Krooninen sairaus

tiivistelmä

munuaissolukarsinooma (RCC) on tappavin urologian syöpäsairauksia. Metastaattinen sairaus vaikuttaa kolmanneksella potilaista diagnoosi jossa vielä kolmannen kehittää etäpesäkkeitä jälkeen extirpative leikkauksen. Heterogeenisyys taudinkulku takaa ennustamisessa etäpesäke on tunnetusti vaikeaa, vaikka rutiininomaista käyttöä prognoosi- kliinis-patologisten parametrit riski kerrostumista. Enemmän ymmärrystä reittejä mukana patogeneesissä, useita biomarkkerit on osoitettu olevan prognostinen merkitys, mukaan lukien Ki67, p53, verisuonten endoteelin kasvutekijän reseptori 1 (VEGFR1) ja ligandin D (VEGFD), SNAIL ja SLUG. Edellinen polku analyysi on peräisin tutkimuksesta primaarikasvaimen, joilla on vain vähän huomiota etäpesäkkeitä, jotka ovat kohdennetuilla molekyyli hoitoja. Sinänsä tässä tutkimuksessa kudoksessa microarray 177 primaarisessa munuaisten kasvain, munuaisten suoneen kasvain trombin ja /tai RCC etäpesäke on luotu ja käytetty Automated Quantitative Analysis (AQUA) on immunofluoresenssilla tutkia ennustetekijöiden merkitystä näiden merkkiaineiden paikallisesti kehittynyt ja etäpesäkkeitä. Lisäksi tämä on mahdollistanut arvioinnin ero proteiinin ilmentymisen välillä primäärikasvaimissa, munuaisten suoneen kasvain thrombi ja etäpesäkkeitä. Tulokset osoittavat, että kliinis-patologisia parametrit ovat edelleen merkittävin ennustajia syövän erityisiä selviytymisen; kuitenkin korkea VEGFR1 tai VEGFD voi ennustaa huono syövän erityinen selviytyminen yhden muuttujan analyysiin, paikallisesti kehittyneitä ja etäpesäkkeitä. Siellä oli merkittävästi suurempi ilmentymä Ki67, p53, VEGFR1, SLUG ja SNAIL että etäpesäkkeitä verrattuna primäärikasvaimissa ja munuaisten suoneen kasvain trombin. Lukuun ottamatta p53 nämä erot proteiiniekspressiossa ei ole esitetty aikaisemmin RCC. Tämä vahvistaa, että on tärkeää leviämisen, angiogeneesin ja epiteelin jotta mesenkymaalitransitioon synnyssä ja etäpesäke RCC. Mikä tärkeintä, tämä työ korostaa tarvetta polun analyysiä etäispesäkekasval- voittamiseksi lääkeresistenssin ja kehittää uusia hoitoja.

Citation: Laird A, O’Mahony FC Nanda J, Riddick AKT, O’Donnell M, Harrison DJ, et al. (2013) Differential Expression of Prognostiset proteomiikan Markers in Primary kasvainten, Laskimoperäiset Kasvainten veritulppa ja metastasoitunutta munuaissyöpää Tissue ja Korrelaatio potilaiden hoitotuloksiin. PLoS ONE 8 (4): e60483. doi: 10,1371 /journal.pone.0060483

Editor: Bin Hän, Baylor College of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 31 joulukuu 2012; Hyväksytty: 26 helmikuu 2013; Julkaistu: 05 huhtikuu 2013

Copyright: © 2013 Laird et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Työ tekijän AL rahoittaa Royal College of Surgeons Edinburgh Robertson Trust, Melville Trust hoitoon ja hoito syövän ja Medical Research Council Scottish kliinisen farmakologian ja patologia ohjelman. Työ Tekijöiden FCO, JN, ACPR, DJH ja GDS edellä mainitut rahoitetaan Johtavan tutkijan Office, myöntää numero ETM37, ja tukee johtava tutkija Rahoitetut Health Sciences Skotlannissa ja Cancer Research UK Experimental Cancer Medicine Centre. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

munuaissyövän (RCC) osuus 2,5% kaikista aikuisten syövistä, mutta se on kaikkein vaarallisin kaikista urologisiin syöpäsairauksia. Kolmasosa RCC potilailla esiintyy etäpesäkkeitä (mRCC). Vaikka extirpative leikkaus on tarkoitus olla parantava joilla paikallinen tauti, vielä 30-40% lopulta kehittyy etäispesäkkeitä [1], [2], [3]. Tällä hetkellä emme pysty ennustamaan ne potilaat, jotka uusiutumisen johtuen erittäin vaihteleva luonnollinen historia tauti.

