Krooninen sairaus

tiivistelmä

aktivoituminen ohituksen signaaleja, kuten MET ja Axl, on tunnistettu mahdollinen mekanismi EGFR-TKI vastarintaa. Koska eri onkoproteiineja riippuu HSP90 kypsymisen ja vakautta, tutkimme vaikutuksia AUY922, äskettäin kehitetty ei-geldanamysiini luokan HSP90 estäjä, keuhkosyövän solujen METSO ja AXL välittämän resistenssin. Perustimme resistenttejä solulinjoja HCC827 -solut eksonin 19-deleetiomutaation on

EGFR

geenin kautta pitkäaikainen altistus kasvavia pitoisuuksia gefitinibin ja erlotinibin (HCC827 /GR ja HCC827 /ER, vastaavasti). HCC827 /GR vastus välitti MET aktivointi, kun taas Axl aktivaation aiheuttama vastus HCC827 /ER-soluja. AUY922 hoito ehkäistä tehokkaasti proliferaation ja indusoi solukuoleman molemmissa resistenttejä solulinjoja. Näin ollen downregulation EGFR, MET, ja AXL vähensivät Akt aktivointia. Estovaikutukset AUY922 kunkin reseptorin vahvistettiin geeni-transfektoiduissa LK2 soluissa. AUY922 myös tehokkaasti hallinnassa kasvaimen kasvua vierassiirrekokeissa hiiri malleja, jotka sisältävät HCC827 /GR ja HCC827 /ER-soluja. Lisäksi AUY922 vähensi invaasion ja maahanmuuttoa molempia resistenttien solujen. Tutkimuksemme löydökset osoittavat, että AUY922 on lupaava terapeuttinen vaihtoehto METSO ja AXL välittämän resistenssin EGFR-TKI keuhkosyövässä.

Citation: Choi YJ, Kim SY, niin KS, Baek IJ, Kim WS Choi SH, et al. (2015) AUY922 tehokkaasti ratkaisee METSO ja AXL välittämä kestävyys EGFR-TKI in Lung Cancer Cells. PLoS ONE 10 (3): e0119832. doi: 10,1371 /journal.pone.0119832

Academic Toimittaja: Javier S. Castresana, Navarran yliopisto, Espanja

vastaanotettu: 26 elokuu 2014; Hyväksytty: 16 tammikuu 2015; Julkaistu: 17 maaliskuu 2015

Tämä on avoin pääsy artikkeli, vapaa kaikki tekijänoikeudet, ja saa vapaasti jäljentää, levittää, välittää, modifioitu, rakennettu, tai muuten käyttää kuka tahansa laillista tarkoitusta. Teos on saatavilla Creative Commons CC0 julkisuuteen omistautumista

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: J. K. Rho oli myönnetty avustus National Research Foundation of Korea (NRF, 2013R1A1A2005112) ja S. H. Choi oli myönnetty avustus on Asan Institute for Life Sciences (2014-597). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

epidermaalisen kasvutekijän reseptorin estäjä (EGFR-TKI) on yksi onnistuneen kohdistuksen aineita, joita käytetään syövän hoitoon. Kuitenkin resistenssin kehittymistä, vaikka hyvä alustavat vastaukset, potilailla, joilla on EGFR-mutantti keuhkosyöpä on väistämätöntä [1,2]. Vaikka lähes puolet TKI vastus johtuu toissijainen T790M mutaatio [3,4], aktivointi ohittaa signaalit kuten MET tai AXL voitaisiin myös edistää hankintaan vastus [5,6].

MET-geenin monistaminen aiheuttaa HCC827 -solut herkistävän EGFR mutaatio tulla vastustuskykyisiä gefitinibin kautta ErbB3-riippuvainen aktivaatio fosfoinositidi-3-kinaasin /Akt (PI3K) reitti [5]. Alustavat tutkimukset raportoitu, että noin 20% potilaista, joilla on hankittu vastustuskyky EGFR-TKI osoitti

MET

geenimonistuksen tai ilman T790M [5,7], kun taas tuore tutkimus siitä, miten usein resistenssimekanismeja paljasti, että

MET

vahvistus kehittyi noin 5%: lla potilaista, kun vastus [8]. Yhdistelmä hoidot MET ja EGFR: n estäjien voitaisiin kumota aktivointi loppupään signaaleja, jolloin tuotteita kehittynyt resistenssi EGFR: n estäjien [5,9]. Useat MET tyrosiinikinaasin estäjät ja MET-esto monoklonaalisia vasta-aineita, kuten SU11274, ARQ197 ja onartuzumab, ovat kliinisissä kokeissa [10].

