Krooninen sairaus

tiivistelmä

munasarjasyöpä, tappavin Gynekologiasairauksien syöpien, ei yleensä ole diagnosoitu, kunnes vaiheissa. Vaikka karboplatiinin on ollut suosittu hoitoon munasarjasyöpä vuosikymmeniä, potilaat lopulta kehittää vastustuskykyä tämä platinaa sisältävä lääke. Expression of neurologisesta lokuksen notch-homologi 3 (Notch3) liittyy chemoresistance ja huono kokonaiselossaolo munasarjasyöpää sairastavilla potilailla. Yli-ilmentyminen NICD3 (konstitutiivisesti aktiivinen muoto Notch3) in OVCA429 munasarjasyöpäsoluja (OVCA429 /NICD3) tekee ne vastustuskykyä karboplatiinihoitoa verrattuna OVCA429 /pCEG solut, jotka ilmentävät tyhjän vektorin. Olemme aiemmin osoittaneet, että methylseleninic happoa (MSEA) indusoi oksidatiivisen stressin ja aktivoi ataksia-telangiektasiassa mutatoitunut ja DNA-riippuvaisen proteiinikinaasin syöpäsoluissa. Tässä testasimme hypoteesin, että MSEA ja karboplatiinin kohdistama synteettinen tappava vaikutus OVCA429 /NICD3 soluja. Samanaikainen käyttö MSEA synergistisesti herkistynyt OVCA429 /NICD3 muttei OVCA429 /pCEG solujen tappaminen karboplatiini. Tämä synergia liittyi solun syklin poistua G2 /M-vaiheen ja induktio NICD3 kohdegeenin

HES1

. Hoito

N

asetyyli kysteiini tai inhibiittorit edellä kaksi kinaasien ei suoraan vaikutusta synergistisyyttä OVCA429 /NICD3 soluja. Yhdessä nämä tulokset viittaavat siihen, että teho karboplatiinin hoidossa korkealuokkaisesta munasarjasyöpäpotilailla voidaan parantaa siten, monimuotoiset hoidon MSEA.

Citation: Tzeng TJ, Cao L, Fu Y, Zeng H, Cheng WH (2014) Methylseleninic Acid herkistää Notch3-Activated OVCA429 munasarjasyöpäsoluja karboplatiini. PLoS ONE 9 (7): e101664. doi: 10,1371 /journal.pone.0101664

Editor: Reiner Albert Veitia, Institut Jacques Monod, Ranska

vastaanotettu: 24 maaliskuu 2014; Hyväksytty: 10 Kesäkuu 2014; Julkaistu: 10 heinäkuu 2014

Tämä on avoin-yhteys artikkeli, vapaa kaikki tekijänoikeudet, ja saa vapaasti jäljentää, levittää, välittää, modifioitu, rakennettu, tai muuten käyttää kuka tahansa laillista tarkoitusta. Teos on saatavilla Creative Commons CC0 public domain omistautumista.

Data Saatavuus: Kirjoittajat vahvistaa, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus oli osittain tuettu Maryland Agricultural Experimental Station ja Mississippi Agricultural and Forestry Experimental Station (ja W.-H. Cheng), ja naisten ja lasten Health Research Institute rahoituksen lahjoittanut Royal Alexandra Hospital Foundation, Kanada (Y. Fu). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

tulokset maantieteellisistä, eläin- ja kliiniset tutkimukset voimakkaasti viittaavat välistä positiivista seleeniä ja kemopreventiossa [1] – [3]. Kuitenkin supranutritional saanti ravinnosta seleeni muodossa selenometioniinin ei estä eturauhassyöpää [4]. Useiden seleeni yhdisteitä, methylseleninic happo (MSEA) on osoitettu olevan poikkeuksellisen tehokkaita torjumaan eturauhas-, haima- ja rinta- syöpien hiirillä [5] – [8]. Tehoa seleenin kemopreventiossa riippuu myös lähtötilanteessa seleeniä tila ja geneettistä taustaa [9]. MSEA metaboloituu methylselenol, lopulta jolloin muodostuu seleenidioksidin, superoksidianionin, ja vetyperoksidia [10], [11]. Lisäksi MSEA voi aktivoida ataksia-teleangiektasian mutatoitu (ATM) ja katalyyttinen alayksikkö DNA-riippuvaisen proteiinikinaasin (DNA-PK

cs), kaksi kriittistä DNA-vaurioita vaste kinaasien syöpäsoluissa [12] – [14].

