Krooninen sairaus

tiivistelmä

Useita toiminta syyttää sytokiinien tuumorinekroositekijä (TNF) terveyden ja sairauden. Erityisesti TNF osoitettu vaikuttavan karsinogeneesin monin tavoin. Tämä sytokiini toimii aktivaation kautta kahden solun pinnan reseptoreihin, TNFR1, joka liittyy tulehdukseen, ja TNFR2, joka on osoitettu aiheuttavan tulehdusta signalointia. Arvioimme vaikutukset TNF ja sen kaksi reseptoreihin etenemistä haimasyövän mukaan

in vivo

bioluminesenssi kuvantamisen syngeenisellä potilaalle tehdä kasvain hiirimallissa Panc02 soluihin. Hiiret puutteellinen for TNFR1 voineet spontaanisti hylätä Panc02 kasvaimia ja lisäksi näytetään tehostetun syövän etenemiseen. Sen sijaan murto-villityypin (37,5%), TNF puutteellinen (12,5%), ja TNFR2 hiirissä (22,2%), kykenivät täysin hylätä kasvaimen kahden viikon kuluessa. Haiman kasvaimia TNFR1 hiirissä näytetä lisääntynyt verisuonten tiheyden, suurempaa tunkeutumista CD4

+ T-solujen ja CD4

+ forkhead laatikko P3 (FoxP3)

+ säätelijä-T-solujen (T

reg) mutta vähensi numerot CD8

+ T-soluja. Näiden muutosten lisäksi mukana transkription säätelyä IL4. Näin ollen, TNF: n ja TNFR1 tarvitaan haiman duktaalikarsinooma optimaalisen CD8

+ T-soluvälitteinen immuunitutkimusohjelmasta ja kasvaimen hyljinnän. Eksogeeninen systeeminen anto ihmisen TNF kuitenkin joka vain vuorovaikutuksessa hiiren TNFR1, nopeutettu syövän etenemiseen. Tämä viittaa siihen, että TNFR1 on periaatteessa kyky on Panc02 mallin käynnistää pro-ja kasvaimia torjuvaa vaikutusta, mutta spatiotemporal saatavuus TNF näyttää määrittää lopulta kokonaistulosta.

Citation: Chopra M, Lang I, Salzmann S, Pachel C, Kraus S, Bäuerlein CA, et al. (2013) tuumorinnekroositekijän indusoi Kasvain edistäminen ja kasvaimia torjuvaa Vaikutukset Haimasyöpä kautta TNFR1. PLoS ONE 8 (9): e75737. doi: 10,1371 /journal.pone.0075737

Editor: Dominik Hartl, Tübingenin yliopistossa, Saksa

vastaanotettu: 24 heinäkuu 2013; Hyväksytty: 21 elokuu 2013; Julkaistu: 30 syyskuu 2013

Copyright: © 2013 Chopra et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Interdisziplinäre Zentrum für Klinische Forschung der Universität Würzburg [myöntää B-149, B-233], Deutsche José Carreras Leukämie-Stiftung eV (R /06/17), Deutsche Forschungsgemeinschaft [avustusten SFBTR 52 Z2, Wa 1025 /18-1, KFO 216 TP8, ja Ma 760 /19-1] ja Else-Kröner-Fresenius-Stiftung (2010_Kolleg.52) . Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Haiman adenokarsinooma (PDA) on yksi kaikkein tuhoisia maligniteetteja poikkeuksellisen huono 5 vuoden eloonjäämisluvut ja hyvin rajalliset hoitovaihtoehdot [1] – [3]. Eri signalointireitteihin on levoton haimasyövän ja tämä ei vaikuta pelkästään kasvainsoluja suoraan vaan koskee myös stroomasoluihin sisällä ja ympärillä kasvain [4] – [6]. Varsinkin NF-KB signalointi yleisesti vapautettiin PDA [7] – [9]. Merkittävä aktivaattori NF-KB: n on sytokiini tuumorinekroositekijä (TNF), joka on pääasiassa tuottavat aktivoidut immuunisolujen, erityisesti makrofagien ja T-solujen, vaan voidaan ilmaista myös kasvainsolujen [10], [11].