Äskettäin kolme riippumatonta opintoryhmät kertoi, että Axl, joka sisältyy TAM ( Tyro-Axl-Mer) reseptori tyrosiinikinaasin (RTK) perhe, voisi olla syynä EGFR-TKI vastus kokeellisissa malleissa [6]. Vaikka noin 20% potilaista osoitti AXL yli-ilmentyminen jälkeen vastustuskyvyn kehittymistä kyseisessä tutkimuksessa tarkka osuus potilaista, joilla hankittu resistenssi ja hoitojen, joita voitaisiin käyttää voittamiseksi vaikutusten kohdistaminen AXL kliinisissä yhteyksissä vielä määritettävä [11] .

lämpöshokkiproteiini 90 (HSP90) on keskeisessä asemassa ylläpitämisessä solun homeostaasin vaikuttamalla proteiinin kypsymisen ja vakaus [12]. Koska eri onkoproteiineja riippuu sen moitteettoman toiminnan, HSP90 on tunnustettu houkutteleva terapeuttinen kohde [13]. Kliiniset kokeet kohdistaminen mutantti EGFR, mukaan lukien T790M mutantti kanssa HSP90 estäjiä, ovat käynnissä. Jotkut prekliinisissä tutkimuksissa on raportoitu lupaavia tuloksia [14-16]. On kuitenkin olemassa riittävästi tietoa siitä, miten METSO tai AXL välittämää vastus EGFR-TKI keuhkosyövässä voidaan korjata estämällä HSP90. Meidän Tässä tutkimuksessa tutkimme tehoa AUY922, ei-geldanamysiini luokan HSP90 estäjä METSO ja AXL välittämä resistenttejä solulinjoja ja eläinmalleissa.

Materiaalit ja menetelmät

Soluviljely ja reagenssit

HCC827-solut saatiin American Type Culture Collection (Rockville, MD). Gefitinib- ja erlotinibin kestävät solulinjat (HCC827 /GR ja HCC827 /ER, vastaavasti) perustettiin osana aiemman tutkimuksen [17]. Soluja viljeltiin RPMI 1640: ssä (Invitrogen, Carlsbad, CA), joka sisälsi 10% naudan sikiön seerumia (FBS), 100 U /ml penisilliiniä ja 100 ug /ml streptomysiiniä (Invitrogen) 37 ° C: ssa ilmakehässä, jossa oli 5% CO

2. AUY922 hankittiin Selleck Chemicals (Houston, TX).

Solujen elinkelpoisuus määritykset

Solujen elinkelpoisuus arvioitiin käyttäen MTT-määritystä. Lyhyesti, solut logaritmisessa kasvuvaiheessa kerättiin, ympättiin 96-kuoppalevyille ja viljeltiin yön yli. Solut altistettiin eri annoksia AUY922 väliaineessa, joka sisälsi 1% FBS: ää. 72 tunnin jälkeen, MTT-määritys suoritettiin, kuten on kuvattu julkaisussa Carmichael et ai. [18]. Validoida syöpää ehkäisevistä vaikutuksista on AUY922, soluja käsiteltiin osoitetulla annoksella AUY922 72 tunnin ajan, ja kiinnittyneet solut värjättiin 0,2% trypaanisinisellä, joka sisälsi 50% metanolia. Solujen elinkelpoisuus määritettiin käyttäen ADAM-MC automaattinen solulaskijalla (NanoEnTek, Seoul, Korea) vuonna accordiance kanssa valmistajan ohjeiden mukaisesti. Tulokset edustavat ainakin kolmen erillisen kokeen, ja virhe palkit osoittavat keskihajonnan (SD).

