Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoite

Mukosiitti on vakava häiriö ruoansulatuskanavassa, joka johtuu syövän lääkehoito. Tutkimme kasvun vaikutukset viinirypäleensiemenuutteen annokset vakavuudesta kemoterapian rottamallissa ja sen päällekkäisiä vaikutuksia kemoterapeuttisen tehokkuus koolonkarsinoomasoluissa.

Suunnittelu

Nainen Tumma Agouti rotille letkulla rypäleen siemen uutetta (400-1000 mg /kg) tai vedellä (päivä 3-11) ja ruiskutettiin intraperitoneaalisesti 5-fluorourasiili (150 mg /kg) tai suolaliuosta (kontrolli) päivänä 9 aiheuttavan mukosiitti. Päivittäinen metabolisen kerättiin ja rotat lopetettiin päivänä 12. Suoliston kudokset kerättiin histologista ja myeloperoksidaasin analyysejä. Caco-2 solujen elinkelpoisuus tutkittiin vastauksena viinirypäleensiemenuutteen yhdistelmänä 5-fluorourasiili by 3- (4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli) -2,5-difenyyli-liumbromidi) määrityksessä.

Tulokset

verrattuna 5-fluorourasiili valvontaa, rypäleiden siemenet ote (400-1000 mg /kg) vähensi histologinen vahinko pisteet (

P

0,05) tyhjäsuolessa. Rypäleiden siemenet ote (1000 mg /kg) nousivat tyhjäsuolen krypta syvyys 25% (

P

0,05) 5-fluoriurasiili käsiteltyjen rottien verrattuna 5-fluorourasiili valvontaa, ja heikennettyjä 5-fluorourasiilin aiheuttama vähennys limakalvon paksuus (25%,

P

0,05). Rypäleiden siemenet ote (600 mg /kg) laskivat myeloperoksidaasiaktiivisuus 55% (

P

0,01) verrattuna 5-fluorourasiili valvontaa. Rypäleiden siemenet ote oli tehokkaampi ameliorating 5-fluorourasiili indusoi suolen vamma, jonka vaikutukset voimakkaimmin proksimaalisessa tyhjäsuolessa. Rypäleensiemenuute (10-25 ug /ml) paransi merkittävästi kasvua inhiboivia vaikutuksia 5-fluoriurasiili 26% (

P

0,05) Caco-2-soluissa ja oli tehokkaampi kuin 5-fluoriurasiili 50-100 ug /ml.

Johtopäätös

viinirypäleensiemenuutteen voi edustaa uutta terapeuttista mahdollisuus vähentää oireita suoliston mukosiitin, kun samanaikaisesti vaikuttavia elinkelpoisuudesta koolonkarsinoomasoluissa.

Citation: Cheah KY, Howarth GS, Bastian syyskuu (2014) viinirypäleensiemenuutteen Annoksesta vasteena Vähennykset sairauden vaikeusasteen rottamallissa mukosiittia; Samanaikaisesti tehostaminen kemoterapeuttisia Tehokkuus koolonkarsinoomasoluissa. PLoS ONE 9 (1): e85184. doi: 10,1371 /journal.pone.0085184

Editor: Michael Muders, University Hospital Carl Gustav Carus Dresden, Saksa

vastaanotettu: 20 kesäkuu 2013; Hyväksytty 3 joulukuuta 2013 mennessä; Julkaistu: 21. 2014

Copyright: © 2014 Cheah et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Professori Gordon Howarth tukee Etelä-Australia terveys tutkimuslaitos Cancer neuvoston Senior Research Fellowship. Ei Rahoitussopimuksiin paikallaan. Tämä tutkimus tukivat University of Adelaide, jäsenyydestä viinin Innovation Cluster, Waite Campus, Adelaide, South Australia. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Mukosiitti on vakava, heikentävä seuraus syöpähoidon, joka vähentää merkittävästi elämänlaatua syöpäpotilaiden [1]. Mukosiitti on kivulias tila liittyy tulehdusta ja haavaumia ruoansulatuskanavan; yleisimmin vaikuttavat suun limakalvojen (suun mukosiitti) ja ohutsuolen (suoliston mukosiitti). Suoliston mukosiitti on tunnusomaista alentunut suoliston proliferaatio ja lisääntynyt apoptoottista määrä imukerässoluista, jolloin imeytymishäiriö ja häiritsi suojavaikutuksen [2], [3]. Oireita limakalvotulehdus kuuluu voimakas kipu, ripuli, pahoinvointi, oksentelu ja ruokahaluttomuus. Usein on suurentunut bakteeri-infektion kanssa liittyvän kuolleisuuden ja sairastavuuden [1]. Joskus maha myrkyllisyys voi alentaa tai jopa päättyminen, että solunsalpaajahoito [4]. Tämän takia kemoterapiaa annos syöpäpotilaille usein optimaalisia; joten uusi hoito, joka vähentää sivuvaikutuksia, säilyttäen tehoa haetaan. Nykyiset mukosiitti hoidot ovat suurelta osin tehottomia, sillä ne kohdistuvat vain oireita, mutta ei patogeneesiin ehto [5]. Näin ollen on tärkeää etsiä uusia vaihtoehtoisia hoitoja, jotka eivät ainoastaan ​​kohdistaa mukosiitti mutta myös parantaa kemoterapeuttisen toimintaa vaarantamatta hyvinvointia potilaalle. Tällä hetkellä optimaalinen yhdistelmä aineita, jotka voivat parantaa sekä kemoterapia-sytotoksisuutta vastaan ​​syöpäsoluja ja on minimaalinen vaikutus normaaleihin soluihin, ei ole vielä määritetty.