Nisäkkäät ilmaista neljä neurologisesta lokuksen notch-homologi (Notch) proteiinit aikana kasvaimen kehittymisen ja alkionkehityksen [15], [16]. Toisin kuin monet muut molekyylejä, aktivointi Notch reitin ei vaadi johdetun lähettien monistamiseen [17]. Ligandin sitoutuminen N-terminaalisen EGF-toiston alueella, Notch transmembraaninen reseptori läpikäy sarjan proteolyyttisen cleavages tuumorinekroositekijä-α-konvertoiva entsyymi, metalloproteaasin, ja γ-sekretaasin [18]. γ-Secretase pilkkominen vapauttaa Notch intraceullular verkkotunnuksen (NICD) solulimaan, jonka jälkeen translokaation tumaan transaktivaatiota spektrin osallistuvien geenien kasvaimen kehittymisessä ja etenemisessä [19] – [21]. Näin ollen, Notch pidetään lupaavana parantamiseksi platinapohjaisen kemoterapian [22].

Platinayhdisteet on hyväksynyt Yhdysvaltojen Food and Drug Administration syövän hoitoon vuodesta 1979. vähemmän sivuvaikutuksia, karboplatiinin [

cis

-diammine (1,1-syklobutaanidikarboksylato) platina (II)] on tehokkain toisen sukupolven platinan yhdistettä munasarjojen ja kivessyöpä [23], [24]. Karboplatiini alkyloivat DNA-emäksiin ja muotoja monoadducts, joista suurin osa lopulta muunnetaan DNA siltojen [25], [26]. Mielenkiintoista, solut otto karboplatiinin tavalla riippuen kupari kuljettaja, CTR1 [27] – [29].

Useimmat munasarjasyöpä potilaat diagnosoidaan edennyt pitkälle, koska ei ole validoituja seulontatestejä. Huolimatta on tehokkain lääke hoitoon munasarjasyöpä, vastustuskykyä karboplatiinin kehittyy joissakin korkealaatuista kasvaimia. Poikkeava Notch aktivointi liittyy vahvasti karboplatiinin vastus [22], [30], [31]. Erityisesti, Notch3 on yli-ilmentynyt 66% korkealaatuista munasarjasyövän [32], 22%, josta vaiheissa II-IV muuttunutta Notch signalointi [33]. Koska tällaiset havainnot, tutkimukset raportoitu tässä oli tarkoitus selvittää MSEA voisi herkistää Notch3-aktivoitua munasarjojen syöpäsolujen karboplatiinihoitoa.

Materiaalit ja menetelmät

Soluviljely ja kemikaalien

OVCA429 solut eristettiin potilaalta, jolla myöhäisessä vaiheessa, sisplatiini kestävä munasarjasyövän. OVCA429 /pCEG kantavien solujen vihreä fluoresoiva proteiini tyhjän vektorin ja OVCA429 /NICD3 solut ilmentävät konstitutiivisesti vihreää fluoresoivaa proteiinia koodattu NICD3 lajiteltiin fluoresenssi-solulajittelijaa ja pidettiin RPMI 1640-alustassa (Mediatech Inc., Herndon, VA), johon oli lisätty 10 % lämpöinaktivoitua naudan sikiön seerumia ja 100 U /ml penisilliiniä ja streptomysiiniä, 37 ° C: ssa, 5% CO

2-inkubaattorissa [34].

N

asetyyli kysteiini (NAC) ja MSEA (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) liuotettiin fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen. NAC on antioksidantti, joka pääasiassa kumoaa vetyperoksidia. Karboplatiini (Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY) liuotettiin veteen. KU 60019 ja NU 7026 (Tocris, Ellisville, MO) liuotettiin dimetyylisulfoksidiin, ja oli ATP-kilpailukykyisiä, kemiallisia estäjiä kinaasiaktiivisuuden ATM ja DNA-PK

cs [35], tässä järjestyksessä.