Western blot-analyysi

western blotting, proteiinit erotettiin SDS-polyakryyliamidigeeleillä ja sähköllä Immobilon-P -kalvoille (Millipore, Bedford, MA). Vasta-aineet ovat spesifisiä p-EGFR (Tyr1173), EGFR, Axl, MET, Akt, p-Erk, Erk, Myc, ja β-aktiini saatiin Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA), ja vasta-aineita p-MET ( Tyr1234 /1235), p-AXL (Tyr702), p-Akt, PARP ja kaspaasi-3were saatu Cell Signaling Technology (Beverly, MA). Proteiinit todettiin käyttäen tehostettua kemiluminesenssi Western blotting (Amersham Biosciences, NJ) mukaisesti valmistajan ohjeiden.

Ohimenevä transfektio

pcDNA3 /EGFR (WT) ja pcDNA3 /EGFR (delE746- A750) saatiin Dr. TY Kim (College of Medicine Seoul National University, Seoul, Etelä-Korea). pCMV6-Entry /MET ostettiin Origene (Rockville, MD). pcDNA3.1 /AXL (WT) rakennettiin osana aiemman tutkimuksen [6]. Transfektiot suoritettiin käyttäen Lipofectamine 2000 (Invitrogen) noudattaen valmistajan ohjeita.

Solusyklianalyysiä

Solut ympättiin 6-kuoppalevyille ja käsitelty osoitetun kertaa 1 umol /l AUY922. Sekä pysyvällä ja kelluvat solut kerättiin analyysiä varten. Solut kiinnitettiin 70%: lla jääkylmää etanolia 1 tunnin ajan ja inkuboitiin 50 ug /ml RNaasi A: ta ja 25 ug /ml propidiumjodidia (PI) 30 minuutin ajan 37 ° C: ssa. Kvantitatiivinen analyysi solusyklin jakautumisen suoritettiin käyttäen FASCalibur virtaussytometrillä (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ).

In vivo

tutkimuksessa

nainen vaikea sekamuotoinen immuunivajavuus (SCID ) hiiriä (18-20 g; 5 viikon iässä, 5 hiirtä /ryhmä) hankittiin Charles River Laboratories. Kaikki kokeelliset menetelmät suoritettiin seuraava protokolla hyväksymä Institutional Animal Care ja käyttö komitean Asan Institute for Life Sciences (2013-01-066). Kasvaimet kasvatettiin istuttamalla soluja (1 x 10

6 HCC827 /GR soluja tai 5 x 10

6 HCC827 /ER solut) Matrigel (BD Biosciences) ja sen jälkeen hiireen kylkiin. Hoito ajoneuvonhallintajärjestelmän aloiteta kasvaimet saavuttivat tilavuuden 50-100 mm

3 (20 mg /kg AUY922 kautta vatsaonteloon injektio, 5 päivää /viikko). Hoito lopetettiin ilmoitettua päivää, ja hiiret saivat seurantaa tutkimukset dokumentoida kasvaimen uusiutumisen. Mitata kasvaimen kokoa, pituutta (

L

) ja leveys (

W

) kunkin kasvaimen mitattiin käyttämällä jarrusatulat, ja kasvaimen tilavuus (TV) laskettiin TV = (

L

×

W

2) /2. Immunohistokemiallinen värjäys suoritettiin käyttämällä spesifistä primaarista vasta-ainetta (Ki-67; DakoCytomation, Los Angeles, CA), The EnVision Plus -värjäyspakkausta (DakoCytomation) ja APO-Direct terminaalinen deoksinukleotidyylitransferaasi-välitteisen dUTP nick end merkintöjä (TUNEL) määritys kit (Millipore) ohjeiden toimittajan ohjeiden. Kvantitatiivinen analyysi kustakin värjättyä jaksossa suoritettiin laskemalla kaikkien immunopositiivista solut 5 mielivaltaisesti valituilla alueilla (× 400 suurennus).

Invasion ja muuttoliike määritykset

Kaikki solumigraatioon ja invaasiota määritykset suoritettiin mukaan aikaisemmin kuvatulla menetelmällä [19]. Tulokset edustavat ainakin kolmen erillisen kokeen, ja virhe palkit osoittavat SDS.

