Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tarkoitus

resistenssin kehittymistä vastaan ​​syöpälääkkeiden on ollut jatkuva kliininen ongelma hoitoon paikallisesti pitkälle edennyt syöpä pään ja kaulan limakalvojen peräisin levyepiteelisyöpä (HNSCC). Viimeaikaiset todisteet osoittavat, että DNA translesion synteesi (TLS) polymeraasi η (Pol η; hRad30a geeni) vähentää tehokkuutta gemsitabiinin /sisplatiinin. Tavoitteena Tämän tutkimuksen tarkoituksena on tarkastella niiden suhdetta ilmentymistason Pol η ja havaitun vastustuskykyisiksi näitä kemoterapeuttisten aineiden HNSCC, mikä ei tällä hetkellä tiedetä.

Methods

kuusikymmentäneljä limakalvon peräisin okasolusyöpää pään ja kaulan (HNSCC) vuodesta 1989 ja 2007 City of Hope National Medical Center (Duarte, CA) on takautuvasti analysoitiin. Esikäsittely näytteet immunovärjättiin anti-Pol η vasta-aineen ja korrelaatio ekspressiotaso Pol η ja kliinisiä tuloksia arvioitiin. Neljäkymmentäyhdeksän tapauksia käsiteltiin platina (n = 40) tai gemsitabiinia (n = 9), joka kemoterapian tutkittiin edelleen Pol η ilmentymistaso verrattuna potilaan vaste kemoterapiaan.

Tulokset

ilmentymistä Pol η kohosi 67% pään ja kaulan kasvainten näytteitä. Pol η ilmentymistaso oli huomattavasti korkeampi aste 1 luokkaan 2 kasvaimet (hyvin tai kohtalaisen eriytetty). Yleinen etu (täydellinen vaste + osittainen vaste) hoidetuilla potilailla platinaa ja gemsitabiinin kemoterapian oli 79,5%, jossa alhainen Pol η taso oli merkitsevästi yhteydessä korkea täydellinen hoitovaste (p = 0,03), vaikka ei liity yleistä selviytymistä. Lisäksi mitään merkittävää korrelaatiota ei havaittu Pol η ekspressiotaso sukupuoleen, ikään, tupakka /alkoholi historia, kasvain vaiheessa ja metastaattisen tila.

Johtopäätökset

Tuloksemme viittaavat siihen, että Pol η ilmentyminen olla käyttökelpoinen ennusteen merkkiaine tehokkuuden platinaa tai gemsitabiinin perustuva terapia HNSCC.

Citation: Zhou W, Chen Y-w, Liu X, Chu P, Loria S, Wang Y, et ai. (2013) Expression of DNA Translesion Synthesis Polymerase η pään ja kaulan okasolusyöpä ennustaa kestävyys gemsitabiini ja sisplatiini-kemoterapian. PLoS ONE 8 (12): e83978. doi: 10,1371 /journal.pone.0083978

Editor: Olivier Gires, Ludwig-Maximilians Yliopisto, Saksa

vastaanotettu: 25 kesäkuu 2013; Hyväksytty: 11 marraskuu 2013; Julkaistu: 20 joulukuu 2013

Copyright: © 2013 Zhou et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Työ tukivat NIH RO1 112446 varten KMC. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

