Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

ErbB2 on jäsenenä kasvutekijän tyrosiinikinaasiryhmän joka on keskeisesti mukana eturauhassyövän ja useat tutkimukset ovat raportoineet, että suuri ilmaus tämä proteiini on ennusteen arvioinnissa. Tässä tutkimuksessa olemme tutkineet, onko kasvain ErbB2 immunoreaktiivisuus (ErbB2-IR) on kliinisesti käyttökelpoinen ennusteen arvioinnissa, eli että se tarjoaa lisää ennustetekijöiden tietoa kuin korvattava rutiininomaisesti kliinisten kokeiden (Gleason, kasvain vaihe).

Menetelmät /Principal havainnot

ErbB2-IR mitattiin täsmällisesti määriteltyä kudos microarray kasvaimen ja ei-pahanlaatuiset saatuja näytteitä diagnoosin. Lisäksi mRNA-tasot ErbB2-IR eturauhasen määritettiin rotalla seuraavan manipulointi verenkierrossa androgeenitason. Kasvaimen ErbB2-IR oli merkitsevästi yhteydessä loppupään signalointi molekyyli fosforyloitua-Akt ja solujen lisääntymistä markkeri Ki-67. Merkittävä yhdistys Kasvaimen ErbB2-IR kanssa Gleason diagnoosin katosi, kun ohjattu yhdistyksen molempien parametrien Ki-67. Rotilla eturauhasen, mRNA ErbB2 oli käänteisesti yhteydessä verenkierrossa androgeenitason. Ei ollut yhdistyksen välillä ErbB2-IR ja androgeenireseptorin (AR) -IR kasvaimissa, mutta vuorovaikutusta kahden parametrin nähtiin suhteessa niiden yhdessä kasvain vaiheessa. Kasvaimen ErbB2-IR vahvistettiin ennustetyövälineenä merkkiaine tautikohtaisia ​​säilymiseen, mutta se ei tarjonnut merkittävää lisäaine tietoja Gleason pisteet tai Ki-67.

Johtopäätökset /merkitys

voidaan päätellä, että kasvaimen ErbB2-IR on kliinistä arvoa ennustetyövälineenä merkki tukea hoitopäätöksiä, mutta voisi olla patofysiologisia merkitystä eturauhassyövässä.

Citation: Hammarsten P, Winther J, Rudolfsson SH, Häggström J, Karalija A, Egevad L, et ai. (2014) ErbB2 Reseptori immunoreaktiivisuus in Eturauhassyöpä: Suhde androgeenireseptorin, sairauden vakavuuden klo Diagnosis and Disease tulos. PLoS ONE 9 (9): e105063. doi: 10,1371 /journal.pone.0105063

Editor: Ramin Massoumi, Lundin yliopisto, Ruotsi

vastaanotettu: 16 helmikuu 2014; Hyväksytty: 19 heinäkuu 2014; Julkaistu: 12 syyskuu 2014

Copyright: © 2014 Hammarsten et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustuksia Ruotsin Research Council (Grant no. 12158, lääketiede, CJ Fowler); Ruotsin Cancer Society (Grant no. CAN2010 /437, C. J. Fowler); Lion Cancer Research Foundation, Umeå University (P. Hammarsten ja C. J. Fowler); Cancer Research Foundation Pohjois-Ruotsissa (P. Hammarsten), ja tutkimuksen rahastojen lääketieteellisen tiedekunnan, Umeå University (CJ Fowler). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

ErbB2 (Her-2 /neu) on jäsen, epidermaalisen kasvutekijän tyrosiinikinaasiryhmän mukana erilaisia ​​soluvasteita, myös apoptoosia, muuttoliike, kasvua, adheesio ja erilaistumista [1]. ErbB2 muodostaa heterodimeerejä muiden jäsenten kanssa ErbB- perheen ja aloittaa lukuisiin signalointipolkujen, mukaan lukien aktivoituminen eloonjäämistekijää Akt [1], [2]. ErbB2 löytyy myös kasvainsoluja, ja trastutsumabi, ErbB2 monoklonaalinen vasta-aine, on käytetty hoitona ErbB2-rintasyöpä. Muut ErbB2 monoklonaalisia vasta-aineet ovat myös kliinisessä kehitystä [3].

