Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Krooninen tulehdus näyttelee kausaalinen rooli mahakasvaimen aloittamista. Tunnistaminen ennakoivan biomerkkiaineissa mahalaukun tulehdus kasvaimien syntyyn auttaa meitä erottamaan mahalaukun syövän atrofinen gastriitti ja diagnoosin alkuvaiheen mahasyöpä. Fosfolipaasi C epsilon 1 (PLCε1) raportoidaan tärkeä rooli tulehduksen ja kasvaimen kehittymisen. Tämä Tutkimuksen tarkoituksena oli tutkia kliinistä merkitystä PLCε1 käynnistymiseen ja etenemiseen mahasyövän.

Menetelmät /Principal Havainnot

Ensinnäkin mRNA ja proteiini ilmentymä PLCε1 analysoitiin käänteistranskriptio -PCR ja Western blotting normaaleissa mahan limakalvojen epiteelisolujen linja GES-1 ja mahasyövän solulinjoissa AGS, SGC7901, ja MGC803. Tulokset osoittivat sekä mRNA ja proteiini tasoilla PLCε1 olivat säädellään ylöspäin mahasyövän soluissa verrattuna normaaliin mahalimakalvosoluissa epiteelisolujen. Toiseksi, tämä tulos vahvistettiin immunohistokemiallisella havaitsemisen kudoksessa microarray lukien 74 pariksi mahasyövän ja viereisten normaaleissa kudoksissa. Kolmanneksi, riippumattomuuteen immunohistokemiallinen analyysi 799 kroonisen atrofisen gastriitin kudosnäytteiden osoittaneet PLCε1 ilmentyminen atrofinen gastriitti kudoksista alassäädetty koska PLCε1 ilmentyminen oli negatiivinen 524 (65,6%) atrofinen gastriitti. Lisäksi sovitettu kliininen kudosten atrofista vakavia gastriitti ja mahasyöpä potilasta käytettiin edelleen vahvistaa aiemmat tulokset analysoimalla mRNA ja proteiini tasojen ilmentymistä PLCε1 kliinisissä näytteissä.

Johtopäätökset /merkitykset

Tuloksemme ehdotti, että PLCε1 proteiini voi olla mahdollinen biomerkkiaine erottaa mahasyövän tulehdus vaurio, ja voisi olla paljon mahdollisuuksia sovelluksissa kuten diagnoosi ja ennakkovaroitus alkuvaiheen mahasyöpä.

Citation: Chen J Wang W, Zhang T, Ji J, Qian Q, Lu L, et al. (2012) Differential Expression of fosfolipaasi C Epsilon 1 liittyy krooninen atrofisen gastriitin ja mahasyövässä. PLoS ONE 7 (10): e47563. doi: 10,1371 /journal.pone.0047563

Toimittaja: Javier S. Castresana, Navarran yliopisto, Espanja

vastaanotettu: 22 kesäkuu 2012; Hyväksytty: 18 syyskuu 2012; Julkaistu: 15 lokakuu 2012

Copyright: © Chen et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat National Key Basic Research Program of China (973 Project) (2010CB933900), New Century Excellent Talent opetusministeriön of China (NCET-08-0350), Special Infection Diseases Key Project of China (2009ZX10004-311), Kansallinen Natural Science Foundation of China (31170961 ja 31100717), Shanghai Science and Technology Fund (12ZR1415800) ja Shanghai Jiao Tong-yliopiston juhlarahaston jatko-(Z-340-007). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Mahasyöpä on neljäs yhteinen kasvaimia maailmassa. Ilmaantuvuus mahalaukun syövän kasvaa tasaisesti, koska viimeaikaisten muutosten elämäntavan ja ruokavalion tottumukset Kiinassa [1]. Kuten mahasyövän, eloonjäämisluvut riippuu varhainen taudinmääritys. Tyypillisesti aikaisemmin syöpä havaitaan ja diagnosoidaan, sitä enemmän onnistunut hoito on. Siksi on erittäin tärkeää parantaa määrien varhainen toteaminen ja varhainen hoito syöpään. Olemme pyrkineet luomaan varhaisessa mahasyövässä ennakkovaroitus perustuva geenien ilmentymisen mikrosiruanalyysi vuodesta 2005 [2]. Samalla olemme myös toivoivat löytävänsä aikaisin mahalaukun syöpäsolut