viinirypäleensiemenuutteen (GSE) on laajalti käytetty ravintolisä pohjalta sen voimakas antioksidantti [6], anti-inflammatoriset [7] ja väitetty, antineoplastisia [8] ominaisuuksia. Prosyanidiinit (PC: t) ovat ryhmä polyfenoliyhdisteiden koostuu flavan-3-oli-alayksiköt (oligomeerit ja polymeerit) [9]. PC ovat laajalti todettu muissa elintarvikkeiden lähteistä, kuten teetä, omenoita ja punaviiniä ja uskotaan olevan keskeinen bioaktiivisten ainesosien GSE [10], [11]. Useissa tutkimuksissa on raportoitu, että oton ja tietokoneiden suolistossa riippuu niiden kemiallisen rakenteen ja polymerointiaste [12]. PC (polymerointiaste = 7 tai korkeampi) säilyvät suolistossa, mikä lisää kosketusaika gut enterosyytteihin edistää suoliston terveyttä [10]. Tutkimuksissa GSE yhdistelmänä 5-fluorourasiilin (5-FU) normaaleissa eläimet ovat rajalliset. Lisäksi tutkimuksia ei ole julkaistu tutkia yhdistelmä 5-FU: n ja GSE paksusuolen syövän malleissa.

Aikaisemmin osoitimme alustavassa tutkimuksessa, että GSE (400 mg /kg) vähensi suolivauriota molemmat rottamalleissa suoliston mukosiitin [13] ja haavainen paksusuolen tulehdus [14]. Kuitenkin annos tarvitaan saavuttamaan maksimaalinen terapeuttinen hyöty, annos-vaste ja turvallisuus GSE jäi määrittelemättömän. Niinpä tutkimme GSE useilla annoksilla sen mahdollisuuksia optimaalisesti ja turvallisesti lievittää suoliston mukosiitin rottamallissa. Kasvavia annoksia GSE edelleen esti 5-FU aiheuttaman mukosiitin vaurioita, ja nämä hoidot olivat hyvin siedetty eläimiä ei metabolisia muutoksia ei havaittu verrattuna terveisiin kontrolleihin. Lisäksi tutkimme myös vaikutuksia yhdistelmän GSE 5-FU kemoterapiaa paksusuolen neoplasia käytettäessä

in vitro

malliin verrattuna tehokkuutta 5-FU yksin. Yhdistelmä GSE ja 5-FU entisestään myrkyllisyydestä koolonkarsinoomasoluissa.

Materiaalit ja menetelmät

Kemikaalit

catechin, epikate-, metanoli, phloroglucinols, askorbiinihappoa heksadekyylitrimetyyliammoniumbromidi (HTAB), natriumbikarbonaatilla ja

o

-dianisidine ostettiin Sigma Chemical Co. Ltd, St. Louis, MO. Folin-ciocalteau reagenssia ja

13C sakkaroosi ostettiin AnalaR, BDH, Merck, Pty. Ltd., Australia. Kudosviljelmässä ratkaisuja ovat Dulbeccon modifioitu Eaglen Minimum Essential Medium (DMEM), vasikan sikiön seerumia (FCS), antibiootit (penisilliini, gentamysiini ja streptomysiiniä), Dulbeccon fosfaattipuskuroitu suolaliuos, dimetyylisulfoksidi (DMSO) ja 3- (4,5-Dimethylthiazol- 2-yyli) -2,5-difenyyli-liumbromidi) (MTT) hankittiin Gibco BRL, Life Tehnologies Pty Ltd, Australia. Kemoterapia huumeita, 5-fluorourasiili (5-FU) ostettiin MaynePharma Pty. Ltd., Australia).

viinirypäleensiemenuutteen (GSE) valmistelu

viinirypäleensiemenuutteen oli ystävällisesti lahjoittanut Tarac Techologies (North Adelaide, South Australia, erä no: 02VIN03) ja varastoidaan ilmatiiviiseen, valonkestoisia pack kunnes se liuotetaan tislattuun veteen ennen käyttöä. GSE oli peräisin kondensoitiin tanniini valmistettu Australian valkoviinistä puristejäännöksestä (jäljellä nahat ja siemenet viiniyttämisessä). Ravitsemus profiilia GSE on lueteltu taulukossa 1. GSE hyödynnetään nykyisessä tutkimuksessa saatiin samasta lähteestä samalla eränumero sitä, jonka Cheah et al [13]. Polyfenolinen pitoisuus mitattiin aikaisemmin Folin-ciocalteau määritys [13], ja kemiallinen profiilin kvantifioitiin phloroglucinolysis kuvattu alla.

