Krooninen sairaus

tiivistelmä

Viimeaikaiset todisteet viittaavat siihen, että joitakin kiinteitä kasvaimia, kuten munasarjasyöpää, sisältävät erillisiä populaatioita kantasoluja, jotka ovat vastuussa kasvaimen aloittamista, kasvu, kemoterapia-vastus, ja toistumisen. Hippo polku on herättänyt paljon huomiota, ja jotkut tutkijat ovat keskittyneet YAP toimintojen ylläpitämiseksi stemness ja solujen erilaistumiseen. Tässä tutkimuksessa olemme onnistuneesti eristäneet munasarjasyöpä aloittamista soluja (OCICs) ja osoittivat YAP edistänyt itseuudistumisen munasarjasyövän vireille solu (OCIC) kautta alavirran koaktivaattori TEAD. YAP ja TEAD perheet olivat tarpeen säilyttää tiettyjen geenien ekspressiota, jotka voivat olla mukana OCICs ”stemness ja chemoresistance. Yhdessä meidän data on ensin ilmoitettava, että YAP /TEAD koaktivaattoria säännelty munasarjasyövän aloittanut solun pluripotenttisuus ja Chemo-vastus. Se ehdottanut uutta mekanismia huumeiden vastustuskykyä syövän kantasolujen että Hippo-YAP signaalireitin voisi toimia terapeuttisina kohteina munasarjasyövän hoitoon Kliinisissä.

Citation: Xia Y, Zhang YL, Yu C, Chang T Fan HY (2014) YAP /TEAD koaktivaattoria säädelty pluripotenttisuus ja Chemoresistance munasarjasyövässä käynnistämä Cells. PLoS ONE 9 (11): e109575. doi: 10,1371 /journal.pone.0109575

Editor: Hong Wanjin, Institute of Molecular and Cell Biology, Biopol’ia®, Yhdysvallat

vastaanotettu: 21 kesäkuu 2014; Hyväksytty: 1. syyskuuta 2014; Julkaistu 4 marraskuuta 2014

Copyright: © 2014 Xia et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat National Natural Science Foundation of China (81172473, 31371449), National Basic Research Program of China (2011CB944504, 2012CB944403 ), ja tieteellinen perustutkimus rahoitus Zhejiangin yliopistossa (2011QN81001). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Munasarjasyöpä on kaikkein vaarallisin Gynekologiasairauksien maligniteettien lähinnä puutteen vuoksi varhaisen havaitsemisen, mikä johtaa useimmilla potilailla on diagnosoitu pitkälle edenneessä tämän taudin [1], [2]. Mekanismit syöpälääkkeen kestävyys ja uusiutumisen jää epävarmaksi. Viimeaikaiset todisteet viittaavat siihen, että joitakin kiinteitä kasvaimia, mukaan lukien munasarjasyöpä, sisältävät erillisiä populaatiot kantasoluja, jotka ovat vastuussa kasvaimen aloittamista, kasvua, Chemo-resistenssi, ja toistumisen [3] – [6]. On joidenkin mielestä kemoterapia-vastus munasarjasyövän johtuu pääasiassa olemassaolosta pienten populaatioiden syövän kantasolujen (CSCS).

Jotkut tutkimukset kertoivat, että CSCS järjestetty kiinnittämisestä riippumattomana, pallomaisia ​​rakenteita [7] . Samanlaisia ​​rakenteita havaittiin munasarjasyövän potilaan askites-solujen, joka sisälsi pienen alapopulaatio kasvaimen lisäys soluihin, jotka kykenivät järjestää osaksi pallosia. On tunnettua, että korkeat ekspressiotasot kantasolujen merkkiaineita, kuten MMA–4, SOX-2, Nanog, ja Notch-1, voidaan havaita CSCS [8]. Jotkut solunpintamarkkereiden ovat myös erittäin ilmaistaan ​​CSCS, kuten CD44, CD117, ja CD133 [9], [10]. On yleisesti hyväksytty, että syöpäsolut, joilla on korkea CD44 ja CD117 ilmaisun tullut erittäin tuumorigeenisemmiksi ja voivat palauttamaan niiden alkuperäisestä kasvaimesta hierarkian [11].