in vivo

multi-mode kohdistettuja kuvantamismenetelmiä [3] – [7]. Kuitenkin puuttuu of biomarkkeri mahasyövän on edelleen suuri este varhaisen diagnoosin.

Nykyään hyväksytään yleisesti, että

Helicobacter pylori

(

H. Pylori

) näytelmiä syy rooli käynnistämiseen krooninen tulehdus (gastriitti), joka johtaa pahanlaatuisen, ja on luokiteltu selvä ihmisille syöpää aiheuttaviksi International Agency of Research on Cancer (IARC) [8] – [10]. Lisäksi perustuu histologiseen eroista krooninen gastriitti ja mahasyöpä, alkuvaiheen mahasyöpä on usein havaitaan endoskopialla. Siten tutkimus molekyyli- ja biologiset muutokset, mukaan lukien geenien monistaminen ja aktivoinnit, jotka esiintyvät kroonisesta gastriitti mahalaukun syövän, voi tarjota uusia oivalluksia patologian tämän taudin ja uuden ennustetekijöitä merkkiaineita. Kuitenkin, ajan tasalla, on olemassa muutamia raportteja erityistilanteissa biomarkkerit voidaan erottaa mahalaukun tulehduksen mahalaukun kasvaimien syntyyn.

Fosfoinositidi-spesifisen fosfolipaasi C (PLC) edustaa suuri perhe, joka katalysoi hydrolyysin fosfatidyyli 4, 5-bifosfaatin kahteen tärkeää toisiolähettejä, diasyyliglyserolin ja inositoli 1,4,5-trisfosfaatti, joka sisältää kuusi perheet nisäkkäiden PLC isoformeja (β, γ, δ, ε, ζ ja η) [11] – [13]. Joukossa, PLCε on äskettäin tunnistettu jäsen logiikkaperhe [12]. Se on keskeinen alavirtaan tiedoksiannon Ras perheen pieniä GTPaaseja: Ras, Rap1, ja Rap2 [12], [14], [15].

Äskettäin paljon töitä raportoitu että PLCε1 ollut keskeinen rooli kasvainten synnyssä ja tulehdus. PLCε1 ilmaisun on todettu korreloivan ihmisen virtsarakon syöpä, ja knockdovvn PLCε1

in vitro

ja

in vivo

esti virtsarakon kasvaimen kasvua [16], [17]. Lisäksi On raportoitu, että PLCε1 on yli-ilmentynyt ihosyöpää [18]. Vuonna PLCε

– /- hiirissä, sillä oli merkittävä resistenssi kasvaimen muodostumisen ja 12-O-tetradekanoyyliforboli-13-asetaatti (TPA) -induce ihotulehdus [18], [19]. Myöhemmät tutkimukset osoittivat, että PLCε pelataan ratkaiseva rooli spontaani suoliston kasvainten synnyssä kanssa lisääminen angiogeneesin ja tulehduksen käyttämällä adenomatoottisen polypoosin coli (APC)

Min /+ hiirimallissa [20].

Lisäksi PLCε vaadittiin aktivaatioon sytokiinituotannon ei-immuuni ihon solujen erilaisia ​​tulehdusreaktioita, ja tämä tärkeä tehtävä PLCε vahvistettiin edelleen transgeenisissä hiirissä yli-ilmentävät PLCε [21], [22]. Toisaalta, PLCε vaadittiin tuumorinekroositekijä (TNFa) aiheuttaman kemokiini (C-C-motiivi) ligandia 2 (CCL2) ilmentyminen ihmisen keratinosyyteissä ja yhteistyössä tumatekijä kappa B (NF-KB) reitin [23]. Tällainen toiminta PLCε tulehdus on ainutlaatuinen PLC-isoentsyymien [13].