merkitys ErbB2 synnyssä eturauhassyövän (PCA) on vähemmän selvä. Pca kasvua säädellään androgeenireseptoreita (AR), ja keskeinen hoito androgeeniriippuvaisen PCA on vähentää androgeenitason joko kirurgiseen tai kemiallinen kastraatio. Kuitenkin vaikutus hoidon on väliaikainen, ja syövät tulla androgen kestävä. Vuonna 1999 Craft et al. [4] kertoi, että käyttöönotto ErbB2 osaksi LNCaP androgeeniriippuvaisissa Pca solujen tehnyt niistä osittain resistentti kasvua estäminen tuottama androgeenien puute. Edelleen ksenograftimallia käyttäen kastroitu hiiriä, ErbB2-ilmentävät solut tuottivat nopeammin kasvainten muodostumiselle kuin transfektoimattomat LNCaP-solut [4]. Ennustavan pätevyys ksenograftimalleja on kiistanalainen [5], mutta korotettuun etäpesäke on raportoitu käytettäessä potilaalle tehdä mallin Pca seuraavista injektiona vatsanpuoleinen eturauhanen nude-hiirten NBE-1,4 rotan eturauhasen solut yli-ilmentävät rotan homologi ErbB2 [ ,,,0],6]. Toisaalta, hoito naaraspuolisia BALB /c-nude-hiiriä ErbB2-vasta-aineen vähensi kasvainten kasvua injektion jälkeen 22Rv1 Pca soluihin [7]. Poistaminen androgeenien peräisin soluviljelyväliaineesta lisää ErbB2 ilmaisun [8], ja lievä nousu ErbB2 ilmaisun seitsemän päivää kastraation nähdään ksenograftimallia kasvaimen kasvua CWR22 solujen [9].

Vaikka tutkimukset solulinjoissa ja eläinmalleissa osoittavat avainasemassa ErbB2 patogeneesissä Pca, tutkimukset ihmisillä eivät ole yhtä selviä. Eri tutkimuksissa on raportoitu erittäin suuret vaihtelut tasot ErbB2 eturauhasessa kasvainkudoksessa (katso [10], ja siinä olevat viitteet). Kuitenkin meta-analyysi kirjallisuuden välillä 1996 ja 2009 löydettiin suurentunut suhteellinen riski kuoleman takia Pca tai biokemialliset (eturauhasen-antigeeni, PSA) taudin uusiutumista potilailla, joilla on kohtalainen tai korkea kasvaimen ErbB2 ilmaisun [11 ]. Nämä tekijät päättelivät, että ”ylimääräisten kliinisten kokeiden pitäisi testata hypoteesia, että HER-2 /neu on markkeri kliinisesti huonompi tulos, jos potilaalla on eturauhassyöpä ja potentiaalinen kohde terapia”. Yksi tällainen Myöhempi tutkimus on suuri ( 1700) potilaiden lukumäärä vahvisti, että ennustetekijöiden ominaisuudet ErbB2 yli-ilmentymisen kanssa PSA toistumisen kuin päätepisteenä, vaikka se ei tarjonnut lisäaine ennustetekijöiden tiedot kuin antamaa Gleason pisteet, kasvain vaihe ja ennen leikkausta PSA taso [10]. Vaikka potilaille ei käsitelty aikana seuranta-ajan, näytteet on saatu eturauhasen mieluummin kuin diagnoosi. Näin ollen on tärkeää määrittää, ErbB2 on parempi ennusteen arvioinnissa (eli antaa lisäaine tietoja, jotka annetaan käyttäen Gleason pisteet ja muut prognostisia markkereita) kohortin potilaista jossa otettiin kudosnäytteet diagnoosin ja luonnollisen taudin etenemistä voidaan tutkia. Tämä on tutkittu tässä tutkimuksessa.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

Ihmisen Aineisto kerättiin Ruotsin määräysten mukaisesti samaan aikaan, kun tietoon perustuvan suostumuksen ei tarvittu . Tutkimuksen eettinen komitea Uumajan yliopistollisessa sairaalassa (Regional Ethical Review Board Uumajassa) hyväksyi tutkimuksen (no. 02-283) ja luopua tarvetta suostumusta.

Ethical lupaa (no. A110-12) varten eläinkokeissa saatiin paikallisesta eläimen eettisen komitean (Umeå eettinen komitea eläinten Studies, Ruotsi).

Potilasnäytteet

kohortti käytetty on peräisin peräkkäinen 412 miestä, joilla oli diagnosoitu eturauhasen syöpä seuraavat höyläysleikkaus alempien virtsateiden symtoms [12]. Tapaukset kerättiin vuosina 1975 ja 1991 keskussairaalassa, Västerås, Ruotsi, ajanjakso, jolloin PSA-testaus ei ollut rutiinia. Koska potilailla diagnosoitiin leikkauksen, ne eivät olleet saaneet hormonaalista hoitoa tai sädehoitoa ennen höyläysleikkaus. Sitten näytteet formaliinilla kiinnitetyt ja parafiiniin upotettu. Käyttäen (halkaisija 0,6 mm), kudossiruina tehtiin käyttäen Beecher väline (Sun Prairie, WI, USA). Kunkin potilaan jopa kahdeksan ydintä (tavallisesti 5) kasvainkudoksen ja enintään neljä näytettä ei-pahanlaatuista kudosta kustakin potilas asetettiin [12].