kantasolu-allas, joka sisältää syövän kantasoluja on myös tiukasti säännelty signalointipolkujen alkaen mikro-ympäristö kantasolujen markkinarako. Näistä Hippo reitti on herättänyt paljon huomiota, ja jotkut tutkijat ovat keskittyneet YAP toimintojen ylläpitämiseksi stemness ja solujen erilaistumista [12], [13]. Kohdunulkoinen YAP lauseke estää ES-solujen erilaistumista

in vitro

ja ylläpitää kantasolujen fenotyyppi [14], [15]. Tähän mennessä, TEAD perheenjäsenet, jotka ovat YAP loppupään co-aktivaattorit, ei ole perusteellisesti tutkittu syövän kantasoluja.

Viimeaikaiset tutkimukset osoittivat, että vuorovaikutus useita reittejä, kuten Hedgehog [16], Wnt [17] – [19], MAPK [20], PI3K [21], ja Hippo reitit [22] – [24], olivat mukana kantasolujen pluripotenttisuus ja säännellä syövän syntymistä. Knockdown on Hippo koulutusjakson ydinosat vaikuttaa kudoksen homeostaasiin laakamato

Macrostomum lignano

ja aiheutti hyper-leviämisen kantasolujen [12]. LATS2, tuumorisuppressori kinaasin Hippo reitin, transkription jälkeen tukahduttaa ihmisen solujen uudelleenohjelmointi [25]. YAP on toiminnallisesti tärkeää kasvaimen tukahduttava vaikutus LKB1, vastavirtaan syöpää estävien että MAPK-reitin [26].

Tässä tutkimuksessa olemme menestyksellisesti eristetty kantasolujen palloja hiiren tuumoriksenografteja jotka olivat peräisin ihmisen munasarja- syöpäsoluja. Nämä palloja muodostavan solut erittäin tuumorigeenisemmiksi ja voisi sarjoittain levitä niiden alkuperäisestä kasvaimesta fenotyypit. Tämän perusteella parannettu, toistettavissa tuumorigeenisyyteen, me näitä kahta alalla muodostavien solujen munasarjasyövän aloittamista soluja (OCICs), mukaisesti aikaisemmin hyväksynyt terminologiaa. Tämä alaryhmästä syöpäsolujen oli myös parannettu OCICs ”stemness ja lääkeresistensseihin kautta YAP /TEAD säännellään geenit ilmaisun. Nämä tulokset tukevat viimeaikaiset havainnot, mukaan lukien oma, että YAP-TEADs määräytyy munasarjasyöpä pahanlaatuisen tasoilla ja täydensi mekanistinen oivalluksia roolit YAP ja TEADs munasarjasyöpää sairastavilla.

Materiaalit ja menetelmät

munasarjasyövän aloittamista solu (OCIC) eristämistä ja viljelyä

Voit hankkia OCICs, me ihon alle injektoidaan soluja munasarjasyövän A2780 nude-hiiriin (2 x 10

6 solua per hiiri). Sen jälkeen kasvain halkaisija oli noin 1,5 cm (yleensä neljän viikon kuluttua injektio), poistimme kasvainkudoksen, leikkaa se pieniksi paloiksi, ja pilkottiin se kollagenaasilla valmistamiseksi yksisolususpensioi-. Sitten kerättiin yhden soluja viljeltiin seerumivapaassa DMEM-F12 (Invitrogen), jota oli täydennetty 5 ug /ml insuliinia (Sigma), 20 ng /ml ihmisen rekombinantti epidermaalista kasvutekijää (EGF; Invitrogen), 10 ng /ml emäksinen fibroblastikasvutekijä (b-FGF; Invitrogen), ja 0,4% naudan seerumin albumiinia (BSA; Sigma) Ultra Low lisäyksessä levyt (Corning). OCICs ja ohjaus solut kaikki erotettu muista soluista käyttäen jatkuvaa tiheysgradienttisentrifugoinnilla. Kontrollisoluihin saatiin myös injektoimalla A2780-soluja nude-hiiriin, ja erotusmenetelmiä olivat samanlaisia, joita käytetään OCICs. Ne viljeltiin Ultra Low lisäyksessä levyt (Corning) ja väliaine oli samankaltainen OCICs, paitsi että elatusaine oli 10% naudan sikiön seerumia (FBS). Kaikki media sisältyy penisilliiniä (10 yksikköä /ml) ja streptomysiiniä (10 ng /ml) ja soluja kasvatettiin kosteutetussa inkubaattorissa 37 ° C: ssa, 5% CO

