97,

P

0,001 ) vastaavasti monimuuttuja-analyysissä (taulukko 2). Lisäksi ennustetekijöitä nomogram kanssa ennusteeseen viittaavia tekijöitä ja 91H ilmaisun perustettiin ennustamaan todennäköisyys, että potilailla, joilla on CRC kuolisi 3 vuoden kuluessa hänen alkuperäinen leikkaus, olettaen potilaat eivät kuolleet muista syistä ensimmäisen (kuva 5). Samaan aikaan nomogrammissa n ennakoiva tarkkuus mitattiin kautta konkordanssin indeksi (c-indeksi). CRC, nomogram sisältävä 91H oli enemmän ennakoivaa tarkkuutta kuin ilman 91H (c-indeksi: 0,90 vs. 0,85 vastaavasti).

DNA kopioluvun vaihtelu (CNV) ei ollut mukana ylös- säätely 91H ilmaisun

Voit selvittää 91H ekspressiotaso CRC liittyi CNV, ekspressiokuviota 91H mitattiin qRT-PCR, ja lisäksi arvioitiin välistä yhdenmukaisuutta 91H DNA kopiomäärä ja 91H suhteellisen ilmentymistason . Vain 2,8% (2/72) pariksi normaalin ja kasvaimen kudosten CNV osoitti yli-ilmentyminen 91H. Kuitenkin poikkeava ilmentyminen 91H havaittiin 95,8% (69/72) pariksi normaalien ja tuumorikudosten ilman kopioluvun muutos (kuvio 6).

, The 91H suhteellinen ilmentyminen täsmäsi syöpä- ja noncancerous kudosten mitattiin qRT-PCR. β-aktiini pidettiin sisäisen valvonnan. B, kopioluku vaihtelu 91H syöpäsoluissa ja noncancerous kudosten mitattiin myös qRT-PCR. RNaasi P käytettiin referenssinä geeni.

91H edistänyt leviämisen, invaasion ja migraatio CRC-solujen in vitro

arvioimiseksi biologisia toimintoja 91H, 91H ekspressiotasot mitattiin erilaisia ​​solulinjoja (FHC, HCT-8, HT-29, HCT-116, ja SW-620), jonka qRT-PCR: llä. Kuten kuviossa 7 on esitetty, 91H ilmentymistä havaittiin korkeammat tasot HCT-8, HT-29 ja HCT-116 verrattuna FHC, lukuun ottamatta SW-620. Jälkeenpäin HCT-116-solut transfektoitiin si-91H tai si-NC. Transfektion jälkeen 48 tuntia, 91H on tehokkaasti vaiennettu HCT-116-solut (kuvio 8).

vieressä pyrittiin määrittämään, onko 91H pudotus vaikuttaa soluproliferaation MTT-määrityksellä. Tiedot, verrattuna HCT-116-solut infektoitiin si-NC, osoitti, että leviämisen HCT-116-solujen si-91H asuttivat 36,7% (

P

0,05), 45,4% (

P

0,05), 43,2% (

P

0,05), 65,6% (

P

0,01) ja 65,3% (

P

0,01) 6, 24, 48, 72 ja 96 h, vastaavasti (kuvio 9). Lisäksi, apoptoosin seuraavien 48 tunnin hoidon si-91H tai si-NC mitattiin käyttäen virtaussytometriaa. HCT-116-solujen 91H Knockdown ei tietenkään näy apoptoosin verrattuna hallita (kuva 10).