ErbB2 immunoreaktiivisuus (ErbB2-IR) in Pca mikrosiruja

4 um parafinoidut kudoksen mikro joukko leikkeitä sijoitettiin objektilaseille, paistettiin 60 ° C: ssa, 1 tunti, sitten deparaffinised ja uudelleenhydratoitu. Peroxide lohko 3% H

2O

2 metanolissa 20 min tehtiin. Antigeeni haku suoritettiin osiot sijoitetaan sitraattipuskurissa pH 6,0 ja höyrytettyä mikroaaltouunissa 2 min. Liuoksen annettiin jäähtyä 5 min, pestiin tislatulla vedellä ja sitten TBS-puskuria. Proteiini-block (DAKO, Tukholma, Ruotsi) suoritettiin 15 min, minkä jälkeen leikkeet altistettiin ensisijaiseen monoklonaalinen vasta-aine (hiiren c-erbB-2 esilaimennettu Cocktail-vasta-aineen (PM070AA), biocare, CA, USA), 2 tuntia RT. Sitten sekundaarinen vasta-aine (hevonen anti-hiiri (BA-2000), Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) inkuboitiin 30 min huoneenlämpötilassa, minkä jälkeen avidiini-biotiini-kompleksin koodaus 30 minuuttia huoneenlämpötilassa käyttäen Elite ABC Kit (Vector Laboratories ) ja lopuksi DAB (DAKO) lisälaitteen 40 s ajan RT: ssä.

kasvaimen (n = 1822) ja ei-pahanlaatuiset (n = 1170) ytimet pisteytettiin ErbB2 eturauhasen epiteelisoluissa ja kasvainsolujen skannataan digitaalisesti kuvaa yhden arvioijan (JW), jotka eivät tuolloin arvioinnin on pääsy kliiniset tiedot. Kasvain näytteet pisteytettiin perusteella immunoreaktiivisia intensiteetti (välillä 0 = ei värjäytymistä 4 = maksimaalinen värjäys) ja jakelu (0, 25, 50, 75, 100%). Huomaa, että jakelu tulokset eivät sisältäneet strooman, koska tämä ei ilmaissut ErbB2-IR. Näin ollen näyte on vain pieni osa epiteelisolujen, mutta suuri määrä strooman voi silti pisteet jakauma 100% ja voimakkuus 4. Sitten kunkin ytimen komposiitti-arvo määritettiin (1-4). Esimerkiksi ydin, jossa 25%: n Pisteytettävät näytteen oli intensiteetti 2 ja 75%: lla oli intensiteetti 3 saisivat komposiitti pisteet (0,25 x 2 + 0,75 x 3) = 2,75. Mediaaniarvot Sitten määritettiin kussakin tapauksessa. Määrittämään johdonmukaisuus, 301 kasvain ytimiä pisteytettiin ja sitten rescored. Interclass korrelaatiokerroin johdonmukaisuuden (sekoitettu malli) antoi Cronbachin alfa 0,90, 254 301 tulokset olivat 0,5 pisteet yksikköä toisiaan. Ei-pahanlaatuisen Ytimet lisäksi teki pohjapinta ja onteloerityssolut erikseen, kun se on mahdollista. Jotkut ytimet (n = 482) oli selvästi tunnistettavissa tyvi- ja onteloerityssolut ja nämä on palautettu kuin pohjapinta ja luminaaliselle tietokantaan. Epätarkkarajaista Tyvikerros (n = 436) havaittiin joitakin muita sydämiä ja muissa ytimet (n = 252) tyvisoluihin ei voitu tunnistaa. Ytimet ei käytetty täällä, joten on syytä muistaa niin varoitus, että tulokset pohjapinta ja luminal ei-pahanlaatuinen ErbB2-IR edustaa rajoitettua aineisto. Ki67 index, Pakt-IR, androgeenireseptorin (AR) -IR ja kliinisiä piirteitä jokaiselle potilaalle oli saatavilla tietokannassa ja on raportoitu kokonaan tai osittain aiemmin [12] – [15].

Eläimet ja käsittelyt

Neljäkymmentäkaksi täysikasvuisia Sprague-Dawley-rottia (284-430 g) nukutettiin pentobarbitalnatrium (50 mg /kg) ja kastroitiin avaamalla kivespussi. Kuusi ehjä eläimet toimivat vertailuryhmänä. Jälkeen 7 päivää, kaksikymmentäyksi että eläimet saivat ihonalaisen pitkävaikutteista testosteronia (5 mg /kg, Sustanon, Organon, Oss, Alankomaat), kerta-annos joka toinen päivä, kuten aiemmin on kuvattu [16]. Eturauhasen kudos poistettiin eri aikoina kastraation jälkeen (1, 3, 7 päivää), ja eri aikoina sen jälkeen, kun kastraation + Testosteronihoidon (1 päivä, 2 päivää, 3 päivää) ja jäädytettiin nestetypessä. Oli seitsemän ryhmää myös kontrolliryhmässä ja kukin ryhmä koostui kuudesta eläimestä.

koeasetelma Tämän tutkimuksen eteni suuntaviivat hoitoon ja hallintaan koe-eläinten ja hyväksyi paikallinen eläimen eettisen komitean ( Umeå eettinen komitea eläinten Studies, Ruotsi). Eläimiä pidettiin alle kontrolloidussa lämpötilassa keinotekoisen valaistu huone (12 tunnin valo /12 tunnin pimeä). Ruokaa ja vesijohtovettä oli vapaasti saatavilla.

