Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tavoitteet

Yhden nukleotidin polymorfismien (SNP) in otaksuttu microRNA sitoutumiskohtia (miRSNPs) moduloida syöpäalttiutta kautta vaikuttavien miRNA sitova. Täällä pyrkimyksistä yhdistyksen välillä miRSNPs ja kohdunkaulan syövän riskiä.

Methods

Ensimmäinen genotyyppi 41 miRSNPs 37 syöpään liittyvien geenien 338 potilasta ja 334 valvonta (tutkimus 1), ja toisti merkitseviä 502 potilaalle ja 600 valvonta (tutkimus 2). Testasimme vaikutukset miRSNPs on mikroRNA-mRNA vuorovaikutusta lusiferaasireportterilla määrityksessä.

Tulokset

Viisi SNP näkyy merkittäviä yhdessä kohdunkaulan syövän riskiä tutkimuksessa 1. Vain

IL-16

rs1131445 ylläpitänyt merkittävää yhteyttä kohdunkaulan syöpä (CT /CC vs. TT, säätää tai = 1,51,

P

= 0,001) tutkimuksessa 2. Tämä yhdistys oli selvempää yhdistetyn datan kahdesta tutkimuksesta ( oikaistu OR = 1,49,

P

= 0,00007). Olemme myös havainneet, että miR-135b matkii vuorovaikutuksessa

IL-16

3′-UTR vähentää geenien ilmentyminen ja että rs1131445 T C substituutio oletetun sitoutumiskohta heikentynyt vuorovaikutuksen miR-135b kanssa

IL-16

3′-UTR. ELISA osoitti, että seerumin IL-16 sairastavien potilaiden kohdunkaulan syövän nostettiin (kontrolleja,

P

= 0,001) ja korreloi rs1131445 genotyyppi. Potilaat, jotka kantoivat rs1131445 C-alleelin oli korkeampi seerumin IL-16 kuin ei-kantajia (

P

0,001).

Johtopäätökset

Nämä tulokset tukevat hypoteesia, että miRSNPs muodostavat alttius tekijä kohdunkaulan syöpiä. rs1131445 vaikuttaa

IL-16

ilmentymisen häiritsemällä tukahduttava toiminta miR135b ja tämä muunnos liittyy merkittävästi kohdunkaulan syövän riskiä.

Citation: Mi Y, Wang L, Zong L, Pei M Lu Q, Huang P (2014) geneettisiä variantteja in microRNA Kohdesivustot 37 Valitut syöpään liittyvien geenien ja kohdunkaulasyövän riskin. PLoS ONE 9 (1): e86061. doi: 10,1371 /journal.pone.0086061

Editor: Qing-Yi Wei, Duke Cancer Institute, Yhdysvallat

vastaanotettu: 02 marraskuu 2013; Hyväksytty: 9. joulukuuta 2013. Julkaistu: 22 tammikuu 2014

Copyright: © 2014 Mi et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Xi’an Science and Technology Research Program (Grants XASTR1125), tieteellinen tutkimus säätiö Palautetut Overseas Kiinan Tutkijat (State Opetusministeriö) ”. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Kohdunkaulan syöpä, kolmanneksi yleisin syöpä naisilla [1], johtuu pääasiassa ihmisen papilloomaviruksen (HPV) infektio [2]. Vaikka HPV-infektiot ovat yleisiä seksuaalisesti aktiivisia naisia, vain pieni osa infektioiden jatkuvat ja kehittyä CIN-muutos grade 2/3 (CIN 2/3) tai jopa kohdunkaulan syövän [3]. Useat kofaktoreita vaikuta siirryttäessä alunperin HPV-infektio on kohdunkaulan syöpä, kuten elämäntyyli, isännän immuunivasteen, ja geneettinen alttius [4], [5]. Tärkeä roolit geneettisten tekijöiden kohdunkaulan syövän synnyssä kehotuksen havainnot, että kohdunkaulan syöpä näyttelyitä merkittävä familiaalinen klustereiden ja ensimmäisen asteen sukulaiset potilailla on kaksinkertainen riski sairastua syöpään [6]. Muutama riski muokkaava variantteja kohdunkaulansyövän on todettu ehdokas geeni yhdistys tutkimus. Geenejä, jotka liittyvät kohdunkaulan syöpään alttius osallistuvat DNA: n korjaukseen, solusyklin ja apoptoosin, solujen lisääntymisen ja erilaistumisen HLA-järjestelmä ja immuunivastetta [7], [8].