Myöhemmin päästä vaikutukset 91H tukahduttaminen on HCT-116-solujen liikkuvuutta, naarmu haava määritys suoritettiin arvioimaan vaikutuksen 91H knockdown solun liikkuvuuteen. 91H aleneminen aiheutti lieventävät motiliteettia HCT-116-soluissa. Erityisesti, verrattuna infektoituihin soluihin si-NC, haavan elpyminen viivästyi huomattavasti siRNA-infektoiduissa soluissa (kuvio 11). Lisäksi muuttoliike ja invaasio määrityksiä käytettiin edelleen pääsy tähän vaikutusta 91H Knockdown muuttoliikettä ja invasiivisuus CRC soluja. Tuloksista ilmeni, että siirtyminen ja invasiivisuus merkittävästi estyy infektoituihin soluihin si-91H, verrattuna si-NC-infektoituneissa soluissa (kuvio 12). Lisäksi HCT-116 solumigraation ja invaasiota pieneni 49,4% (P 0,05) ja 43,9% (P 0,05), vastaavasti, seuraavaa 91H vaimennus (kuva 13). Nämä havainnot osoittivat, että 91H esto voisi olla tiiviisti korreloivat solujen lisääntymisen, migraation ja invaasion CRC solulinjoissa.

määrä invasiivisia tai siirretty solujen kunkin koeryhmän laskettiin keskiarvona 5 viisi näkökenttävaatimusten mikroskoopilla (*

P

0,05).

keskustelu

Koska uusi molekyyli tähti lncRNA, varaamiseen tutkimukset ovat keskittyi vaikutuksesta lncRNA syövän synnyssä, ja voisi tarjota uusia oivalluksia biologia näiden syöpien [20], [21], [22]. Huolimatta merkittävää edistymistä lncRNAs syövän synnyssä, biologiset roolit lncRNAs eivät ole selkeitä CRC. Tutkia biologiaan lncRNA CRC, tässä tutkimuksessa suoritettiin ensin tutkia biologinen roolit 91H CRC etenemistä ja vaikutuksen arvioimiseksi 91H on kliinis ominaisuuksista ja ennusteen.

Tässä tutkimuksessa data paljasti, että 91H ekspressiotasot CRC kudoksessa olivat huomattavasti korkeammat kuin vastaavien noncancerous kudoksessa. Tuloksena tunnistettiin in vitro CRC solulinjojen ja normaalin ihmisen suoliston epiteelisolulinja (kuvio 7). Lisäksi yliekspressio 91H liittyi etäpesäkkeiden on ennusteeseen viittaavia tekijöitä (

P

0,05). 91H havaittiin olevan stabiili ilmentyminen rintasyöpäsolulinjoissa, ja se havaittiin olevan säädelty primaarista rintasyöpää [14]. Tärkeämpää, hiiren myoblastit, 91H oli päättänyt olla osallisena myötäsääntelyä geenien klo H19 /IGF2 lokuksen edistää syövän synnyn ja syövän etenemistä [16]. Kuitenkin 91H ilmentyminen ei ollut yhteydessä kaukainen etäpesäke ennusteeseen viittaavia tekijöitä ruokatorven okasolusyöpä (ESCC) [23]. Epäjohdonmukainen päätelmät yhdistää 91H ilmaisutapoja kliinis tekijät voivat johtua eri histopatologiselle tyyppejä. Lisäksi käyttäen in vitro -tiedot, osoitimme, että 91H Knockdown esti solun liikkuvuus, muuttoliike ja invasiivisuus CRC soluja. Nämä tulokset osoittivat, että 91H voisi olla potentiaalinen rooli etäpesäke CRC.

Lisäksi olemme ensinnäkin kuvaili näyttöä siitä korkeat 91H ekspressiotasot kasvainkudoksessa liittyivät huonon ennusteen, ja 91H suhteelliset ekspressiotasot olivat läheisesti toisiinsa huono kliininen tulos potilaita, osoittaa ilmaus 91H voitaisiin toiminut arvokkaana itsenäinen ennustetekijöiden biomarkkereiden riippumattomia merkittävistä kliinis ominaisuuksista, paitsi etäpesäke tila. Itse asiassa aikaisemmat tutkimukset osoittivat, että lncRNAs myös pitää molekyyli biomarkkereita syövissä. PVT-1, tuottaa antiapoptoottisten aktiivisuus CRC, tunnistettiin uutena prognostinen indikaattori CRC potilaille [12], [24]. Samaan aikaan hotair oli mukana kasvaimen etenemiseen ja pidettiin uutena epigeneettiset molekyyli biomarkkereiden potilaalla on ESCC tai CRC [18], [25], [26]. Siksi katsomme, että 91H voisi olla uusi potentiaalinen prognostinen indikaattori potilailla, joilla on CRC.