limakalvon peräisin okasolusyöpä pään ja kaulan (HNSCC) viittaa ryhmään biologisesti vastaavia syöpiä peräisin limakalvon levyepiteelikarsinooma epiteelisolujen ylemmän aerodigestive suolikanavan, mukaan lukien huuli, suuontelon, nenäontelon, sivuonteloiden poskionteloiden, nielun ja kurkunpään. HNSCC on kuudes useimmin esiintyvä syöpä maailmassa ja osuus 2% kaikista syövän kuolemaan vuosittain. Mukaan American Cancer Society, 36540 amerikkalaiset diagnosoitu pään ja kaulan alueen syöpä vuonna 2011 ja 7880 tautiin kuolleet [1,2]. Useimmat potilaat läsnä imusolmuke etäpesäkkeitä aikaan diagnoosi, ja viiden vuoden pysyvyys näistä potilaista on noin 35% [3]; joka ei ole parantunut viimeisten kymmenen vuoden aikana [4]. Platina-pohjainen yhdistelmä hoito, kuten sisplatiini /oksaliplatiinin ja 5-FU ja taksoteeri, on nykyinen ensilinjan neoadjuvanttikemoterapian paikallisesti edennyt HNSCC [22]. Kuitenkin huono tai osittainen vaste platinapohjaiseen kemoterapia HNSCC edelleen arvoitus onkologit. Platinum yhdisteet muodostavat DNA juosteensisäisellä tai säikeiden- sidonnaisuuksia vakavasti estävät DNA-synteesiä ja johtaa mutaatioiden ja apoptoosin [5]. Nämä platina aiheuttama adduktit korjautuvat nukleotidin Leikkauskorjauksessa järjestelmä (NER) [6,7], yhteensopimattomuuden korjausjärjestelmän (MMR) järjestelmä, ja rekombinaatio korjaus (RR) [8]. Lisäksi DNA translesion synteesi (TLS)-polymeraaseja on myös osoitettu olevan kyky ohittaa sisplatiinin aiheuttamaa juosteensisäiseen addukteja [9,11,39,40]. Tämä viittaa siihen, nämä ohituksen polymeraaseja antaa vaihtoehtoisen mekanismin käsiteltäessä platinayhdisteellä aiheuttama DNA addukteja ja voivat myötävaikuttaa havaittu vastustusta nämä yhdisteet [9,11]. Niistä TLS DNA-polymeraasit, DNA Polymerase η (Pol η; hRad30a geeni, xeroderma pigmentosum variantti geenituote) on ainoa, hyvin ymmärrettävä biologinen toiminta, joka on jäljitellä poikki cis-syn syklobutaani tymiinidimeeri (CPDS), joka indusoi UV-säteilyn [10]. Geenivirheitä koodaavan geenin Pol η tuloksia Xeroderma pigmentosum Variant (XP-V) sairaus, ja XP-V potilaat ovat hyvin herkkiä UV-säteilyä ja altis kehittämiseen ihosyövän [10]. Pol η on myös osoitettu olevan kyky ohittaa laajan DNA vaurioita, kuten 7,8-dihydro-8-oxoguanine [15], (+] – trans-anti-bentso [α] pyreeni-N2- dG [16], asetyyliaminofluoreeni-yhdistetyt guaniini [17], O6-metyyliguaniini [18], ja tymiini glykoli [41].

lisäksi on osoitettu, että Pol η voivat moduloida solujen herkkyyttä kemoterapeuttisten aineet [11]. Pol η vajaiden solujen, jotka ovat peräisin XP-V potilaat olivat herkempiä p-D-arabinofuranosyylisytosiini (sytarabiini, araC), gemsitabiini, sisplatiini [12]. Cellular ja biokemialliset analyysit ehdotti, että suurempi herkkyys XP -V soluja näille lääkeaineille johtuu puute Pol η toiminnan uudelleenkäynnistämisen helpottaminen taukokohdasta DNA: n replikaation aiheuttama terapeuttisia aineita [13,14]. Pol η ohittaa Pt-GG juosteensisäisellä silloitettu addukteja suhteellinen suurempi tehokkuus ja fidelity, kun verrataan muihin TLS entsyymit [42-44]. Tutkimukset ovat myös osoittaneet, että ekspressiotaso Pol r korreloi negatiivisesti sisplatiinin herkkyys ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) solulinjat [19]. Lisäksi Pol η -proteiiniekspressio ehdotettu olevan itsenäinen ennustava merkkiaine hoitovasteen ja eloonjäämisen mahalaukun metastasoivaa adenokarsinoomaa potilaita, joita hoidetaan oksaliplatiinipohjaisen kemoterapiaa [20].

Tässä tutkimuksessa selvitimme assosiaatiot

in situ

ilmentyminen Pol η proteiinien ja tiedossa ennustetekijät kuten lavastus ja kasvaimen erilaistumista. Tutkimme myös yhdistysten välillä ilmaus Pol η proteiinien ja vastaus platinaa tai gemsitabiinin kemoterapian hoito ja eloonjäämisen HNSCC.

Materiaalit ja menetelmät

Potilasominaisuudet

kasvain lohkoja kuusikymmentäneljä potilailla diagnosoitiin limakalvon peräisin okasolusyöpää pään ja kaulan (HNSCC) vuodesta 1989 ja 2007 city ​​of Hope National Medical Center (Duarte, CA) on takautuvasti analysoitiin. Kasvainkudospalasta mukana Nenänielun kasvainten, sivuonteloiden, suuontelon, nielun, hypopharynx, ja kurkunpää. Mediaani-ikä potilailla oli 59 vuotta (vaihteluväli 39-78 vuotta) aikaan diagnoosin. Kahdeksan potilasta suljettiin selviytymisen analyysin puutteen vuoksi pitkän aikavälin seurantatutkimuksissa. Mediaani seuranta-aika oli 56 kuukautta (vaihteluväli +4,3-142kuukausi). Niistä 64 potilasta, 51 olivat ensisijainen HNSCC ja 13 olivat toistuvia tai toisen primaarikasvaimen. Kolmekymmentäneljä potilaalle tehtiin radikaaleja, 49 potilasta sai kemoterapiaa (40 potilasta sai neoadjuvant sisplatiinia, taksoteerin ja 5-FU, 4 potilasta sai myös gemsitabiini, ja loput 5 ajokelvottoman toistuvat syöpäpotilaat saivat palliatiivisen kemoterapiaa (gemsitabiini ja hydroksiurea). tiedot klinikan ominaisuudet on koottu taulukkoon 1.

