Krooninen sairaus

tiivistelmä

Orthotopic virtsarakon syöpä ksenograftien ovat välttämättömiä testaamiseen uusia hoitomuotoja ja molekyylitason manipulointia solulinjojen

in vivo

. Nykyinen ksenografteissa luottaa tuumorisoluinokulaatiosta by rakonsisäistä tiputusta tai pistetään suoraan virtsarakon seinämään. Tiputuksen rajoittaa puuttuminen solulinjoista, jotka ovat tuumorigeenisia toimitettaessa tällä tavalla. Invasiivisen malli aiheutetaan sairastuvuus on hiirille tarve laparotomy ja liikkeelle virtsarakon. Lisäksi tämä menettely on monimutkainen ja aikaa vievä. Kolme virtsarakon syövän solulinjoissa (UM-UC1, UM-UC3, UM-UC13) ympättiin 50 kateenkorvattomiin nude hiiriin ihon kautta injektiona ultraääniohjauksessa. PBS ensin pistetään välillä lihaksen seinämän ja limakalvon erottaa näitä kerroksia, ja kasvaimen solut myöhemmin ruiskutettiin tähän tilaan. Bioluminesenssi ja ultraääni niitä käytetään mittaamaan kasvaimen kasvua. Varjoainetehostettu ultraääni käytettiin tutkittaessa muutoksia kasvaimen perfuusio jälkeen systeeminen gemsitabiini /sisplatiinihoitoon. Osoittaakseen periaatteen todiste että terapeuttiset aineet voidaan injektoida perustettu ksenografteissa ultraääniohjauksessa, onkolyyttisten (VSV) injektoitiin UM-UC3 kasvaimia. Ksenograftikudoksesta kerättiin immunohistokemiaan jälkeen 23-37 päivää. Perkutaaninen kasvainsolujen injektion virtsarakkoon seinään suoritettiin tehokkaasti (keskimääräinen aika: 5,7 min) ja ilman komplikaatioita kaikissa 50 eläimestä. Ultraääni ja bioluminenssi vahvisti läsnäolo kasvain etuosan virtsarakon seinämä kaikilla eläimillä 3 päivää myöhemmin. Keskimääräinen kasvaimen kasvoivat tasaisesti tutkimusaikana. UM-UC13 kasvaimia osoitti vähentyneen merkittävästi määrän ja perfuusio kemoterapian jälkeen. Immunohistokemiallinen värjäys VSV-G osoitettiin virus kertymä kaikissa UM-UC3 kasvainten jälkeen kasvaimensisäistä injektion. Olemme kehittäneet uuden menetelmän luomiseen potilaalle tehdä virtsarakon syövän ksenografti vuonna vähän invasiivisia tavalla. Käsissämme tämä on korvannut perinteisen mallin vaativat laparotomy, koska tämä malli on enemmän aikaa tehokas, tarkempia ja liittyy vähemmän sairastuvuus hiirillä.

Citation: Jäger W, Moskalev I Janssen C, Hayashi T , Awrey S, Gust KM, et ai. (2013) Ultraääni-ohjattu Intramural Siirrostus Orthotopic Virtsarakon syövän ksenoqraftit A Novel High-Precision Approach. PLoS ONE 8 (3): e59536. doi: 10,1371 /journal.pone.0059536

Editor: Xiaolin Zi, University of California Irvine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 07 tammikuu 2013; Hyväksytty: 15 helmikuu 2013; Julkaistu: 26 maaliskuu 2013