Solun elinkelpoisuus

sulforodamiini B (SRB) kolorimetrisiä määrityksiä suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [36]. Lyhyesti, solut ympättiin (10

5 solua /kuoppa) 96-kuoppaisille levyille ja annettiin kiinnitystä varten yön yli ennen lääkehoitoa. Sitten solut kiinnitettiin 10% trikloorietikkahapolla 1 h ajan 4 ° C: ssa, pestiin 5 kertaa vedellä ja kuivattiin ilmassa, ja sitten värjättiin 0,4% SRB 1% etikkahapossa 20 minuuttia huoneen lämpötilassa. Sitoutumattoman väriaineen poistettiin varovasti pesemällä solut 5 kertaa 1% etikkahapolla. Oltuaan kuivattiin ilmassa, soluja inkuboitiin 200 ui tris (hydroksimetyyli) aminometaani-puskurilla (pH 10,5, 10 mmol /l) 30 minuutin ajan 37 ° C: ssa. Optinen tiheys mitattiin levylukijaa (BMG LabTech, Cary, NC) 492 nm: ssä. Prosentuaalinen solujen elinkelpoisuus laskettiin käyttämällä kaavaa [36]:

% solujen elinkykyä = [(meanOD

näyte – meanOD

päivä 0) /(meanOD

neg ohjaus – meanOD

päivä 0)] x 100% ”

Solujen elinkelpoisuus analysoitiin edelleen laskemalla yhdistelmä indeksi (CI) arvot CalcuSyn ohjelmisto (Biosoft), joka perustuu lause, Chou-talalay. synergia CI asteikko 1 0 ja antagonismi on 1 äärettömään [37].

Immunofluoresenssikoe

Immunofluoresoivat analyysit ATM fosforylaatio Ser-1981 (pATMS1981), DNA-PK

cs fosforylaatio Ser -2056 (pDNA-PK

csS2056) ja H2AX fosforylaatio Ser-139 (γH2AX) suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [14], [38], [39]. Kaikki kuvat on otettu samoissa parametrit kirkkaus, kontrasti sekä valotusaika ja käsitellään dekonvoluutio käyttämällä AxioVision Release 4.7.2.0 kytketty Zeiss Axio Observer Z1m fluoresenssimikroskooppia (Zeiss, Thornwood, NY). Viisi kuvaa arvottiin kustakin dia (n = 3).

Cell cycle ja seleeni analysoi

virtaussytometrinen analyysit solusyklin suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [12]. Solut analysoitiin FACSCalibur sytometrin kanssa CellQuest ohjelman (Becton Dickinson, San Jose, CA). ModFit LT (versio 3.0, Verity Software House, Topsham, ME) levitettiin solusyklin analyysi päällekkäin histogrammit. Solunsisäiset seleeni-pitoisuudet määritettiin, kuten aikaisemmin on kuvattu [40], [41].

RNA: n eristys ja kvantitatiivinen RT-PCR: llä (qRT-PCR) B

Kokonais-RNA eristettiin käyttäen kloroformia faasien erottumista , isopropanolia RNA sateeseen, 75% etanolissa RNA pestä, RNaasi-vapaata vettä RNA resuspension, ja DNaasi-käsitelty ennen cDNA syntetisoitiin käyttäen High-Capacity cDNA Reverse Transcription kit (Life Technologya), kun läsnä on RNaasi-inhibiittoria. qRT-PCR suoritettiin käyttäen SYBR Green menetelmä Applied Biosystems 7500 Fast Reaaliaikainen (Applied Biosystems, Foster Ciet, CA). Alukkeiden sekvenssit varten qPCR ovat taulukossa S1 File S1.

Tilastot

Nämä tiedot analysoitiin SAS 9,0 (SAS Institute Inc., Cary, NC). Kaksisuuntainen opiskelijan

t

-testi ää käytettiin määrittämään tilastollista merkitystä (

p

0,05) välillä hoidon ja vastaavan kontrolliryhmiin.