Ominaisuus

n

POLη värjäystä

P

Low

(%) B korkea

(%)

Ikä (v) 593312362164≥603192922710.73GenderFemale175291271Male47163431660.34T stage

b

,

c

T

19333667T

210330770T

3217331467T

41763511650.56N tila

b

N-7229571N + 57193338670.32Histological differentiationWell8008100Moderate337212679Poor2314619390.01TobaccoNo187391161Yes46143032700.63EtOHNo4416362864Yes2052515750.34ChemotherapyNo164251275Yes48173730630.2Table 1. kliinis parametrit ja Pol η ilmaisun 64 HNSCC.

todennäköisyydellä tilastollinen ero (P) analysoitiin χ

2 testi itsenäisyyden.

b Potilaat luokiteltiin mukaan American Joint komitea Cancer (AJCC) /International Union Against Cancer (UICC) WHO luokitusjärjestelmä ja läsnäolo tai puuttuminen imusolmuke etäpesäke (N status).

c 7 potilaiden T vaiheessa voisi olla determined.Data edustettuna prosenttiosuudet tapaukset, joilla on alhainen tai korkea Pol η ilmaisun kunkin parametrin, ja n edustaa absoluuttista asianumero kunkin parametrin. todennäköisyys tilastollista eroa (P) analysoitiin χ

2 testi itsenäisyyden. Potilaat luokiteltiin mukaan American sekakomitealle syöväntutkimuskeskuksen (AJCC) /International Union Against Cancer (UICC) WHO luokitusjärjestelmä ja läsnäolo tai puuttuminen imusolmuke etäpesäke (N status). CSV Lataa CSV

Kaikki potilasta koskevat tiedot ja kudosnäyte keräys oli hyväksynyt IRB komitea (protokolla # 95917) City of Hope National Medical Center ja Beckman tutkimuslaitos, CA. Tiedot kliinisistä tuloksista ja vaste kemoterapialle saatiin sairaalaan kaavio lue ja kliinisen protokollan ennätys. Potilaita lavastettu mukaan TNM luokitusjärjestelmän American sekakomitean Cancer (AJCC). Taudista vapaa eloonjääminen määritettiin aikana alkaen diagnosoitu viime kontakti päivämäärä ja sensuroitiin toistuvat mennessä. Okasolusyöpä luokiteltiin käyttämällä Anneroth n monitekijäinen luokitusjärjestelmä: G1-hyvin eriytetty, G2-kohtalaisen eriytetty, G3-huonosti eriytetty, G4-erilaistumaton. Kliininen vaste kemoterapialle arvioitiin kasvaimen koon pieneneminen ja kaula imusolmuke tila on tietokonetomografia skannaus ennen ja jälkeen kemoterapiaa, mukaan Response arviointiperusteet kiinteitä kasvaimia (RECIST kriteerit) [21] seuraavasti: täydellinen vaste (CR) = 100 % regressio taudin; osittainen vaste (PR), ≥30% lasku summasta pisin halkaisija tavoitteita; progressiivinen disease≥ 20% kasvu; ja vakaa tauti (SD) = jäännöksiä. Patologinen täydellinen vaste (PCR) määriteltiin puuttuminen brutto- tai mikroskooppisia todisteita jäljellä kasvaimen kirurgisen tai biopsianäytteen kemoterapian jälkeen. Koska PCR vasta havaittiin neljällä potilaalla siis vain kliinisen vasteen käytettiin tilastolliseen analyysiin.

kudosnäytteitä ja vasta-

HNSCC näytteitä (n = 64) ja paracancer normaali suomuinen limakalvo kudokset ennen kemoterapiaa saatiin potilailta, joille suoritetaan operaation syöpä resektio tai incisional /excisional koepala kirjallisen suostumus potilaiden tammikuusta 1989 kesäkuussa 2007. Yhdeksän kuusikymmentäneljä jälkeinen kemoterapia kasvainten kudokset verrattiin myös. Histologinen luokittelu arvioitiin mukaan vuoden 1987 International Union syöpää vastaan ​​(UICC). Anti-Pol η-vasta-ainetta tuotettiin immunisoimalla kani erittäin hyvin puhdistettua N-terminaalinen domeeni ihmisen Pol η-proteiinin (aminohapot 1-513, katso kuva 1a). Polyklonaalinen vasta-aine puhdistettiin käyttäen G-proteiinin pylvääseen. Vasta-aineen spesifisyyden arvioitiin western blotting ja esto määritys (kuva 1b ja 1c).