Äskettäin kaksi yhden emäksen monimuotoisuus (SNP) rs2274223 ja rs11187870 in PLCε1 loci on tunnistettu uusi alttius lokus mahasyövän in Chinese väestö genomin laaja geeni-yhdistys analyysi (GWAS) [24] – [26]. Nämä tulokset vahvistivat yhdistyksen välillä PLCε1 ja riskien mahasyövistä.

Tässä tutkimuksessa selvitimme ekspressiokuviota PLCε1 ihmisen mahalaukun kudoksissa, kuten normaali, atrofinen gastriitti, ja kasvain kudosten ja teki hypoteesi roolia PLCε1 vuonna kroonisen tulehduksen ja kasvaimen kehittymisen mahasyövän. Verrattuna normaaleissa kudoksissa, huomasimme, että PLCε1 proteiinia ilmentyy runsaasti mahasyövässä kudoksissa, kun taas se oli säädellä vähentävästi atrofinen maha- kudoksissa. Tuloksemme viittaavat vahvasti siihen, että PLCε1 voi olla mahdollisesti lupaava biomarkkereiden erottamiseen mahasyövän atrofista gastriittia ja saattaa olla mahdollinen biomarkkereiden diagnosoimaan alkuvaiheen mahasyöpä.

Materiaalit ja menetelmät

Ethic liitetiedot

tutkimus hyväksynyt eettinen komitea Sun Yat-sen University Cancer Center ja eettiselle toimikunnalle ensimmäisen Affiliated sairaala Shanghai Jiao Tong University, ja kirjallinen suostumus saatiin kuhunkin aiheeseen.

Solulinjat

SV40-transformoidut kuolematon mahalaukun epiteelisolujen GES-1 säilytettiin meidän instituutti ja ylläpidetään suositellaan [27]. Kolme mahasyövän solulinjoissa AGS, SGC7901 ja MGC803 saatiin Kiinan tiedeakatemia Cell Bank of Type Culture Collection ja pidetään laboratoriossamme. Kaikkia solulinjoja viljeltiin Dulbeccon Modified Eagle Medium (DMEM), jota oli täydennetty 10% vasikan sikiön seerumia (FCS) (Sigma Chemical, St. Louis, MO), 100 yksikköä /ml penisilliiniä ja 0,1 mg /ml streptomysiiniä. Soluja pidettiin 37 ° C: ssa kostutetussa kammiossa, 5% CO

2.

RNA uuttaminen ja Reverse Transcription-PCR

Kokonais-RNA soluista ja kudoksista näytteet uutettiin käyttäen Trizol-reagenssia (Invitrogen) mukaisesti valmistajan ohjeiden. Uutettu RNA esikäsiteltiin RNaasi-vapaata DNaasia, ja 2 ug RNA: ta kustakin näytteestä käytettiin cDNA-synteesin pohjustettu sattumanvaraisia ​​heksameerejä. PCR-välitteinen amplifikaatio PLCε1 cDNA, ensimmäinen monistus käyttäen PLCε1 alukkeita tehtiin denaturaatiovaiheen 95 ° C: ssa 10 min, mitä seurasi 30 denaturointi sykliä 95 ° C: ssa 60 s, alukkeen 55 ° C: ssa 30 s, ja alukkeen pidennyksen 72 ° C: ssa 30 s. Päätyttyä pyöräily vaiheet, lopullinen pidennys 72 ° C: ssa 5 minuutin ajan toteutettiin ennen kuin reaktio pysäytettiin, ja säilytettiin 4 ° C: ssa. Expression data normalisoitiin geometrinen keskiarvo housekeeping glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH) gene hallita vaihtelua ekspressiotasot. Käänteinen transkriptio-PCR suunniteltiin käyttäen Primer Express ohjelmiston versio 3.0 (Applied Biosystems). Sekvenssit sense- ja antisense-alukkeet olivat seuraavat: 5′-GCAAGAAGTGGCCTTCTCAG-3 ’(F) ja 5′-GAACTTGAAGGGAGGGCATT -3′ (R) PLCε1, 5’-GCTCCTCCTGAGCGCAAG-3 ’(F) ja 5’- CATCTGCTGGAAGGTGGACA – 3 ’(R) GAPDH.