Leikkauksen jälkeen useita prognoosi- nomogrammit on ehdotettu ennustamiseen tauti uusiutuu. Näitä ovat tyypillisesti TNM lavastus ja Fuhrman laatu sekä suorituskyky ja joilla seerumin veren merkkiaineita (hemoglobiini, kalsium-, laktaattidehydrogenaasi, verihiutaleita, neutrofiilejä ja C-reaktiivinen proteiini) enemmän tai vähemmän [4], [5], [6 ], [7]. Nämä kliinis-patologisia muuttujia käytetään laajalti kliinisessä käytännössä osituksesta uusiutumisen riskiä ja suunnittelee seurannan. Tästä huolimatta, yksikään näistä mallit ovat 100% tarkka. Yrittäessään parantaa potilaan riski kerrostumista, ja paremmin ennakoida tauti uusiutuu ja liittyvän kuolleisuuden, monet ovat tutkineet rooli prognoosi- biomarkkereiden [8], [9]. EMT markkereita, SLUG ja SNAIL, on raportoitu olevan ennustava sekä varoituksia merkitys RCC [10], [11]. Kuitenkin varsinkin, Klatten

et al

suoritti elegantti tutkimuksen keskeisten proteiinien RCC synnyssä käyttäen TMA tekniikkaa osoittamaan Ki67, p53, verisuonten endoteelin kasvutekijän reseptori 1 (VEGFR1) ja endoteelikasvutekijä ligandi D (VEGFD) liittyi taudista elinaika (DFS) paikallisessa RCC [12]. Tämä paneeli markkereita yhdistetään, pystyi paremmin ennustamaan DFS verrattuna vakiomuuttujat. Ennustetyövälineenä nomogram rakennettiin yhdistämällä nämä markkereita kliinis-patologinen muuttujat ensimmäistä kertaa osoittaa parannetun ennakoivaa tarkkuudella. Tästä huolimatta yleiseen käyttöön nämä merkit klinikalla ei ole hyväksytty.

parempi ymmärtäminen molekyylitasolla RCC ei ole vain edistynyt biomarkkereiden löytö, mutta myös kehittynyt metastaattisen RCC (mRCC) kehittämisen kanssa kohdennettujen molekyylien hoitoja. Tärkein havainto on ollut mutaatioiden tunnistaminen von Hippel-Lindaun (VHL) geenin perinnöllisen kirkas solu RCC (ccRCC) ja jopa kaksi kolmasosaa satunnaisia ​​tapauksia [13]. Tämä johtaa aktivoinnin hypoksia reitin ja sen jälkeen ylös-säätely hypoksia liittyvien molekyylien eli verisuonten endoteelin kasvutekijöiden (VEGF) ja verihiutaleista peräisin kasvutekijät. Nämä löydöt johti kliinisen käytön VEGF monoklonaalinen vasta-aine (bevasitsumabi) ja multi-kohdistetun tyrosiinikinaasin estäjät (sunitinibia ja sorafenibi) in mRCC. Lisäksi ymmärrystä rooli nisäkkään rapamysiinin kohde (mTOR) väylän RCC on synnyttänyt kliinistä käyttöä mTOR-inhibiittorit, temsirolimuusin ja everolimuusi. Huolimatta merkittävää parannusta tehoa verrattuna immunoterapioiden, edellinen kultakanta hoitoon mRCC, resistenssin näille molekyyli hoitoja on edelleen merkittävä ongelma [14], [15], [16].

Suuri osa tiedon tämän molekyylisulan perusteella RCC on paljastunut läpi tutkimuksen ensisijainen munuaisten kasvain, joilla on vain vähän analyysi eroista primaarikasvaimen ja etäpesäkkeitä. Äskettäin Gerlinger

et al

raportoitu, että geneettinen allekirjoitus primaarikasvaimen ei välttämättä heijasta kuin etäpesäke [17], mutta on vain vähän tutkimus näistä eroista proteiinin tasolla. Lee

et ai

on raportoitu lisääntynyt Bcl-2: n ilmentymisen [18] ja Schultz

et ai

ovat osoittaneet suurempaa ekspressiota Pakt, PS6, 4EBP1 ja cMYC ja alemman ilmentymisen PTEN Metastasoituneessa RCC verrattuna primaarikasvainten [19]. On todennäköistä, että avain ymmärtää kestävyys ja kehittää tehokkaampia hoitoja, on perusteellinen tutkimus etäpesäkkeitä, koska tavoitteena hoito on vähentää etäpesäkekasvainkudoksen taakka. Lisäksi ensisijainen RCC kasvain on mieltymys ottamaan laskimoiden järjestelmä (munuaisten suoneen, Alaonttolaskimo ja oikea eteinen), tämä laskimoiden kasvain Veritulppa (VTT) on mahdollisesti sopuratkaisua fenotyyppi ensisijaisen ja metastaattinen kasvain.