Tulokset

synergistinen kuolleisuutta MSEA ja karboplatiinin OVCA429 /NICD3 solujen

munasarjakarsinoomat ilmentävät NICD3 kestävät platina terapeuttisia aineita [22], [30], [31]. Olemme aiemmin osoittaneet, että MSEA hoito (LD

50, 4 umol /l) tappaa HCT116 peräsuolen, PC-3 eturauhasen ja U-2 OS luusarkoomasoluissa yhdessä reaktiivisia happiradikaaleja (ROS), ATM ja DNA-PK

cs [12], [13]. Koska ROS on myös osallisena Notch3 signalointireitin [42], [43], testasimme hypoteesia, että MSEA voi tukahduttaa flegmatoimiseen OVCA429 /NICD3 munasarjasyöpäsoluja karboplatiini. Tulokset SRB selviytymisen määritykset osoittivat, että MSEA (0,25-2 umol /L, kuvio 1A) tai karboplatiini (1-25 umol /L, kuvio 1 B) yksin annosriippuvaisesti tappanut enemmän OVCA429 /pCEG kuin OVCA429 /NICD3 soluja. Tulokset monimuotoiset hoitoon (taulukko 1), ehdotti, että MSEA (2 umol /l) ja karboplatiini (1-25 umol /l) synergistisesti herkistyneet OVCA429 /NICD3 soluja (kuvio 1 D), mutta ei OVCA429 /pCEG soluja (kuvio 1C). Lisäksi CI analyysit vahvistivat epätehokkaalla välillä MSEA (2 umol /l) ja karboplatiinin (1-25 umol /l) OVCA429 /NICD3 soluja (taulukko 2). Synergia oli lineaarisesti parannettu kuten karboplatiinin pitoisuudet kasvoivat. Mielenkiintoista, joka perustuu Cl-arvot (taulukko 2), kohtuullisesta voimakkaaseen antagonismi tapahtui sen jälkeen, kun yhtäaikainen käsittely MSEA 2 umol /L OVCA429 /pCEG solujen ja ≤ 1 umol /l joissakin OVCA429 /NICD3 soluja. Erityisesti MSEA (2 umol /l) ja karboplatiinin (25 umol /l) co-käsittely herkisti tulenkestävä OVCA429 /NICD3 solujen määrin muistuttaa, että OVCA429 /pCEG soluja (36,2 vs. 30,2% eloonjääminen). Yhdessä MSEA voivat synergistisesti herkistää Notch3-aktivoitu OVCA munasarjasyöpäsoluja perinteisen karboplatiinihoitoa farmakologisesti saavutettavissa pitoisuuksina.

OVCA429 /pCEG ja OVCA429 /NICD3 syövän soluja käsiteltiin gradientilla pitoisuus MSEA (

) tai karboplatiini (

B

) 2 päivää. *,

p

0,05, vertaa OVCA429 /pCEG soluja. OVCA429 /pCEG solut (

C

) ja OVCA429 /NICD3 solut (

D

) käsiteltiin karboplatiinin (0-25 umol /l) poissa tai läsnä MSEA (2 umol /L) ja 2 päivää. Arvot ovat keskiarvo ± SEM (N = 3). Katkoviivat ennustaa additiivista vaikutusta MSEA ja karboplatiinin.

Solusyklianalyysiä of OVCA429 /pCEG ja OVCA429 /NICD3 solujen yhteistyötä käsitelty MSEA ja karboplatiinin

Koska MSEA ja karboplatiinin oli suurempi G2 /M ja vähemmän G1 ja S populaatioiden (

p

0,05) OVCA429 /NICD3 kuin OVCA429 /pCEG soluja (taulukko 3). Kaksi päivää sen jälkeen yhteistyössä hoidossa MSEA (2 umol /l) ja karboplatiinin (5 mikromol /l), S ja G2 /M väestö väheni huomattavasti (

p

0,05) OVCA429 /pCEG ja OVCA429 /NICD3 soluissa, vastaavasti. OVCA429 /pCEG ja OVCA429 /NICD3 solujen vertailukelpoisella näytetään ajasta riippuva induktio DNA-fragmentaation jälkeen co-hoidon osoituksena sub-G1 populaatioissa. Nämä tulokset viittaavat siihen, että co-hoito differentiaalisesti kohdistaa S vaiheen OVCA429 /pCEG soluihin ja G2 /M vaihe OVCA429 /NICD3 soluja.