Viimeaikaiset varmaa näyttöä osoittaa, että polymorfismeilla microRNA (miRNA) sitoutumiskohtiin syöpään liittyvät geenit ovat tärkeä lähde, jossa sijaitsee aiheuttava perimä syövän [9]. miRNA, usein 19-25 nukleotidin pituus ei-koodaavaa RNA, sitoo sisällä 3’alue (UTR) ja transcriptions kohdennettujen geenien estävän ja jopa poistaa sen käännöksen proteiinin. On arvioitu, että noin 30% ihmisen geeneistä säätelevät miRNA [10]. Gene vapauttaminen on yksi tärkeimmistä mekanismeista, joita solut voivat edetä syöpään [11]. miRNA voivat osallistua syövän synnyn kautta transkription jälkeisen sääntelyn monien syöpään liittyvien geenien, kuten onkogeenien ja tuumorisuppressorigeeneille. Poikkeavaan ilmentyminen miRNA edistää etiologia useiden syöpien, kuten kohdunkaulan syövän [12]. miRNA profiili analyysi kohdunkaulan syövän paljasti, että Mirs-9, 21, 135b, 146a, 199 a, 203 ja 205 on usein yli-ilmentynyt syövän kudoksissa tai solulinjoissa [12]. Lisäksi miR-205 toimii onkogeenin edistää solujen lisääntymistä ja kulkeutumista ihmisen kohdunkaulansyövän solut [13]. Sen sijaan, miR-214 suoraan kohdistuu GALNT7 geenin tukahduttaa kasvua ja invasiivisuus kohdunkaulan syövän solujen toimii tuumorisuppressorina tuumorisuppressori [14]. Emäsparien muutoksia sisällä miRNA-kohdealueen syöpään liittyvien geenien voi tuhota tai luoda sitoutumiskohdan tai muuttaa sitoutumisaffiniteetin ja post-transkriptionaalisen säätelyn mRNA miRNA ja siksi saattaa vaikuttaa siirtymistä normaaleihin soluihin syöpäsolujen [9].

bioinformatiikan analyysi on tunnistettu useita SNP jotka sijaitsevat otaksutun miRNA sitoutumiskohdat syövän kandidaattigeenejä ja jotka vaikuttavat merkittävästi sitovaa energia oletettujen miRNA :: mRNA duplexes [15]. Pieni osa niistä on edelleen osoittautunut muuttaa ilmentymistä kohde- geenien lusiferaasireportterigeenin määritys ja näyttää merkittävää yhteyttä syöpäalttiuteen [16], [17]. Landi et ai. seulotaan pois 57 SNP sisällä miRNA sitovat kohdat 104 kandidaattigeenit paksusuolisyövän, löytyy kahdeksan SNP niistä näyttää eri Gibbsin vapaa energia välisen sitoutumisen kahden alleelin kunkin SNP, ja lopulta osoitti SNP, rs17281995 sisällä miRNA-sitovan sivustoja CD86, koska riski muokkaava variantti ja peräsuolen syöpään [16]. Käyttäen samanlaista tutkimusstrategia, SNP sisällä miRNA sitoutumiskohtiin muita tärkeitä syövän kandidaattigeenit, kuten DNA: n korjaus geenejä [17], integriinin geenit [18] ja kaspaasi-geenit [19], on myös tunnistettu ja edelleen arvioitu alttius variantteja virtsarakon syöpä, rintasyöpä, peräsuolen syöpä, ja pään ja kaulan alueen syövän riskiä. Viime aikoina Shi et ai. osoittivat, että rs11064 G-alleelin alueella

TNFAIP8

geenin heikentää sitoutumisaffiniteettia miR-22 on TNFAIP8 3′-UTR ja siihen liittyy lisääntynyt riski kohdunkaulan syövän [20], mikä viittaa siihen, että miRNA- sitoutumiskohdat ovat myös kriisipesäkkeisiin että satama kohdunkaulan syövän alttiuden variantteja.

Tässä tutkimuksessa, pyrimme tunnistamaan uusia riskejä varianttien kohdunkaulan syöpä miRNA-kohde sivustoja syöpään liittyvien geenien. Tarkastelemalla kirjallisuudessa ja bioinformatiikan tietokannat, löysimme 37 syöpään liittyvien geenien kanssa vaihteluita otaksuttu 3′-UTR miRNA sitoutumiskohtia. Yhdistyksen vahvuus Näiden varianttien kanssa kohdunkaulan syövän arvioitiin kaksivaiheisessa tapauskontrollitutkimuksessa. Sillä liittyvä variantti, sen toiminnallinen vaikutus miRNA-välitteisen ilmentymisen säätelyyn kohdegeenien tutkittiin käyttämällä lusiferaasireportterisysteemillä määrityksessä.