Folin-ciocalteau määritys

yhteenlaskettu fenolipitoisuus GSE aiemmin kvantifioitiin Folin-ciocalteau määritys [13]. Lyhyesti, GSE näytteet lisättiin kolmena kappaleena ei-steriili 96-kuoppalevyille ja inkuboitiin Folin-Ciocalteun reagenssia 5 min. Natriumbikarbonaattiliuoksella (7,5% w /v) lisättiin ja inkuboitiin edelleen 4 tunnin ajan pimeässä. Levy luettiin 740 nm: ssä spektrometrillä (Multiskan® Spectrum, Therma Electron Corporation, Vantaa, Suomi) käyttäen Skanit ohjelmiston 2.2. Katekiini standardit valmistettiin 1 mg /ml Varastossa (1/2 sarjalaimennoksia) ja käytettiin tuottamaan kalibrointikäyrä. Tiedot analysoitiin käyttämällä GraphPad Prism versio 4.0 Windows® (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) ja ilmaistu mg /ml catechin vastineet.

kvantifiointi procyanidins (PC) GSE by phloroglucinolysis

prosyanidiinia profiilia GSE leimasi phloroglucinolysis joka määrittelee alayksikkö koostumus, keskimääräinen polymeroitumisaste (MDP) ja galloylation tietokoneita. Phloroglucinolysis suoritettiin aikaisemmin kuvatun menetelmän [15]. GSE liuotettiin metanoliin (10 mg /ml, tilavuus /tilavuus) ja 25 ui GSE lisättiin yhtä suureen tilavuuteen floroglusinoli-liuosta (0,2 N HCI: a metanolissa, 100 g /l floroglusinoli ja 20 g /l askorbiinihappoa ). Phloroglucinolysis Reaktio suoritettiin 50 ° C: ssa 25 min ja analysoitiin käänteisfaasi-korkean paineen nestekromatografia (RP-HPLC) käyttäen (-) – epikatekiinia, kuten kvantitatiivisia vakiona [15].

Ethic liitetiedot

Tämä tutkimus seurasi Australian käytännesäännöt Care ja eläinten käyttö tieteellisiin tarkoituksiin ja hyväksyi sekä Animal Care ja eettisten komiteoiden lasten, nuorten ja naisten Health Service ja University of Adelaide (AE : 777-3-2011).

Eläinkokeet

Nainen Tumma Agouti rottia (100-140 g, n = 64) on sijoitettu yksittäisten aineenvaihdunnan häkeissä (Tecniplast, Exton, PA, Yhdysvallat ) in lämpötilaohjattu huoneen lämpötilassa (22 ° C), jossa on valo-pimeä sykli 12 h. Rotille annettiin

mielinmäärin

pääsy veden ja ruoan (18% kaseiini-pohjainen ruokavalio) [16] in Animal Care Facility lasten, nuorten ja naisten Health Service, North Adelaide, South Australia.

Rotat jaettiin satunnaisesti 8 ryhmää (n = 8): Vesi + Saline injektio; GSE 400 mg /kg + suolaliuos injektio; GSE 600 mg /kg + suolaliuos injektio; GSE 1000 mg /kg + suolaliuos injektio; Vesi + 5-FU injektio (5-fluorourasiili: 150 mg /kg); GSE 400 mg /kg + 5-FU-injektio, GSE 600 mg /kg + 5-FU injektio; ja GSE 1000 mg /kg + 5-FU injektio. Rotat sopeutunut metaboliahäkeissä päivästä 0-2 ja sitten letkulla 1 ml GSE liuotetaan veteen (400 mg /kg, 600 mg /kg tai 1000 mg /kg) tai vettä päivä 3-11. Päivänä 9, kaikki rotat intraperitoneaalisesti joko 5-FU tai suolaliuosta (kontrollit). Päivittäiset mittaukset kehon painosta, ruoan ja veden saanti, ja virtsan ja ulosteen tuotos kirjattiin. Rotat tapettiin CO

2 tukehtumisen seurasi niskanmurrolla päivänä 12. Kaikki sisäelimissä punnittiin ja heitettiin pois. Pituudet ja painot ruoansulatuskanavan elimissä (pohjukaissuoli, ohutsuoli ja paksusuoli) rekisteröitiin. Edustavia näytteitä (2 cm) maha-suolikanavan elimiin kerättiin ja kiinnitettiin 10%: puskuroituun formaliiniin histologista analyyseihin, kun taas neljä cm näytteet jäädytettiin nopeasti nestemäisessä typessä ja säilytettiin -80 ° C: ssa biokemiallisia analyysi.