Copyright: © 2013 Jäger et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Grant rahoitus annettiin kautta DFG (WJ, www.dfg.de/en, jA 2117 /1-1:1), Kanadan Cancer Society Research Institute (PCB; www.cancer.ca/Research.aspx, 2010-700527) ja ohjasivat Lääkärin tutkijan palkinto Vancouver Coastal Health Research Institute (PCB; https://www.vch.ca/about_us/awards_ _recognition, F08-04967). Ultraääni kuvantaminen alusta rahoitti Kanadan Foundation for Innovation (PCB; www.innovation.ca, 27255). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Virtsarakon syöpä on neljänneksi yleisin syöpä miehillä ja yhdeksäs yleisin syöpä naisilla kehittyneissä maissa [1]. Vuonna 2010 oli 70530 tapaus tapauksissa ja 14680 kuolemantapaukset virtsarakon syöpään Yhdysvalloissa [2]. Noin kolme neljäsosaa tapauksista ovat ei-lihas- invasiivisia [3]. Näillä on suuri taipumus uusiutumisen ja osajoukko on vaarassa etenemisen invasiivisia sairauksia [4]. Loput neljäsosa tapauksista läsnä lihas invasiivisia virtsarakon syöpään. Huolimatta optimaalinen multimodaalinen hoito, noin puolet potilaista lihasten invasiivisia virtsarakon syöpä periksi heidän sairautensa [5]. Mitään merkittäviä läpimurtoja on tehty kahden viime vuosikymmenen parantaa systeeminen hoito on tässä potilasryhmässä [6].

Hiirimallit ihmisen syövän käyttäen johdetut solulinjat potilaasta kasvaimista (ksenograftit) ovat keskeinen väline syöpätutkimukseen. Ne antavat meille mahdollisuuden kuulustella tuumoribiologiassa kanssa molekyylimanipulaatiolla, tunnistaa asiaankuuluvien diagnostisten ja ennakoivan biomarkkereiden, ja testata antineoplastisia vaikutuksia Uusien hoitomuotojen. Virtsarakon syövän rokotus ihmisen solulinjojen hiireen virtsarakon (potilaalle tehdä ksenografti) on vertailuvakiona [7], [8]. Tämä rokotus voidaan saavuttaa joko rakkoon tiputtamisen kasvainsolujen ( ”rakkoon malli”) [9] tai pistetään suoraan virtsarakon seinämän ( ”sisäiset malli”) [10]. Vaihtoehtoiset mallit sisältävät rokottaminen hiiren virtsarakon syöpäsolujen immunokompetenteilla hiirillä (syngeneeisissä malli) [11] sekä siirtogeenisiä malleja [12]. Samanlaisia ​​malleja ovat myös mahdollisia rotilla [13], [14].

Jokaisessa orthoptic ksenograftimallia on puutteensa. Rakkoon tiputtamisen johtaa muodostumista kasvaimia urothelial pinnalla virtsarakon, jotka ovat sopivia myöhemmin rakonsisäisen tiputtamisen uusia lääkkeitä. Kuitenkin se on osoittautunut erittäin haastava tällä menetelmällä saataisiin luotettavaa kasvain ottaa minkään solulinjojen muu kuin KU7 [9], jota olemme viime aikoina osoitettu olevan HeLa [15]. Lisäksi rakkoon soluinokulaation on aikaa vievää ja voi johtaa hallitsemattomaan kasvaimen kasvua vieressä elimissä (virtsaputken, virtsajohdin, munuaisaltaan) [16]. Lopuksi, kasvaimen sijainti rakossa on arvaamaton, niin että kasvu noin virtsanjohtimen aukkoa voi aiheuttaa vakavia ylemmän ahtauma ennen hiiret saavuttavat terapeuttiset parametrit.

suora injektio kasvaimen solun virtsarakon seinämään johtaa muodostumista invasiivisen virtsarakon kasvaimia, jotka ovat sopivia systeemistä hoitoihin [10]. Vaikka useissa solulinjoissa kasvaa luotettavasti kuin vierassiirrännäiset tässä mallissa, sovellus rajoittaa sairastuvuus aiheutettu hiirille tarve laparotomy ja liikkeelle virtsarakon [17]. Se on myös teknisesti haastavaa varmistaa riittävä ruiskutus virtsarakon seinämän, ja tämä menetelmä liittyy merkittävä oppimiskäyrä.