Materiaalit ja menetelmät

1 Tutkimuskanta

rekrytoimme 840 potilaalla on kohdunkaulan syövän potilaista, jotka saivat sairaalahoitoa kolmessa sairaalassa välillä toukokuussa 2008 ja huhtikuussa 2012. niistä 338 koehenkilöllä Liaocheng People sairaala (LCPH) käytettiin ensimmäisessä vaiheessa tutkimuksessa (tutkimus 1), jossa tutkittiin kaikki valitun SNP, ja 502 aiheita Ensimmäinen Affiliated sairaala Xi’an Jiaotong University (TFAHXJTU) ja äidin ja lapsen terveys sairaala Shaanxin maakunnassa (MCHHSP) käytettiin toisen vaiheen tutkimuksessa (tutkimus 2), joka oli kopioida huomionarvoista havainnot (

P

0,05) esittää tutkimuksesta 1. Kaikki potilaat diagnosoitiin histologisella tarkastelu koepala alle Kolposkooppi ja /tai resekoitu kudoksiin. Kliiniseen vaiheeseen ja histologinen tyyppi kohdunkaulan syövän potilaiden kerättiin potilastiedot ja on esitetty taulukossa 1. Kaikkiaan 934 tervettä verrokkia rekrytoitiin naisista rutiininomaisesti osallistui lääkärintarkastus näissä kolmessa sairaalassa, 334 koehenkilöllä LCPH tutkimuksessa 1 ja 600 aiheita TFAHXJTU ja MCHHSP tutkimuksessa 2. Kaikki hallintalaitteet ollut historiaa neoplastisten tai syöpään liittyvän sairauden, ja heillä oli normaali kohdunkaulan sytologia vähintään kahden peräkkäisen vuotuinen tutkimukset. Kaikki asiat olivat geneettisesti liity, ja niiden iän, rodun, tupakointi, sosioekonominen asema, ja siviilisääty tutkittiin myös lukemalla potilastietoja tai haastatteluilla. Tutkimus hyväksyi Medical eettisten toimikuntien LCPH, TFAHXJTU ja MCHHSP ja kaikki osallistujat antoivat tietoisen kirjallisen suostumuksen.

2 polymorfismi valinta ja genotyypityksen

Aiemmat tutkimukset ovat järjestelmällisesti seulotaan SNP vuonna miRNA sitoutumiskohtiin monien syöpään liittyvien geenien. Lyhyesti, ne seulotaan ensin syöpään liittyvien geenien tietokannan ja kirjallisuushakuja, ja sitten ne tunnistetaan oletetun miRNA kohdesivustoluetteloon näissä geenien erityisiä algoritmeja (esim miRBase, Miranda PicTar ja TargetScan) ja valinnut SNP, jotka sijaitsevat miRNA-sitoutumiskohdat by dbSNP etsintä ja BLAST, lopulta tunnistaa SNP jonka alleelit tehdä kohdesekvenssi on merkittävästi erilaiseen sitova energiaa miRNA tietokoneessa ennustava malli [16], [18]. Koska monet syöpään liittyvien geenien jaetaan useiden syöpien [21], valitsimme SNP edellisestä kirjallisuudesta, joka kattaa aiheista miRNA-sitoutumiskohta /miRNA kohdekohtia polymorfismit ja syöpä /kasvaimen. Medline /PubMed tietokannasta etsittiin löytää kirjallisuutta, joka julkaistiin 2000 tammikuusta 2013 tammikuussa. Olemme lopuksi valitut 41 SNP ennusti miRNA-sitoutumiskohtien 37 syöpään liittyvien geenien pienin alleelifrekvenssit suurempi kuin 0,1 Kiinan Han väestöstä (taulukko 2). Genomi-DNA uutettiin periferaalisen veren leukosyyteistä käyttäen Blood DNA Midi Kit (Omega Biotech, Norcross, USA), mukaisesti valmistajan protokollaa. Valitut SNP genotyypattiin potilailla ja käyttäviin MALDI-TOF sisällä MassARRAY järjestelmässä (Sequenom Inc., San Diego, CA, USA) [22].