2. Väliaine vaihdettiin joka 3. päivä.

Nude hiiren ksenograftimallissa

Hiiriä käsiteltiin mukaisesti NIH Guide for Care ja koe-eläinten käyttöä, hyväksymä eettinen komitea Zhejiangin yliopistossa. Hiiriä pidettiin lämpötilaltaan ohjattu huoneen kunnon pimeys-valo syklit, syötetään säännöllistä ruokavaliota, ja ylläpidetään edelleen hoidossa laboratorion Animal Unit, Zhejiangin yliopisto, Kiina. Munasarjasyöpäsolulinjassa-siirrettyjen nude-hiiriin ruiskutettiin 2 x 10

6 solua ja niitä tutkitaan päivittäin noin kolme viikkoa. Sen jälkeen, kun kasvaimen halkaisija saavutti 1,5 cm, hiiret lopetettiin käyttämällä CO

2 hengitettynä menetelmällä ennen uhrataan. Arvioida OCIC tuumorigeenisiä kykyä

in vivo

, sferoidit laskettiin, suspensoitiin uudelleen 100 ul: aan PBS: ää, ja sitten injektoidaan ihon alle vasempaan kylkiin 4-viikkoisen naaras-nude-hiiriin. Cell käytetyt pitoisuudet vaihtelivat välillä 10

4-10

5 OCIC ja kontrolliryhmissä ja hiiret jaettiin kahteen ryhmään, ja neljä hiirtä kussakin alaryhmässä. Alkaen viikon kuluttua injektion Siirto tehty hiiriä tarkkailtiin päivittäin kasvaimen massojen ja tilavuus. Hiiren oli inhimillisesti uhrattiin, kun kasvain halkaisija oli 1,5 cm. Ksenograftikasvaimissa irrotettiin, kiinnitettiin 4% paraformaldehydi, upotettiin parafiiniin ja leikattiin Leica rotaatiomikroskooppi (5 um paksuus). Leikkeitä käytettiin H Santa Cruz).

Chemotherapy aineen herkkyys määrityksissä

Cell sferoidit hajotettiin ja ympättiin 4000 solua /kuoppa 96- hyvin Ultra Low Kiinnityslevy (Corning) ja viljeltiin seerumittomalla DMEM /F12 täydennetty kasvutekijöillä. OCICs ja hallita munasarjasyövän soluja käsiteltiin sisplatiinin (20-60 uM), taksoli (2-20 uM), tai bleomysiini (20 uM TO100 uM) 48 tuntia. Viljelyn jälkeen 48 tuntia, solujen elinkelpoisuus arvioitiin käyttämällä solun laskenta kit-8 (Dojndo, Japani), mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Solujen eloonjäämisprosentti määriteltiin prosentteina elossa lääkeaineen-käsitellyissä soluissa jaettuna käsittelemättömien kontrollisolujen. Kaikki kokeet suoritettiin kolmena kappaleena.

kvantitatiivinen PCR mikrosiruanalyysi ja reaaliaikaisen RT-PCR

Human Cancer Drug Resistance RT

2 Profiler PCR array (QIAGEN # 330231) käytettiin ekspression määrittämiseksi profiilit 84 geenien mukana kemoterapia asetuksessa. Alukkeet 84 testiä geenien ja 5 siivous geenit (