Tulokset

AUY922 tehokkaasti estää proliferaatiota gefitinibin /erlotinibin-resistenttien solujen

Gefitinibi /erlotinibin kestävä alalinjoja peräisin vanhempien, herkkä HCC827 solulinja perustettiin osana aiemman tutkimuksen [17]. Soluja käsiteltiin AUY922 annoksesta riippuvaisella tavalla sen määrittämiseksi, onko se estää solujen kasvua gefitinibi /erlotinibi-resistentit solut. Kuten on esitetty kuviossa. 1, sekä resistenttejä solulinjoja osoittanut ristiresistenssiä gefitinibi tai erlotinibi, vastaavasti, ja olivat resistenttejä myös afatinib. Kuitenkin AUY922 hoito ehkäistä tehokkaasti leviämisen vanhempien linjan ja molemmat resistenttejä solulinjoja (Fig. 1 D). Kasvua estäviä vaikutuksia sekä AUY922 havaittiin myös silloin, kun lääkeaineen pitoisuus oli alhainen (Fig. 2A).

Soluja käsiteltiin osoitetulla annoksella gefitinibi, erlotinibi, afatinib tai AUY922 72 tunnin ajan alustassa, joka sisälsi 1% FBS: ää. Solujen elinkyky määritettiin käyttämällä MTT-määritystä.

A, Soluja käsiteltiin osoitetulla annoksella AUY922 72 tunnin ajan väliaineessa, joka sisälsi 1% FBS: ää. Liitteenä solut värjättiin trypaanisinisellä liuosta (ylhäällä). Solujen elinkelpoisuus perustuu solulaskennan on myös esitetty (alhaalla). Pylväät edustavat keskiarvoa ± SD kolmesta kuoppiin. B, solut käsiteltiin AUY922, samanlainen kuin paneeli A. 48 tunnin jälkeen solut kerättiin ja EGFR-liittyvä signalointi-molekyylien arvioitiin käyttäen western blotting. C, LK2 soluja käsiteltiin vektorin sisältävä villityypin EGFR, del E746-E750, MET tai AXL ja osoitetun annokset AUY922 12 tuntia.

Olemme aiemmin osoittaneet, että vastus of HCC827 /GR ja HCC827 /ER solut välittävät MET tai AXL aktivointi, vastaavasti [6,17]. Aiemmat raportit ovat myös osoittaneet, että suuri määrä HSP90 asiakkaan proteiinien ratkaiseva rooli syövän etenemiseen, ja että esto HSP90 huonontaa asiakkaan proteiineja [13,20,21]. Siten, tutkimme AUY922 vaikuttaa vakautta MET tai AXL. Estyminen HSP90 mukaan AUY922 todettiin johtavan olennaisen heikkenemisen EGFR, MET, ja Axl on annoksesta (Fig. 2B) ja ajasta riippuvaisella tavalla (S1 Kuva.). Tämän mukaisesti AUY922 hoito vähensi myös taso keinotekoisesti aikaan proteiinien LK2 soluissa, jotka transfektoitiin geenejä, kuten

EGFR

(WT),

EGFR

(Del E746-E750),

MET

, ja

AXL

(Fig. 2C).

Monet HSP90 estäjät aiheuttaa solukierron pysähtymisen ja apoptoosin erilaisissa syöpäsoluissa [22-26]. Edelleen vahvistavat vaikutukset AUY922, tutkimme solusyklin muutoksia PI-värjättyjen solujen FACS-analyysi. Kuten on esitetty kuviossa. 3A, AUY922 hoito lisäsi solujen G2 /M-vaiheen ja indusoitiin sub-G1 (eli solukuoleman) 48 tunnin kuluttua. Yhdenmukaisesti näiden tulosten, ajasta riippuva PARP ja kaspaasi-3 lohkaisu havaittiin myös (Fig. 3C). Nämä tiedot osoittivat, että antituumorivaikutukset AUY922 vanhempien ja resistentit solut voivat johtua solusyklin pysähtymisen ja solukuolemaan.

A ja B, Soluja käsiteltiin 0,1 umol /l AUY922 24-72 tuntia. Analysoida solusyklin jakautuminen, Kerätyt solut analysoitiin virtaussytometrialla. C, Solulysaatit analysoitiin western-blottauksella. Mainituilla vasta-aineilla on käytetty arvioimaan apoptoottisen solukuoleman.