immunohistokemia (IHC) on keskeinen väline molekyyli patologian käyttää apuna diagnoosin ja ennusteen RCC. Kuitenkin IHC on subjektiivista ja vain semikvantitatiivinen. Kehittäminen Automated Quantitative Analysis (AQUA) immu- mahdollistaa tarkan ja herkän in situ proteiinia lokalisointi ja kvantifiointiin, jotka olemme puhdistettu käytettäviksi RCC [11]. Lyhyesti, tämä tarkoittaa immunofluoresenssivärjäyksellä kohdeproteiinille ja luoda epiteelituumori maski, jolloin erilaistuminen kasvaimen strooman, ja osa-lokalisaatio sytoplasman ja ytimeksi. On myöhempi digitaalinen kuvien ottamista, ja automatisoitu analyysi kuvien antaa jatkuvaa pistemäärät kohde ilme. Tämä tekniikka mahdollistaa suuremman objektiivisuutta ja tarkkuutta proteiinien määrällisesti ja ennustettavuutta tarjoamia Klatten ja työtovereiden. Tässä tutkimuksessa on tavoitteena käyttää AQUA immunoflurescence arvioida ero proteiinin ilmentymistä raportoitu ennustetekijöitä merkkiaineiden primaarikasvaimen, VTT ja etäpesäkkeitä RCC ja määrittää niiden ennustetekijöiden rooli paikallisesti levinnyt ja /tai metastasoitunut ensisijaisen munuaissolukarsinooman.

Potilaat ja menetelmät

tutkimus Väestö

Potilailla, joilla oli primaarinen munuaissolukarsinooma ja /tai munuaisten suoneen tai alaonttolaskimo trombin ja /tai etäinen RCC metastaasit aikaan leikkauksen yhteydessä tai myöhemmin päivämäärä tunnistettiin prospektiivisesti koottu tietokanta. Formaliinilla parafiiniin (FFPE) kasvain näytteet tunnistettiin 177 näistä potilaista, joille tehtiin radikaali nephrectomy vuosina 1983 ja 2010, Department of Urology, Edinburgh. Jos mahdollista, kirjallinen lupa saavutettiin käytettäväksi kudoksen ylijäämä diagnostisia vaatimuksen ja siihen liittyvän nimettömät potilastiedot. Eettinen hyväksyntä käyttää näitä arkistoituja kudosten myönsi Lothian alueellisen eettisen komitean (08 /S1101 /41 ja 10 /S1402 /33). Eettinen hyväksyntä 08 /S1101 /41 sallii jakelun FFPE näytteiden ja niihin liittyvien linkitetty nimettömät tietoja Pathology arkistosta tutkimuksen ilman lupaa, koska ne on kerätty diagnoosia varten ennen syyskuussa 2006. diagnostinen koulutusjakson Näiden kudosnäytteiden on nyt saatu päätökseen ja arkistoitu näytteet ovat ylijäämää tähän prosessiin. Muita kudoksia 2006 jälkeen kerättiin ja luovutettu käytettäväksi alle eettinen hyväksyntä 10 /S1402 /33, joka on tutkimus Kudospankki eettistä hyväksyntää hallussa SAHSC Bioresource puolesta NHS Lothian. Tämä hyväksyntä koskee periaatteita ”kannanoton diagnostisia arkistoja vapauttaa kudoksen tutkimusta” yhteisen julkilausuman Human Tissue Authority (HTA) ja National Research Ethics Service (NES) heinäkuussa 2009 käyttöön näiden näytteiden. Kaikki patologinen lavastus ilmoitettiin käyttäen TNM 2002 -luokituksen [20]. Jos kuolinsyistä ei ollut saatavilla kliinistä toteaa näissä saatiin General maistraatille of Scotland.

Tissue Microarray (TMA) Hakemisto Rakentaminen

Nämä kudosnäytteet käytettiin rakentamaan TMA [21 ]. Vähintään kolme edustavan rinnakkaisten ydintä, 0,6 mm, kunkin potilaan primaarikasvaimen, VTT ja etäpesäkkeitä otettiin tarkistuksen jälkeen ja merkinnät hematoksyliinillä ja eosiini värjätään dioja ja lohkojen Konsulttina patologi. Riittävä kudos ei ollut saatavissa kaikista ensisijainen kasvaimia ja etäpesäkkeitä. Kaikkiaan 1980 ydintä otettiin ja jaettu yli 12 diat 177 potilasta, jotka edustavat 163 primaarikasvaimia, 103 VTT: n ja 69 etäpesäkkeitä. Tämä mukana 29 potilasta, joilla primaarikasvaimia vain; 79 Hyväksytty ensisijainen ja VTT: n; 24 Hyväksytty ensisijainen kasvaimia, VTT: n ja metastaasit; 31 Hyväksytty ensisijainen kasvaimia ja etäpesäkkeitä ja 14 potilaalla on verraton etäpesäkkeitä vain.