13C-sakkaroosi hengityksen testi (SBT) B

SBT on epäsuora mitta suoliston sakkaroosi aktiivisuutta ja suoritettiin menetelmän mukaisesti kuvataan Tooley

et al.

[17] lyhyesti , rotat olivat oro-mahalaukussa letkulla 1 ml sakkaroosia, joka sisälsi

13C (250 mg /kg) ja hengitystä kerättiin 15 minuutin välein 120 minuutin ajan. Hengitys Näytteistä analysoitiin

13CO

2 sisällön isotooppisuhde massaspektrometrian (IRMS) varustettuna V410 tiedonkeruujärjestelmä (Europa Scientific, ABCA 20/20, Crewe, Yhdistynyt kuningaskunta). Tiedot ilmaistiin prosentteina kumulatiivinen annos 90 min (% CD90) laskemalla muutoksen hengityksen

13CO

2 tasossa lähtötilanteesta kunakin ajankohtana hengityksen keräys koko ajan välein näytteenotto. SBT määritykset suoritettiin päivänä 3 (ennen GSE hoitoa), päivä 9 (ennen 5-FU injektio) ja päivä 12 (ennen kill).

myeloperoksidaasi (MPO) määritys

ohutsuolen kudoksen näytteet (4 cm) jejunum, risteyksessä tyhjäsuolen ja sykkyräsuolen (JI) ja sykkyräsuoli sulatettiin jään päällä ja homogenoitiin 1,5 ml: lla fosfaattipuskuria (10 mM, pH 6,1) 60 sekunnin ajan, kunnes liuos oli homogeeninen. Homogenaatteja pidettiin jäädytettyinä -80 ° C: ssa, kunnes niitä tarvittiin.

MPO on entsyymi läsnä solunsisäisen rakeet neutrofiilien, joka toimii akuutin tulehduksen markkeri. Taso MPO ohutsuolessa määritettiin pienin muutoksin kuvanneet Krawisz

et al.

[18] Kudoshomogenaatteja sulatettiin jäillä ja sentrifugoitiin 13000 g: ssä 13 min. Supernatantti heitettiin pois ja solupelletit suspendoitiin uudelleen heksadekyylitrimetyyliammoniumbromidi (0,5%, pH 6,0). Näytteitä vorteksoitiin 2 min ajan ja sentrifugoitiin edelleen 13000 g: ssa 3 minuutin ajan. Supernatantit reagoida

o

-dianisidine ja absorbanssi mitattiin 450 nm: ssä 1 minuutin välein ajaksi 15 min käyttäen mikrolevyn lukijaa (Sunrise Microplate Reader, Tecan Austria GmbH, Grodig, Itävalta). MPO-aktiivisuus ilmaistiin yksiköinä MPO aktiivisuuden per gramma kudosta.

Histologinen analysoi

Gut kudosnäytteistä (2 cm) upotettiin parafiinin ja 4 um: n leikkeitä värjättiin hemotoksyliini- ja eosiinilla. Yleinen histologinen sairauden vaikeusasteen pistemäärä (ODS) suoliston osissa oli mitoitettu puolittain määrällisesti (0-3), joka perustuu 11 itsenäistä histologisten kriteerien mukaisesti kuvanneet Howarth

et al.

[19] Kasa korkeudet ja crypt syvyydessä (40 Villi ja 40 crypts per jakso) määritettiin ohutsuolen kohdat kuten tyhjäsuolen risteyksessä tyhjäsuolen ja sykkyräsuolen (JI) ja sykkyräsuoli kuvatulla Howarth

et al.

[19] yhdistetty mittaus of villus korkeuksia ja krypta syvyydet edellyttäen lähentää koko limakalvon paksuus kussakin ohutsuolen näytteestä. Kaikki mikroskooppi-pohjainen analyysit tehtiin sokkona valomikroskoopilla (Nikon, ProgRes®CS, Tokio, Japani) ja kuva ProPlus ohjelmistoversio 5.1 (Media Cybernetics, Silver Spring MD, USA).

Cell Culture

ihmisen paksusuolen syövän solulinja, Caco-2 saatiin American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, USA). Caco-2-soluja pidettiin 37 ° C: ssa kostutetussa inkubaattorissa 5% CO

2-95% ilmaa ja 90% suhteellinen kosteus Dulbeccon modifioidussa Eaglen Minimum Essential Medium (DMEM), johon oli lisätty 10% (v /v ) vasikan sikiön seerumia (FCS) ja 1% antibiooteilla (penisilliini, gentamysiini ja streptomysiiniä) (v /v). Soluja kasvatettiin 75 cm

2 tuuletettu kudosviljelypulloissa, viljelyväliaine vaihdettiin kahdesti viikossa ja solut siirrostettiin, kun ne olivat 80-90% konfluentteja.