Western-blottaus

Solut kerättiin näytteet puskuriin [62,5 mmol /L Tris-HCI (pH 6,8), 2% SDS: ää, 10% glyserolia ja 5% 2-h-merkaptoetanolia]. Kaikki tuoreet kudokset maadoitettu jauhe nestemäisessä typessä ja sen jälkeen hajotetaan näytteenoton puskurilla. Proteiinipitoisuus määritettiin Bradford-määrityksellä (Bio-Rad Laboratories). Yhtä suuret määrät proteiineja pantiin 9% polyakryyliamidi-SDS geeleissä (SDS-PAGE), erotettiin elektroforeettisesti ja siirrettiin polyvinylideenifluoridi kalvoja (Amersham Pharmacia Biotech). Kalvo inkuboitiin anti PLCε1 kanin vasta-ainetta (1:250; Sigma). PLCε1 ekspressio havaittiin piparjuuriperoksidaasiin konjugoitua vuohen anti-kani-IgG: tä (1:2,000; Amersham Pharmacia Biotech) ja tehostetun kemiluminesenssin (Amersham Pharmacia Biotech) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. β-aktiini havaittiin anti-β-aktiini kanin vasta-ainetta (1:1,000 laimennus; Sigma) käytettiin latauskontrollina.

Potilaat, kudosnäytteet ja Tissue Microarray

Potilaat, joilla on atrofinen gastriitti ja syöpä valittiin potilaat, jotka oli tarkoitus ylemmän ruoansulatuskanavan endoskopia rutiiniseulontaan mahasyövän First Affiliated sairaala Shanghai Jiao Tong-yliopiston ja Sun Yat-sen University Cancer Center tammikuusta 2003 joulukuu 2009. sulkea pois potilailla, joilla oli sai haavaumia aineita tai antibiootteja jopa kaksi kuukautta ennen tutkimusta ja ne, joilla oli historia mahasyöpä, maha- tai pohjukaissuolihaava, tai mahalaukun leikkausta. Hematoksyliinillä ja eosiinilla (H keski-ikä = 63,77 vuotta, 23 naista ja 35 miestä) sisältyy 36 aikaisin tapauksissa (pTNM vaihe I = 11, pTNM vaiheen II = 25) ja 36 edenneissä tapauksissa (pTNM vaiheen III = 32, pTNM vaihe IV = 6). Näistä 6 (0,81%) luokiteltiin hyvin eriytetty adenokarsinooma, 40 (54,1%) kuin kohtuullisesti eriytetty, ja 25 (33,8%) kuin huonosti eriytetty adenokarsinooman.