3 HPV genotyypityksen

Ihmisen HPV kohdunkaulan kaavinta kokeena ja /tai resektoitiin kudoksista genotyyppi käyttäen HPV GenoArray testipakkaus (HybriBio Ltd, Guangdong, Kiina). Ensinnäkin, HPV-DNA monistettiin L1 konsensus HPV-alukkeet MY09 /MY11 ja HMB01. Sitten PCR-tuote käsitellään läpivirtaus hybridisaatio tapaan makrosiruformaateissa muodossa nailonkalvolle, johon HPV-genotyypin-spesifisiä oligonukleotidikoettimia immobilisoitiin. Tämä tekniikka voi tunnistaa 21 HPV genotyyppejä, mukaan lukien 5 matalan riskin tyyppejä (6, 11, 42, 43, ja 44), 14 korkean riskin tyyppejä (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52 , 56, 58, 59, 66, ja 68), ja 2 väli-riskityyppeihin (CP8304 ja 53).

4 Seerumin IL-16 tasossa

potilaiden ja valvonta ”verta kerättiin välillä 8 ja klo 10 seerumia sentrifugoitiin 3000 rpm: ssä 10 min ja jäädytettiin -80 ° C: ssa. Seerumin IL-16-tasot mitattiin kaupallisesti saatavilla entsyymi-immunologinen määritys (ELISA-pakkauksia), (PIERCE Endogen) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Vähimmäistaso tunnistus IL-16 oli 0,10 pg /ml. Ei rajat havaitseminen muiden sytokiinien havaittiin. Sisäinen variaatio oli 10%.

5 Soluviljely

Ihmisen kohdunkaulan syövän solulinjat, HeLa [23] ja SiHa [24], ostettiin Type Culture Collection of Kiinan Academy of Sciences (Shanghai, Kiina). Näitä soluja viljeltiin Dulbeccon modifioidussa Eaglen väliaineessa, jota oli täydennetty 100 U /ml penisilliiniä, 100 mg /ml streptomysiiniä ja 10% naudan sikiön seerumia, ja niitä kasvatettiin 37 ° C: ssa kostutetussa 5% hiilidioksidia inkubaattorissa.

6 Transient transfektiot ja Lusiferaasimäärityksiä

3′-UTR: IL-6-mRNA: n, mukaan lukien C-alleeli tai T-alleelin rs1131445, monistettiin käyttäen alukkeita 5′-TGGCCTGGGCCTCCTCACAA-3 ’(eteenpäin) ja 5’CTCCACCACCCTTCCCTA -3 ’(taaksepäin). Monistetut fragmentit kloonattiin sitten alavirtaan tulikärpäsen lusiferaasi-geenin pGL3-perusvektoriin (Promega, Madison, USA). Nämä rekombinaatio plasmidit sekvensoitiin vahvistamaan tarkkuudella. Sillä lusiferaasireportteri määrityksissä, HeLa- ja SiHa maljattiin 24 kuopan ruokia voidaan kotransfektoitiin 100 ng pGL3-C tai pGL3-T rakentaa, 50 pmol /ul kemiallisesti syntetisoitujen miRNA miR-135b (GenePharma, Shanghai, Kiina) tai negatiivinen kontrolli miRNA käyttäen Lipofectamine 2000 transfektioreagenssia (Invitrogen, Carlsbad, USA). Kunkin transfektion, 20 ng PRL-TK-plasmidia (Promega, Madison, USA) käytettiin korjaamaan transfektion tehokkuutta. Kukin transfektio tehtiin kolmena kappaleena. Solut kerättiin 48 tuntia transfektion jälkeen, ja lusiferaasiaktiivisuus mitattiin dual-lusiferaasireporttiterilla määritystä (Promega, Madison, USA) ja normalisoidaan aktiivisuus Renilla lusiferaasigeeni.

7. Tilastollinen analyysi

Laskimme tilastollista kuten aikaisemmin on kuvattu [25]. Χ

2 Testi suoritettiin tehdä vertailun kategorisen muuttujista kuten genotyyppi taajuus ja joitakin demografisia ominaisuuksia. Studentin t-testi, Mann-Whitneyn U-testiä tai varianssianalyysi suoritettiin vertailla jatkuvia muuttujia, kuten ikä, seerumin IL-16 tasolla, ja reportteri ekspressiotaso, tarvittaessa. Liitot välinen