Solujen elinkelpoisuus

inhibitiota Caco-2-solujen elinkelpoisuus määritettiin 3- (4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli) -2,5-difenyyli-liumbromidi) (MTT) mukaisesti aiemmin kuvattu menetelmä Huynh-Delerme

et al.

[20] soluja (5 x 10

3 solua /kuoppa) ympättiin 96-kuoppaisille kudosviljelylevyille 48 tuntia, jotta kiinnitys. GSE valmistettiin dimetyylisulfoksidiin (DMSO) ja laimennettiin DMEM ja edelleen steriloida suodattamalla 0,22 um: n suodattimen (Millipore, South Australia, Australia). Kaikissa kokeissa, DMSO: n konsentraatio kontrolli- ja käsiteltyjen näytteiden oli vähemmän kuin 0,025%. 48 tunnin kuluttua viljelyalusta korvattiin seerumivapaassa sisältävät GSE eri pitoisuuksina (pg /ml) ja 5-FU (uM) ja edelleen inkuboitiin joko 24 tai 48 tuntia. MTT-liuos valmistettiin Dulbeccon fosfaattipuskuroitu suolaliuos (1 mg /ml) ja steriili-suodatetaan biologista epäpuhtauksia. Seuraavaksi 50 ui MTT-liuosta lisättiin kuhunkin kuoppaan ja inkuboitiin edelleen 37 ° C: ssa 4 h. Elatusaine korvattiin 100 ui DMSO: ta poimia formatsaanituotteesta. Levyt sijoitettiin ravistelemalla inkubaattorissa 15 minuutin ajan ja luetaan -spektrometrillä 570 nm: ssä. Data ilmaistiin elävien solujen lukumäärän prosenttiosuutena ohjaus käsiteltyjen solujen seerumittomalla väliaineella vain.

Tilastolliset analyysit

Tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen PASW 18 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA) ja XLSTAT versio 02.04.2011 (Addinsoft SARL, Ranska). Kaikkien muuttujien tiedot kuten painon, päivittäin metabolisen tietoja, SBT, MPO, villus kahdessa krypta syvyyttä ja solujen elinkelpoisuus verrattiin käyttämällä yksisuuntaista varianssianalyysi (ANOVA), jossa on Tukeyn

post-hoc

testi. Yleinen sairauden vaikeusasteen pistemäärä (ODS) verrattiin jonka Kruskal-Wallisin testi Mann Whitneyn U-testi tunnistaa merkitys ryhmien välillä. Tiedot katsottiin merkitsevä

P

0,05.

Tulokset

karakterisointi procyanidins tekijänä phloroglucinolysis

GSE oli pieni massa muuntaminen (23,8% w /w), MDP (5,9) ja moolimassa (1871 g /mol), mitattuna phloroglucinolysis (taulukko 2). PC-päätelaite alayksiköiden GSE käytti enimmäkseen hallitsi (-) – epicatechin-3-

O

-gallate.

Daily metabolisen parametreja ja paino

Suun hallinto GSE (400, 600 tai 1000 mg /kg) välillä päivää 3 ja 9 ei vaikuttanut merkittävästi kehon painon, ravinnon tai veden oton ja virtsan tai ulosteen lähtö verrattuna rottiin vesistötutkimuksia (taulukko 3). 5-FU injektio lisäsi merkittävästi otto- ja virtsaneritystä ja vähentää kehon painoa, ruokailu ja ulosteen ulostulo verrattuna saaneilla rotilla suolaliuosta injektiota välillä päivää 10 ja 12 (taulukko 4). GSE 600 ja 1000 mg /kg 5-FU käsiteltyjen rottien merkitsevästi palasi ulosteen ulostulo (

P

0,01), takaisin kohti arvot tavanomaista suolaliuosta ruiskutetaan verrokkirotissa.

sisäelimissä

5-FU injektio vähensi merkittävästi kateenkorvan painoa 51% (

P

0,001) ja pernan painoa 20% (

P

0,05) verrattuna normaaleihin kontrolleihin.

Sakkaroosi puhalluskoe (SBT)

5-FU injektio merkitsevästi (

P

0,001) pienensi SBT (% CD90) 70% verrattuna arvoihin vedessä + suolaliuosta saaneilla rotilla, joka epäsuorasti osoittaa 5-FU injektio oli häiriintynyt harjareunusten sakkaroosi aktiivisuus (kuvio 1). Ei ollut merkittäviä eroja% CD90 kesken tahansa 5-FU saaneilla rotilla sai GSE verrattuna 5-FU käsiteltyjen-verrokkirotissa. Lisäksi mitään merkittäviä eroja% CD90 havaittiin välillä GSE ja vedenkäsittely, mikä yksikään GSE annosten oli todistettavasti vaikutti harjareunusten sakkaroosi toimintaa terveillä rotilla (kuvio 1).