Effect NAC, KU 60019, ja NU 7026 annetun herkkyys OVCA429 /pCEG ja OVCA429 /NICD3 solujen MSEA ja karboplatiini yhteistyössä hoidon

Seuraavaksi selvitettävä, redox tilan ja kinaasiaktiivisuudet ATM ja DNA-PK

cs olivat mukana herkkyys OVCA429 /pCEG ja OVCA429 /NICD3 solujen MSEA ja karboplatiini co-hoitoa. Kun läsnä on NAC (10 mmol /l), tappaminen vaikutus MSEA ja karboplatiinin suuresti lievittää molemmissa solulinjoissa (kuviot 2A-2D). Sen sijaan läsnä KU 60019 (3 ​​umol /l) tai NU 7026 (10 umol /l) ei muuttanut herkkyyttä OVCA429 /pCEG tai OVCA429 /NICD3 solujen kaltevuus pitoisuudet MSEA ja karboplatiinin co-hoitoa (kuvio 3 ). Nämä tulokset viittaavat siihen, että induktio ROS, mutta ei ATM tai DNA-PK

cs kinaasiaktiivisuudet, on mukana tappaminen vaikutus MSEA ja karboplatiinin co-hoitoa.

OVCA429 /pCEG (

,

C

) ja OVCA429 /NICD3 (

B

,

D

) soluja käsiteltiin MSEA ja kaltevuus pitoisuuden karboplatiinin (

,

B

) tai karboplatiini ja gradienttia pitoisuus MSEA (

C

,

D

) läsnä ollessa tai poissa ollessa NAC. Solujen elinkelpoisuus määritettiin SRB-määrityksellä. Solujen elinkelpoisuus ilman karboplatiini (

,

B

) tai MSEA (

C

,

D

) käsittely asetettiin 100%. Arvot ovat keskiarvo ± SEM (N = 3). *,

p

0,05, verrattuna MSEA tai karboplatiini ainoa hoito.

Soluja käsiteltiin MSEA ja kaltevuus karboplatiinin (

–

D

) tai karboplatiini ja kaltevuus pitoisuus MSEA (

E

–

H

) läsnä ollessa tai puuttuessa KU 60019 (

,

B

,

E

,

F

) ja NU 7026 (

C

,

D

,

G

,

H

). Solujen elinkelpoisuus määritettiin SRB-määrityksellä. Arvot ovat keskiarvo ± SEM (N = 3).

vaikutus MSEA ja karboplatiinin mRNA- ilmentymisen Notch kohdegeenien OVCA429 /pCEG ja OVCA429 /NICD3 solujen

vieressä määritetään, onko mRNA: n ekspression Notch kohdegeenien voidaan muuttaa MSEA ja karboplatiinihoitoa. Kuten odotettua,

HES1 ja HEY1

, klassinen Notch kohdegeenien olivat säädellään ylöspäin OVCA429 /NICD3 soluja (kuva 4).

HES1

mRNA ekspressio lisääntyi (

p

0,05) 6 ja 12 tunnin jälkeen MSEA kohtelu sekä OVCA429 /pCEG ja OVCA429 /NICD3 solut, kansi-induktioon, joka oli suurempi entisen kuin jälkimmäinen. MSEA aiheuttama

HES1

mRNA: n ilmentymisen laantunut 12 h. Sen sijaan karboplatiinihoitoa johti vaatimaton ja myöhäinen induktio

HES1

ilme. Kuitenkin,

HEY1

mRNA: n ekspressio ei vaikuttanut MSEA tai karboplatiinihoitoa sekä OVCA429 /pCEG ja OVCA429 /NICD3 soluja. Kaikkiaan MSEA indusoi mRNA ilmaus

HES1

riippumattomia karboplatiinin tai NICD3 ilme.