A) N-terminaalinen fragmentti Pol η (korostettu harmaalla), jota käytetään sukupolven anti-Pol η-vasta-ainetta. B) Kehitetty vasta-aine, jota käytetään havaitsemiseen Pol η lysaateissa peräisin GM637 tai XP30RO soluja. C) Lane 1. tunnistaminen Pol η lysaatista ihmisen HCT116 soluista. Lane 2. Esto puhdistetulla rekombinantti ihmisen Pol η proteiinia. D) 1-3, GM 637 solua koetettiin sekundaarinen vasta-aineella yksinään (D2 ja D3). 4-6, GM637 solut tutkittiin anti-Pol η vasta-aine (D5) tai anti-PCNA-ainetta (D6). 7-9, XP30RO solut tutkittiin anti-Pol η vasta-aine (D8) tai anti-PCNA-ainetta (D9).

Western blot-analyysi

Western blot suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [1]. Lyhyesti, 20-ug kokosolulysaattia erotettiin 10% SDS-PAGE, ennen kuin siirrettiin nitroselluloosakalvolle (Bio-Rad Laboratories, CA) ja inkuboitiin estopuskurilla (1% I-Block reagenssia ja 0,1% Tween 20: tä), joka sisälsi Pol η primaarista vasta-ainetta yli yön 4 ° C: ssa. Membraani pestiin PBS: llä, jossa oli 0,1% Tween 20: 3-5 kertaa ennen inkuboidaan fluoresoivasti leimatut sekundääriset vasta-aineet vielä 60 minuuttia. Sen jälkeen peräkkäisiä pesujen signaaleja kalvot skannattiin kanssa Odyssey Infrared Imaging System (LI-COR Biosciences) tai havaita käyttämällä Fuji LAS-1000 kuvantamisjärjestelmä.

immunohistokemia

Human GM637 villityypin ja Pol η puutteellinen XP30RO soluja käytettiin vahvistamaan vasta kehitetty laboratoriossa. Lyhyesti, proliferatiivinen solut kiinnitettiin 4% paraformahyde PBS: ssä, jota seuraa inkubointi permeabilisointipuskuriin (0,5% saponiinia, 0,1% BSA ja 0,1% NaN3 PBS: ssä), huoneen lämpötilassa 30 minuutin ajan ennen kuin siihen lisättiin ensisijaisen vasta-aineiden permeabilisointipuskuriin lisää 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Ensisijainen vasta-aineet poistettiin pesemällä solut kolme kertaa permeabilisointipuskuriin ennen kuin lisättiin DyLight 488 tai DyLight 549 konjugoituja sekundäärisiä vasta-aineita (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.) vielä 1 tunnin ajan. Solut tutkittiin käyttäen konfokaalimikroskopialla (Biorad).

ilmentymisen Pol η parafiiniin upotettujen kudosten lohkot on saatu potilailta, immunohistokemiallinen värjäys suoritettiin käyttäen 4-um: n paksuisia leikkeitä valmistettiin formaliinilla lohkoja. Kudosleikkeet parafiini ksyleenillä jälkeen 100% etanolia. Sitten näytteet sammutettiin 3% vetyperoksidia ja esikäsitellään edistämään antigeenin haun höyryssä EDTA-liuoksella. Sen jälkeen, kun antigeeni haku, kalvot inkuboitiin Protein Block (DAKO, Carpinteria, CA) 5 minuutin ajaksi ja sen jälkeen inkuboimalla ensisijaisen anti-Pol η-vasta-aineita 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Objektilasit pestiin sitten Dako puskurilla ja inkuboidaan kanssa DAKO Envision anti-kani-Polymer sekundaarista vasta-ainetta (DAKO, Carpinteria, CA) vielä 30 minuuttia. Jälkeen pesun Dako puskurissa, laseja inkuboitiin kromogeenin diaminobentsidiinitetrahydrokloridilla (DAB, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), vastavärjättiin hematoksyliinillä ja asennettu.

värjäytyminen Pol η arvioitiin laskemalla positiivisten ydinvoiman värjättyjen solujen. Yleensä värjäys Pol η oli raikas, minimaalisella tausta värjäytymistä paratumor stroomasolujen, kuten on esitetty kuviossa 1. yhteensä 20 HPF, laskettiin kunkin näytteen, ja prosenttiosuus positiivisten kasvainsolujen ytimiä laskettiin kunkin tapauksessa (suurennos x 400, kentän koko 0,18 mm

2) alueilla useimpien positiivinen ytimet (hot spots). Nuclear immunoreaktiivisuus pisteytettiin perustuu värjäytymisen intensiteettiä ja värjäyksen määrin ja luokiteltiin käyttäen kaksitasoinen luokitusjärjestelmä: alhainen ilmaus: tumavärjäystä in 30% kasvainsoluja; ja korkea ilmaisun: tumavärjäystä in 30% kasvainsoluja. Kaikki tapaukset pisteytettiin sokkona kolme tarkkailijaa ja osoitti välinen Räter luotettavuus (sisäinen luokan Korrelaatiokerroin, Cronbachin α = 0,82).