Data esitetään keskiarvoina ( % CD90) ± SEM. *** Osoittaa

P

0,001 verrattuna Water + Saline.

myeloperoksidaasiaktiivisuus (MPO) B

jälkeen 5-FU injektio, oli merkittävä (

P

0,001) kasvaa MPO toimintaa proksimaalisessa tyhjäsuolessa, risteyksessä tyhjäsuolen ja sykkyräsuolen (JI) ja sykkyräsuoli vesi + 5-FU hoidettujen rottien (1092%, 357% ja 297% vastaavasti) verrattuna veden + suolaliuosta käsittely (kuvio 2). GSE 600 mg /kg merkittävästi (

P

0,01) pienensi MPO aktiivisuutta 55% JI verrattuna vettä + 5-FU hoidettujen rottien (kuvio 2B). Ei ollut mitään merkittävää eroa MPO aktiivisuuden välillä GSE ja vedenkäsittely terveillä rotilla (kuvio 2), mikä osoittaa, että GSE käyttö ei vaikuttanut MPO aktiivisuutta terveitä eläimiä.

Data ilmaistaan ​​keskiarvona (MPO yksikköä /g kudos) ± SEM. * Tarkoittaa

P

0,05, ** osoittaa

P

0,01 ja *** osoittaa

P

0,001 verrattuna rottiin vastaanottavan vesistön ja suolaliuosta injektiota. ## Osoittaa

P

0,01 verrattuna rottiin vastaanottaa vettä ja 5-FU injektio.

Kaiken sairauden vaikeusasteen tulokset

anto 5-FU huomattavasti sairauden vakavuuden pisteet proksimaalisessa tyhjäsuolessa kun arvioidaan semi-kvantitatiivisia histologinen vakavuus pisteet analyysi (kuva 3 ja 4). 5-FU valvontaa saavuttaneet korkeimmat vahinko pistemäärä (mediaani pistemäärä = 30) ja olivat merkittävästi suurempia kuin vesi + suolaliuoksella hoidettujen rottien (mediaani pistemäärä = 1,

P

0,01). GSE hoito vähensi merkitsevästi sairauden vaikeusasteen pisteet 5-FU: lla käsitellyistä rotista annoksella reagoiva tavalla (GSE 400 = 21 (15,5-25,5),

P

0,01; GSE 600 = 15,75 (9-24)

P

0,01 ja GSE 1000 = 11,75 (7-19),

P

0,01) verrattuna 5-FU ohjaa. Ei ole merkittävää eroa sairauden vaikeusasteen pisteet välillä havaittiin GSE ja veden saaneilla rotilla sai fysiologista suolaliuosta (kuva 3), mikä osoittaa, että GSE ollut häirinnyt suoliston eheyttä terveille eläimille.

vakavuus tulokset arvioitiin Yhteensä 11 parametreihin eri kerrosten suolistossa perustuu aiemmin kuvattu protokolla Howarth

et al.

[19] rasiakuvaajien edustavat erilaisia ​​sairauden vakavuudesta pisteet ja vaakaviivat edustavat mediaani taudin vakavuudesta pisteet. ** Osoittaa

P

0,01 verrattuna Water + Saline. ## Osoittaa

P

0,01 verrattuna Vesi + 5-FU.

(Original suurennus 40 x.)

Kasa korkeus, krypta syvyys ja limakalvon paksuus

5-FU injektio johti lyhentämistä nukkapeitteen tyhjäsuolessa (38%,

P

0,001), JI (39%,

P

0,001), ja sykkyräsuoli (26%,

P

0,01) verrattuna vettä kontrolleihin (kuvio 5). 5-FU injektio vähensi myös krypta syvyys tyhjäsuolessa (38%,

P

0,001), JI (23%,

P

0,05) ja sykkyräsuoli (15%,

P

0,05). Vuonna tyhjäsuolen GSE hoidot taipumus annoksesta vasteena parantaa villus kahdessa krypta syvyys, vaikka vain GSE annoksella 1000 mg /kg merkittävästi (

P

0,05) kasvoi krypta syvyys verrattuna 5-FU säätimet (kuvio 5A). Tärkeää on, mikään GSE hoitojen vaikutti kielteisesti villus kahdessa krypta syvyys terveille eläimille. 5-FU injektio vähensi merkittävästi limakalvon paksuus tyhjäsuolessa (38%,

P

0,001), JI (45%,

P

0,001) ja sykkyräsuoli (29%,

P

0,01) verrattuna vesikontrolleilla (kuva 6). GSE hoidot yleensä annoksen vasteena lisäämään limakalvon paksuus tyhjäsuolessa, vaikka vain GSE 1000 mg /kg lisäsi merkittävästi limakalvon paksuus (25%,

P

0,05) verrattuna 5-FU ohjaa (kuvio 6A) .