AUY922 voittaa, hankittu resistenssi gefitinibille /erlotinibin ksenograftimalleissa

HCC827GRand HCC827 /ER tuumoriksenografteja perustettiin SCID-hiirissä edelleen arvioimaan tuumorin vastaista tehoa AUY922. Kasvaimen kasvu HCC827 /ER-soluja oli pienempi kuin HCC827 /GR-solut. AUY922 hoito johti huomattavan kasvun esto sekä solujen (Fig. 4A). Tukahdutti kasvaimen kasvua säilyi HCC827 /ER ksenografteissa kautta 2 viikon kuluttua lääkkeen lopettamisen, kun taas kasvaimia HCC827 /GR -ksenografti hitaasti kasvoi jälleen seuraavan vieroitusoireista. Immunohistokemiallinen analyysit kasvain kudosten osoitti, että solujen lisääntymistä olivat vähentyneet ja apoptoosin aiheutettiin molempiin kasvaimia AUY922 hoito (Fig. 4B-C).

, SCID vakiintuneiden HCC827 /GR ja HCC827 /ER kasvainsolu ksenografteja hoidettiin AUY922. Tuumorin koko mitattiin ilmoitettu päivinä ja laskettiin tuumorin tilavuus. Nuolet tarkoittaa viimeistä päivää lääkehoidon (punainen nuoli, HCC827 /GR, violetti nuoli, HCC827 /ER). Pylväät edustavat keskiarvoa kasvaimen tilavuus ± SD. B ja C, immunohistokemiallinen värjäys Ki-67 ja TUNEL seurasi kvantitatiivisen analyysin lisääntymistä ja apoptoosia (B) Ki-67

+ solujen ja (C) TUNEL

+ soluja.

* p

0,01 ja

** p

0,001 verrattuna kontrolliin.

AUY922 vähenee solujen liikkuvuuden

induktio AXL tai MET liittyy lisääntynyt solun liikkuvuus syövissä [6,10,27-29]. siksi tutkittiin muutoksia solujen liikkuvuuden sekä vanhempien ja gefitinibi /erlotinibin-resistentit solut. Kuten odotettua, muuttavien ja invasiivisen kyvyt sekä kestävä solutyypeissä dramaattisesti lisääntynyt verrattuna vanhempien soluja (Fig. 5). AUY922 hoito johti vähensi muuttavien ja invasiivisia valmiuksia sekä kestäviä ja vanhempien soluja.

Solut ympättiin joko kollageenin tai Matrigel päällystettyä polykarbonaattisuodattimille määrittää niiden muuttavien ja invasiivisia mahdollisuuksia, vastaavasti. Soluja inkuboitiin modifioitu Boyden kammioiden kanssa tai ilman osoitetun annoksia AUY922 24 tunnin ajan, ja solut, jotka tunkeutuivat suodattimen värjättiin ja laskettiin valomikroskoopilla. Pylväät edustavat keskiarvoa ± SD kolmesta kuoppiin.

* p

0,01 ja

** p

0,001 verrattuna HCC827 soluihin.

Keskustelu

Koska mutantti EGFR variantteja, mukaan lukien T790M, ensin osoitettu olevan yhteydessä HSP90 kaperoni proteiineihin [16], useita samankaltaisia ​​linjat todisteiden on kertynyt. T790M-ilmentävien solujen, jotka ovat resistenttejä jopa peruuttamattomia EGFR-TKI ovat herkkiä HSP90 inhibition. HSP90 esto johtaa regressio EGFR

L858R

ajettavat hiiren keuhkon adenokarsinooma, riippumatta läsnä T790M [15]. Bao et ai. ovat myös raportoineet, että kohdistaminen HSP90 kanssa CUDC-305, joka on HSP90 estäjä, voi voittaa erlotinibi-resistenssi ei-pienisoluinen keuhkosyöpä [30]. Lisäksi 17-DMAG vähentää kasvua keuhkosyövän soluja mutantti EGFR, riippumatta siitä, että läsnä on T790M mutaatio hiirissä ksenograftimalleissa [14]. Tällä hetkellä yli tusina HSP90 estäjiä kirjoittautuu kliinisissä tutkimuksissa, joista osa tutkivat T790M välittämää vastus EGFR-TKI: [20].