TNF on trimeerisen transmembraaninen tyypin II proteiinia, josta liukoinen muoto vapautuu proteolyyttisen käsittelyn. Kaksi muotoja TNF vuorovaikutuksessa kahden reseptorin, TNFR1 ja TNFR2, mutta eroavat kyvyssään aktivoida näihin reseptoreihin. Kalvoon sitoutuneen TNF aktivoi voimakkaasti Molempien reseptorien ottaa huomioon liukoisen TNF, vaikka sitoutuminen TNFR2, vain aktivoi TNFR1 asianmukaisesti [12]. Kun taas TNFR1 on tyypillinen edustaja kuoleman domeenin sisältävä alaryhmä TNF-reseptorin proteiinin perheen, TNFR2 kuuluu TRAF-vuorovaikutuksessa alaryhmä. Vaikka ottaa death-domeenin, TNFR1 vasteena TNF ensisijaisesti aloittaa pro-inflammatorinen signalointireittien johtaa NF-KB: n transkription tekijöitä ja eri MAP-kinaasien, mutta ei tyypillisesti solukuoleman induktioon. On selvää analyysi TNFR1 ja TNFR2 hiirten, että monet immunoregulatooristen prosessit ohjataan kahden TNF-reseptoreihin antagonistinen, lisäaineen tai jopa synergistinen tavalla, mutta on myös näyttöä itsenäinen toimintojen kunkin kahden reseptorin [11], [13]. Erityisesti, TNFR2 on osoitettu olevan tärkeä rooli homeostaasiin immunosuppressiivisten säätelijä-T-solujen (T

regs) [14] – [16].

haimasyövän TNF: llä on monimutkainen, mutta tähän asti huonosti rooli [17] – [23]. Täällä osoitettu miten TNF ja sen reseptorit vaikuttavat immuunijärjestelmän valvonnan PDA käytettäessä potilaalle tehdä syngeenisissä hiirimallissa. Menetys TNFR1 vastaanottavassa kumotaan kasvain ohjaus ja johti parantuneeseen kasvainten kasvua. TNFR1 puute aiheutti vapautuminen T-solujen infiltraatiota ja aktivaatiota. Ehdotamme uutta antituumorigeenistä roolia isännän TNFR1 PDA jossa TNF-TNFR-vuorovaikutukset säätelevät homeostaasiin sekä sääntelyyn ja sytotoksisten T-solujen päättääkseen PDA ohjataan ja lopulta hylättiin tai kasvaa progressiivisesti.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Kaikki kokeet suoritettiin Saksan määräyksiä eläinkokeiden. Tutkimuksen hyväksyi Regierung von Unterfranken kuin vastuuviranomaisen (Luvan numero 55.2-2531.01-76 /10). Kaikki Leikkaus suoritettiin esketamiini /ksylatsiinia anestesia, ja yritettiin minimoida kärsimyksen.

Eläimet

C57BL /6 puutteelliset TNF (B6.129S-TNF

tm1Gkl /J , lyhyt B6.TNF KO), TNFR1 (C57BL /6-Tnfrsf1a

tm1Imx /J, lyhyt B6.TNFR1 KO), TNFR2 (B6.129S7-Tnfrsf1b

tm1Imx /J, lyhyt B6.TNFR2 KO), TNFR1R2 (B6.129S-Tnfrsf1a

tm1ImxTnfrsf1b

tm1Imx /J, lyhyt B6.TNFR1R2 KO) alun perin saatiin Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME, USA) ja takaisinristeytettiin albiinoyhteisön C57BL /6 taustalla (C57BL /6J-Tyr c-2J hiiret, Jackson Laboratories) parantaen

in vivo

bioluminenssina kuvantamiseen herkkyyttä (pienentää valon imeytyminen puutteen vuoksi melaniinin ihossa) kuten aiemmin on kuvattu [16]. Genotyyppien KO hiiret rutiininomaisesti tarkistettiin PCR:. Nainen hiiriä käytettiin kokeissa välillä 8 ja 12 viikon iässä. Kaikki hiiriä kasvatettiin määritellyssä patogeenittomassa eläin laitos Center for Experimental molekyylilääketieteen yliopistollisen sairaalan, Würzburgin vastaanottaa jyrsijämuonaa ja autoklavoitiin juomavettä mielin määrin.