RNA: n valmistaminen ja määrälliset Käänteinen transkriptio-PCR

Kokonais-RNA kudoksista eristettiin mukaisesti TRIzolia menetelmää (Invitrogen, Tukholma, Ruotsi). RNA konsentraatiot kvantitoitiin spektrofotometrisesti 260 nm: ssä (DU 640 Spektrofotometri, Beckman Coulter, Bromma, Ruotsi) ja RNA: n eheys varmistettiin 28 S ja 18 S rRNA eheyden jälkeen agaroosigeelielektroforeesilla (tuloksia ei ole esitetty).

Viisi sata ng kokonais-RNA päinvastainen puhtaaksi käyttäen satunnaisia ​​heksameerejä (Applied Biosystems, Sundbyberg, Ruotsi) ja Superscript II käänteistranskriptaasia (Invitrogen, Tukholma, Ruotsi) kanssa 10 ui reaktiota mukaan valmistajan ohjeiden. Kaikki cDNA reaktiot suoritettiin kaksinkertaisina.

kvantifiointi ErbB2 mRNA suoritettiin reaaliaikaisella kvantitatiivisella PCR: llä käyttämällä ABI PRISM 7900HT Instrument (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA). Reaktiot suoritettiin 20 ul äänenvoimakkuutta TaqMan geeniekspression määrityksiä Rn00566561_m1 (Applied Biosystems, Life Technologies Europe BV, Tukholma, Ruotsi) TaqMan geeniekspressiota Mastermix mukaan valmistajan protokollaa. Kukin näyte analysoitiin Rpl13a (Rn00821946_gl, Applied Biosystems) ja β-aktiini (Rn00667869_ml, Applied Biosystems) ilmaisua käyttää normalisoi viite valvontaa. Vahvista vahvistus spesifisyys PCR-tuotteet alistettiin sulamiskäyräanalyysi. Kvantifiointia analysoitiin SDS 2,4 Software (Applied Biosystems), ja suhteelliset arvot ErbB2 mRNA näytteissä lasketaan standardikäyrästä, joka on saatu vahvistus viisi kertaa sarjalaimennosta päinvastaiseksi transkriboidaan kokonais-RNA: vertailunäytteen. Ongelma tämän tyyppisessä tutkimuksessa on sopiva taloudenhoito käyttää, koska niiden taso voi vaihdella syöpätutkimuksessa tutkimuksissa [17], [18]. Olemme valittiin esittää tiedot normalisoitu kaksi geeniä: ß-aktiini ja rpl13a, jotta arvion luotettavuutta tietoja.

Tilastot

intraclass korrelaatiokerroin, binary logistinen ja Coxin suhteellisen vaarat regressio analyysit tehtiin SPSS ohjelmistoa (IBM). Järjestysluku regressioanalyysisarjoissa hyödyntää ohjelmisto kehitetty R projektin tilastollisiin tietojenkäsittely (versio 2.15.2) [19]. Kaikki muut tilastolliset laskelmat käytetty tilastollinen paketti rakennettu GraphPad Prism 6 tietokoneohjelma Macintosh (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Tapauksissa seuraa odote, Receiver Operating Characteristic (ROC) käyrät on 15-year follow-up rajaa käytettiin määrittämään cut-off ErbB2-IR. Näiden käyrien ja Kaplan-Meier selviytymisen käyrät, tapahtuman määriteltiin kuolemantapauksen eturauhassyövän ja rekisteröidään tietokantaan ”event = 1”. Potilaat, joilla muista syistä johtuvat kuolemat ja tapauksia, joissa potilaat olivat elossa aikaan seurannan sensuroitiin ja tuli tietokantaan tapahtuma = 0.

Tulokset

ErbB2-IR Pca kudossiruina: vertailu kasvain ja ei-pahanlaatuiset tulokset

yhteensä 357 (kasvain) ja 222 (ei-pahanlaatuinen pohjapinta ja luminal) tapausta pisteytettiin ErbB2-IR. Esimerkkejä eri ErbB2-IR intensiteetit neljästä kasvaimen ydintä on esitetty kuviossa. 1A-D. Esimerkki ei-pahanlaatuinen kudos osoittaa selvä ero pohjapinta ja luminal ErbB2-IR on esitetty kuvassa. 1E. Sekä kasvain ja ei-pahanlaatuiset näytteitä, epiteelisolujen osoitti ErbB2-IR taas strooman ei. Kumulatiivinen pisteet kasvain epiteelin ja ei-pahanlaatuiset pohjapinta ja onteloerityssolut on esitetty kuviossa. 2A. Yhteensopivaksi näytteiden tulokset olivat merkittävästi erilaiset toisistaan ​​(P 0,0001 pareittain testejä, Wilcoxonin parittaista allekirjoitettu rank-testi). Tasolla yksittäisten hylsyjen, tapausten määrä, joissa perus tulokset ≥-1, -0,99–0,01, 0, ,01-,99, 1-1,99 ja ≥2 yksikköä korkeampi kuin sovitetun luminaali tulokset olivat 1, 1, 5, 86, 286 ja 103, vastaavasti.