Olemme kehittäneet uuden lähestymistavan käsitellä näitä rajoituksia sisäiset rokotus virtsarakon syövän ksenograftien, ja siten mahdollisesti parantaa tarkkuutta ja toistettavuutta tämän mallin. Olemme optimoineet perkutaanisesti, ultraääni-ohjattu injektio virtsarakon syövän solujen etulohkon virtsarakon seinämä. Lisäksi voimme seurata ksenograftin kasvun ja perfuusiota

in vivo

pitkittäin hoidon aikana [18], [19], ja voimme pistää terapeuttisia aineita suoraan kasvaimeen ultraääniohjauksessa. Täällä osoittaa toteutettavuus ja toistettavuus ultraääni-ohjattu sisäiset rokotus ortotooppisten virtsarakon syövän ksenograftien sekä myöhemmin kuva ohjattu manipulointi ja seurantaan.

Materiaalit ja menetelmät

Eläimet

viisikymmentä 10-viikkoisen naaras-kateenkorvattomia nude-hiiret hankittiin Harlan (Indianapolis, IN, USA). Kaikki eläin menettelyt suoritettiin ohjeiden mukaan Kanadan neuvoston Animal Care (CCAC). Protokolla hyväksyttiin Animal Care komitean University of British Columbian (Protocol Number: A10-0192).

tuumorisolulinioissa

Ihmisen virtsarakon syövän solulinjoissa UM-UC1, UM -UC3 ja UM-UC13 ystävällisesti antamat patologian Core virtsarakon syövän SPORE MD Anderson Cancer Center (Houston, TX, USA) [20] – [22]. Solulinjaa identiteetit vahvistettiin DNA-sormenjälkien avulla AmpFlSTR® Identifiler® Amplification protokolla (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA) [23]. Kaikkia solulinjoja viljeltiin alle 3 kuukautta Dulbeccon muokatussa Eaglen elatusaineessa (DMEM), jossa oli 10% naudan sikiön seerumia (FBS) 37 ° C: ssa kosteutetussa 5% CO

2-ilmakehässä.

in vivo

tutkimuksissa solulinjat koki transduktion kanssa lentiviraalinen konstruktilla kuljettaa lusiferaasin tulikärpäsen geeni

in vivo

kuvantamiseen [9]. Lusiferaasi plasmidi sisälsi blastisidiinia resistenssigeenin mahdollistaa positiivisen valinnan 10 ug /ml blastisidiinia (Invitrogen, Life Technologies Inc., Burlington, ON, Kanada). Solulinjat kontrolloitiin in vitro lusiferaasiaktiivisuuden ja solujen määrä korreloi bioluminenssina (R 0,99; tuloksia ei ole esitetty), käyttäen Xenogen IVIS Spectrum (Caliper Lifesciences, Hopkinton, MA, USA). Sillä ksenografti tutkimuksia solut otettiin talteen 70% yhtymäkohdassa ja suspendoitiin Matrigelillä® (BD Biosciences, Mississauga, ON, Kanada). Solupitoisuus oli muutettu perustuen aikaisemmin määritettyyn kasvukinetiikat kolmesta eri solulinjoissa (UM-UC1 luc 9 x 10

6 /ml; UM-UC3 luc 12 x 10

6 /ml; UM-UC13 luc 11 x 10

6 /ml).

Perkutaaniset kasvaimensiirrostuspäivänä

Kasvaimen inokulointi suoritettiin Vevo 770® pieneläinten kuvantamisen alustan (Visual Sonics, Toronto, oN, Kanada). Korkea taajuus RMV 706 ultraääni scanhead (20-60 MHz), joka mahdollisti sivusuunnassa resoluutio on 30 mikronia ja runko on jopa 240 fps, käytettiin.