immunohistokemia

immunohistokemiallinen analyysi käytettiin määrittämään ekspressiokuviota PLCε1 proteiinin 74 Hyväksytty ihmisen mahasyövän kudosten ja 799 atrofinen gastriitti näytteitä. Lyhyesti, parafiiniin näytteet leikattiin 4 um: n leikkeiksi, ja paistettiin 60 ° C: ssa 2 h, mitä seurasi deparaffinization ksyleenillä ja rehydratoitiin. Leikkeet upotettiin EDTA antigeenisen haku puskuria ja mikroaalloilla antigeenisiä haku, jonka jälkeen ne käsiteltiin 3% vetyperoksidilla metanolissa sammuttaa endogeenisen peroksidaasin aktiivisuus, jonka jälkeen inkuboitiin 1% naudan seerumin albumiinia estää epäspesifisen sitoutumisen. Leikkeitä inkuboitiin kanin anti PLCε1 (1:50; Sigma) yön yli 4 ° C: ssa. Normaalia vuohen seerumia käytettiin negatiivisena kontrollina. Pesun jälkeen kudosleikkeiden käsiteltiin biotinyloidulla anti-kani sekundääristä vasta-ainetta (Zymed), minkä jälkeen inkuboitiin edelleen streptavidiini-piparjuuriperoksidaasi-kompleksia (Zymed). Tissue jälkeen leikkeet upotettiin 3, 3′-diaminobentsii- ja vastavärjättiin 10% Mayerin hematoksyliinillä, kuivattu, ja asennettu.

pisteytys PLCε1 immunohistokemia

PLCε1 immunoreaktiivisuus arvioitiin itsenäisesti 3 patologit ( WW, QQ ja VL), jotka olivat sokaissut hoitotuloksia. Prosenttiosuus positiivisesti värjäytyneiden solujen ja intensiteetti värjäämällä solut määritettiin kullekin tarkkailijan ja keskimäärin 3 tulokset laskettiin. Me satunnaisesti valittu 10 suuritehoisia kenttiä (suurennos, × 400; 100 solua suuritehoisia kenttä) ja laskettiin 1000 solua. Kun keskiarvo prosenttiosuus PLCε1-positiivisten solujen on lähes 0% tai 100%, keskihajonta (SD) on lähellä 0; ja, kun keskiarvo on noin 50%, SD on noin 5%. Siten SD ei kasva keskiarvon. Tässä tutkimuksessa PLCε1 ilmentyminen luokiteltiin seuraavasti: kudoksen positiivista sytoplasmista värjäytymistä ≤25% soluista pisteytettiin negatiivinen, ja kudos positiivisella sytoplasmista värjäytymistä 25% soluista pisteytettiin positiivinen [30].

tilastollinen analyysi

Kaikki tilastolliset analyysit tehtiin SPSS 17.0 tilastollinen ohjelmistopaketti. Wilcoxonin menetelmää käytettiin analysoimaan näitä Hyväksytty mahalaukun kasvaimet kudosten kudoksen microarray. Testin ja Fisherin testejä käytetään analysoida näitä mahalaukun syövän ja vaikea atrofinen gastriitti, ja myös suoritettiin määrittämään merkitystä suhde PLCε1 ilmaisun ja ennusteeseen viittaavia ominaisuuksia. Kukin koe suoritettiin itsenäisesti ainakin kaksi kertaa samanlaisilla tuloksilla.

p

0,05 kaikissa tapauksissa pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Up-säänneltyjen ilmentäminen PLCε1 mahasyövän Solulinjat

Ensinnäkin Huomasimme mRNA ja proteiini ilmentymistä PLCε1 eri mahan solulinjoissa (kuvio 1). Käänteinen transkriptio-PCR-analyysi ja Western blotting-analyysi suoritettiin näistä näytteistä peräisin normaalista mahalimakalvosoluissa solut GES-1 ja kolme mahasyövän solulinjoissa AGS, SGC7901 ja MGC803. Huomasimme, että kaikki mahasyövän solulinjoissa paljasti suurempia PLCε1 ilmaisua kuin normaalissa mahalaukun solujen valvontaa sekä mRNA ja proteiini tasoilla.

, ilmentyminen PLCε1 mRNA mahalaukun normaalissa solulinjassa GES-1and syöpäsolulinjoissa SGC7901 , MGC803 ja AGS käänteistranskriptiolla-PCR. B, ilmentyminen PLCε1 proteiinin mahan normaalia solulinjojen GES-1 ja syöpäsolulinjat SGC7901, MGC803 ja AGS Western-blottauksella.