yleensä nomogrammit on kehitetty useimmissa syöpätyyppien [27], [28], [29], joka luo yksinkertainen graafinen esitys tilastollinen ennustava malli, joka luo numeerisen todennäköisyys kliininen tapahtuma [30]. Lisäksi kyky nomogrammit tuottaa yksilöllisiä ennusteita mahdollistaa niiden käytön tunnistamista ja kerrostuminen potilaiden kliinisiin tutkimuksiin [30]. Tässä tutkimuksessa perustuu 91H suhteellinen ekspressio kasvaimen ja kliinis tekijät, ennakoiva nomogram suoritettiin ennustamaan todennäköisyys, että leikkauksesta toipuvien potilaiden kuolisi CRC 3 vuoden kuluessa, paitsi kuolevat toinen syy ensin. Samaan aikaan nomogram sisältävä 91H oli enemmän ennakoivaa tarkkuutta kuin ilman 91H (c-indeksi: 0,90 vs. 0,85 vastaavasti), mikä osoittaa, että 91H ilmentyminen kasvainten selvästi vahingoittuneista nomogram ennakoivaa tarkkuudella. Tärkeämpää, nomogrammissa voitaisiin käyttää lääkärit tunnistamaan potilaita laskemalla niiden todennäköisyys leikkauspotilailla CRC, ja tarjota asianmukainen hoito ja optimaalinen strategia. Siksi potilaita yliekspressioon 91H tulee seurata ja asianmukainen adjuvantti hoitojen jälkeen CRC resektion.

yli-ilmentyminen 91H oli mukana syövän etenemisessä [14], [23]. Kuitenkin syy miksi 91H oli väärin säädellystä kasvaimen jäi tuntemattomaksi. Kopioi numero vaihtelu oli tärkeä muoto genomista rakennetta muutos, edistää tiettyjen geneettisten ja kehityssairauksista, kuten munasarjasyöpä ja rintasyövän [31], [32]. H19 /IGF2 kopio numero muunnelmia, joka sijaitsee 11p15 painettu alue, ilmoitettiin Beckwith-Wiedemann ja Silver-Russell oireyhtymät [33], [34]. Samaan aikaan, 91H-geeni, H19 antisense-RNA, on myös sijaitsee kromosomissa 11p15.5 [14]. Näin ollen voidaan spekuloitu, että yliekspressio 91H CRC voi liittyä CNV. Esillä olevassa tutkimuksessa, CNV on 91H havaittiin kahdella potilaalla, joilla on korkea 91H ilme, ja kopioluvun poistamisen 91H oli tapahtunut yhdellä potilaalla, jolla CRC (kuva 2). Vaikka tulos ei osoittanut tilastollisesti merkitsevä, se tarjosi mahdollisen uuden strategian tutkintaan 91H välittämän geeni asetus syöpään. Rajallisen koon tapauksista ilmoittautunut tässä tutkimuksessa lisätutkimuksia sen täytyy tulevaisuudessa havainnollistamaan mahdollisia suhdetta.