Hiiret nukutettiin isofluraanilla ja asennettu kuvantamisen pöydän jatkuvasti elintoimintojen [Fig. 1A]. Vatsa desinfioida alkoholilla ja steriiliä ultraäänen geeliä levitettiin. Virtsarakon visualisoitiin ruudulla [Fig. 1B] ja virtsarakon ontelon täytettiin steriilillä, lämmin fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS) läpi 24 gaugen angiocatheter haluttuun tilavuuteen 50-100 ui.

. Hiiret nukutettiin isofluraanilla ja asennetaan lämmitetty kuvantamisen pöydän jatkuvasti elintoimintojen. Sen jälkeen visualisointi virtsarakon kanssa Vevo 700® pieneläinten kuvantamisen alustan iho oli rei’itetty kanssa 30G neulalla. B. Ultraääni visualisointi normaalin hiiren rakon sagittaalinen leike tyypillisiä mitoiltaan (valovirran mitat 4,4 x 6,5 mm; seinämäpaksuus 0,25 mm).

1,0 ml ruiskun PBS: lla ja yhdistetty 30 mittari, ¾ tuuman neulaa (Kendall, Mansfield, MA, USA) tuotiin ihon yläpuolella häpyluun kulmassa 30 ° viiste suunnattu anteriorly. Havaitsemisen jälkeen neula ultraääni näytöllä [Fig. 2A], se johdettiin ihon ja vatsan lihaksia [Fig. 2B]. Viistouksen neulan käännettiin 180 ° (suunnattu posteriorisesti) ennen kärki työnnettiin virtsarakon seinämän ilman tunkeutumista limakalvon [Fig. 2C]. PBS: ää (50 ui) injektoitiin välillä lihasten kerroksen ja limakalvon luoda tilaa [Fig. 2D] ja neula vedettiin. Toinen 1,0 ml ruisku (täynnä syöpäsoluja suspendoitu Matrigelillä®, (BD Biosciences)), jossa on 30 gaugen, ¾ tuuman neula ohjattiin samaan tilaan [Fig. 2E]. 40 ui (UM-UC1 luc) tai 50 ui (UM-UC3 luc, UM-UC13 luc) solususpensiota injektoitiin tähän tilaan [Fig. 2F].

. Havaitseminen neula ultraääni näytöllä. B. lävistys ihon ja vatsan lihaksia. C. Neula työnnetään virtsarakon seinämään ilman tunkeutumista limakalvon. D. Injection PBS: ää (50 ui) välillä lihasten kerroksen ja limakalvolle. E. ohjaus toisen neulalla keinotekoisesti luotuun tilaan. F. Injection kasvainsolujen keskeytettiin Matrigelillä®.

kaksi hiirillä agaroosia ruiskutettiin samalla tavalla luomiseksi tarkka sijainti ksenograftin rokotus rakossa seinämän. Hiiret välittömästi tapettiin ja niiden virtsarakot poistettiin histologista analyysiä.

Vieraslajisiirteen Growth Monitoring

Kasvaimen kasvu seurattiin bioluminenssina kuvantaminen (BLI) ja ultraääni joka kolmas päivä alkoi 4 päivää tuumorin istuttamisen . Xenogen IVIS järjestelmää käytettiin BLI ja hiiret kuvattiin 10 ja 15 minuutin kuluttua vatsaonteloon D-Luciferin (150 mg /kg; Firefly, Etu Life Science). 3D ultraääni suoritettiin nukutetuissa hiirten skannaus virtsarakon kokonaisuudessaan 0,1 mm välein. Kasvaimen tilavuus määritettiin Visual Sonics kuvantamisen ohjelmistopaketti analysoimalla joka viidennen kuvan mukaan käyttäjän käsikirja [24].