Immunofluoresenssikoe

TMA dioja poistui-vahattu ksyleenissä ja sitten niihin lisätään peräkkäin laimean etanolin ratkaisuja. Antigeeni haku suoritettiin kuumentamalla liukuu painekattilassa 5 minuuttia Tris-EDTA pH9.0 tai natriumsitraatti pH 6,0. Endogeeninen peroksidaasiaktiivisuus estettiin käsittelemällä levyt 3% vetyperoksidia 10 minuutin ajan ja ei-spesifinen sitoutuminen vähennetään inkuboimalla seerumittomassa proteiini lohkon (Dako, X0909) 10 minuutin ajan. Laseja inkuboitiin ensisijaisen tavoitteen vasta-ainetta, että kiinnostavan proteiinin, 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Primaaristen vasta-aineiden on esitetty yksityiskohtaisesti taulukossa 1. Sen jälkeen laseja inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa sopivan vasta määritellä kasvaimen maskin. Nämä olivat pan-kadheriinin (Cell Signalling, 4068, 1:100) käytettäessä kanin ensisijainen vasta-aine tai yhdistelmä yleiseurooppalaisen kadheriinin (Sigma-Aldrich, C1821, 1:750) ja CK5 /6/8/18 (Novocastro, 6003168, 1:100) käytettäessä hiiri ensisijainen vasta-aine [11]. Levyjä inkuboitiin 1,5 tuntia Alexa Fluor 555-konjugoitu vasta-aine (Invitrogen A21422 ja A21428, 1:25) ja piparjuuriperoksidaasi-koristeltu dekstraani-polymeerirungon-vasta-ainetta (EnVision, Dako). Leikkeitä inkuboitiin sitten 10 minuutin ajan Cy5-Tyramide (HistoRx, AQUAntiplex putki F, 01:50), joka aktivoi piparjuuriperoksidaasi ja annettiin visualisointi primaarisen vasta-aineen. DAPI (4 ’, 6-diamino-2-fenyyli, Invitrogen, P36931) vastavärinä käytettiin visualisoimaan ytimet. Edustava ydin nähdään kuvassa 1.

edustaja TMA sydämestä esittäen vihreä sytoplasmista värjäytymistä yhdistelmä sytokeratiinia ja pancadherin (A), sininen tumavärjäystä DAPI (B), punainen tavoite värjäys (C, tässä tapaus VEGFR1) ja kaikki kolme osastoa yhdistettiin (D). Määrällinen arviointi ja lokero lokalisoinnin kohde ilmentyminen mitataan läpi laskemalla yhteen kohde- pikselin intensiteetti jaettuna osaston alasta ja normalisoitu valotusaikaa.

Automatisoitu Quantitative Analysis

monokromaattinen kuvia kunkin TMA ydin vangittiin 20 × tavoite käyttäen Olympus AX-51 epifluoresenssimikroskooppia (Olympus, Pennsylvania, USA). Jos epiteelin käsittää vähemmän kuin 5% koko ydinalueen, ydin jätettiin pois analyysistä. Korkean resoluution digitaalisia kuvia analysoitiin AQUAnalysis ohjelmisto (HistoRx, Conneticut, USA), määrittää kohde- proteiinin ilmentymisen yleinen ja sytoplasman ja ydinvoiman osastojen laskemalla summa kohde- pikselin intensiteetti jaettuna osaston alasta ja normalisoituna valotusajan .

tilastollinen analyysi

asianmukaiset lokero AQUA tulokset normalisoitiin mediaani keskitys kunkin TMA sallia välisten TMA vertailuja ja sitten keskimääräinen kudos pisteet otetaan toisinto ydintä. X-laatta käytettiin määritettäessä cut off määrittelyyn korkean ja matalan proteiinin ilmentymisen primaarikasvaimen, Kaplan Meier-analyysi [22]. Cancer erityisiä selviytyminen (CSS) määritettiin Kaplan Meier analyysin ja vertailuja tehdään log-rank-testi. Ennakoiva merkitys proteiinin ilmentymisen ja kliinis-patologisten tekijöiden CSS määritettiin käyttäen Coxin yhden ja usean regressioanalyysi. Korrelaatio proteiinin ilmentymisen standardin patologisia tekijöitä arvioitiin Pearson korrelaatioanalyysiin. Differential proteiinin ilmentymisen välillä primaarikasvaimen, munuaisten suoneen kasvain Veritulppa ja metastasoituneen kudos arvioitiin käyttämällä Mann-Whitneyn testi. Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttäen PAWS versio 18.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA), p 0,05 otettiin osoittamaan merkitystä.