Cell Culture

lentiviruksen transduktio Panc02 soluihin [24], 293-T-soluja transfektoitiin ohimenevästi standardin kalsiumfosfaattisaostus-protokollan 10 cm: n maljoille 10 ug pMDL ja 5 ug RSV-REV pakkaus plasmidit, 6 ug VSV /G kirjekuori plasmidi ja 20 ug EGFP ja tulikärpäsen lusiferaasi koodausta plasmidi FUGLW. Kaksi päivää myöhemmin, sisältävä supernatantti lentiviruksen hiukkasia aspiroitiin, suodatettiin 0,45 um: n suodattimen, 8 ug polybreeniä /ml, lisättiin, ja seosta käytettiin transdusoimaan kasvainsoluihin. Transdusoiduissa solut virtaus lajiteltu kahdesti eGFP-ilmaisun, jota kutsutaan jäljempänä Panc02-FUGLW. Soluja ylläpidettiin Dulbeccon modifioitu Eaglen väliaine (DMEM), jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia (FBS), 1% antibiooteilla (penisilliini, streptomysiini), L-glutamiinia ja 0,1% β-merkaptoetanolia. Solut trypsinoitiin ja siirrostettiin kahdesti viikossa. Soluviljelyelatusainetta ja täydennykset saatiin Invitrogen (Darmstadt, Saksa), kaikki muovivälineitä oli peräisin Greiner BioOne (Frickenhausen, Saksa). Panc02-FUGLW solut ovat syngeenisissä C57BL /6-hiiristä.

Orthotopic PDA Malli ja in vivo Bioluminescence Imaging

Panc02-FUGLW solut trypsinoitiin, kerättiin ja pestiin kaksi kertaa PBS: llä. Vastaanottajan hiiret nukutettiin i.p. injektio 80 mg /kg (bw) esketamiini hydrokloridi (Pfizer, Berliini, Saksa) ja 16 mg /kg ksylatsiinia (cp Pharma, Burgdorf, Saksa) ja asetetaan 37 ° C lämpölevy. Panc02-FUGLW solua injektoitiin ortotooppisesti kuten muualla on kuvattu [17], [25] pienin muutoksin. Lyhyesti, vatsaontelon avasi minimaalisen invasiivisen poikittainen laparotomy. Pää haima tunnistettiin ja externalized. 1 x 10

4 elinkelpoinen Panc02-FUGLW solut hitaasti injektoitiin 30 ui PBS: ää pään haima käyttäen 710 RN 100 ui Hamilton ruisku Gauge 28, 10 mm, Pisteen tyyli 4 neulan (Hamilton Ruisku, Bonaduz , Sveitsi). Haima asetettiin takaisin vatsaonteloon ja vatsakalvon ja iho suljettiin ajamalla yksikerroksinen 6-0 polyglaktiini ompeleita (Johnson eläinten lukumäärä on merkitty kuvassa legendoja. Kaikki tulokset on esitetty keskiarvona ± keskivirhettä. Kuviot valmistettiin käyttämällä GraphPad Prism 5 -ohjelmaa (La Jolla, CA, USA) ja Adobe Photoshop 7 (San Jose, CA, USA). Kaikki ryhmät verrattiin villin tyypin tai hoitamattomaan verrokkiryhmään, vastaavasti kaksisuuntaisella parittomalla Studentin t-testiä käyttäen GraphPad InStat 3 -ohjelmiston. Data oli tilastollisesti merkittävä ilmoitetaan muodossa: * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01.

Tulokset

Menetys Host TNFR1 kumoaa Spontaani hylkääminen Orthotopic Panc02 kasvaimia

jotta seurata kasvaimen kasvua ei-invasiivisesti syngeenisessä hiirimallissa PDA, me syntyy Panc02 soluja, jotka ilmentävät eGFP ja tulikärpäsen lusiferaasi (Panc02-FUGLW) ja pistää 1 x 10

4 näiden tuumorisolujen ortotooppisesti albiino villityypin C57BL /6-hiiristä ja albiino C57BL /6-hiirten puutteellinen TNF, TNFR1, TNFR2 tai molemmat TNF-reseptorit. Kaikissa genotyypit arvioitu, Panc02-FUGLW kasvaimet aluksi kasvoi 7 ensimmäisen päivän kuluessa kasvaimen inokulaation (kuva 1A ja B). 3/8 B6 villityypin hiirissä, 1/8 B6.TNF KO-hiirissä, ja 2/9 B6.TNFR2 KO-hiiret spontaanisti hylkäsi kasvaimen sisällä 14 päivää. Vastakohtana 13/13 hiirissä, joilta puuttuu varten TNFR1 tai TNFR1 ja TNFR2 voinut hylätä kasvain.