Tilastollinen analyysi

Suhde Pol η ilmaisun ja kliinis ominaisuuksia tutkittiin chi-neliö testi ja Fisherin tarkka testejä. Univariate analyysi taudista vapaan eloonjäämisen tehtiin Kaplan-Meier-analyysi (log-rank-testi). Monimuuttujamenetelmin toteutettiin Coxin suhteellista riskin malliin säätämällä suurten ennusteeseen viittaavia parametreja. P-arvot (kaksipuolinen) alle 0,05 pidettiin tilastollista merkittävyyttä. Kaikki tiedot analysoitiin käyttämällä JMP tilasto-ohjelmalla, versio 9 (Cary, NC).

Tulokset

validointi anti-Pol η-vasta

Anti-Pol η-vasta kehitettiin immunisoimalla kani hyvin puhdistettua ihmisen Pol η polymeraasidomeenia sisällä N- päätelaite (1-513 aminohappoa, kuva 1a), yksityiskohtaiset menettelyt on kuvattu Materiaalit ja menetelmät. Voit testata spesifisyyden kehittyi vasta-, käytimme tätä vasta-koetin läsnäolon Pol η käyttää solulysaatteja ihmisen fibroblasti GM637 soluja tai XP30RO fibroblastisolut johdettu XP-V potilailla. Kuten on esitetty kuviossa 1 b, vasta-aine tunnisti ~ 80 kDa: n proteiinin GM637 solulysaateista, joka vastaa kanssa molekyylipaino Pol η mutta samaa proteiinia vyöhyke ei ole havaittu XP30RO solulysaateista. Edelleen tämä tulos, kompetitiomäärityksessä käyttämällä hyvin puhdistettua N-terminaalinen fragmentti Pol η kilpailla endogeenisen solun Pol η suoritettiin myös. Kuten on esitetty kuviossa 1 c, anti-Pol η-vasta-aine tunnistaa spesifisesti määräävän proteiinin vyöhyke ~ 80 kDa, mikä on sopusoinnussa molekyylipainon Pol η. Kilpailuun määrityksessä (kuvio 1c, kaista 2), tämä kirjataan proteiini band estyi täysin puhdistettua ihmisen Pol η, osoittaa kehitetty anti-Pol η vasta-aineella on erittäin spesifinen tunnistamaan ihmisen Pol η. Edelleen spesifisyyden varmistamiseksi tämän vasta-aineen, teimme IHC tutkimuksessa, jossa käytettiin villin tyypin ihmisen GM637 ja XP30RO fibroblastisolujen peräisin XP-V potilaalle. Kuten kuviossa 1D 5, anti-Pol η vasta-aine tunnisti Pol η ytimet GM637 soluissa, mutta ei Pol η puutteellinen XP30RO soluja (kuvio 1D 8). Kuten sisäinen valvonta, anti lisääntyvän solun tuma proteiini (PCNA) signaalit olivat positiivisia sekä soluissa (kuvio 1D. 6 ja 9). Ei signaalia ei havaittu, kun vain sekundäärinen vasta-aine oli läsnä (kuvio 1 D 2-3). Nämä tulokset vahvistivat lisäksi spesifisyys anti Pol η aineella.

ilmentyminen Pol η oli positiivisessa yhteydessä eriyttäminen HNSCC

Suhde kliinis parametrien ja Pol η ilmentyminen tutkittiin ja tulokset lueteltiin taulukossa 1. merkittävä korrelaatiota ei havaittu ilmaus Pol η ja histologisia arvosana HNSCC (p 0,01). Lisäksi prosenttiosuudet Pol η-korkean ilmentymistason havaittiin korreloivan erilaistumisen HNSCC huonosta, valvottu hyvin, koska prosenttiosuudet Pol η-korkea ilmentymistaso oli 39, 79, ja 100%: lla. Muut kliinis muuttujat, kuten potilaiden iän diagnoosin, sukupuoli, T vaiheessa N vaiheessa ja tupakka /alkoholi historia arvioitiin myös, mutta ei tilastollista merkittävyyttä ei havaittu.