PLCε1 on säädelty mahasyövän Vauriot mutta säädellä vähentävästi Atrofinen gastriitti Vauriot

Sitten tutkimme roolia PLCε1 sekä kasvaimen ja normaaleissa kudoksissa on mahasyövän kudos microarray. Kuten kuviossa 2 on esitetty, havaitsimme, että sekä kasvain ja normaaleissa kudoksissa osoitti positiivisen ekspression PLCε1. Kuitenkin, kuten taulukossa 1 on esitetty, kudoksen microarray data-analyysi oli osoittanut, että prosenttiosuus PLCε1 positiivisen ilmaisun kasvainkudoksissa on huomattavasti korkeampi kuin viereisillä normaaleissa kudoksissa Wilcoxonin testi analysointi (73,0% vs. 20,3%,

p

0,01).

edustaja kuvia immunohistokemiallinen analyysi 74 arkistoituja mahasyövän ja 799 atrofinen gastriitti tapauksissa. A katsaus kudosten microarray immunovärjäyksellä vasta PLCε1. Boxed koepaloja esitetään yksityiskohtaisesti (B ja C). B ja C ovat Hyväksytty kasvain ja viereisten normaaleissa kudoksissa peräisin samasta potilaasta. Potilas on pTNM vaiheen III huonosti eriytetty adenokarsinooma. Molemmat kasvain (B) ja viereisen normaali (C) solut ovat positiivisia PLCε1. Edustavia immunohistokemiallista (D) /histologinen (G) havainnot on atrofinen gastriitti kudosta, edustaja immunohistokemiallinen (E) /histologinen (H) havainnot mahalaukun normaalia kudosta, edustaja immunohistokemiallinen (F) /histologinen (I) havainnot on mahasyövän kudos . (Original suurennus, × 2 B ja C, × 200 D, E, F, G, H ja I). ​​

määrittämiseksi PLCε1 ilmaisun tulehdus ympäristössä, laajensimme PLCε1 immunohistokemiallista analyysiä käyttäen toista riippumaton sarja parafinoidut kudosleikkeiden 799 atrofisen gastriitin kudosnäytteet. Immuunihistokemialliset Tulokset osoittivat, että PLCε1 ilme oli positiivinen 275 (37,0%) atrofinen gastriitti lukien 106 (37,7%) lievä atrofinen gastriitti, 98 (26,0%) kohtalainen atrofinen gastriitti ja 71 (28,1%) vuonna vaikea atrofinen, vastaavasti. Lisäksi PLCε1 ilmentyminen korreloi aste surkastumista (

p

= 0,036) (katso taulukko 2). Näin ollen, verrattuna kasvaimen ja normaaleissa kudoksissa, atrofinen gastriitti näytteet oli vähentynyt PLCε1 ilmentymistä (

p

0,001) (katso taulukko 2).

Sitten vahvisti nämä immunohistokemiallisella kudos microarray tulokset käänteisfaasi-transkription-PCR: llä ja Western blot-analyysi kolmesta pariksi ja mahalaukun syövän vieressä normaaleissa kudoksissa ja kolme pariksi ja vaikea atrofinen gastriitti ja viereisten normaaleissa kudoksissa, jotka ovat peräisin samasta potilaasta. Verrattuna vieressä normaaleissa kudoksissa, kolme tutkittiin mahalaukun tuumorit up-regulation of PLCε1 ilmentymisen sekä mRNA: ta ja proteiinia tasolla, mutta kaikki vaikea atrofinen gastriitti kudoksissa oli pienempi ilmentyminen PLCε1 (ks Figure.3). Kanssa tulosten immunohistokemiallisella kudoksen mikrosiruanalyysi, pariksi analyysi osoitti myös PLCε1 oli yli-ilmentynyt kasvain, mutta alas-säädellä vaikea atrofinen gastriitti verrattuna Hyväksytty viereisten normaalit kudokset.