Tulokset

kliinis-patologisia piirteitä liittyvä potilaiden ensisijainen RCC on esitetty taulukossa 2. mediaani potilaan ikä oli 64 vuotta, ja miesten ja naisten suhde oli 1.5:1. Ei ollut merkittävää eroa laterality kasvainten ja kasvaimen keskimääräinen koko oli 8,7 cm (vaihteluväli: 1,5-16 cm). Suurin osa kasvaimista (n = 138; 88%) oli histologisesti selkeä solu, kun taas 14 (9,8%) oli papillaarikuvioiden ja loput olivat muita harvinaisempia alatyyppejä. Useimmissa tapauksissa se oli patologinen vaiheessa T3b (n = 107, 73,4%). 29 (15,8%) tapauksista oli patologisesti imusolmukkeisiin klo nephrectomy ja 13 (7,1%) potilasta oli vahvistanut etäpesäkkeitä alkudiagnoosin.

Ki67 ja p53 ilmentymistä ei havaittu yli taustan tasot 35,8% (n = 59) ja 1,2% (n = 2) ensisijaisen RCC vastaavasti. Muuten proteiinin ilmentymistä muiden merkkiaineiden tunnistettiin kaikista kasvaimista. Arvio suhde proteiinin ilmentymistä primaarikasvaimen ja tavallinen patologinen parametrit paljasti lisääntynyt SNAIL ilmentyminen korreloi kehittynyt patologinen kasvain vaiheessa (p = 0,001) ja lisääntynyt Maksimaalinen kasvaimen halkaisija (p = 0,048). Korkea VEGFR1 ja VEGFD liittyivät ei-kirkas cell alatyypin (p = 0,017 ja p = 0,018 vastaavasti).

Lisäksi korkea VEGFR1 täydellisessä kasvain maski, mutta ei lokalisoitu sytoplasman osasto, korreloi imusolmukkeisiin tauti (p = 0,005). Ei ollut muita merkittäviä korrelaatioita arvioitavaa proteiinin ilmentymisen ja standardi kliinis-patologisia muuttujia.

Arvio ero proteiinin ilmentymisen välillä primaarikasvaimen, VTT ja etäpesäkkeitä havaittu mitään merkittävää eroa primaarikasvaimen ja VTT mutta huomattavasti ilmentymisen etäpesäkkeitä verrattuna ensisijaisen ja VTT Ki67, p53, VEGFR1, SNAIL ja SLUG (kuviot 2, 3, 4, 5, 6). Tarkka Eloonjääntitulokset oli käytettävissä 132 potilasta. Keskimääräinen seuranta-aika oli 58 kuukautta. Histologinen alaryhmä ei merkittävästi vaikuttanut CSS Kaplan Meier-analyysi; kuitenkin, patologinen kasvain vaiheessa (pT vaihe), Fuhrman laatu ja imusolmukkeisiin taudin diagnoosin teki ennustaa CSS (luvut 7, 8, 9, 10). Survival analyysi proteomic merkkiaineiden paljasti korkeat VEGFR1 ja VEGFD liittyvän merkitsevästi pienempi CSS (kuvat 11 12). Ei ollut merkitsevää eroa CSS Ki67, p53, SNAIL ja SLUG ekspressiotaso. Mediaani, ennusti 5 ja 10 vuoden pysyvyys patologisen muuttujat ja proteomiikka markkereita esitetään yksityiskohtaisesti taulukoissa 3 ja 4.

Merkittävästi lisääntyneen ilmentymisen ydinvoiman Ki67 esitetty etäpesäkkeitä verrattuna VTT ja primaarikasvaimen mutta mitään eroa ilmentymisessä välillä primaarikasvaimen ja VTT.

Merkittävästi lisääntyneen ilmentymisen ydinvoiman p53 esitetty etäpesäkkeitä verrattuna VTT ja primaarikasvaimen mutta eroa ilmaisun välillä primaarikasvaimen ja VTT.

Merkittävästi lisääntyneen ilmentymisen sytoplasman VEGFR1 esitetty etäpesäkkeitä verrattuna VTT ja primaarikasvaimen mutta eroa ilmaisun välillä primaarikasvaimen ja VTT.

Merkittävästi lisääntynyt ekspressio ydinaseiden SNAIL esitetty etäpesäkkeitä verrattuna VTT ja primaarikasvaimen mutta eroa ilmaisun välillä primaarikasvaimen ja VTT.

Merkittävästi lisääntyneen ilmentymisen ydinvoiman SLUG esitetty etäpesäkkeitä verrattuna VTT ja primaarikasvaimen mutta eroa ilmaisun välillä primaarikasvaimen ja VTT.

ei ole merkittävää eroa CSS näkyy välillä selkeä solu (n = 111) ja papillaarinen RCC (n = 11) kasvaimia.