Data ilmaistaan ​​keskiarvona (gm) ± SEM. * Tarkoittaa

P

0,05, ** osoittaa

P

0,01 ja *** osoittaa

P

0,001 vertailla Water + Saline. # Osoittaa

P

0,05 verrattuna vesi + 5-FU.

Data ilmaistaan ​​keskiarvona (um) ± SEM. * Tarkoittaa

P

0,05, ** osoittaa

P

0,01 ja *** osoittaa

P

0,001. # Osoittaa

P

0,05 verrattuna vesi + 5-FU.

Effects of 5-FU elinkelpoisuus Caco-2-solujen

annosvasteet 5-FU (0-100,000 uM) on Caco-2-soluja 24 h ja 48 h on esitetty kuviossa 7. 5-FU annosta testattiin myös 72 h (tietoja ei esitetty). Solujen elinkelpoisuus Caco-2-solujen estyi 5-FU on ajasta ja annoksesta riippuvalla tavalla. 24 h, 5-FU: 100pM vähensi elinkelpoisuuden Caco-2-solujen 88% (

P

0,05) verrokkiarvoista ja vähentää lisää solujen elävyyden havaittiin 70% (

P

0,05) verrokkiarvoista 48 tuntia. 100 uM 5-FU valittiin seuraavaksi kokeessa, koska tämä annos vähensi Caco-2 solujen elinkykyä (70-85%), mikä heijastaa ruoansulatuskanavan toksisuutta yleisesti havaittu syöpäpotilailla kemoterapian.

Data ilmaistaan ​​prosentteina solujen elinkelpoisuuden suhteen elinkelpoisuuden käsittelemättömien kontrollien. Data esitetään keskiarvoina ± SEM 2-3 itsenäisestä kokeesta. Bar tietoa ei jakavat saman kirjeen ovat merkittävästi erilaiset

P

0,05.

Effects of GSE ja 5-FU Caco-2 solujen elävyyden

jotta voidaan vahvistaa sytotoksisuuden GSE Caco-2-solut, GSE (10-100 ug /ml) levitettiin soluihin joko 24 tai 48 h (kuvio 8). GSE hoito esti solujen elinkelpoisuuden annoksesta ja ajasta riippuvaisella tavalla. GSE hoidot merkitsevästi (

P

0,05) vähensi solujen elinkykyä (IC

50 = 50,24 ug /ml) 24 h, ja tuli myrkyllisiä Caco-2-soluja 48 h (IC

50 = 37,84 ug /ml). Kun solut altistettiin yhdistelmä GSE (10-100 ug /ml) ja 5-FU (100 uM), suurempi määrä kuolleita soluja oli selvästi verrattuna soluihin, altistettu 5-FU yksinään (kuvio 8). 24 h, 5-FU vähensi solujen elinkelpoisuuden 84% (

P

0,05) kontrolliarvoista. Mielenkiintoista on, että kun Caco-2-solut altistettiin yhdistelmä GSE ja 5-FU, kasvua estäviä vaikutuksia 5-FU merkittävästi parantaa 26% (GSE = 25 ug /ml;

P

0,05; yhdistelmähoito vs. molemmat aineet yksin) 24 tuntia. GSE suuremmilla annoksilla (50-100 ng /ml) kohdistuva suurempi kasvun inhibitio verrattuna 5-FU yksin. 24 h, GSE indusoi merkittävää kasvua estäviä vaikutuksia Caco-2-soluja (GSE 50 = 33% ja GSE 100 = 27%;

P

0,05) verrattuna 5-FU-ohjaus (84% valvontaa arvo) (kuvio 8A). Lisäksi GSE yksin merkittävästi (

P

0,05) vähentynyt elinkelpoisuutta Caco-2-solut (GSE 50 = 31% ja GSE 100 = 29%;

P

0,05) verrattuna 5-FU-ohjaus (64% vertailuarvosta), 48 h (kuvio 8B).

tiedot ilmaistaan ​​prosentteina solujen elinkelpoisuus suhteessa käsittelemättömiin kontrolleihin. Data esitetään keskiarvoina ± SEM 4 itsenäisestä kokeesta. Bar tietoa ei jakavat saman kirjaimet ovat merkittävästi erilaiset

P

0,05.

Keskustelu

Esillä oleva tutkimus on ensimmäinen raportti GSE annoksesta vasteena vähentäminen vakavuus mukosiitti. Tulosten perusteella näyttää, että suuremmat annokset GSE ovat tehokkaampia vähentämään vakavuutta indikaattorit suoliston mukosiitin rotilla ja että nämä GSE aiheuttama vaikutukset ovat suureksi osaksi annoksesta riippuvia ja selvempää proksimaalisessa tyhjäsuolessa verrattuna distaaliseen ohutsuoleen.