In vivo

BLI (kuva 1A ja B) ja

ex vivo

BLI kuukauden kuluttua tuumorin istuttamisen (kuvio 1 C ja D) paljasti myös huomattavasti korkeampi tuumoritaakka hiirillä puutteellinen varten TNFR1 (tai TNFR1 ja TNFR2) kuin villityypin hiirillä. Siten TNFR1 esiintyi tärkeä tekijä valvontaa ja hylkääminen Panc02 kasvaimia.

Hiiren haiman adenokarsinooma (Panc02) solut transdusoitiin vakaasti ilmentämään eGFP ja tulikärpäsen lusiferaasi ja 10

4 kasvainsoluja ruiskutettiin ortotooppisesti albiino C57BI /6-hiirissä. Kasvaimen kasvu villityypin hiirillä (B6.WT) ja hiiret, jotka olivat puutteelliset TNF tai sen reseptoreihin määritettiin

in vivo

BLI. V: Kasvaimen kasvu näkyy yhteensä radianssi (B6.WT n = 8, B6.TNF KO n = 8, B6.TNFR1 KO n = 6, B6.TNFR2 KO n = 9, B6.TNFR1R2 KO n = 7). B: Esimerkkejä kuvia kuvantamisen ajan kuluessa hiiri, joka spontaanisti hylkäsi kasvain (vasemmalla) ja hiiri, joka ei voinut valvoa kasvaimen etenemiseen (oikealla). C:

Ex vivo

kuvantamisen kuukauden kuluttua tuumorisolujen inokulaation jälkeen. Sisäelinten oli kuvattu, että tuumorisolujen läsnäolo. Esimerkillinen kuvia hiiri, joka spontaanisti hylkäsi kasvain (I), hiiren alhainen tuumorikuorma (II), ja hiiren korkea tuumorikuorma (III). D: Haiman kasvaimen koko kuukauden kuluttua Panc02 siirrostuksen näytetään yhteensä radianssi (B6.WT n = 8, B6.TNF KO n = 8, B6.TNFR1 KO n = 6, B6.TNFR2 KO n = 9, B6.TNFR1R2 KO n = 5). * P≤0.05, ** p≤0.01. Yhdistetty data neljästä itsenäisestä kokeesta.

Panc02 Kasvaimet Show Altered T infiltraatioita B6.TNFR1 KO hiiret

Seuraavaksi analysoimme immuunisolujen infiltraatio Panc02-FUGLW kasvaimia kasvatettiin joko C57BI /6 villityypin tai C57BL /6-hiiret puutteelliset TNF, TNFR1: n tai TNFR2 (kuvio 2 ja taulukko 2) käsittelemään onko menetys kasvaimen ohjaus voi liittyä muutoksia immuunijärjestelmän soluinfiltraatin kasvain. Menetys TNFR1 korreloi vähentynyt määrä soluttautua CD8

+ T-solujen ja lisääntyneisiin soluttautua CD4

+ Foxp3

+ T

regs. TNFR1 puutos lisäksi huomattavasti verisuonitiheydessä arvioituna CD31-ilmentyminen, mutta ei merkittävästi muuta infiltraatiota synnynnäisen immuniteetin soluja myeloidista (CD11

+, F4 /80

+, Gr1

+ solut). Muuttunut T-solujen infiltraatiota malleja Panc02-FUGLW kasvainten B6.TNFR1 KO yhden kuukauden kuluttua siirrostuksen sai meidät arvioimaan T-solujen fenotyyppi varhaisessa vaiheessa kasvaimen kasvua. Näin ollen, olemme analysoineet ilmentymisen aktivaation markkereiden CD4

+ ja CD8

+ T-solut 7 ja 15 päivää sen jälkeen, kun kasvainsolujen injektion jälkeen (kuvio 3). T kiaineen vain hienovaraisesti erosivat. Kuitenkin havaitsimme suuntaus kohti korkeampia aktivointi aikaan CD8

+ T-solujen (CD25-proteiinin ekspression ja CD69: n) ja alemman aktivointi CD4

+ T-solujen (lauseke CD27, CD54, ja CD69: n). Kasvaimen kasvu oli voimakkaasti yhteydessä Myelooisessa tulehdukseen. Virtaussytometria osoitti, kasvoi prosenttiosuudet CD11

+ ja Ly6G

+ haiman ajan riippumaton geneettisen taustan kasvaimen kantavien hiirten. Mielenkiintoista, on systeeminen tasolla, menetys TNFR1 johti merkittävästi vähentynyt CD11

+ ja Ly6G

+ solumäärät pernat kasvainta kantavien hiirten. Lisääntynyt kasvaimen kasvu haimasta TNFR1 KO-hiirten vahvisti merkittävästi kohonnut määrä eGFP

+ Panc02-FUGLW solut näissä hiirissä kahden viikon kuluttua kasvaimen istuttamisen (kuvio 3).