IL-16

variantit ja kohdunkaulan syövän riski arvioitiin laskemalla syrjäisimpien alueiden ja niiden 95% luottolaitosten monimuuttuja logistinen regressio analyysit oikaisua ikä, painoindeksi, tupakointi tila ja perhe historia syöpä. Jotta vältettäisiin keinotekoinen yhdistys aiheuttama useita testejä, väärien positiivisten raportin todennäköisyys (FPRP) laskettiin kuvaaman menetelmän Wacholder et al. [26]. Asetamme 0.2 kuin FPRP kynnyksen ja annetaan etukäteen todennäköisyys 0,01 havaita OR = 1,50 (riskien vaikutukset) tai 0,67 (varten suojaavia vaikutuksia) varten yhdessä SNP tai kliinis-demografisia ominaisuuksia. Hardyn-Weinberg tasapaino (HWE) SNP joukossa valvonta arvioitiin χ

2 testiä. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin SPSS (versio 13.0, Chicago, IL, USA). Arvo

P

0,05 katsottiin merkittäväksi (kaksisuuntainen).

Tulokset

1 Väestö ominaisuudet

Analysoimme yhteensä 840 potilailla, joilla on kohdunkaulan syöpä ja 934 valvontaa tutkimuksissa 1 ja 2. demografiset ja kliiniset ominaisuudet potilaiden ja verrokkien on esitetty taulukossa 1. ei ollut merkittävää eroa jakauman ikä, rotu, tupakointi asema, koulutustaso, ja siviilisäädyn tila välillä säätimet ja tapaukset, tutkimuksessa 1 tutkimus 2 ja kaikki asiat yhdessä. Kuitenkin tapaukset olivat todennäköisemmin nuorempi vuotiaana ensimmäisessä toimitus (

P

= 0,038) ja HPV-infektio (

P

0,001) kuin kontrollit. HPV-infektio oli edelleen merkitsevästi yhteydessä kohdunkaulan syöpään ottaen huomioon FPRP joka oli alle 0,2. Nämä kaksi muuttujaa olivat edelleen mukautettu jäljellä häiriövaikutukset myöhempinä monimuuttuja logistinen regressio analyysejä.

2 Association of SNP sisällä miRNA-sitoutumiskohtiin syöpään liittyvien geenien kanssa kohdunkaulan syövän riski

Yli 99% näytteistä genotyypattiin onnistuneesti kullekin SNP, ja rinnakkaisten kokeilun satunnaisesti valittua 300 näytettä hankittiin täysin sopusoinnussa genotyyppitietoja alkuperäisen analyysin. Taulukossa 2 esitetään luettelo valitun SNP sisällä miRNA-sitoutumiskohdat 3′-UTR 37 syöpään liittyvien geenien, sitova miRNA että ne mahdollisesti vaikuttavat, ja niiden genotyyppi taajuudet ja yhdistysten kanssa kohdunkaulan syövän tutkimus 1. Kaikki havaitut genotyyppi jakaumat joukossa ohjaimissa Study 1 olivat linjassa HWE. Niistä 41 SNP, jotka sisältyivät tutkimuksessa 1, viisi SNP (rs465646 in

REV3L

geeni, rs2239680 vuonna

BIRC5

geeni, rs1476215 vuonna

FGF2

geeni, rs3213180 vuonna

E2F1

geeni, rs1131445 vuonna

IL-16

geeni) osoitti selvästi erilainen genotyypin jakautuminen tapauksissa kohdunkaulan syövän ja säätimet (

P

= 0.003~0.030). Sen määrittämiseksi, onko totta merkitseviä olemassa vai oliko väärä tuloksia, suoritimme toisinto analysoimaan näitä SNP toisessa väestöstä asuu Shaan Xi maakunnassa Pohjois-Kiinassa. Tutkimuksessa 2, niiden havaittiin genotyyppi taajuudet olivat myös yhdenmukaisia ​​HWE (taulukko 3). Lisäksi olemme havainneet, että vain

IL-16

rs1131445 oli edelleen merkittävää yhteyttä kohdunkaulan syöpä. Tutkittavat sen TC tai CC-alleeli oli lisääntynyt riski kohdunkaulan syövän (oikaistu OR = 1,51, 95% CI 1,18-1,93,

P

= 0,001) ja oikaisua ikä, tupakointi asema, koulutustaso, ikä primiparity, siviilisääty, ja HPV-infektio tila. Yhdistyksen välinen rs1131445 ja kohdunkaulan syöpä oli merkittävämpi tietojen yhdistetyn Study 1 ja 2 (mukautettu OR = 1,49, 95% CI 1,22-1,81,