mikrokuplien varjoainetehosteisiin Ultraääni analyysi kasvaimia

visualisoimiseksi perfuusio tila ksenograftikasvaimissa, joka on cine silmukka kirjattiin viitteen. Toinen cine silmukka (1000 kehykset 30 Hz) rekisteröitiin 10 sekuntia injektion jälkeen 120 ui ei-kohdennettuja mikrokuplia (Visual Sonics) häntälaskimoon nukutettujen hiirillä. Kohta, jossa mikrokuplia tullut kone määritettiin ja viitteellisesti vähennettiin. Kasvain valittiin kontrastia alueen ja viite vähennetään Mean Data käytettiin. Muutokset Kontrastin Prosenttia Area ajan dokumentoitiin ja 2D-kuvia kirjattiin jossa minkä tahansa pikselin leimasi vihreänä mikrokuplien kulunut [24].

Hoito

kasvaimensisäisenä virus-injektio.

Osoittaakseen potentiaalia ultraääni ohjaa ihon kautta kasvaimeen ruiskuttamalla käsittelyaineiden osaksi perustettu ksenografteja injektoimme onkolyyttisten (VSV) osaksi UM-UC3 luc ksenografteissa päivänä 22 inokulaation jälkeen. Tuumorimassa määritettynä BLI ja ultraäänen käytettiin jakaa eläimille kahteen suhteellisen yhtä suureen ryhmään. Kasvaimet visualisoitiin pituussuunnassa ultraäänellä ja 30G neula sijoitettu keskelle kasvaimen [Fig. 3A]. VSV (1,05 x 10

7 pfu) suspendoitiin 25 ul: ssa PBS: ää injektoitiin 7 hiirissä, ja yksinomaan PBS: ää injektoitiin kontrolliryhmässä (n = 7).

. -ksenografteja Visualisoitiin ultraäänellä ja joko VSV (1,05 x 10

7 pfu) liuotettiin 25 ui: aan PBS: ää tai yksinomaan PBS: ää injektoitiin läpi 30G neulan keskelle kasvain. B. 48 tunnin kuluttua injektion VSV, kaikki ksenograftikasvaimissa osoitti positiivista värjäytymistä VSV-G pistoskohdan ympärillä, joka korreloi TUNEL värjäystä. C. VSV-G ja TUNEL värjäys olivat negatiivisia jälkeen PBS injektion yksin.

systeemistä kemoterapiaa.

Osoittaakseen mahdollisten

in vivo

reaaliaikainen seuranta of ksenografti perfuusion, käsittelimme UM-UC13 luc kasvainta kantavien hiirten kanssa solunsalpaajahoidosta. Päivänä 28 istutuksen jälkeen, hiiret jaettiin kahteen yhtä suureen ryhmään perustuen kasvaintaakkaa määritetään ultraäänellä ja BLI. Kahdeksan eläimet saivat intraperitoneaalisesti gemsitabiinia (120 mg /kg; SANDOZ, Boucherville, QC, Kanada) päivänä 30 ja 35 sekä sisplatiini (2,5 mg /kg; Hospira, Saint-Laurent, QC, Kanada) päivänä 31 ja 36. vastaavan määrän PBS: ää injektoitiin samaan aikaan kohtia kontrollieläimillä (n = 7).

Histologia

UM-UC3 luc, UM-UC1 luc ja UM-UC13 luc -ksenografteja talteen 24, 28 ja 37 päivää, vastaavasti. Ruumiinavauksessa, lantio, retroperitoneum, maksassa ja keuhkoissa oli tarkastetaan huolellisesti mahdollisia etäpesäkkeitä, ja epäilyttävät kudos poistettiin. Tätä kudosta ja koko rakot kiinnitettiin formaliiniin, valettiin parafiiniin ja leikataan 4-um: n leikkeitä, jotka värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla (H 1:300, ab1874, Abcam, Cambridge, MA, USA) immunohistokemiallinen värjäys suoritettiin Ventana Autostaineriin mallin Discover XT (Ventana Medical System, Tucson, AZ, USA ), jossa entsyymillä leimattu biotiini streptavidiinisysteemillä ja liuottimia kestävä 3,30-diaminobenyidine Kartta kit. Kaikki näytteet analysoitiin myöhemmin patologi (LF) ja prosenttiosuus immunoexpression VSV-G ja värjäytyminen TUNEL havaittiin 200 x suurennoksilla.