määritetty tulokset olivat: Pisteet 1 paneelissa A; Pisteet 2 paneeli B; Pisteet 2,25 (75% voimakkuuspisteet 2, 25% intensiteetti pisteet 3) Panel C; Pisteet 4 Panel D Gleason tulokset tapauksista, joista hylsyt olivat peräisin olivat 5 Paneelit A ja C, ja 10 Paneelit B ja D. Paneeli E näyttää esimerkkiä ErbB2 immunoreaktiivisuus ei-pahanlaatuinen ydin, jossa pohjapinta ja luminaali värjäys voidaan helposti tunnistaa.

Ruutu A kumulatiivinen taajuudet ErbB2-IR tulokset on esitetty kasvain näytteet (n = 357), sekä pohjapinta ja luminaalinen pahanlaatuisten näytteitä (n = 222 molemmissa tapauksissa). Mediaaniarvot (jossa kvartiiliväli suluissa) olivat: kasvain, 3,0 (2,25-3,5); luminaali- pahanlaatuisten, 2,25 (2,0-2,625); pohjapinta hyvänlaatuisen 3,875 (3,5-4,0). Mediaaniarvot olivat merkittävästi erilaisia ​​toisiinsa nähden (p 0,001, Dunn monivertailutesti merkittävien Kruskal-Wallisin testi). Paneeli B esittää scatterplot että yksittäiset pistemäärät kasvaimen ErbB2-IR ja Pakt-IR (otettu [14]).

Association of ErbB2-IR sairauden vaikeusasteen diagnoosin

yhdistyksen ErbB2-IR kliiniseen (ikä, Gleason pisteet,% ydin oli kasvaimeen liittyviä) ja biokemialliset (Ki67 indeksi, stroomasta AR-IR ja Pakt-IR) toimenpiteet samalla alueella on esitetty taulukossa 1. Ensimmäinen kertaluvun Spearmanin rho arvot taulukossa 1 laskettiin kuvatulla [20]. Vuonna kasvain näytteissä, merkittävä yhdistysten kanssa Gleason pisteet,% ytimen, joka oli kasvaimeen liittyviä, Ki67 indeksi ja Pakt-IR löytynyt. Hajontaan osoittaa yhdistyksen välillä kasvain ErbB2-IR ja Pakt-IR tulokset on esitetty kuvassa. 2B. Yhdenmukainen merkittävä Spearmanin rho arvo, jakelu tapauksissa Gleason tulokset 4-5, 6, 7 ja 8-10 vastaavasti, oli erilainen niille, joilla on kasvain ErbB2-IR pisteet ≤2.75 (40 [26%], 46 [30%], 26 [17%] ja 41 [27%]) kuin pistemäärällä 2,75 (21 [10%], 57 [28%], 40 [20%] ja 86 [42%]) (P 0,0005, Chi neliö testi; arvot ovat numero [% varten ErbB2-IR ryhmä] kanssa Gleason alue diagnoosi. Vastaavat arvot kasvain laadut 1a-1b, 2, 3 ja 4, vastaavasti, olivat: kasvain ErbB2-IR pisteet ≤2.75, 92 [61%], 30 [20%], 25 [17%] ja 3 [2%]); kasvain ErbB2-IR pisteet 2,75, 83 [41%], 61 [30%], 49 [24%] ja 8 [4%] (P 0,005, χ

2 -testi).

teoriassa merkittävää yhteyttä kahden parametrin voisi johtua siitä, että molemmat parametrit liittyvät kolmasosaa parametri. Siten esimerkiksi, jos tapauksissa on korkea solujen lisääntymistä, joita nähdään markkeri Ki67 indeksi on useammin korkea Gleason tulokset ja korkeamman ErbB2-IR tulokset kuin tapauksissa alhainen solujen lisääntymisen, niin korrelaatiota ErbB2- IR ja Gleason tulokset olisivat aiheuttama. Yhdenmukainen Tässä tilanteessa ensimmäisen kertaluvun korrelaatioita ErbB2-IR ja joko Gleason pisteet tai% ytimen, joka oli kasvaimeen liittyviä kontrolloidaan kasvaimen Ki67 indeksin eivät olleet merkittäviä. Kuitenkin yhdistyksen välillä kasvain ErbB2-IR ja Pakt-IR edelleen merkittäviä (taulukko 1). Näin ollen, kasvainkudoksessa, ErbB2-IR tulokset liittyvät loppupään signalointimolekyylin Pakt ja solujen lisääntymistä markkeri Ki67, mutta ei voimakkaasti kliinisen toimenpiteet taudin vakavuus. Mitään merkittävää korrelaatiota ErbB2-IR ja joko Gleason pisteet,% ytimen, joka oli kasvaimeen liittyvät tai ei-pahanlaatuinen Ki67 indeksi nähtiin joko pohjapinta tai luminal ErbB2-IR. Merkittävät assosiaatioita pohjapinta ErbB2-IR ja sekä ei-pahanlaatuisia Pakt-IR ja strooman AR nähtiin.