CSS oli tilastollisesti erilainen perustuen patologinen kasvaimen lavalle Kaplan Meier-analyysi. 122 potilasta otettiin mukaan tähän analyysiin (7 pT vaihe 1, 13 pT vaihe 2, 99 pT vaihe 3 ja 3 pT vaihe 4), toiset jätettiin pois koska puutteellinen seurantaa tai patologian tietoja. Tämä osoittaa huonompi CSS pahenemista patologisia kasvaimen vaiheessa diagnoosi.

Tämä osoittaa tilastollisesti erilainen CSS perustuvat Fuhrman luokalla. 89 potilasta otettiin mukaan tähän analyysiin (1 luokka 1, 35 asteen 2, 38 asteen 3 ja 15 asteen 4), toiset jätettiin pois koska puutteellinen seurantaa tai patologian tietoja. On köyhimmät CSS luokan 1, jossa erottamattomat CSS asteen 3 ja 4, ja edullisin CSS luokka 2.

positiivinen solmu tilan diagnoosi on merkittävästi huonompi CSS kuin imusolmukenegatiivisista tauti.

korkea VEGFR1 ilmentymisen primaarikasvaimen liittyy merkittävästi huonompi CSS kuin alhainen VEGFR1 ilme.

korkea VEGFD ilmentymisen primaarikasvaimen liittyy merkittävästi huonompi CSS kuin alhainen VEGFD ilme.

Ne muuttujat, jotka olivat merkitseviä Kaplan Meier-analyysi arvioitiin Cox monimuuttuja regressioanalyysi, ja kliininen muuttujien Fuhrman asteen ja solmun asema säilyi merkitsevänä, kun taas pT vaihe , VEGFR1 ja VEGFD eivät olleet itsenäisesti ennustetekijöitä (taulukko 5).

keskustelu

Tällä uudella tutkimus on osoittanut huomattavasti ilmentymä Ki67, p53, VEGFR1, SLUG ja SNAIL RCC etäpesäkkeitä verrattuna primaarikasvaimen ja laskimoiden kasvaimen trombin. Lisäksi primäärikasvain ilmaus VEGFR1 ja VEGFD voidaan käyttää ennustamaan merkittäviä eroja syövän erityisiä eloonjäämisen pitkälle edennyttä munuaissyöpää. Vaikka VEGFR1 ja VEGFD olivat merkittäviä yhden muuttujan analyysiin, ylivoimainen riippumaton ennustetekijöitä merkitystä näiden merkkiaineiden tavalliseen kliinis-patologisten parametrit monimuuttujamenetelmin ei voitu osoittaa.

Tietääksemme tämä on suurin raportoitu sarja ensisijainen ja metastasoitunut RCC näytteitä käyttää rakentamaan TMA vertailevan proteiinin analyysi, ja se on ainoa tutkimus arvioida VTT molekyylitasolla. Lisäksi käyttö AQUA immunofluoresenssilla mahdollistaa tarkemman ja objektiivinen proteiini kvantifiointiin, parannus muut julkaistu teos tutkimalla proteiinin ilmentymisen käyttäen TMA tekniikkaa. Olemme kuitenkin tunnustaa tämän ainutlaatuisen ja vaikea saada kudokseen asettaa yhä edustaa pientä kohortin. Tämä voi aiheuttaa tyypin II virheiden seurauksena alimitoitettu tutkimuksen. Erityisesti tämä on saattanut ehkäistä merkittäviä eroja primaarikasvaimen ja VTT proteiinin ilmentymiseen havaitaan ja mahdollisia aliarviointiin ennustetekijöiden merkitystä näiden merkkiaineiden ja tunnettujen patologinen ennustetekijöiden indikaattoreita, varsinkin monimuuttujamenetelmin. Merkit valittiin perustuivat aiemmin dokumentoitu ennustetekijöiden merkitys, syytetään niiden merkitys RCC synnyssä, mutta olisi tärkeää tulevaisuudessa suorittaa laajamittaista puolueeton arviointi proteiinien laajuuden arvioimiseksi eroa ensisijaisen ja metastaattisen RCC. Kuitenkin merkittäviä eroja proteiinin ilmentymisen avaimen markkereiden välillä primaarikasvaimen ja etäpesäkkeiden on osoitettu ensimmäistä kertaa.