B2M

,

Hprt1

,

Rpl13a

,

GAPDH

, ja

Actb

) sisällytettiin kuhunkin 96-kuoppalevylle. First Strand (QIAGEN # 330401) ja SYBR Green qPCR Mastermix (QIAGEN # 330500) olivat SABiosciences. qPCR suoritettiin valmistajan ohjeiden (SABiosciences RT

2 Profiler PCR Array System) käyttäen Bio-Rad CFX96TM Real-Time PCR-laitteella. Data-analyysi tehtiin käyttämällä online SABiosciences PCR Array data-analyysi, kuten on kuvattu valmistajan protokollan.

sferoidi soluja, eriytetty pallomainen soluja, tai primaarisen kasvaimen solut saatettiin RNaasivapaata mikroputkea. Yhteensä RNA ja käänteistranskriptio tehtiin kanssa RNAiso Plus ja Käänteinen transkriptio Mix Kit (Takala) mukaan valmistajan ohjeiden. Kokonais-RNA (0,5 ug) on ​​kääntynyt päinvastaiseksi transkriptoitiin käyttämällä cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad). Reaaliaikainen PCR reaktiot suoritettiin käyttäen CFX96 Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad). Kukin cDNA näyte testattiin kolmena kappaleena. Määrittämään geenin ilmentymisen muutoksia, △△ Ct menetelmää käytettiin laskemaan suhteellinen taitettavan muutokset normalisoinnin jälkeen on

Actb

(β-aktiini) mRNA-tasot. Geenispesifisillä RT-PCR-aluke sekvenssit esitetään taulukossa S1.

Proteiinin uutto ja Western blotting -analyysi

Solut hajotettiin solujen hajotuspuskuria (Beyotime), joka sisälsi sopivan tilavuuden proteaasiestäjäseostabletit (Roche). Yhteensä proteiinit erotettiin SDS-PAGE: lla ja siirrettiin sitten polyvinylideenifluoridia kalvon (Millipore, USA). Ei-spesifiset sitoutumiskohdat tukittiin 5% kuorittua maitoa TBST huoneenlämpötilassa 1 tunti. Sen jälkeen, kun koettimena primaarisilla vasta-aineilla, membraaneja inkuboitiin piparjuuriperoksidaasi-kytkettyä anti-kani-vasta-aineita (Cell Signaling Technologies, Danvers, MA) ja sitten pestiin. Sitoutuneet vasta-aineet visualisoitiin käyttämällä Enhanced Chemiluminescence Detection Kit (Amersham). Ensisijainen vasta-aineet olivat: anti-YAP, anti-Oct-4, anti-Notch-1, anti-aktiini, jotka kaikki olivat peräisin Cell Signaling Technology. Anti-TEAD1 (1:1000; 5178-1) vasta-aine oli peräisin Epitomics. Anti-TEAD2 (1:1000; LS-C119063) ja anti-TEAD3 (1:1000; LS-C30406) vasta-aineet olivat peräisin Lifespan Biosciences. Anti-TEAD4 (1:1000; ab97460) vasta-aine oli peräisin Abcam. Proteiinit saatiin näkyviin käyttäen Dura Super Signal Substraatti (Millipore, USA).

Tilastollinen analyysi

Kaikki määritykset tehtiin kolmena kappaleena. GraphPad Prism-ohjelmisto (GraphPad Prism, San Diego, CA) käytettiin vertaamaan ryhmään tuloksia Chi-square testejä tai ANOVA tarvittaessa. Eroja pidettiin merkittävinä varten p 0,05.