Tilastollinen analyysi

tilastollisia Analyysien tarkoittaa bioluminesenssi ja kasvainten niiden standardipoikkeamat määritettiin. Erojen merkitsevyyden mitattiin Studentin t-testiä (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA) ja P 0,05 katsottiin merkitseväksi. Regression tontteja käytetään kuvaamaan korrelaatio bioluminesenssi ja volyymi.

Tulokset

tuumorisoluinokulaatiosta

Ultraääni-ohjattu tuumorisoluinokulaatiosta onnistuneesti suoritettiin 50 eläintä (UM- UC1 luc 20 eläintä, UM-UC3 luc 15 yksilöä ja UM-UC13 luc 15 yksilöä) [Taulukko 1]. Tyypillinen koejärjestelyistä ja edustava ultraääni kuvia ja mitat hiiren virtsarakon ovat kuviossa. 1. vaiheet ymppäyksen on esitetty kuviossa. 2. välin kohden menettely (asennus hiirten pöydälle ennen lopullista injektio) voitaisiin alentaa 7,7 ± 3,7 min ensimmäisen ryhmän (UM-UC3 luc) 3,4 ± 1,6 min kolmannessa ryhmässä (UM-UC1 luc ). Yksikään eläimistä kärsinyt komplikaatio menettelyn aikana. Injektio agaroosigeelillä osoitti, että rokotus oli tiukasti välissä lamina proprian ja tunica musculariksesta [Fig. 4].

sagittaalinen H E kohdat osoittivat, että kaikki kasvaimet olivat invasiivisia lihakseen ja jotkut osaksi perivesical rasvaa, mutta ei ollut näyttöä invaasio viereisiin elimiin [Fig. 5D]. Mikään kasvaimia kasvoi läpi lamina propriaan rakkoon onteloon. Vatsakalvontakainen lymfadenopatia todettiin 60% UM-UC13 luc ja 20% UM-UC3 luc ksenografteissa. Tämä vahvistettiin H 0,01). B. Vieraslajisiirteen perfuusio mitattiin injektio ja kaikukuvaukseen kohdentamattomaan mikrokuplapitoisuus UM-UC13 luc ksenografteissa ennen ja 5 päivän ajan hoidon jälkeen säätöainetta (PBS; vasen paneeli) tai systeemistä kemoterapiaa (gemsitabiini /sisplatiini, oikea paneeli). Perfuusio kvantifioitiin kontrastina prosenttia alueella. Edustavia yksittäisten tulosten ulos 4 mitattuna eläintä ryhmää kohti esitetään.

perfuusiota ksenograftissa kasvain mitattiin ennen ja jälkeen annon systeemistä kemoterapiaa epäspesifistä mikrokuplia. Kemoterapia johti vähenemiseen Perfuusionopeus (Contrast Prosentti Area) 84%: sta 66%, kun taas sama parametri pysyi vakiona hoidon jälkeen yksinomaan PBS (79% vs. 77%) [Fig. 6B].

Keskustelu

olemassaolo luotettavien eläinmalleissa on perusvaatimus syöpäpotilailla tutkimukseen in vivo tutkimuksessa tuumoribiologiassa ja testaus uusien antineoplastisten hoitostrategioiden. Huolimatta toistettavissa syngeenisten [11] ja siirtogeeniset [12] potilaalle tehdä kasvainmuodoista virtsarakon syövän, ne eivät ole laajassa käytössä johtuu sekä luontainen rajoitukset (esim kyseenalainen soveltuvuutta Syngeenisten malleja hiiren virtsarakon syövän ihmisen tauti) ja monimutkaisuus malleja sekä intensiteetti liittyy resurssien hyödyntämistä. Orthotopic ksenograftimalleja ovat osoittautuneet tarjota eniten joustavuutta (mitattuna valinnassa solulinjoilla) ja on eniten käytännön hyödyn, ja siksi edelleen kultakantaan in vivo mallintamiseen virtsarakon syöpään [7], [8].