ero Ki67 ilmaisun välillä primaarinen ja metastaattinen vauriot on tutkittu useita syöpiä, kuten rinta- , paksusuoli, mahasuolistrooman (GIST) ja virtsarakon syöpä, jossa vastakkaisia ​​tuloksia. Rintasyövän ja paksusuolen ja peräsuolen syöpä, korkeampi Ki67 ilmentyminen primaarikasvainten verrattuna solmukohtien ja maksametastaaseista vastaavasti, osoitettiin [23], [24], [25], [26]. Kuitenkin GIST ja virtsarakon kasvaimet, sekä muissa tutkimuksissa rinta- ja kolorektaalisyövän, päinvastainen tai ei eroa ilmentyminen on osoitettu [27], [28], [29], [30]. Tulokset Tämän tutkimuksen ovat osoittaneet merkittävä kasvu Ki67 ilmaisun metastaattisessa RCC kudoksessa verrattuna ensisijaisen ja VTT RCC, mikä viittaa säätelyn leviämisen, jota ei ole raportoitu aikaisemmin. Toiset kuitenkin ovat tutkineet ero p53 ilmentymistä perus- ja metastaattisen RCC [31], [32], [33]. Johtuen laajennetusta puoliintumisaika mutantti p53 verrattuna villityypin p53, mutantti sijaan villityypin p53 havaitaan immunohistokemiallisesti [33]. Työmme on vahvistanut lisääntyneen ilmentymisen mutantin p53 metastaattisessa RCC on esitetty aikaisemmin, syytetään inaktivaatio p53 taudin etenemisen.

Tämä tutkimus osoitti myös ensimmäistä kertaa, lisääntynyt ilmentyminen VEGFR1 metastaattisessa verrattuna ensisijainen ja VTT RCC kudosta. VEGF on tärkeä signalointi proteiini mukana angiogeneesiin ja imusuonten [34], avainprosessien syövän kasvua ja levitys; tunnusmerkkejä syöpä [35]. Ylös sääntely VEGF kautta induktion hypoksia polkuun mutaatio VHL-geenin hyvin vastaan ​​patogeneesissä ccRCC ja johtanut onnistuneen kehittämisen molekyyli hoitomuotojen hoidossa RCC. Kuitenkin differentiaali VEGF ja VEGFR ilmaisun ala- ja metastaattisen RCC ei ole aiemmin tutkittu, vaikka RCC etäpesäkkeiden ollessa kohteena VEGF estäjiä. Lisääntynyt VEGF (pikemmin kuin VEGFR) mRNA-tasot havaittiin maksassa etäpesäkkeitä verrattuna ensisijaisen Kolorektaalituumorien [36], kun taas mitään eroa proteiiniekspressiossa VEGF tai VEGFR1 melanooman ja pariksi etäpesäkkeitä on raportoitu [37]. Tuloksemme ovat vahvistaneet lisääntyneen ilmentymisen VEGFR1 metastaattisessa RCC, syytetään jopa angiogeneesin säätelyyn ja lymfangiogeneesiä ja käyttöä tukevat VEGF kohdennettujen hoitomuotojen etäpesäkkeitä.

aktivointi invaasiota ja etäpesäkkeiden on toinen tunnusmerkki syövän [35] ja epiteelin että mesenkymaalitransitioon (EMT) ajatellaan olevan tärkeä prosessi tässä, jossa fysiologinen kehitysprosessiin on päinvastainen. Sarcomatoid dedifferentiaation nähdään RCC [38], [39], ja tämä voi olla fenotyypin esimerkki EMT havaitsemat patologi. Olemme osoittaneet merkittävästi suurempi ekspressio sekä SLUG ja SNAIL proteiinien etäpesäkkeinen RCC verrattuna primaaristen kasvainten, sekä korrelaatio lisääntynyt SNAIL ilmentymistä ja lisätä kasvaimen kokoa ja edistää pT vaiheessa. Tämä tuetaan EMT fenotyypin molekyylitasolla RCC synnyssä.

Tämä työ on toistaiseksi ilmoittanut avaimen proteiinit voivat olla tärkeitä patogeneesissä RCC ja havaittu merkittäviä eroja proteiinin ilmentymistä perus- ja VTT RCC verrattuna metastaattisen talletukset. Me arveltu, että VTT olisi välillisen jalostamisen välillä ensisijaisen ja etäpesäkkeitä, mutta eivät pystyneet osoittamaan tämän kanssa proteiinien arvioitiin. Tämä voi johtua useista tekijöistä. Ensinnäkin, kuten edellä on esitetty tämä on edelleen suhteellisen pieni kohortin, ja sellaisena voi olla alimitoitettu. On mahdollista, että proteiinit tutkittiin eivät ole avain invasiivisia laajentaminen ensisijaisen osaksi VTT. Kuitenkin voisi intuitiivisesti olettaa markkereita leviämisen, angiogeneesin ja EMT olla mukana tällaisessa prosessissa. Lopuksi, meidän täytyy hyväksyä, että kasvain, joka siirtyy, sopeutuu ja kasvaa uudessa ympäristössä eroaa kasvain, joka tunkeutuu paikallisesti, ja että VTT voi olla edustava jatke primaarikasvaimen.

sekä ero proteiinien ilmentyminen, me pyrittiin arvioimaan ennustetekijöiden merkitystä näiden merkkiaineiden kehittyneissä RCC. Löysimme standardi patologisia tekijät pysyvät Tärkeimmät muuttujat ennustavat syövän tiettyjä selviytymistä. Solmukohtien taudin esitys on osoitettu olevan ennustetekijöiden sekä muutoin paikallinen sairaus ja etäpesäkkeitä riippumaton muista ennustetekijöiden [40], [41], [42]. Olemme vahvistaneet tämän merkitystä patologinen havainto nykyisessä tutkimuksessa, jossa positiivinen solmukohtien osallistuminen on suurin riskisuhde (2,7) on monimuuttujamenetelmin CSS.