A ja C ekspressio PLCε1 mRNA: ta ja proteiinia kussakin mahalaukun kasvaimet (T) ja mahalaukun viereisen normaaleissa kudoksissa (N) yhdistetty saman potilaan käänteistranskriptio-PCR: llä ja western blot. B ja D, ilmentyminen PLCε1mRNA ja proteiinin kunkin vaikea atrofinen gastriitti (S) ja mahalaukun viereisen normaaleissa kudoksissa (N) yhdistetty saman potilaan käänteistranskriptio-PCR: llä ja Western blottauksella.

Nämä havainnot viittaavat siihen, että PLCε1 ilmentymistilanne oli hyvin erilainen yhteydessä tulehduksen versus kasvaimien syntyyn. Tuloksemme erittäin ehdottaa, että tuloksia erittäin ehdottaa, että PLCε1 proteiini voisi olla potentiaalinen biomarkkereiden mahasyövän.

väliset korrelaatiot PLCε1 ja viittaavia tekijöitä

Ei ole tilastollisesti merkitsevä ero PLCε1 ilmaisun ennusteeseen viittaavia tietoja, kuten ikä, sukupuoli, kasvaimen koko, luokittelu, kliiniseen vaiheeseen, potilaiden välillä eri vaiheissa mahasyövän kudoksessa microarray (esitetty taulukossa S1).

Erityisesti, kuten on esitetty kuviossa 2, PLCε1 proteiinin ilmentymistä sytoplasmassa on usein havaittu kaikissa tuumorikudoksissa, normaaleissa kudoksissa, mutta harvemmin atrofinen gastriitti kudoksissa.

kuitenkin, kuten kuviossa 4 on esitetty, kudoksen microarray, positiivinen PLCε1 ilmentymistä havaittiin tulehdussolujen ja lymfosyyttien 13 (48,1%) viereisen normaalin kudoksen näytteitä imusolmuke etäpesäkkeitä (N0) mahasyöpäpotilaista (esitetty kuviossa 4A). Lisäksi on vaikea atrofinen gastriitti kudoksissa, 6 (2,37%) näytteistä osoitti positiivisen PLCε1 ekspression tulehduksellisten solujen tai imusolmukkeet (kuvio 4B). Näin ollen, nämä tulokset osoittavat, että ilmentyminen PLCε1 voi liittyä tulehduksellisten solujen invaasion aikana tumorigenesis ja kasvaimen etäpesäkkeitä.

edustajan immunohistokemiallista (A) /histologinen (B) havainnot mahalaukun normaalia kudosta, edustaja immunohistokemiallinen (C ) /histologinen (D) havainnot on atrofinen gastriitti kudosta. Nuolet osoittavat positiivisesti värjättyä immuunisolujen (Original suurennos, × 200).

Keskustelu

Täällä Tutkimuksemme ensinnäkin osoittanut, että PLCε1 oli säädellään ylöspäin ihmisen mahakasvaimen kudoksista, mutta sen alassäädetty tulehduksessa ympäristössä, verrattuna normaalissa kudoksessa. Differentiaalinen ilmentyminen PLCε1 eri kudoksissa erittäin suositeltavaa, että ilmaus PLCε1 voisi olla keskeinen rooli tulehduksen ja kasvaimen kehittymisen.

Tulehdus on tunnustettu tärkeä osatekijä paikallisen ympäristön ylläpitävä kasvainten kehittymiseen, mukaan lukien aloittamista, edistäminen , pahanlaatuinen muuntaminen, invaasio, ja etäpesäkkeiden [31]. Syy-yhteyttä mahakasvaimen edistäminen ja tulehdus on tuettu havainnoista, että aiheuttamaa tulehdusta