mRNA-tasot normalisoitiin kuin β-aktiini ja esitetty kertamuutoksia suhteessa OVCA429 /pCEG soluja ilman MSEA (2 umol /l) ja karboplatiinin (25 umol /l) hoitoon. Arvot ovat keskiarvo ± SEM (N = 3). *,

p

0,05, verrattuna OVCA429 /pCEG soluja. #,

p

0,05, verrattuna soluihin ilman MSEA ja karboplatiinihoitoa.

vaikutus MSEA ja karboplatiinin yhteistyössä käsittely muodostumista pATMS1981, pDNA-PK

csS2056 ja γH2AX in OVCA429 /pCEG ja OVCA429 /NICD3 solut

seuraava arvioitiin solujen DNA-vaurioita vastaus co-hoitoa. 24 h, pDNA-PK

csS2056 taso nousi huomattavasti (

p

0,05) ja induktio voitiin täysin päinvastainen läsnäollessa NU 7026 sekä OVCA429 /pCEG ja OVCA429 /NICD3 soluja ( Kuva S1A File S1). Läsnäolo NAC heikennettyä pDNA-PK

csS2056 ilmaisun OVCA429 /pCEG mutta ei OVCA429 /NICD3 soluja. Toisaalta, pATMS1981 ilmentyminen indusoitiin (

p

0,05) Yhteistyössä hoidon OVCA429 /pCEG mutta ei OVCA429 /NICD3 soluja (kuvio S1B File S1). Induktiota pATMS1981 ilmentymisen tukahdutettiin läsnä ollessa KU 60019 tai NAC. MSEA ja karboplatiinin yhteistyössä hoito ei aiheuttanut γH2AX muodostumista (Kuva S2 File S1), joka on yhdenmukainen aikaisempien raporttien kanssa, jotka osoittavat karboplatiinihoitoa, jopa erittäin suuri annos (100 mikromol /l), vain hieman indusoi γH2AX muodostumista OVCAR-3 munasarjasyöpäsoluja [44], [45]. Kaikkiaan pDNA-PK

csS2056 ja pATMS1981 vastata differentiaalisesti MSEA karboplatiinihoitoa co-hoitoa ja jotka eivät suoraan korreloi tappamisen vaikutus OVCA429 /pCEG ja OVCA429 /NICD3 soluja.

Keskustelu

tulokset Tässä tutkimuksessa osoitetaan, että MSEA voivat synergistisesti tehostavat karboplatiinin tappamisen OVCA429 /NICD3 munasarjasyöpäsoluja, mikä viittaa uuden strategian hoitoon korkealuokkaisesta munasarjasyöpäpotilailla näytteille Notch3 aktivointia. Tällainen synergistinen vaikutus on todennäköisesti johtuu modulaatioon NICD3 transaktivaation tapahtumia säätelevät MSEA ja karboplatiinin. Karboplatiinihoitoa tai ilmaus NICD3 ei vaikuta seleeniä sisällön MSEA käsiteltyjä soluja (OVCA429 /pCEG soluja, 21,5 ± 2,6 vs. 24,7 ± 1,4 ng /mg proteiinia; OVCA429 /NICD3 soluja, 26,8 ± 2,9 vs. 25,1 ± 1,4 ng /mg). ROS voi edistää tappaminen vaikutus MSEA ja karboplatiinin, mutta niitä ei tarvita synergismin OVCA429 /NICD3 soluja. Koska veren seleeniä ja karboplatiinin pitoisuuksia on raportoitu määrä 15 ja 105 umol /l, vastaavasti [46], [47], annokset MSEA ja karboplatiinin Tässä tutkimuksessa käytetyt ovat kliinisesti merkittäviä ja farmakologisesti saavutettavissa. Siitä huolimatta se on tulevaisuudessa kiinnostaa vahvistamaan synergiaa muiden Notch3-aktivoitua syöpäsoluissa ja prekliinisissä ja kliinisissä.