tässä työssä olemme onnistuneet tuottamaan uusi in vivo mallissa potilaalle tehdä virtsarakon syövän ksenografteissa kautta rokottaminen ihmisen virtsarakon syövän solut hiiren virtsarakon ja ovat osoittaneet sen olevan hyvin toistettavissa. Kasvaimet perustettiin 98%, siirrostettiin hiirillä käyttäen kolmea eri ihmisen solulinjoja. Erinomaisten optinen tarkkuus, kasvainsolut voidaan saastutetaan korkean tarkkuuden tiukasti osaksi etummainen virtsarakon seinämä, mikä vähentää nopeutta obstruktiivisen komplikaatioita ja mahdollistaa pidemmän kasvun ja hoitojaksot. Lisäksi aika per rokotus on lyhyt verrattuna nykyisiin malleihin, ja laskee nopeasti ylimääräisiä kokemusta. Yhden havaittu komplikaatio oli vatsaonteloon kasvainsolujen levittämiseen, joka tapahtui yksi ensimmäisistä eläimiä injektoitiin ja voidaan katsoa johtuvan injektio liian suuria suhteessa eläimen koon mukaan. Tätä tukee se, että määrän vähentäminen injektio 50-40 ui johti enää komplikaatioita.

Meidän malli on muunnelma potilaalle tehdä mallin aikaisemmin kuvanneet Dinney et al. [10]. Uskomme, että ultraääni-ohjattu tuumorin istuttamisen parantaa tätä mallia, koska sen helppous, nopeus, tarkkuus ja vähentynyt asteen invasiivisuus. Jälkimmäinen tekijä ei ole vain yksi eläinten hyvinvointiin, mutta voi myös edistää toistettavuutta kokeiden vähentämällä sekoittavia komplikaatioita. Tarkkuus standardin sisäiset pistoksen kautta vatsanaukaisuviillon rajoittaa mahdollisuutta päättää tarkka neulan ajankohtana injektion. Muoto ja jakautuminen bleb virtsarakon seinämän pistoksen jälkeen usein vahvistaa oikeaan paikkaan, mutta ei ole ennalta vahvistusta ennen solut injektoidaan. Tämä tarkoittaa sitä, että tietty osa hiiret ovat solut ruiskutetaan onteloon virtsarakon tai valunut herakalvon pinnalle virtsarakon. Kun ultraäänitekniikkaa, muodostuu tila limakalvonalaisesti virtsarakon seinämän suolaliuoksella, joka ei aiheuta vaaraa vuoto, ja myöhemmin tuumorisoluinokulaatiosta seuraa helposti samaan tilaan suorassa visualisoinnin.

Monitoring kasvaimen tilavuuden ultraääni täydentää tietoja saama BLI että potilaalle tehdä ksenograftimallissa. Vaikka BLI on tullut olennainen osa kasvaimen havaitsemiseen ja kasvun analyysi, se ei aina korreloi hyvin kasvaimen tilavuus. Olemme aiemmin osoittaneet, että potilaalle tehdä ksenograftimallia että kasvain perfuusio ja hypoksia ymmälle suhdetta volyymin ja luminesenssi [17], ja sama on oletettavasti vastuussa erot kuvassa. Tämä on erityisen totta suurempi kasvaimia [26], kun taas varhain siirrostuksen jälkeen ultraääntä koko voi olla epätarkkoja, koska tilavuus ruiskutetaan nestettä, ympäröivän kudoksen turvotus, ja se, että vain osa pistetään solujen hengissä ja kasvaa.