Panc02-kasvaimia eksplantoitiin yksi kuukauden tuumorisolujen inokulaation jälkeen, peräkkäisen histologiset leikkeet värjättiin ilmoitettu immuunijärjestelmän solujen populaatiot ja verisuonet (CD31). Haimatuumorien johti virtaa immuunijärjestelmän solupopulaatioiden synnynnäisen ja adaptiivisen immuunijärjestelmän, joita ei havaittu terveillä haimakudoksessa vakaissa olosuhteissa. Huomattavaa on, että puutos TNFR1 pienensi sytotoksisen CD8

+ T-solujen tunkeutumista, mutta lisäsi T

reg infiltraatiota. Esimerkillinen mikrovalokuvia on esitetty. Mittakaava osoittaa 100 um.

haimasta ja pernat naiiveja ja kasvaimen kantavien hiirten yhden ja kahden viikon kuluttua tuumorisolujen inokulaation eksplantoitiin ja valmistettiin, kuten yhden solun suspensiot. T-solut analysoitiin ilmentymisen aktivoinnin liittyvän pinnan reseptoreihin virtaussytometrialla. Lisäksi prosenttiosuus T

regs, myeloidisoluissa ja kasvainsolujen määritettiin virtaussytometrialla (w /o kasvaimen: B6.WT n = 8, B6.TNFR1 KO n = 6; d + 7: B6.WT n = 7, B6.TNFR1 KO n = 6; d + 15: B6.WT n = 7, B6.TNFR1 KO n = 7). * P≤0.05, ** p≤0.01. Yhdistetty data neljästä itsenäisestä kokeesta.

Arvioidaan tarkemmin mekanistinen eroja kasvaimen valvonnan välillä villityypin ja TNFR1 KO hiiret, arvioimme ilmaus immunosuppressiivisten geenien ja erilaisten sytokiinien Panc02-FUGLW kasvaimet (kuvio 4). Täällä havaittu transkription tasolla merkittävästi lisääntynyt ilmentyminen galektiini-9: n ja IL-4, kun taas iNOS- väheni merkittävästi.

Panc02-kasvaimia eksplantoitiin kuukauden kuluttua tuumorisoluinokulaatiosta ja kokonais-RNA eristettiin kasvain kudos. RNA käänteiskopioitiin ja monistettiin qRT-PCR. Aineisto esitetään suhteessa ekspression kasvaimissa, jotka ovat peräisin B6.TNFR1 KO-hiirissä verrattuna kasvaimia, jotka ovat peräisin villityypin (WT) hiiriä (B6.WT n = 3, B6.TNFR1 KO n = 4). * P≤0.05.

Ulkosyntyisen TNF ei indusoi Etäpesäke huolimatta tehostaminen kasvaimen kasvua ja vaikuttaminen T

reg Homeostasis

TNF osoitettu lisäävän kasvainsolujen etäpesäkkeitä useilla

in vivo

hiiren malleissa [27] – [29] sisältäen potilaalle tehdä ksenotransplantaatio malli PDA haimanpoistoleikkauksen aiheuttama etäpesäke [17]. Testata, onko TNF vaikuttaa myös Panc02-FUGLW kasvaimen kasvun ja etäpesäkkeiden, me kasvaimen kantavien hiirten rekombinantti ihmisen TNF, joka sitoo vain hiiren TNFR1, joka toinen päivä kolmen viikon ajan tuumorisoluinokulaation. Tämä merkittävästi kasvanut kasvaimen kasvu haimasta ja ablatoitu spontaani kasvainta arvioituna

in vivo

ja

ex vivo

BLI (kuvio 5A ja B), mutta ei aiheuttanut etäpesäke maksa, munuaiset, tai suoliliepeen (tuloksia ei ole esitetty). Olemme myös analysoineet soluttautuminen CD8

+ ja CD4

+ T-soluja, ja T

regs kasvaimiin käsittelemättömiä ja TNF-käsiteltyjen eläinten ja todellakin havaittu, että ihmisen TNF-hoidon merkittävästi T

reg numerot tuumoreissa (taulukko 3). Koska me ja muut ovat havainneet aikaisemmin, että TNFR2 sijaan TNFR1 T

regs täytyy ajaa niiden laajentamisen [14] – [16], tämä viittaa epäsuora mekanismi, jonka anto ihmisen TNF laukaisee T

reg laajennus meidän PDA mallissa.