Injection 5-FU vaikutuksia ohutsuolen suuremmassa määrin kuin paksusuolessa, mikä johtuu oletettavasti suurempi solujen vaihtuvuus enemmän proksimaalisessa alueilla suolen [3]. Tuloksemme ovat yhtäpitäviä aiempien tutkimusten kanssa, [18], [19], [21], jossa 5-FU mukosiitti malli aiheutti vakavia suoliston loukkaantumisen 72 tuntia induktion jälkeen mukosiitti. Tämä vahinko on ominaista väheneminen suoliston harjareunusten entsyymin toimintaa [21], lisääntynyt neutrofiilikeräytymän [22], lisääntynyt taudin vakavuudesta pisteet [23] ja samalla limakalvoon paksuus [13]. Yhdenmukainen aiempien tutkimusten [13], tylpistämällä Villi ja epäjärjestyksestä kryptojen (sijainti kantasolujen) oli pääasiallinen liittyviä tapahtumia vakava mukosiitti. Jejunumissa on maksimaalinen vammakohdan kemoterapian aiheuttama ja vaikutus tulee vähemmän korostunut distaalisemmissa alueet ohutsuolen [13]. Tämä osoitettiin olevassa tutkimuksessa, jossa vähemmän vahinkoa havaittiin kannalta MPO aktiivisuuden (neutrofiilien tunkeutumista), nukkalisäkkeen korkeus ja limakalvon paksuus distaaliseen päähän ohutsuolen

hyötyosuus PC suolistossa järjestelmään on hyvin dokumentoitu muissa tutkimuksissa [24]. Ainutlaatuinen polymeroitunut rakenne tietokoneiden estää absorption ohutsuolessa, että ne noudattavat suolen limakalvon [25]. Tsang

et al.

[26] havaittu suurempia muotoja tietokoneita ohutsuolessa rotilla jopa 12 h kuluttua nauttimisesta. Siten, kertyminen suhteellisen korkea PC pitoisuudet voivat esiintyä suolen onteloon suojella suoliston. Nykyisessä tutkimuksessa suurempia annoksia GSE (1000 mg /kg) oli tehokas säilyttämään crypt syvyys ja limakalvon paksuus tyhjäsuolen alueella, jossa suurin arvo lähestyy arvoja terveillä verrokeilla. Lisäksi nykyinen tutkimus osoitti myös parantaa ulosteen ulostulo (vähemmän vakavaa ripulia) kemoterapiassa saaneilla rotilla vastaanottaa suuremman annoksen GSE (600 mg /kg ja 1000 mg /kg), mikä viittaa vähensi häiriöitä limakalvon limakalvon ohutsuolen .

Vaikka GSE nykyisessä tutkimuksessa oli tehokkaampi tyhjäsuolessa, sivuston suurten suoliston loukkaantumisen, bioaktiivisuus vähennettiin distaalisessa ohutsuolen. Tämä saattaa johtua huonontuneen bioaktiiviset ainesosat päästä distaalisen alueen ohutsuolen [27], [28]. Pilkkominen, imeytyminen ja metabolia GSE on tärkeää tunnistaa kohtalosta bioaktiivisten yhdisteiden GSE. Jatkossa tutkimuksissa on tarpeen tunnistaa muotoa, kokoa ja bioaktiivisuus procyanidins GSE edistämisestä vastaavat suoliston terveyttä käyttämällä

in vitro

ja

in vivo

malleja imeytymistä suolistosta. Lisäksi tulevissa tutkimuksissa voitaisiin tarkastella suojan GSE, mahdollisesti mikrokapselointi, kautta tai peräpuikko sovellus, kohdentaa paremmin GSE ja parantaa hyötyosuutta distaalisemmissa alueilla suolen. Monimutkaisuuden vuoksi GSE sisältöä, se olisi vaikea määrittää, mitkä tekijät ovat vastuussa havaittu bioaktiivisuus. Tästä syystä, GSE sijaan vaihtoehtoinen proteiinin lähdettä, kuten naudan seerumin käytettiin omaa valvontaa. Administration GSE normaali eläimiä saa tarkempia verrattuna GSE saaneilla rotilla, jotka saivat 5-FU kemoterapiaa.

Kiinnostus GSE on ollut pääasiassa koska sen korkea antioksidanttipitoisuus. GSE on voimakkaampi radikaalinsieppausaineen kuin muut tunnetut antioksidantit, kuten C-vitamiinia ja E [29]. Esillä olevassa tutkimuksessa osittainen alentaminen akuutin tulehduksen GSE, kuten on osoitettu lasku MPO toiminnan, ja väheneminen lymfosyyttien tunkeutumisen tallentama sairauden vaikeusasteen pisteet analyysi, voisi vahvistaa mahdollinen rooli GSE kuin voimakas antioksidantti ja anti-inflammatorinen aine. Useat tutkimukset ovat kuvanneet GSE anti-inflammatoriset edustaja.