helikobakteeri

infektio voi lisätä riskiä kasvaimen edistämisen [8] – [10]. Viime aikoina useat tutkimukset ovat osoittaneet, että PLCε1 ekspressiotasot ovat erittäin liittyy tulehdukseen ja kasvaimen kehittymisen [19] – [21], [23]. Kuitenkin molekyylimekanismi taustalla biologista merkitystä PLCε1 mahalaukun syövän kehittymisen ja etenemisen edelleen epäselvä. Tutkimuksemme on osoittanut, että PLCε1 ylössäätöä voisi olla tärkeä etenemistä mahasyövän. Erityisesti sen alassäätöä tulehduksessa ympäristössä, erittäin suositeltavaa, että PLCε1 voi olla tärkeä biologisten merkkiaineiden, ja sitä voidaan käyttää erottamaan mahasyövän tila Atrofista leesiosta vaiheessa.

Lisäksi työmme, PLCε1 proteiini voi olla havaitaan tulehdussolujen ja lymfosyyttien kudosten viereiseltä normaaleissa kudoksissa N0 asteen ja jotkut vaikea atrofinen gastriitti kudoksiin. Nisäkkäillä, PLCε1 on raportoitu ilmaistaan ​​ei-immuunisolujen, kuten orvaskeden keratinosyyttien, ihon fibroblastit, ja epiteelisolut, mutta ei immuunijärjestelmän solujen, kuten lymfosyyttien, granulosyyttien, makrofagien ja dendriittisolujen [21], [32], [33]. Tuloksemme viittaavat siihen, että toiminta PLCε1 proteiinin mahasyövässä voidaan liittää ilmaisunsa immuunijärjestelmää.

Näiden saatavilla tuloksia, ehdotimme mahdollinen mekanismi PLCε1 proteiinin toiminta kasvainten synnyssä mahasyöpä-: PLCε1 proteiinia kuin tiedoksiannon Ras ja Rap pieni GTPaaseja [12], [14], [15] on ensimmäinen ilmentyy normaaleissa mahan limakalvojen. Vuoden etenemistä atrofisen mahalaukun vaurio, PLCε1 proteiinin ilmentyminen on vähentynyt ehkäistä ennenaikaista tulehduksen tunkeutumisen mukaan PLCε

– /- hiirillä näyttelyitä merkitty vastustuskykyä TPA-aiheuttaa ihon tulehdus [18], [19]. Yhä aikaa ja tulehduksen atrofinen mahalaukun leesion, PLCε1 proteiini vähitellen ilmaistaan ​​immuunijärjestelmän soluissa, koska PLCε tarvittiin erilaisia ​​tulehdusreaktioita [21], [22], jotka voivat lopulta aiheuttaa mahalaukun syöpä. Samanaikaisesti PLCε1 proteiini saa enemmän ilmentymistä mahasyövässä soluissa koska PLCε yli-ilmentyminen voi edistää suoliston tuumorigeneesiä APC

Min /+ hiirillä [20].

Yhteenvetona ylös-säätely PLCε1 ilmaisun maha- syöpä mutta alassäätöä in atrofinen gastriitti havaittiin tutkimuksemme. Tärkeys roolia PLCε1 mahasyövän käy selvästi ilmi myös havainto sen käänteinen korrelaatio kroonista atrofinen gastriitti. Nämä tulokset eivät vain ehdottaa, että PLCε1 voidaan käyttää ennustetyövälineenä indikaattorina erottaa mahalaukun syövän atrofinen gastriitti, mutta myös takaa lisätutkimukset luoda mahdollisen yhteyden biologisen toiminnan PLCε1 ja patogeneesin mahasyövän. Tutkimuksemme osoittavat myös, että PLCε1 voi olla tärkeä rooli kasvainten synnyssä mahalaukun syövän, erityisesti varhaisessa vaiheessa, ja saattaa edustaa uutta markkeri diagnosoimaan alkuvaiheen mahasyöpä.

tukeminen Information

Taulukko S1.

suhde PLCε1 ilmaisun ja ennusteeseen viittaavia ominaisuuksia.

doi: 10,1371 /journal.pone.0047563.s001

(DOC) B