P

= 0.00007) korjattuna edellä mainittujen muuttujien. Sitten lasketaan FPRP arvot kaikille havaittu merkitseviä. Kun oletus ennen todennäköisyys oli 0,01, yhdistys jossa

IL-16

rs1131445 (TC /CC vs.TT) oli edelleen huomattava molemmissa Tutkimus 1 aiheista (FPRP = 0,171) ja kaikki (FPRP = 0,011). Koska OR = 1,5 nimellistä

P

= 0,05 genotyypin taajuuksilla vaihtelevat 0,20-0,40, tilastollista voimaa Tutkimuksemme havaita yhteenliittymän kunkin SNP kohdunkaulan syövän Tutkimus 2 ja yhdistetyt Study 1 ja 2 oli arviolta 81,0-91,5% ja 95,0-98,9%, vastaavasti. Ositus analyysi ei havaittu merkittävää vuorovaikutusta demografisen ja kliinisiä tekijöitä sekä rs1131445 genotyypin kohdunkaulan syövän riskiä (tuloksia ei ole esitetty). Lisäksi ei ollut merkittäviä korrelaatioita genotyyppejä rs1131445 ja kliiniseen vaiheeseen ja histologinen tyyppi kohdunkaulan syöpä (tuloksia ei ole esitetty).

3 Seerumin IL-16 tason ja sen korrelaatio

IL-16

rs1131445 genotyyppi

koska havaittu merkittävä assosiaatio rs1131445 ja kohdunkaulan syövän riskiä, ​​voimme tutkia edelleen seerumin IL-16 tasoa kontrolleissa ja potilailla, joilla on kohdunkaulan syövän sekä mahdolliset sääntelyyn vaikutukset rs1131445 genotyypin seerumin IL-16. Valitsimme 100 potilaalla on kohdunkaulan syöpää ja 80 säätimet aiheista Tutkimus 2 ja tutkittiin seerumin IL-16 tasot ELISAlla. Seerumin IL-16 sairastavien potilaiden kohdunkaulan syöpää merkittävästi lisääntynyt verrattuna kontrolleihin (

P

= 0,001, Kuva 1A). Lisäksi potilailla, joilla on kohdunkaulan syöpä, oli merkittävä korrelaatio seerumin IL-16 ja rs1131445 genotyyppi (

P

= 0,001). Rs1131445 C-alleelin kuljettavien potilailla oli korkeampi seerumin IL-16 kuin ei-kantajia (

P

0,05, kuvio 1 B). Lisäksi emme todeta tilastollisesti merkitsevä assosiaatio seerumin IL-16 kanssa kliinisessä vaiheessa ja histologinen tyyppi kohdunkaulan syöpä (tuloksia ei ole esitetty).

. Seerumin IL-16 tasoa kontrolleissa ja potilailla, joilla on kohdunkaulan syöpä, mitattuna ELISA. B. korrelaatiot seerumin IL-16 tasoa genotyypin kontrolleissa ja potilaille. Data ilmaistiin keskiarvona ± SEM. *

P

0,05 kontrolleja ryhmä. +

P

0,05 vs. potilaalla on TT genotyypin.

4 vaikutus rs1131445 vuorovaikutukseen miR-135b ja

IL-16

3 ”-UTR

oletetun sitoutumiskohdan sisällä 3′-UTR

IL-16

mir-135b on tunnistettu käyttäen miRBase, Miranda ja PicTar ohjelmisto. Se oli myös ennustettu, että substituutio T: n C alleeli rs1131445 voivat heikentää Gibbsin sitova vapaa energia miRNA-mRNA 3,93 KJ /mol [16], mikä viittaa siihen, että tämä SNP voi vaikuttaa

IL-16

geenin ilmentymistä muuttamalla miRNA-mRNA: n sitoutumisaffiniteettia (kuvio 2A). Tämän hypoteesin testaamiseksi, lusiferaasi määritys suoritettiin HeLa ja SiHa kohdunkaulan syövän solulinjat, jotka on transfektoitu pGL3-C-alleelin tai pGL3-T-alleelin konstruktit liitetään kemiallisesti syntetisoituja miRNA miR-135b tai negatiivinen kontrolli miRNA ( kuvio 2A). Sekä konstruktioita, kun läsnä on miR-135b jäljittelee, lusiferaasin ilmentyminen väheni merkittävästi (kuvio 2B-C), mikä vahvistaa toiminnallinen potentiaalia miRNA-mRNA: n vuorovaikutusta. Sen sijaan, negatiivinen kontrolli miRNA ilman ennustaa sitoutumiskohtaan

IL-16

3′-UTR ei ole vaikutusta lusiferaasin ilmentymistä (kuvio 2B-C). Lisäksi olemme havainneet, että C-alleeli johti vaatimaton, mutta tilastollisesti merkittävää lusiferaasin ilmentymisen verrattuna T-alleelin (kuvio 2B-C).