immunoväriäys Pol η normaalissa squamous epiteelin kudosten ja HNSCC

Pol η ilmentymistasoon HNSCC kudoksessa verrattiin noncancerous limakalvon levyepiteeli (kuva 2). Kuten on esitetty, Pol η on läsnä pohjapinta ja parabasal kerrokset normaalin levyepiteelin. Interstitiaalinen kudos, vain pieniä määrä Pol η havaittiin stroomasoluissa. Korkea Pol η ilmentymistä havaittiin itukeskusten, joka on yhdenmukainen aiempien tutkimusten kanssa, ja sen roolia somaattisen hypermutaation germinaalikeskuksen [45-47]. Verrattuna normaaliin levyepiteeliin, kohonnut taso Pol η ilmentymistä havaittiin pään ja kaulan okasolusyöpää kuin 43 64 karsinoomien (67%) näytteistä osoitti positiivisen tahra. Suomuinen karsinooma solujen erilaistumista on ominaista kaikkein havaittavissa, kun läsnä tai poissa keratinisaatio-. Keratinization tapahtuu muodossa keratiini helmiä ja kerätään keskustaa kohti karsinoomasolulinjassa pesiä. Karsinoomasoluista keskellä ilmenee usein lisääntyneeseen erilaistumiseen fenotyyppi kuin reunat pesien [55]. Vaikka Pol η värjäytyminen oli suurempi hyvin erilaistunut karsinooma, ei hakeutuvan Pol η kasvaimen pesät havaittiin [23]. Ilmentymisen taso Pol η on karsinoomasoluja, jotka etäpesäkkeitä imusolmukkeissa tutkittiin myös ja vastaavat ekspressiotaso havaittiin vertaamalla vastaavaksi primaariseksi sivustoja (kuvio 2). Toinen mielenkiintoinen havainto oli, että mitoosi syöpäsolut oli pieni Pol η ilme, joka oli yhdenmukainen sen kanssa, että Pol η on pääosin aikana tarvitaan G1 /S-vaiheen [48-50].

A) Nuclear värjäys Pol η normaalissa levyepiteelillä kontrollina. B) vertailu Pol η värjäystä tason välillä HNSCC ja para-syövän normaalia levyepiteelikarsinooma limakalvo suuontelossa. C-E) HNSCC ydin- Pol η ilmaisu luokiteltiin negatiiviseksi (C), alhainen (D) ja korkea, mukaan taajuus ja intensiteetti värjättyjen solujen. F-G) vertailu Pol η värjäyksen ensisijainen syöpä pehmeä suulaki (F) ja metastaattinen syöpäsolujen imusolmuke (G). (Immunoperoksidaasi, alkuperäinen suurennus: × 100 (AB), × 200 (CG)).

muuttaminen Pol η proteiinin tasot vastauksena platinajohdoksia-kemoterapian

Voit selvittää platina kemoterapian muuttunut Pol η ilmaisun tasolla, näytteet samoilta HNSCC potilaiden ennen ja jälkeen kemoterapiaa analysoitiin ja verrattiin (n = 9, kuva 3 ja taulukko 2). Löysimme 6/9 HNSCC (67%) oli samanlainen tai lisääntynyt ilmentyminen Pol η jälkeen kemoterapian (joista yksi tapaus, joka oli lähes negatiivinen Pol η ilmaus ennen kemoterapiaa) ja 3/9 (33%) ovat vähentyneet Pol η ilme kemoterapian jälkeen . Vaikutus kemoterapiaa arvioitiin molempien kasvaimen koon pieneneminen radiographical tutkimus ja histologinen tutkiminen poistettu kohdunkaulan kudoksen hoidon jälkeen. Lopputulos kemoterapian luokiteltiin täydellinen remissio (CR), osittainen vaste (PD), vakaa tauti (SD) ja etenemistä taudin (PR). Tiedot osoittivat, että 33% CR (2 tapausta), 50% PR (3 tapausta) ja 17% PD /SD (1 tapaus) osoitti samanlaista sääteli Pol η ilmaisun post kemoterapiaa, ja 33% CR (1 tapaus), 67% PR (2 tapausta) ja 0% PD osoitti vähentynyt Pol η ilme. Kuitenkaan mitään merkittävää korrelaatiota ilmentymisen muutos Pol η vastauksena kemoterapiaa, lähinnä pienen otoksen koosta.

Ylärivi edustaa tumavärjäystä Pol η vuonna HNSCC ennen kemoterapiaa. Alarivi edustaa Pol η värjäytyminen kudoksessa saadaan samasta alueet alkuperäisestä kasvainten kemoterapian jälkeen. Tapaus 1) Pol η värjäys tasolla säädelty post kemoterapiaa. Tapaus 2) Pol η värjäys taso alassäädetty jälkikäsittelyä. Asia 3-4) Pol η värjäys taso pysyi samalla intensiteetillä jälkikäsittelyä (immunoperoksidaasitesti, alkuperäinen suurennos x200).

CR

(%) B PR

( %) B PD + SD

(%) B n

P

säätely ylöspäin Pol η2333501176down-säätely Pol η133267003N /atable 2. asetus Pol η ekspressiotaso post kemoterapiaa.