Tulokset

munasarjasyöpä aloitti aloilla on syöpä kantasolujen ominaisuuksia

Ensisijainen munasarjasyövän Solut irrotettiin ja laitettiin päällystämättömän kasvatuspulloista seerumittomassa väliaineessa, johon oli lisätty EGF, b-FGF, insuliini, ja BSA: ta. Viikon kuluttua viljelmässä, tarttumaton pallomaisia ​​klustereita soluja, havaittiin alareunassa näistä pulloista. Yksi kuukausi myöhemmin, pallojen lisääntynyt koot selvästi havaittavissa (kuvio. 1A). Yleensä 5 x 10

6~1 × 10

7 pilkottu ksenografti solut pantiin kulttuuriin, ja noin 2-4% heistä muutettiin OCICs alle seerumin riistetty olosuhteissa. Reaaliaikainen RT-PCR: llä ja Western blot tulokset osoittivat, että kantasolujen merkkiaineita MMA: iden ja 4, SOX-2, nestiinin, Notch-1, ja Nanog olivat kaikki ilmentyy voimakkaasti näiden solujen aloilla (Fig. 1 B).

V: Kuvia tarttumattomia pallomaisia ​​soluklusterien peräisin viljellyistä ensisijainen munasarjasyöpä soluja. Mittaviivat = 100 uM. B: Western blotting ja reaaliaikaisen RT-PCR-tulokset osoittavat, lisääntynyt ilmentyminen on esitetty geenien OCICs. Suhteelliset mRNA-tasot määritettiin normalisoimalla endogeenisen β-aktiini-mRNA-tasoja (käytettiin sisäisenä kontrollina) Microsoft Excel. Kunkin osoitti geenin suhteellinen transkriptio tasoa vertailunäytteen (vasen palkki kutakin graafin) asetettiin 1. Suhteellinen transkriptio tasot muita näytteitä verrattiin kontrolliin, ja taita-muutokset näkyvät kaaviossa. C-D: Havainnollinen immunofluoresenssivärjäyksen tulokset CA125, CK7, CD44, ja CD117 ilmentyminen eriytymättömissä ja eriytetty OCICs. Tumat värjättiin DAPI. Asteikko bar = 100 uM kaikkien paneelien.

Seuraavaksi tutkimme jos pallo soluilla oli kiinnittymisestä riippumaton itseuudistumisen. Me viljeltiin sferoidia 14 vuorokautta erottaa olosuhteissa (kasvutekijöiden peruutettu ja keskisuurten, joka sisälsi 10% FBS). Rakeiden solut muuttui kelluvien solujen kiinnittyneet solut, osti epiteelin morfologia, ja muodostivat CA125 ja CK-7-positiivisten symmetrinen pesäkkeet (Fig. 1 C). (CA125 ja CK-7 ovat vakiintuneita solunpintamarkkereiden eriytetyn munasarjan epiteelin syöpäsoluja.) Lisäksi, aiemmin raportoitu solun pinnan markkereita, munasarjojen epiteelin kantasolujen, CD44 ja CD117, ilmennettiin paljon suuremmilla tasoilla alalla soluissa kuin eriytetty litteä soluja (Fig.1D).

Sphere muodostavien solujen vahvasti tuumorigeenisia

tutki nämä tunnistettu palloja muodostavan solut olivat yhtä voimakkaasti tuumorigeenisia kuin muut raportoitu epiteelisyöpäsolujen aloittamista soluja. Lukumäärien alalla solujen ja ohjaus solut ihon alle ruiskutettiin paljaiden hiirien kylkiin. Kahden viikon kuluttua kasvaimet havaittiin kolmessa neljästä kateenkorvattomia nude-hiirten, jotka oli injektoitu 10

4 pallo soluja. Kuitenkin, kasvaimia ei havaittu hiirissä, jotka oli injektoitu eriytetyn munasarjojen kasvainsolujen, jopa 10

5 solua per juurtumista (Fig. 2A). Solupitoisuus kuvassa. 2A on 10

4 per hiiret ja muut pitoisuuksia tuloksia ei ole esitetty.