. Kaaviota

IL-16

3′-UTR kätkeminen oletetun miR-135b sitoutumiskohdan, asema rs1131445, ja konstrukti pGL3-IL-16-3′-UTR-T /C. B ja C. Suhteellinen lusiferaasiaktiivisuus läsnäollessa miR-135b tai negatiivinen kontrolli miRNA näkyy kohdassa

IL-16

3′-UTR kanssa T-alleeli C alleelin HeLa (B) ja SiHa (C) syöpäsolujen; Tiedot esitetään prosentteina suhteessa lusiferaasiaktiivisuus transfektoiduissa soluissa NC ja T-alleelia; virhe pylväs edustaa s.e. kolmesta itsenäisestä kokeesta; *

P

0,05, **

P

0,05, ***

P

0,01. NC edustaa negatiivinen kontrolli.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa olemme seulotaan ulos kohdunkaulan syövän alttiuden variantti päässä miRNA-sitoutumiskohdan SNP 37 syöpään liittyvien geenien jonka kaksivaiheisessa tutkimuksessa. Huomasimme, että SNP rs1131445 C-alleelin 3′-UTR

IL-16

liittyi suurentunut kohdunkaulan syövän. Käyttämällä lusiferaasin määritystä havaitsimme, että miRNA-135b merkittävästi vähentynyt lusiferaasin ilmentyminen pGL3-IL-16-3′-UTR-konstrukteja Hela ja SiHa kohdunkaulan syövän solulinjat. Vielä tärkeämpää on, nämä estäviä vaikutuksia miRNA-135b heikensi substituutio T: n C alleeli rs1131445. Nämä tulokset tukevat hypoteesia, että vaihtelut oletetun miRNA kohdesivustoluetteloon voi olla alttius tekijä kohdunkaulan syövistä.

IL-16 syntetisoidaan eri immuuni- ja parenkyymisolujen, mukaan lukien CD4 ja CD8 T-solut, eosinofiilit, makrofagi /dendriittisoluissa, syöttösolut, keuhkoputken epiteelin, ja fibroblastit [27]. Proteiini suoraan käännetty

IL-16

mRNA on esiaste molekyylin ja pitää pilkkoa kahteen fragmenteista kaspaasi-3. Katkaistun bioaktiiviset IL-16 vapautuu stimulaation jälkeen, jonka histamiinin tai serotoniinin ja toimii kemoattraktantti tekijä säätelemään tulehdusvastetta [27]. Äskettäin IL-16 on tunnustettu tärkeäksi edistää tekijä kasvainten [28], [29], [30], [31]. Tuotanto IL-16 korreloi puhkeamista ja etenemistä eri hematopoieettisten syöpien ja kiinteiden syöpien [28]. Konstitutiivinen IL-16 ilmentyminen on myös havaittu upregulate glioomis- [29] ja eturauhassyövän [31]. Lisäksi, sen ilmentyminen eturauhassyövässä kudos korreloi kasvaimen aggressiivisuus ja biokemialliset uusiutuminen taudin [31]. Seerumin IL-16 tason korkeus on havaittu useita syöpiä [32], [33]. Seerumin IL-16 on ennustaja kehittämisestä etäispesäkkeitä rintasyövän [32]. Lisäksi rintasyöpä, säätely eritetyn IL-16 parantaa tunkeutumisen monosyyttien kasvainkudokseen [30].

roolit IL-16 kohdunkaulan syövän patofysiologiassa pysyvät suurelta osin epäselviä. Meidän havainnot seerumin IL-16 korkeus seuraavat kohdunkaulan syövän synnyn ja merkittävä yhdistyksen

IL-16

kohdunkaulan syövän riski viittaavat siihen, että IL-16 voi säädellä kohdunkaulan syövän synnyn. Tätä hypoteesia tukee syöpää aiheuttavan pysyviä tulehdus kohdunkaulan. Immuunisolujen infiltraatio kasvaimia on kriittinen tekijä kohdunkaulan syövän synnyn [30], [34]. Makrofagi soluttautuminen in kohdunkaulan kasvaa lineaarisesti kohdunkaulan taudin etenemiseen, normaalista kohdunkaula, matala-asteista korkea grade squamous intraepiteliaalisten vaurioita, että kohdunkaulan syöpä [35]. Kasvaimeen liittyvien makrofagien edistää kasvaimen etenemistä aiheuttamalla niiden monikäyttöisyyden kasvaimen solujen lisääntymisen, tuumorisolun invaasio ja kasvaimen angiogeneesissä [36]. Lisäksi makrofagit, CD4