Useat aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että MET on HSP90 asiakas proteiinia ja on huonontuu kun HSP90 esto. SNX-2112, uusi pienmolekyylisalpaaja- HSP90, vähentää EGF ylikuulumista ja aktivointi c-Met-reseptorin kautta, c-Met: hajoamista keuhkosyövän soluihin [31]. Ueno et ai. ovat osoittaneet, että AUY922 tehoaa useimpiin NSCLC solulinjoja, riippumatta tunnettujen molekyylien muutokset. AUY922 hoidon havaittiin indusoivan merkittävä väheneminen asiakkaan proteiinien, kuten EGFR, MET, ja Akt, lisäten siten apoptoosin [32]. Vaikka nämä tutkimukset ovat osoittaneet kykyä HSP90 inhibiittorien alas-säädellä MET, he eivät arvioi MET välittämää vastus EGFR-TKI keuhkosyövässä. Näin ollen, Koizumi et al. Ensimmäinen osoitti tehoa HSP90 estäjien voittaa vastuksen aiheuttama MET signalointi [33]. Tässä tutkimuksessa, HGF-geeni transfektoiduissa Ma-1-solujen EGFR

L858R

(Ma-1 /HGF) ei vastannut erlotinibille, kun taas 17-DMAG inhiboi soluproliferaatiota ja indusoi apoptoosin vähentämällä ilmaus EGFR ja MET, jopa alle HGF ärsykkeitä. Muita kliinisesti merkittävää mallia tutkittiin Xu et al. [34]. Nämä kirjoittajat luotu siirtogeenisten hiirimalleihin ilmentävät mutantti Del19-T790M tai L858R-T790M EGFR (jokaisessa on samanaikainen MET yli-ilmentyminen). Yhdistelmä EGFR ja MET inhibitioastetta WZ4002 (kolmannen sukupolven EGFR-TKI) ja crizotinib osoittivat erittäin tehokas valvonta näissä syöpä malleissa, mutta kumpikaan näistä lääkkeistä yksinään voisi aiheuttaa tukahduttava vasteen. Nämä kirjoittajat lisäksi todettu, että vaikutukset 17-DMAG ovat verrattavissa crizotinib yhdistettynä WZ4002, mikä viittaa siihen, että MET estäminen on mahdollista kautta HSP90. Lisäksi samanlainen vaikutus havaittiin toisessa hiirimallissa laakeri gefitinibi kestävä MET-monistettiin HCC827 ksenografteissa. Nämä tulokset ovat lähes yhtä mieltä nykyisen havaintonsa HCC827 /GR malli. Kuitenkin meidän nykyinen tulokset paremmin edustavat hoitopaikassa koska HCC827 /GR solut perustettiin jatkuvalla pitkäaikaisen lääkealtistuksen.

Verrattuna MET, on olemassa vähän tietoa siitä, miten AXL riippuu HSP90 vakautta. Äskettäin Krishnamoorthy et ai. kertoi, että 17-AAG indusoi säätely alaspäin endogeenisen tai ektooppisesti ilmaistuna AXL proteiinin kilpirauhassyöpä solulinjoissa ja HeLa-soluissa on ajasta ja annoksesta riippuvaisella tavalla, mikä johtaa esto AXL-välitteisen signaloinnin ja biologista aktiivisuutta [35 ]. Tietääksemme nykyinen tutkimus on ensimmäinen, joka osoittaa, että HSP90 esto AUY922 voi voittaa AXL välittämää vastus keuhkosyövän solulinjoissa ja eläinmalleissa. Yhdessä siksi, todisteet osoittavat, että koska HSP90 esto voi voittaa kehittynyt resistenssi EGFR-TKI aiheuttama kolme suurta resistenttiysmekanismi (T790M, MET, ja AXL), HSP90 esto voisi olla lupaava vaihtoehto hoitoon EGFR-TKI vastarintaa.