suhde kasvaimen ErbB2 ja androgeenireseptorin signalointi

Ricciardelli et al. [21] ilmoitti, että korkea molempien kasvaimen ErbB2-IR ja AR-IR olivat yleisempiä Pca potilailla, joilla on vaiheen 3 kasvain (n = 31) kuin vaiheessa 2 kasvain (n = 22, näytteitä saatu eturauhasen). Täällä tutkimme suhde näiden kahden muuttujan meidän kudos microarray. Yhdenmukainen tutkimuksessa [21], ei ollut mitään korrelaatiota kahden muuttujan

sinänsä

tuumorikudokseen (taulukko 1). Kuitenkin meidän materiaali, tapauksia tasot sekä kasvaimen ErbB2-IR ja AR-IR yläpuolella mediaani olivat harvinaisempia potilailla, joilla on vaiheen 3 kasvain (n = 58) kuin vaiheen 2 kasvain (n = 82) (taulukko 2) . Kuten voidaan odottaa korrelaatio analyysit esitetään taulukossa 1, hämmentävä asia on se, että Ki-67-indeksi vaihtelee ryhmien (taulukko 2).

Jotta tämän huomioon, me sitoutui järjestysluku regressioanalyysisarjoissa kasvainta ErbB2-IR, AR-IR ja Ki67-indeksin riippumattomia muuttujia ja kasvaimen vaiheessa epäitsenäisissä järjestysluku muuttuja. Koska varoitus on syytä muistutti Ki67-indeksi korreloi sekä ErbB2-IR (taulukko 1) ja AR-IR (Spearmanin rho -0,17, n = 340, P 0,005) ja niin kolme muuttujat eivät ole todella riippumattomia . Kuitenkin, korrelaatiot, vaikka merkittävää, ovat suhteellisen alhaiset, joten riski multikollineaarisuus on pieni. Lisäksi sana ”järjestysluku” in ordinal regressioanalyysissä viittaa riippuva muuttuja, ja arvot riippumattomia muuttujia on määritelty jatkuva, pikemmin kuin järjestysluku, joka on itse asiassa tapauksessa tulokset (siis, esimerkiksi käyttö Spearmanin rho sijaan Pearsonin r taulukossa 1). Tämä on kuitenkin täysin kohtuullinen järjestysluku regressiomallien kun muuttuja kyseessä on suuri määrä luokkia (on 22 eri kasvain ErbB2 tulokset vaihtelevat 1-4 tietokannassa). Pääasiassa vaikutuksia mallissa, arvot palasi järjestysluku regressioanalyysin muuttujan edustaa sen kokonaisvaikutus kun muut muuttujat ovat mukana. Tässä tapauksessa sekä Ki67 indeksi (positiivinen) ja AR-IR (negatiivinen) olivat merkittäviä, kun taas ErbB2 ei ollut (taulukko 3). Vuorovaikutukseen aikavälillä malli, arvo yksittäisten muuttuja on vakio arvo muiden muuttujien. Tällöin tulokset kolmen muuttujat olivat samat kannalta merkitystä, mutta merkittävä vuorovaikutus ErbB2-IR x AR-IR (positiivinen) palautettiin. Toisin sanoen, kun muuttujat pidetään vakioina, on vaikutusta yhdistelmän ErbB2-IR x AR-IR, niin että mitä suurempi tulokset, korkeampi kasvaimen vaiheen numero. Logit ja kerroinsuhde arvot neljä tasoa vasteen (taso 1 on vertailutaso) eri ErbB2-IR ja AR-IR tulokset esitetään taulukossa S1 valaista asiaa niille lukijoille hyvin perehtynyt tämän tilastollisen menetelmän.

data Ricciardelli et al. [21] ja tässä tutkimuksessa ovat yhdenmukaisia, mutta ei todisteita, välinen vuorovaikutus androgeenireseptorin signalointi ja ErbB2 ilmaisun. Tällaiset todisteet edellyttää kokeellisissa malleissa. Androgeenin poistamisen vaikuttaa ErbB2 ilmentymisen tuumorisolulinjoissa [8] ja ksenograftimalleissa [9]. Ei tiedetä, kuitenkin, onko tämä asetus rajoittuu kasvainsolujen tai näkyy myös ehjä eturauhasen kudosta laajamittaisten vaihtelut kiertävän testosteronitasoja. Sen määrittämiseksi, onko samanlaisia ​​sääntelyn vaikutuksia ei havaittu normaalissa eturauhasessa, ErbB2 ilmaisun mRNA-tasolla tässä kudoksessa mitattiin qPCR seuraavalla kastraatio rotilla ja sen jälkeen uudelleen kiertävän androgeenitason testosteroni injektio. Havaitut tulokset (Fig. 3) ovat yhdenmukaisia ​​-tuumoritutkimuksia em.