Fuhrman laatu todettiin myös olevan merkitsevä yhden ja usean analyysi. Fuhrman arvosana perustuu arviointiin ydinvoiman koko, ydin- pleomorfisimia, ja nucleolar näkyvyyttä [43], ja vaikka sen ennustetekijöiden merkitys papillaarikuvioiden ja kromofobista leikettä RCC on keskusteltu [44] on selkeästi osoitettu olevan tärkeitä ccRCC [43], [ ,,,0],45], [46], [47]. Meidän analyysi, Fuhrman arvosana 1 oli köyhimpien ennustetta ja tämä johtuu todennäköisesti pienestä otoskoko, kun taas luokan 2 tauti oli huomattavasti pitkittynyt CSS verrattuna asteen 3 ja 4, jotka olivat erottamattomat. Vertailukelpoinen CSS potilaan kanssa Fuhrman asteen 3 ja 4 tauti voi johtua muista häiritsevien tekijöiden; kuitenkin on tällä hetkellä huolissaan sekä yksilöiden välinen patologi raportointi vaihtelu Fuhrman grade [44], joka on johtanut International Society of Urologisessa patologia (ISUP) suosittaa korvaamalla Fuhrman luokitus kanssa ISUP nucleolar pisteytysjärjestelmä, perustuu yksinomaan nucleolar kokoa esitettyä Fuhrman mutta ilman sekoittavia ja sekava kysymyksiä ydinvoiman koko ja muoto.

Patologiset kasvain vaihe oli merkitsevä Kaplan Meier-analyysi, mutta ei monimuuttujamenetelmin. Pieni otos koko vaiheissa muiden kuin pT3, ja suuren riskin luonne kohortin, valittiin, koska munuaisten suoneen osallistumisen ja /tai samanaikainen tai myöhempi etäpesäkkeitä, ovat estäneet tunnistamisen ennustetekijöiden rooli kasvaimen vaiheen selkeästi paikallisessa tauti [4 ], [37], [45], [46]. Pieni otoskoko ei-kirkas solu RCC voi myös estänyt mitään merkittävää eroa CSS on tunnistettu perustuu histologiseen alatyypin (todennäköisesti tyypin II virhe), vaikka oli selvä suuntaus alemman CSS ccRCC.

prognostisia merkitys Ki67 ja p53 ilme on laajalti tutkittu RCC. Leviämisen merkki, Ki67, on osoitettu liittyvän suurempia Reaktoriluokan ja huonompi ennusteen lokalisoitu ccRCC [12] ja mRCC [48]. Kuitenkin muut tutkimukset lokalisoitu RCC eivät ole osoittaneet riippumattoman ennustetekijöiden merkitys Ki67, paljolti johtuen sen tiiviissä kasvaimen ja vaihe [49], [50]. Tutkimuksemme paikallisesti edenneen ja metastaattisen RCC, vaikka osoittaa suuntaus huonompi ennusteen korkeampi Ki67 ilmaisun, ei todettu merkittävää eroa CSS perustuvat Ki67 ilme. Samoin ennustetekijöiden merkitys p53 RCC on myös keskusteltu [32], [50], [51], [52], [53], [54], [55], [56], ja meidän kohortin eroa CSS nähtiin korkean ja matalan ilme. Geeniekspressiotutkimuksissa RCC ovat osoittaneet EMT allekirjoitus liittyvän huonompi ennuste [57], [58]. Huolimatta näistä havainnoista, määrällinen arviointi SNAIL ja SLUG, keskeiset proteiineja EMT, ei havaittu merkitsevää eroa CSS.

VEGF ilme on myös tutkittu RCC muiden ja sen havaittiin olevan ennustetekijöitä. Erityisesti VEGFR1 on havaittu olevan yhteydessä huonompi lopputulos lokalisoitu RCC [12], ja tutkimuksemme on vahvistanut tämän yhden muuttujan analyysiin, pitkälle sairaus. Toiset ovat ehdottaneet alhainen VEGFD liittyvän huonompi ennuste [1], [12], mutta olemme nähneet puhumaan kehittyneen taudin huonompi tulos liittyy korkeampi VEGFD in primaarikasvaimen ja ehdotamme tämä on todennäköisesti seurausta säätelyn imusuonten. Kuitenkin menetys merkitystä näiden merkkiaineiden Monimuuttuja-analyysissä voi olla seurauksena hyvin rooli VEGF imusuonten keskusteltu.