esillä olevissa tutkimuksissa, olemme osoittaneet, että AUY922 täysin esti tuumorin kasvua sekä soluihin. Kuitenkin molemmat resistenttien solujen osoitti eri kuvio kasvu ja regrowth lääkkeen käytön keskeyttämisen jälkeen. HCC827 /GR solut kasvavat nopeammin kuin HCC827 /ER soluja kunnon huumeetonta ja he osoittivat regrowth seuraavat vieroitusoireista. Kasvunopeus HCC827 /ER-soluissa oli hitaampaa kuin HCC827 /GR solujen

in vitro

(S2 Kuva.). Vaikka eri tekijät voivat vaikuttaa kasvaimen kasvua ksenograftimalleissa, erot kasvu voi vaikuttaa kasvaimen kasvua. Itse asiassa, HCC827 /ER-soluja, oli alhaisemmat EGFR sekä Akt-aktiivisuutta kuin HCC827 /GR-solujen perustason (tuloksia ei ole esitetty). Ei ollut eroja apoptoosin, nekroosin, solusyklin pysähtymisen (G2 /M pidätys, S3 kuvassa.) Ja leviämisen näiden kahden kasvaimia. Siten eri vastaus huumevieroitusoireiden jäi epäselväksi.

Etäpesäke riippuu useita prosesseja, kuten irtoaminen kasvainsolujen primaarikasvaimen, muuttoliike, invaasio ympäröiviin strooman ja verisuonia, ja selviytymistä ja proliferaatiota kaukaisiin sivustoja. Hepatosyyttikasvutekijää (HGF) on ainoa tunnettu ligandi MET ja se on tunnustettu fibroblasti johdettu tekijä, joka edistää epiteelisolujen irtoaminen ja stimuloi hyökkäys [36,37]. MET vaikuttaa solujen vaeltamiseen, kasvua alkionkehityksen ja ohjaa kasvua ja etäpesäkkeiden syöpäsoluissa [38]. Näin ollen, Wu et ai. ovat osoittaneet, että LY2801653 (MET estäjä) merkittävästi estää sekä ensisijaisen kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden imusolmukkeisiin ja rintakehän in H441 potilaalle tehdä malleissa [39]. AXL liittyy myös tuumorin invaasio ja metastaasi ja edistää kasvaimen kasvua eri syöpiä. Pakko kohdunulkoinen AXL ilmaisu indusoi erittäin invasiivisia ominaisuudet nähdään MCF7 rintasyövän solujen alkuperäisestä heikosti invasiivisia fenotyyppejä, kun taas käyttämällä shRNA hoito aiheuttaa AXL Knockdown vähentää invasiivisia ja muuttavien ominaisuuksien erittäin invasiivisen syöpäsolujen [29]. Lisäksi, Axl tarvitaan MDA-MB-231 rinta- syöpäsolujen etäispesäkkeitä keuhkoihin ortotooppisten malleissa [27]. Meidän nykyinen analyyseissä, AUY922 vähensi invasiivisia ja muuttavien valmiuksia sekä kasvainsolujen MET tai AXL aktivointia. Lisätutkimukset roolin HSP90 estäjien syövän etäpesäkkeiden tarvitaan.

Yhteenvetona AUY922 kiinnostavuus tehokas valvonta pahanlaatuinen fenotyypit, jotka ohjaavat MET ja Axl, kuten lääkeresistenssin, keuhkosyövässä.

tukeminen Information

S1 Kuva. Soluja käsiteltiin 0,1 umol /l AUY922 ajassa riippuvalla tavalla.

Kokeet suoritettiin, kuten on kuvattu kuviossa. 2A ja B.

doi: 10,1371 /journal.pone.0119832.s001

(TIF)

S2 Kuva. Solut (5 x 10

3) ympättiin 24-kuoppalevyille valmistunut media sisälsi 10% FBS.

Solumäärät määritettiin ADAM-MC automaattinen solulaskijaa.

Doi: 10,1371 /journal. pone.0119832.s002

(TIF)

S3 Fig. Tuumorikudoksista kustakin ryhmästä homogenisoidaan lysaatin valmistelua ja analysoitiin Western blot arvioituihin G2 /M pidätykseen.

Sykliini B1, p21 ja cdc2 vasta ostettiin Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA), ja p-cdc2 ( Tyr15) saatiin Cell Signaling Technology (Beverly, MA).

doi: 10,1371 /journal.pone.0119832.s003

(TIF)