+ säätelijä-T-solut voivat edistää syövän synnyn rajoittamalla tehoa T-solujen immuunivasteita syöpiä [37]. Kohdunkaulan syöpä, HPV-spesifisten CD4

+ T-solujen tukahduttaa sytokiinin (IFN-γ, IL-2) tuotantoon häiritä anti-kasvain immuunivasteen [38]. IL-16 voidaan ilmaista epiteelisolujen mukaisesti tulehdustiloja [39] ja se toimii attraktantin monocyptes /makrofagit ja CD4

+ T-solujen infektio sivustolla [40]. Lisäksi erittyy IL-16 stimuloi monocyptes /makrofageja tuottamaan erilaisia ​​pro-inflammatoristen sytokiinien [41]. Näin ollen on todennäköistä, että säätely IL-16 HPV-aiheuttama tulehdus voisi edistää karsinogeneesiä, jonka hyperfunction makrofagien, HPV-spesifisten CD4

+ T-solujen tai muiden tulehdussolujen.

Tässä tarjoamme ensimmäiset todisteet että rs1131445 MIR-135b sitomiskohta

IL-16

3′-UTR, joka voi vaikuttaa IL-16-proteiinin ilmentymistä häiritsemällä miR135b tukahduttava toiminto, oli merkitsevästi liittyvä riski kohdunkaulan syövän. Toimiva määritys in vitro osoittivat, että transfektio HeLa ja SiHa-solut kuljettavat

IL-16

3′-UTR, jossa miR-135b matkivat vähentää merkittävästi lusiferaasin ilmentymistä, mikä viittaa siihen, että IL-16 voi olla suunnattu by miR-135b. Rs1131445 T muutosta C: ksi estää vuorovaikutusta miR-135b kanssa

IL-16

3′-UTR ja ylössäätelee sen ilme. Tämän mukaisesti spekulointia, in vivo analyysi paljasti, että potilaat, jotka kantavat rs1131445 C alleeli oli korkeampi seerumin IL-16 kuin ei-kantajia, mikä johti seerumin IL-16: lla potilaista verrattuna terveisiin kontrolleihin. Ylössäätelyyn miR-135b on havaittu kohdunkaulan syövän [42], joka voi estää ilmentymisen

IL-16

kohdistamalla sen 3′-UTR. Rs1131445 C-alleeli heikentää sitoutumisen miR-135b kohde ja johtaa suurempiin konstitutiivista ilmentymistä

IL-16

ja sen jälkeen vapautuminen seerumin. Koska tärkeä sääntelyn roolit IL-16 vapautumisen immuunivasteen ja seurauksena taso paikallisia tulehdusreaktioita microenvironment, henkilöt kantavat rs3134615 C-alleelin odotettaisiin olevan koholla riskiä kohdunkaulan syövän. Lopuksi todettakoon, että tiedot osoittivat, että rs1131445, toiminnallisena variantti, voi mukauttaa yksittäisten kohdunkaulasyövän riskin todennäköisesti purkamalla transkription jälkeisellä sääntely miRNA-135b on

IL-16

ilme. Vaikka tutkimuksessa käytettiin kohtuullinen määrä potilaiden ja verrokkien ja tiukkaa tilastollisia menetelmiä, emme voineet täysin sulkea pois sitä mahdollisuutta, että vääriä tuloksia ilmi meidän tapauksessamme-ohjaus yhdistyksen tutkimuksen suunnittelu johtuu sattumasta tai väestölle kerrostumista. Siksi edelleen laajamittaista replikointi jossa käytettiin eri etnisten väestöön tai perhe-analyysi, tai mahdollisille kohortti suunnittelu on tuotettava erittäin vakuuttavia tuloksia. Muita funktionaalisia analyysejä tarvitaan myös selventämään tarkka rooleja IL-16 kohdunkaulan syövän synnyssä ja etenemisessä tulevaisuudessa.

Kiitokset

Olemme syvästi arvostaa kaikki potilaat ja vapaaehtoisia osallistuville tässä tutkimuksessa.