10

4-kasvainsoluja injektoidaan pernassa albiino B6.WT hiirillä. Hiiret joko jätettiin käsittelemättä tai käsiteltiin joka toinen päivä 5 ug ihmisen rekombinantti-TNF: ää. Kasvaimen kasvu määritettiin

in vivo

BLI. V: Kasvaimen kasvu näkyy koko radianssi (käsittelemättömät n = 11, TNF n = 10). B:

Ex vivo

kuvantamisen 23 päivää tuumorisolujen inokulaation jälkeen. Sisäelinten oli kuvattu, että tuumorisolujen läsnäolo. Haiman kasvaimen koko näkyy yhteensä radianssi (käsittelemätön n = 11, TNF n = 10). ** P≤0.01. Yhdistetty tietoja kahdesta toisistaan ​​riippumattomasta kokeesta.

Panc02 Solut osoittaa vähän In vitro valmiuksista Etäpesäke

rajallisen metastaattisen aktiivisuuden Panc02 solujen

in vivo

, olemme analysoineet metastaattisen valmiuksia näiden solujen

in vitro

erityisesti myös maan TNF stimulaatiota. Panc02 solut kiinni soluväliaineen proteiinien fibronektiiniä, laminiini I, ja fibrinogeeni, mutta ei kollageenin I eikä IV. Ei ihmisen eikä hiiren TNF modifioitu adheesion Panc02 solujen soluväliaineen komponentteja (kuvio 6A) huolimatta vahvasta laukeaminen klassisen NF-KB-reitin (tuloksia ei ole esitetty). Seuraavaksi analysoitiin Panc02 soluja niiden proteiinien ilmentymisen mukana tarttuvuus ja solujen migraatiota (kuvio 6B). Löysimme PDA kasvainsolujen ilmaista CD29 (integriini β1), CD49f (integriini α6), ja CD107a ja b, jonka ilmentyminen ei ole moduloitu TNF. CD106 (VCAM-1) ilmentymistä, oli kuitenkin TNF: n indusoimaa. Olemme myös arvioinut invasiivisia valmiudet Panc02 solujen käyttämällä

in vitro

invaasiomääritys ja mittaamalla Gelatinolyyttinen toiminta (kuvio 6C). TNF ei merkittävästi indusoi invaasiota ja että infarktoituneen hiiri sydänlihaksen osoittivat MMP-9 ja -2 toimintaa, Panc02 soluja ei riippumatta TNF stimulaatiota. Yhteenvetona, tulokset

in vitro

analyysi etäpesäkkeiden liittyvät tekijät vahvistivat rajoitettu metastaattisen aktiivisuuden havaittiin Pan02 solujen

in vivo

.

Panc02 soluja käsiteltiin 1,67: Tarttuvuus eri soluväliaineen proteiinien (n = 4). B: Virtaussytometrinen määritys liittyvien proteiinien ilmentymisen suhteen adheesion ja muuttoliike (n = 3). C: Invasive ominaisuuksia Panc02 soluja. Vasen paneeli:

In vitro

hyökkäyksen tyvikalvon (n = 3). Oikea paneeli: gelatiinitsymografialla kasvainsolujen näytteitä. Infark- hiiren sydän lysaattia käytettiin positiivisena kontrollina (n = 4).

Keskustelu

Tässä osoitimme, että TNFR1 on tärkeä reseptori immunologista valvontaa PDA. Menetys tämän reseptorin vastaanottavassa johtaa häiriöihin immuunisolujen tunkeutumista kasvaimeen ja ablates immuunitutkimusohjelmasta mekanismeja. Kuitenkin eksogeeninen aktivointi TNFR1 rekombinantti-TNF kasvaimia omaavilla eläimillä aikaan voimakkaampaa syövän etenemiseen, puhuen kaksiteräinen roolia TNF-TNFR1-vuorovaikutus PDA kasvaimen valvontaa.