Tulokset on normalisoitu A. ß-aktiini; B, Rpl13a. Lyhenteet: d kpl, päivien kastraation jälkeen; T, testosteroni. Näkyy ovat yksittäisiä arvoja (n = 6 per ryhmä); kiinteä palkit osoittavat mediaanit. Molemmissa tapauksissa, Kruskal-Wallis kokeet osoittivat merkittävää vaihtelua ryhmien välillä (P 0,0001).

Prognostic arvo kasvain ErbB2-IR

yhteensä 255 tapausta lasketa kasvain ErbB2-IR seurasi odote diagnoosin jälkeen, mikä on tavanomaista hoitoa tuolloin. Näissä tapauksissa luonnollisen sairauden etenemistä voidaan seurata, ja vaikutus biomarkkereiden kun tulos voidaan tutkia. Yleensä cut-off-arvo biomarkkereiden valitaan, ja lopputulos on verrataan tapauksissa alle ja yli cut-off määritetään selviytyminen analyysit, kuten Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyysi ja Kaplan-Meier tontteja. Cut-off-arvot voi olla mielivaltainen, kuten yksinkertainen mediaani split tietojen tai määritellyillä perusteella tilastollisen analyysin. Yksi tällainen lähestymistapa on käyttää vastaanottimen Toiminta (ROC) analysoi, joka juoni kaikille mahdollisille cut-off-arvot todellista positiivisten määrä (herkkyys) vs. väärien positiivisten määrä (1-spesifisyys). Jos ROC-käyrä, jossa ala käyrän alle [AUC] merkittävästi suurempi kuin 0,5 (no ennusteen arvioinnissa), optimaalinen cut-off-arvo (Youdenin indeksi, joka edustaa cut-off, joka antaa suurimman arvon herkkyys + spesifisyyden – 1 ) voidaan laskea (katso [22] varten kuvaus). ROC-käyrä, jossa on 15 vuoden rajan osoitti merkittävän ennusteen arvioinnissa kasvaimen ErbB2-IR (AUC-arvo [AUC] 0,60, P 0,05), ja oli jako ≤2.75 ja 2,75. Vertailun vuoksi ROC AUC varten kasvain Ki67 indeksi oli 0,75 (P 0,0001) ja niin arvo 0,60, vaikkakin merkittävä, ei ole kovin vaikuttava. Ei-pahanlaatuisen pohjapinta ja luminal ErbB2-IR tulokset puuttui ennusteen arvioinnissa (AUC≤0.55, P≥0.4).

Teoriassa on mahdollista, että vaikka AUC kasvainten ErbB2-IR on vaatimaton, se voisi edistää yhdistelmä merkkiaineiden hyödyllisiä ennusteen arvioinnissa. Tutkiakseen tätä mahdollisuutta, kaksi lähestymistapaa on toteutettu käyttäen kasvain ErbB2-IR yhdessä kolmen muun kasvainmerkkiaineet (Ki67 indeksi, epiteelin AR-IR ja Pakt). Tiedot on normalisoitu siten, että suurin pistemäärä kussakin tapauksessa on 100%, ja kun kyseessä on AR, tulokset on ilmaistu 100-normalisoitu pisteet, koska alhainen, eikä korkea, AR-IR on liitetty huono ennuste [15]. Erilaisia ​​yhdistelmiä testattiin, mutta yksikään ei antanut parannusta mitä nähtiin Ki67 yksinään (taulukko S2). ROC käyrät antoivat sama painotus eri biomarkkereita, ja niin teoriassa optimaalinen painotus on ehkä jäänyt. Näin ollen binaarisen Logistisen regressioanalyysin kanssa kliininen tulos kuin riippuva muuttuja tutkittiin käyttäen samoja parametrejä. Paras yhdistelmä parametrien suhteen arvaamalla oikein kuoleman takia Pca oli ~~23% ja sisällyttäminen ErbB2 ei parantunut tämä luku (taulukko S3). Vertailun vuoksi Gleason oli ennustaminen osuus 55,6% (Nagelkerke R

2 arvo 0,419) omasta ja 45,6% (Nagelkerke R

2 arvo 0,401) yhdessä AR-IR + Ki67-IR ( tuloksia ei ole esitetty).