HES1

ja

HEY1

ovat klassisia NICD3 kohdegeenien. HES1 on transkription repressori, jonka rooleja Notch signalointireitin on alettu ymmärtää, [30], [48]. NICD3 transaktivoi

HES1

ilmaisun dissosioimalla yhteistyötään repressors ja mahdollistaa yhteistyön aktivaattorit sitovasti. Transkription repressori, HES1 jälkeen voi vaikuttaa solujen lisääntymistä. Vaikka HES1 ylössäätöä tiedetään edistävän karsinogeneesi [49], on olemassa lukuisia selostuksia, jotka osoittavat alaspäin säätely HES1 yhdessä eturauhassyövän etenemiseen [50] ja aggressiivinen kasvaimissa [51]. Koska MSEA indusoi mRNA ilmaus

HES1

mutta ei

HEY1

, MSEA voi suoraan toimia NICD3. Lisäksi MSEA indusoi suuremman

HES1

mRNA ilmaisun OVCA429 /pCEG kuin OVCA429 /NICD3 soluja, mikä viittaa siihen, että MSEA voivat stimuloida sitoutumista yhteistyössä aktivaattorien riippumaton NICD3. On myös todennäköistä, että Notch1 ja Notch2 selittää merkittävän HES1 induktion OVCA429 /pCEG soluja. Differentiaalinen sääntely MSEA ja karboplatiinin mRNA- ilmentymisen NICD3 kohdegeenien voi ainakin osittain selittää synergistisyyttä OVCA429 /NICD3 soluja. Kuitenkin, koska hoito saman annoksen MSEA ja karboplatiinin sijaan aiheuttaa antagonismin OVCA429 /pCEG soluja, varovainen huomioon on otettava liittyvät solu-spesifinen ja annoksesta riippuvaa luonnetta synergiaa. Tämä käsite on yhdenmukainen käsitys, että erilaisia ​​tehokas seleeni kemopreventiossa on kapea ja syöpä-erityinen [39]. Lisäksi MSEA hoito saattaa edistää kuvaamaan joitakin syöpää edistäviä selenoproteins in OVCA429 /pCEG soluihin [52]. Tulevaisuuden tutkimuksia tarvitaan selventää tätä MSEA aiheuttama transkription säätelyyn ja tarkistaa rooli HES1 ja muiden Notch kohdegeenien prekliinisissä malleissa ja kliinisistä näytteistä munasarjasyöpä.

Low prosenttia S-vaiheeseen väestöstä, joka näkyy in OVCA429 /NICD3 soluja, on osoitus nopeasta DNA: n replikaation ja huono vaste kemoterapialle [53], [54]. Kun MSEA ja karboplatiini co-hoitoa, prosentuaalinen S-vaiheessa väestöstä putoaa OVCA429 /pCEG solut taas prosentin G2 /M väestön pienentymistä OVCA429 /NICD3. Nopeinta pudotus määrä samoin kuin lisääntynyt sub G1 väestöstä, mikä viittaa siihen, että co-hoito voi kohdistaa S vaihe OVCA429 /pCEG solua ja G2 /M vaihe OVCA429 /NICD3 solujen apoptoosin. On mahdollista, että replikaation stressi ja DNA-katkoksia aiheuttama karboplatiinin ja MSEA herkistää OVCA429 /pCEG solujen S-vaiheen solusyklin, mutta homologinen rekombinaatio on aktivoitu OVCA429 /NICD3 soluja. Sinänsä tämä vaatisi monimuotoiset hoito aiheuttaa mitoottisiin stressiä ja kohde G2 /M vaiheessa OVCA429 /NICD3 solujen kuolemaan. Vaikka yhdistelmä gallate ja sulforaphane herkistää pitkälle munasarjasyövän solujen sisplatiinihoitoon läpi G2 /M pidätys [55] mukaan MSEA ja karboplatiini yhteistyössä hoidon näyttää kohdistaa S-vaiheeseen OVCA429 /pCEG solua ja G2 /M vaiheessa OVCA429 /NICD3 soluja .