lisäetu ultraääni on kyky ruiskuttaa uusia käsittelyaineita suoraan kasvaimeen. Tässä olemme osoittaneet toteutettavuudesta kasvaimensisäisenä toimituksen onkolyyttisten VSV. Samaa tekniikkaa olisi mukautuvia muut hoidot virtsarakon syövän kuten geeniterapian tai hakemus nanohiukkasten [27], [28]. Esimerkkinä merkitystä kasvaimeen injektio ihmisen syöpien hoidossa, Kasvaimensisäinen injektio DNA-plasmidi on äskettäin testattu terapiassa leikkaushoitoon haimasyövässä [29].

Olemme myös osoittaneet kykyä seurata kasvaimen verisuonisto aikana lääkehoitoa, tässä tapauksessa perinteinen solunsalpaajahoito. Tämä kyky on erityisen hyödyllinen arvioitaessa vaste kasvainten uusia terapeuttisia luettuna resistenssin kehittyminen, joka voi heijastua jättämisestä vähentää vascularity.

pääasiallinen rajoitus ultraääni-ohjattu tuumorin istuttamisen on riippuvuus ultraääni kuvantaminen alustalle, joka ei voi olla helposti monille tutkijoille. Lisäksi tämä malli edellyttää perehtyneisyys ultraäänikuvauksessa. Toisaalta, monimutkainen eläin mallintaminen ihmisen syövissä, kuten monimutkainen leikkaus ihmisen potilailla, voidaan parhaiten suorittaa osaamiskeskusten kautta tiedeyhteistyöprojektit.

malli ei välttämättä korvaa rakonsisäistä tiputuksen rakon syöpäsolulinjoissa [9], [30]. Sisäiset malli on parempi kuin intravesikaalisen malli useimmissa sovelluksissa, koska kyky käyttää useita erilaisia ​​solulinjoja. Sisäiset malli, mutta sillä ei ole käyttöä testaukseen Uusien hoitomuotojen toimitetaan rakonsisäisenä koska kasvaimet eivät häiritse urothelial pinta (lamina propriasta) virtsarakon onteloon, ja huumeet siksi eivät helposti tunkeutumaan kasvain. Nämä kasvaimet kasvavat expansively pois ontelon virtsarakon niin, että lääkkeet annetaan onteloon virtsarakon ei voi tunkeutua koko syvyys kasvain. Lisäksi sisäiset malli edustaa lihas invasiivisia sairauksia, joita ei koskaan käsitelty rakkoon hoito kliinisessä työssä. Vuonna rakkoon tuumorin malli, toisaalta, kasvaimen pinta altistetaan virtsarakon onteloon ja kasvaimen yleensä ei kasva yli lamina propria useita viikkoja [9], niin, että lääkkeet annetaan rakkoon luumeniin voi riittävästi tunkeutua kasvain. Merkittävin rajoitus intravescial malliin, kuitenkin sen rajoittuminen harvoja solulinjojen, jopa kaikkein kokenut kädet, kasvaa vain epäluotettava tavalla.

Johtopäätökset

Olemme menestyksekkäästi kehittänyt tekniikan ultraääni-ohjattu rokotus ortotooppisten virtsarakon syövän ksenograftien merkittävästi parantavasta ennalta olemassa oleviin malleihin virtsarakon syöpään. Suurimmista eduista tämän mallin hajallaan nopeus ja helppous kasvaimensiirrostuspäivänä sekä tarkkuutta ja toistettavuutta mallin. Lisäksi voimme seurata kasvaimen pituussuunnassa ultraäänellä, mitata in vivo kasvaimen perfuusiota mikrokuplien varjoaineita, ja pistää terapeuttisia aineita kasvaimeen ultraääniohjauksessa.

Kiitokset

kiittää Ben Deeley hänen apua ultraäänikuvauksessa ja Eliana Beraldi hänen apua virustransduktio solulinjojen.