Tuoreessa tutkimuksessa analysoitiin T-antigeenin indusoimaan monivaiheinen syövän syntymistä haiman saarekkeiden ja totesi, että vaikka villityypin hiirissä soluttautua CD4

+ T-solujen aiheuttama kasvain lepotilan, menetys TNFR1 näihin soluihin kytketään ne kasvaimeen edistävää fenotyyppi stimuloimalla angiogeneesiä [18]. Nämä havainnot ovat linjassa tuloksia, eli menetys TNFR1 lisääntynyt verisuonten tiheyksiä sisällä kasvaimia. Vaikka TNFR1-puutos ei aina muuttaa aktivoinnin fenotyypin kasvaimen infiltroituneen T-soluja, löysimme enemmän CD4

+ T-solujen tunkeutuminen kasvaimista TNFR1-puutosta kuin villityypin hiirillä. Lisäksi havaitsimme vähentynyt määrä soluttautua CD8

+ T-solujen ja lisääntyneisiin T

regs. Chee ja työtovereiden löysi menetys TNFR1 NOD hiirissä niiden suojaamiseksi diabetesta vaikuttamalla itseohjautuva tavanomaisten T solujen haiman saarekkeiden samalla kasvattaa määrää T

reg solua [30]. Mallissa, TNFR1 puute aiheutti muutoksia IL-4, galektiini-9, ja iNOS. Tämän mukaisesti, IL-4 on kuvattu voimakas T

H2 sytokiinien [31], että ehdotettiin edistää PDA kasvainsolujen kasvua ja siten aktiivinen rooli tuumorin etenemisessä tämän maligniteetin [32], [33 ]. Galektiini-9 ehkäisee T

H1 immuunijärjestelmän toimintoihin [34] ja indusoi T

regs [35]. Rooli tämän proteiinin PDA ei ole vakiintunut, siitä huolimatta, lisääntynyt ilmentyminen sekä IL-4 ja galektiini-9 saattaa vihje kohti mekanismi selittää suurensi CD4

+ T-solujen ja T

reg tunkeutumista Panc02 kasvaimia kasvanut TNFR1: ssä-hiirillä. iNOS kuvattiin voimistuvan haiman kasvaimissa [36], [37].

rooli TNF haiman syövän etenemiseen on kiistanalainen. Vaikka jotkut tutkimukset osoittivat antituumorigeenistä ominaisuudet TNF [19], [21], muut ovat osoittaneet päinvastaista tulokset [17], [20]. Osoitamme tässä pro-tuumorigeenistä toiminto systeemisesti aktiivista TNF kuin hoidettaessa tuumoreita kantavaa hiirtä tämän sytokiinin lisäsi merkittävästi kasvaimen kasvua. Tämä menee yhdessä kohonnut määrä T

regs sisällä kasvaimia. Olemme äskettäin osoittaneet samanlaista mekanismia B16F10 keuhkojen etäpesäkkeiden malli [16], jossa eksogeeninen TNF-hoidon tehostettu kasvaimen kasvua T

reg-riippuvaisella tavalla.

TNF tiedetään pelata edistämisessä rooli syövän etäpesäke [16] – [17], [27] – [29]. Tästä huolimatta eivät havainneet lisääntynyttä etäpesäke ensisijaisen Panc02 kasvain maksassa, kun eksogeenista TNF-hoidon. Kun taas PDA helposti metastasizes muissa malleissa [17], [38] ja ihmisen potilailla [39], [40] mukaan Panc02 kasvain ei näytä olevan valmiudet etäispesäkkeitä spontaanisti. Kasvain solut osoittivat hyvin vähän Gelatinolyyttinen kapasiteetti ja

in vitro

ei niiden invasiivisia eivätkä niiden liiman ominaisuudet olivat moduloidaan TNF stimulaatiota.

Yhteenvetona ehdotamme roolia TNFR1 kasvaimen immuunitutkimusohjelmasta PDA . Vaikka meidän tiedot puhuvat immuniteettisairaus antituumorigeenistä vaikutus TNF kautta TNFR1, kun varoittavana seurauksena myös havaittu, että eksogeeninen hoito kasvaimen kantavien hiirten TNF täydennetty kasvaimen kasvu sen sijaan ohjata sitä.