Antioksidantit hoito on ehdotettu vähentämään sivuvaikutuksia yhdessä karboplatiinihoitoa lukien ototoksisuudesta, munuaistoksisuus, ja ruoansulatuskanavan toksisuutta [56] – [59]. Kuitenkin vaikutus oksidatiivisen tai pelkistävän stressiä munasarjasyövän ei ole selvä. Koska NAC hoito desensitizes OVCA429 munasarjasyöpäsoluja karboplatiini ja MSEA co-hoidon riippumaton NICD3 ilmaisun, oksidatiivisen stressin näyttää olevan yleinen, mutta ei erityistä vaatimusta estämiseksi tehokkaasti munasarjan syöpäsolujen kasvua. Yhdenmukainen havaintomme, NAC: n on osoitettu estävän sisplatiinin indusoiman apoptoosin sekä keuhko- ja munasarjasyöpä soluihin [56].

On kiehtovaa, että MSEA ja karboplatiini co-hoidon differentiaalisesti aktivoi ATM ja DNA-PK-

cs kinaasien, mutta estämällä niiden kinaasiaktiivisuudet ei ole vaikutusta synergian MSEA ja karboplatiinin tappaa munasarjasyöpäsoluja. Sen jälkeen, kun co-hoitoa, ROS näyttävät aktivointiin tarvitaan ATM mutta myötävaikuttavat vain osittain DNA-PK

cs kinaasin aktivaation OVCA429 /pCEG soluja. Kuitenkin ATM-kinaasin ei ole aktivoitu ja DNA-PK

cs aktivoidaan riippumaton NAC in OVCA429 /NICD3 soluja. Vaikka ATM on ylävirtaan DNA-PK

cs vastaukseen MSEA aiheuttaman oksidatiivisen stressin ei-syöpäsoluja [39], DNA-PK

cs aktivointi yhteistyössä hoidon OVCA429 /NICD3 solujen näyttää oltava riippumaton ATM aktivointia. Koska DNA-PK

cs aktivointi voi ylläpitää solunsisäistä oksidatiivisen stressin jälkeen MSEA hoidon [39], ilmentyminen NICD3 voi altistaa solut oksidatiivista stressiä. Toisaalta, vaikka ATM kinaasi aktivoituu oksidatiivista stressiä HCT116, PC-3 ja U2-OS syöpäsoluja [12] – [14], on hämmästyttävää, että ATM kinaasi ei voi aktivoida OVCA429 /NICD3 solujen jälkeen co -käsittelyä. Koska munasarjasyöpä kantasoluja ilmentävät korkeita ATM [22], rooli ATM karboplatiini kestävä munasarjasyöpään odottaa muita tarkastuksia.

munasarjasyöpä on viidenneksi suurin syy syövän kuolemaan naisten Yhdistyneessä valtioissa. Koska useimmat potilaat diagnosoidaan pitkälle vuoksi mitätöity seulontatestinä ja epäspesifisiä oireita esitetään, he tarvitsevat yhdistelmä debulking leikkauksen ja kemoterapian. Kuitenkin potilaat tyypillisesti toistuvia syövän hoidon jälkeen ja jopa kehittää chemoresistance. Näin ollen voittaa resistenssin kemoterapia on yksi lupaava strategioita hoitoon munasarjasyöpä. Sen lisäksi, että monimuotoiset vaikutus MSEA paklitakselin kanssa, kurkumiini, tai ABT-737: n apoptoottisen kuoleman eturauhas- ja rintasyövän solujen [60] – [62], meidän tiedot tukea suoraan synteettistä tappava vuorovaikutus MSEA ja karboplatiinin munasarjasyöpä soluja, jotka ilmentävät NICD3 ja joilla chemoresistance. Lopuksi MSEA ja karboplatiinin synteettinen kuolleisuutta on lupaavalta myöhäisessä vaiheessa munasarjasyöpään terapia.

tukeminen Information

Tiedosto S1.

doi: 10,1371 /journal.pone.0101664.s001

(PDF) B

Kiitokset

Kiitämme Changhui Zhao kasvaa joidenkin solujen, Craig Lacher ja William Martin seleeni analyysi, ja tohtori Nicholas Gaiano tarjoamiseksi pCEG-NICD3 plasmidi.

Hyväksytty julkaistavaksi kuin Manuscript No. J-12536 Mississippi Agricultural ja metsätalousministeriön Experimental Station, Mississippi State University.