univariate Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyysi tiettyyn tautiin selviytyminen kuin päätepisteenä osoitti, että suhteellinen riski tapauksissa kasvaimeen ErbB2-IR pisteet yläpuolella optimaalisen cut-off, kuin se on määritelty jonka Youdenin indeksi oli suunnilleen kaksinkertaiset niille alle cut-off-arvo (Exp (B) arvo on esitetty taulukossa 4). Yksiulotteista analyysi ei ota huomioon mahdolliset sekoittavia muuttujia. Edellisestä tulokset esitetään tässä paperissa, Ki67 on ilmeinen sekoitin, ja kahden muuttujan Coxin suhteellista riskiregressioanalyysiä osoittivat, että kasvain ErbB2-IR ei tarjota lisää ennustetekijöiden tietoa kuin korvattava joko kasvain Ki67 indeksi (taulukko 3). Kliinisistä hyödyllisyydestä, merkkiaine olisi kiinnostava, jos se tarjotaan tietoa yli sen toimittamat Gleason pisteet. Kuitenkin kahden muuttujan Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyyseissä kontrolloiden Gleason pisteet (kolme ryhmää: 4-6, 7 ja 8-10) osoitti, että ennusteen arvioinnissa kasvaimen ErbB2-IR enää edelleen merkittäviä (taulukko 4). Tämän mukaisesti, Kaplan-Meier -käyrät kaikissa tapauksissa sen jälkeen odote oli merkittävä ennustetekijöitä vaikutus kasvaimen ErbB2-IR (kuvio 4A), ja tapauksissa, joissa Gleason pisteet 4-6 (Fig. 4B). Kuitenkin merkittävä prognostisia vaikutusta ei nähty tapauksia, joissa Gleason pisteet 6 yksinään (kuvio 4C), Gleason pisteet 7 yksin (kuvio 4D, vaikkakin raja merkitystä) tai tapaukset, joissa Gleason tulokset 8-10 (Kuva. 4E).

tapausten lukumäärä, joissa kuolema johtui eturauhassyövän ilmoitetaan muodossa

† Pca kuvassa. Luukut viivoille osoittavat sensuroitiin tiedot (eli muissa kuin kuolema johtuu eturauhassyöpä). Valikoima Gleason tulokset (GS) potilaille on esitetty kussakin paneelissa.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa olemme tutkineet yhdistyksen ErbB2-IR jossa sairauden vakavuuden diagnoosin ja sairauden lopputulos hyvin kuvattu kudos microarray [12]. On suuri elimen työtä koskevan ennusteen arvioinnissa ErbB2 vuonna Pca (katsaus, katso [11]), mutta esillä oleva tutkimus tarjoaa uusia tietoja kahdessa tärkeässä suhteessa: ensinnäkin tiedot saadaan tapauksissa, jotka eivät olleet saaneet mitään syöpää hoitoa ennen näytteet on otettu, koska ne on diagnosoitu vasta höyläysleikkaus alempien virtsateiden oireita. Lisäksi, koska tavanomaista hoitoa oli tuolloin odotettavissa, pitkä seurata käytetyn sallii tutkimisen luonnollisen taudinkulku. Tämä on erittäin arvokas arvioimiseksi biomarkkereita. Toiseksi tietojen saatavuutta, kun AR samoissa näytteissä on mahdollistanut tarkastelu välisten suhteiden välillä ErbB2 ja AR ilmaisun kasvaimia. Yleensä meidän havainnot ovat hyvässä sopusoinnussa kirjallisuudessa. Suhteessa eri kudoksiin ErbB2: n ilmentymiseen, Lyne et ai. [23] ilmoitetaan, että prosenttiosuus yksilöitä, joilla on kohtalainen voimakkaalle ErbB2 immunoreaktiivisuus oli 100 hyvänlaatuisen eturauhasen tyvisoluihin, 11 eturauhasen hyvänlaatuisen onteloerityssolut, 0 hyvänlaatuinen eturauhasen strooman, 87 eturauhasen intraepiteelisen neoplasia ja 82 eturauhassyövän. Tässä tutkimuksessa, emme tarkkailla ErbB2-IR strooman ja numerosta (% suluissa) tapauksista, joissa ErbB2-IR tulokset ≥3 oli 196/222 (88%), 39/222 (18%) ja 201/357 (56%) ei-pahanlaatuisten pohjapinta, luminaalisen ja kasvainnäytteet, vastaavasti.

tuumorinäytteet, ErbB2-IR oli merkitsevästi yhteydessä sekä soluproliferaation markkeri Ki67 ja immunoreaktiivisuus Pakt , fosforyloidun muodon eloonjäämistekijää Akt. Yhdistys kanssa Ki67 vastaa laaja tutkimus käyttäen saatuja näytteitä radikaalia prostectomy, jossa keskimääräinen Ki67 merkintöjä indeksi oli korkeammat 388 ErbB2-positiivisten kasvain näytteissä kuin 1940 ErbB2-negatiiviset näytteet (6,1 vs. 4,3, tässä järjestyksessä, [10]). [21].