Jotkin rajoitukset Tämän tutkimuksen olisi tunnustettava. Ensinnäkin, niiden potilaiden lukumäärä, joilla CRC ei ole suuri. Lisätutkimuksia olisi suoritettava tarkistaa yhdistyksen välillä 91H ilmaisun ja CRC, ja onko 91H ilmentyminen liittyi CNV potilailla, joilla on CRC. Toiseksi seurantatutkimuksissa ei olisi tarpeeksi pitkiä (vaihteluväli 2-36 kuukautta), joka ei tarkasti ennustaa eloonjäämisaste CRC potilaista. Lisätutkimukset tehtiin vahvistamaan tätä tulosta pitkäaikainen seuranta potilaan kohortin tai toisen kohortin potilaista CRC. Lopuksi kaikki in vitro biologisen toiminnot suoritetaan vain yhdessä solulinjassa. Rajoituksista huolimatta osoitti tässä tutkimuksessa, nämä havainnot tukevat tärkeyttä roolin 91H eri vaiheissa syövän etenemistä edistää etäpesäkkeiden CRC.

Yhteenvetona 91H ilme oli merkitsevästi säädellään ylöspäin CRC kudosnäytteistä ja solulinjat. Kohonnut ilmentyminen 91H liittyi huonoon ennusteeseen ja etäinen etäpesäke. Lisäksi 91H CNV selittää vain muutaman prosentin havaittu yli-ilmentymisen. Kumulatiivisesti nämä havainnot osoittivat, että 91H ollut tärkeä rooli kehityksen ja etenemisen CRC. Ymmärtämällä tarkka rooli 91H patogeneesissä CRC, uusi ja lupaava terapeuttinen strategia kehitetään edelleen CRC hoito, joka perustuu säätely alaspäin näiden onkogeenisten lncRNAs.

tukeminen Information

Kuva S1 .

välinen suhde kopioluku vaihtelua ja 91H ilmentyminen kasvaimen kudoksissa ja viereisten normaaleissa kudoksissa.

doi: 10,1371 /journal.pone.0103022.s001

(TIF) B Kuva S2.

91H suhteellinen ilmentyminen kvantitoitiin neljässä CRC solulinjoissa ja normaalin ihmisen suoliston epiteelisolujen rivi qRT-PCR (keskiarvo ± SEM; **

P

0,01).

doi: 10,1371 /journal.pone.0103022.s002

(TIF) B Kuva S3.

HCT-116-solut transfektoitiin SI-NC ja si-91H. 48 tunnin kuluttua, 91H ilmentyminen ehkäisee tehokkaasti qRT-PCR verrattuna si-NC (keskiarvo ± SEM; **

P

0,01).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0103022. S003

(TIF) B Kuva S4.

91H edistänyt leviämisen HCT-116-solujen kautta MTT-määrityksellä (keskiarvo ± SEM;

P

0,05).

doi: 10,1371 /journal.pone.0103022.s004

( TIF)

Kuva S5.

Apoptoosi tutkittiin käyttäen Sytometrinen analyysi 48 h infektion jälkeen si-91H tai si-NC.

doi: 10,1371 /journal.pone.0103022.s005

(TIF) B Kuva S6.

tyhjästä haava määritys arvioitiin solun liikkuvuus. Knockdovvn 91H esti HCT-116 solun liikkuvuus.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0103022.s006

(TIF) B Kuva S7.

91H edistänyt invaasion ja migraatio HCT-116-solut perustuen transwell määrityksessä.

doi: 10,1371 /journal.pone.0103022.s007

(TIF) B Kuva S8.

solujen lukumäärä, jotka tunkeutuneet tai muuttivat kammion läpi arvioitiin 5 kenttiä kunkin koeryhmän ja keskiarvo. Määrä invasiivisia tai siirretty solujen kunkin koeryhmän laskettiin keskiarvona 5 viisi näkökenttävaatimusten mikroskoopilla (*

P

0,05).

Doi: 10,1371 /journal.pone. 0103022.s008

(TIF) B Taulukko S1.

potilaiden tiedot.

doi: 10,1371 /journal.pone.0103022.s009

(DOCX) B Taulukko S2.

tulokset qRT-PCR jokaisesta näytteestä.

doi: 10,1371 /journal.pone.0103022.s010

(XLSX) B