CR, täydellinen vaste; PR, osittainen vaste; SD, stabiili tauti; PD, etenemisen sairauden. CSV Lataa CSV

kliininen merkitys Pol η Värjäys taso vuonna HNSCC

Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että pohjapinta Pol η ilmaus ennen hoito saattaa vaikuttaa lopputulokseen platinayhdisteitä kemoterapian [19,20]. Siksi assosiaatio ilmaus Pol η ennen hoitoa ja kliinisiin tuloksiin, mukaan lukien kemoterapia vaste ja potilaan eloonjäämisen tutkittiin. Kuten taulukosta 3, 12, jotka saivat täydellinen remissio (CR), 8 koehenkilöä (66%) oli negatiivinen /matala ilmentymisen Pol η, ja vain 4 henkilöllä (33%) osoitti korkea Pol η värjäystä. Vuonna Päinvastoin, 10 henkilöillä, jotka eivät reagoineet (PD + SD), 8 olivat korkeat Pol η värjäytymistä ryhmässä (80%), vain 2 koehenkilöiltä otettiin pieni Pol η värjäytymistä (20%).

asiat

Pol η alhainen (%) B Pol η korkea (%) B P-arvo

CR

128 (66 ) 4 (33) PR278 (30) 19 (70) PD + SD102 (20) 8 (80) 0.03Table 3. Association between Pol η proteiinin ilmentymisen ja kliinisen vasteen kemoterapialle.

CR, täydellinen vaste ; PR, osittainen vaste; SD, stabiili tauti; PD, etenemisen sairauden. Yksityiskohdat on selitetty M M. CSV Lataa CSV

Suhde tautikohtaisten selviytymisen ja ilmentymistason Pol η analysoitiin edelleen käyttämällä Kaplan-Meier-analyysi (log-rank-testi). Vaikka on olemassa suuntaus osoittaa, että potilailla, joilla on korkea Pol η ilme on yleensä lyhyempi selviytymisen, korrelaatio ei ollut merkittävä (kuva 4). Monimuuttujamenetelmin edelleen suoritettiin Coxin suhteellista riskin malliin säätämällä suurten ennusteeseen viittaavia parametreja. Kuten taulukosta 4, T vaiheessa (P = 0,03) oli ainoa parametri todettu olevan merkittävä itsenäinen ennustaja kuoleman karsinoomia. Ei muita muuttujia kuten Pol η värjäys, ikä, N tila, ja histologiset kasvain eriyttäminen liittyi eloonjäämisen mukaan monimuuttujamenetelmin. Puute yhdistyksen välillä Pol η ilmaisun ja potilaiden eloonjäämisen tutkimuksessamme voisi johtua pienestä otoskoko kerätty jo hyvin pitkän ajan. Korkea paikallinen uusiutumisriski on tunnettu tekijä esteenä pitkäaikaisia ​​kasvainta elinaika potilaiden kanssa HNSCC [2-4,22]. Meidän kohortti oli 23 ulos 64 potilasta kuoli tauti uusiutuu, mukaan lukien 16 potilasta, joilla on korkea Pol η tason ja 7 potilaalla on matala Pol η tasolla. Ei kuitenkaan tilastollista merkittävyyttä välillä havaittiin Pol η ilmentymisen ja syövän uusiutumiseen (p = 0,15, tuloksia ei ole esitetty).

Sininen käyrä vastaa potilaille, joilla on korkea Pol η tason ja punainen käyrä potilaille, joilla on alhainen Pol η tasolla.

parametrit

Riskisuhde

95% CI

P

b

Age2.710.85-10.220.09T stage3.472.17-6.980.03N status1.040-4.390. 23Histological differentiation2.980.72-14.80.12POL η staining0.90.20-3.920.86chemotherapy0.790.08-17.620.85Tobacco2.240.54-11.40.32EtOH1.420.61-3.390.26Table 4. Osuus erilaisten mahdollisten ennustetekijöiden sairauksien elinaika suullinen syöpä potilailla (n = 58).

CI, luottamusväli.

b P-arvo saatiin Coxin suhteellisten riskien menetelmällä. Laskettu log-rank-testi. CSV Lataa CSV

Keskustelu

Tiedetään, että platina-pohjainen syöpälääkkeiden estää kasvaimen kasvua pääasiassa muodostamalla DNA addukteja [50]. Korkea ekspressiotaso Pol η on korreloinut huono kliiniseen tulokseen kun Platinapohjaisen aineita käytettiin hallintaan kuin pienisoluinen keuhkosyöpä ja mahalaukun metastasoivaa adenokarsinoomaa [19,20]. Mukaan Ihmisen proteiini atlas projekti, Pol η on kaikkialle ilmaistaan ​​ytimien olennaisesti useimmissa kudoksissa paitsi mesenchymal-, glial- ja stroomasolujen hormonaalisten kudoksissa [28]. Lisäksi, Pol η on havaittu useimmissa karsinoomasoluja, vaikkakin eri ekspressiotasoja on raportoitu [19,20,28,29]. Siksi mahdollinen vaikutus Pol η aktiivisuuteen Platinapohjaisen lääkkeitä tai gemsitabiinin HNSCC tutkitaan tässä raportissa.

Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että Pol η lähinnä ilmaistu erittäin lisääntyvissä pohjapinta ja parabasal kerrosta normaalin limakalvon levyepiteelillä. Paljon korkeampi ekspressiotaso Pol η ilmentymistä havaittiin useimmissa HNSCC verrattuna normaaliin vastine kudoksissa. Lisäksi, korkeampi Pol η ekspressiotaso on hyvin erilaistunut HNSCC havaittiin verrattuna huonosti erilaistuneet (kuvio 2 ja taulukko 1). Havaitsimme myös, että korkea perustason Pol η ilmaisun ennen kemoterapian merkittävästi korreloi matalan vastausprosentin kemoterapiaa. Aikaisemmissa tutkimuksissa on osoitettu, että Pol η vähentää sytotoksisia vaikutuksia sekä gemsitabiini ja sisplatiini laajentamalla DNA gemsitabiinin on 3′[11], tai ohittamalla sisplatiinin aiheuttama juosteensisäiseen addukteja [13]. Meidän kohortti, vain 5 potilasta sai gemsitabiinin kertahoitona ja 4 potilasta sai sekä sisplatiinin ja gemsitabiinin hoitoja. Yhdistimme nämä 9 tapausta 40 asiaa sisplatiinia analysoitavaksi. Potilaat, joilla on alhainen perusilmennystä Pol η oli korkeampi täydellinen vaste (8/18) kuin ne, joilla on korkea pohjapinta Pol η lauseke (4/31) (p = 0,03) (taulukko 3). Tuloksemme tukee edelleen, että ohitus aktiivisuus Pol η vaikuttaa platina /gemsitabiini aktiivisuus hallinnassa HSCCC, ja ilmentymistason Pol η voivat olla käyttökelpoisia ennustamiseen klinikan vastauksen ennen kemoterapiaa. Yleinen etu määrä (CR + PR) ei ollut merkitsevästi erilainen näissä kahdessa potilasryhmissä (16/18 Pol η alhaisen ryhmän ja 23/31 Pol η korkea ryhmä) (tuloksia ei ole esitetty), mikä pääasiassa johtui korkea osittainen hoitovaste (18/31) Pol η korkea ryhmä. Tämä voi johtua toiminnasta muuta DNA korjausmekanismit edistää yleistä herkkyyttä kemoterapeuttisten aineiden tuumorikudoksissa [24-27]. Esimerkkejä DNA ydin- Leikkauskorjauksessa proteiinit ja BRCA1 ilmoitettiin myötävaikuttaa vastustuskyvyn platinapohjaiseen aineet [35-38,51-54].

Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että sisplatiinihoitoon kohonnut ilmentyminen DNA: n korjaukseen geenien ja edistänyt havaittua vastus [30-34]. Ceppi et. al. kertoi, että Pol η mRNA-tasot ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) solulinjat merkittävästi aiheuttamien sisplatiinin [19]. Aikaisempi solu tutkimus on osoittanut, että downregulation DNA vaurion ohitus polymeraasia ζ (Pol ζ) pään ja niskan levy- karsinoomasoluja herkistää soluja sisplatiinin, ja esto hRev3 geenin ilmentyminen oli ehdotettu olevan potentiaalinen kliininen strategiaa vähentää vastustuskykyä sisplatiinin HNSCC [56]. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että ilmaisu taso Pol η taso nousi 6 tapauksessa (6/9) ja 9 potilasta, jotka olivat resistenttejä platinaa tai gemsitabiinin kemoterapian, jota ei ole raportoitu aikaisemmin. Lisätutkimukset ovat tarpeen suuremmalla otoskoko päätellä, onko muutos Pol η ilmaisun ennen ja jälkeen kemoterapiaa voitaisiin käyttää ennustava resistenssin kehittyminen platinaa tai gemsitabiinia kemoterapian.

Nykyinen tutkimus osoitti, että korkean tason ilmentymistä Pol η liittyy alennettu herkkyys platina /gemsitabiinihoidon, mikä viittaa siihen, että ilmentymistaso Pol η voidaan käyttää ennakoivaa merkki. Nykyinen Tulokset osoittavat myös, että ei ole merkittävää yhdistyksen välillä Pol η ilmaisun ja ikä, sukupuoli, primäärikasvain koko, LN metastaattinen tila perusteella tällaisia ​​tapauksia numeron. Vaikka tulokset eivät havaitse merkittävää yhdistyksen välillä Pol η ekspressiotason ja potilas (OS ja PFS), on olemassa suuntaus osoittaa, että korkeampi Pol η ilmentyminen korreloi lyhyempi selviytymistä.