V: Kuvia nude-hiirten osoittaa ksenografti munasarjojen kasvaimen muodostumisen jälkeen suonensisäisten OCIC aloilla. Cell pitoisuuksia käytettiin 10

4 kussakin ryhmässä. B: H 0,01 verrattuna vastaavaan kontrolliryhmään. **, P 0,001, verrattuna vastaavaan kontrolliryhmään. B. eloonjäämislukuja OCICs tai ilman

Yap

ja

Tead1 /3/4

Knockdown hoidon jälkeen CDDP, taksolin tai bleomycin ilmoitettuina pitoisuuksina 48 tuntia. ns, ei merkittävää; *, P 0,01; **, P 0,001. C-D: Reaaliaikainen RT-PCR-tulokset osoittavat, että ilmoitetut geenit ilmennettiin OCICs korkeammalla tasolla kuin ensisijainen munasarjasyöpäsoluja (C). Osoitti geenien ekspressiotasot OCICs olivat merkitsevästi alassäädetty kanssa

Yap

ja

Tead1 /3/4

RNAi (D). *, P 0,01; **, P 0,001. E. Western blotting tulokset AKT ja Pakt tasot OCICs tai ilman

Yap /Tead1 /3/4

shRNA hoitoon.

YAP up-regulation GSK3A ja ABCB1 ilmaisun parantamiseksi OCICs ”lääkeresistenssin

määrittämiseksi lääkeaineille geenien säätelyyn OCICs, käytimme lääkeresistentti geeni microarray-analyysi OCICs ja tunnistettu useita oletetun chemoresistance liittyviä geenejä, jotka olivat erittäin ilmaistaan ​​OCICs. Taulukkomuotoinen tiivistelmä niiden mikrosirun havainnoista vastaavaan kertamuutoksia annettiin taulukossa S1. Lääke-vastus liittyvien geenien ABCB1, ABCC1 GSK3A, oli merkittävästi korkeammat ekspressiotasot OCICs kuin ensisijainen munasarjasyöpäsoluja (Fig. 5C). Tutkimme lisäksi nämä geenit säätelevät YAP-TEADs in OCICs. Näistä geeneistä, ABCB1 ja GSK3A olivat merkittävästi säädellä vähentävästi

Yap /Tead

-depleted OCICs, kun taas ABCC1 ilmentyminen ei vaikuta merkittävästi (Kuva. 5D).

Lisäksi

Gsk3a

,

GSK3b,

ja

p53

geenin ilmentymistä havaittiin myös OCICs (Fig. 5C). Näistä

Gsk3a

ja

p53

olivat huomattavan säädellä vähentävästi

Yap /Tead

-depleted OCICs ja

GSK3b

juurikaan muuttunut (Kuva. 5D ). Nämä tulokset viittaavat siihen, YAP ja TEADs parannettu OCICs huumeiden vastustus ylä- ja alaspäin säätäminen ne geenien lääkeainemetabolis- ja solujen eloonjäämistä.

PI3K signalointireitin tiedetään yhteistyötä Hippo polku säädellä solun kasvua ja lisääntymistä [28]. Fosforyloidun AKT tasot olivat korkeita OCICs ja väheni

Yap

ja /tai

Tead1 /3/4

ehtyminen. Mielenkiintoista, koko AKT tasot myös vaimentua vuonna

Yap /Tead1 /3/4

co-köyhdytettyä OCICs. Nämä tulokset osoittivat myös, että YAP /TEADs tarvittiin ylläpitämiseksi PI3K /AKT-reitin aktiivisuutta OCICs (Fig. 5E).

MAPK-reitin geenit ovat mukana YAP ylläpidetään OCIC pluripotenttisuus

tulokset qPCR mikrosiruanalyysi (taulukko S2) osoittivat, että useat geenit osallistuvat MAPK väyliä, kuten

c-Fos

,

EGFR

, ja

Igf2r

, oli korkeammat ekspressiotasot OCICs kuin ensisijainen munasarjasyöpäsoluja (Fig. 6A). Heidän ilmentyminen alassäädetty jälkeen

Yap

ja

Tead1 /3/4

shRNA hoitoon (Fig. 6B). Koska C-kesäkuu ja C-FOS muodostavat AP-1 monimutkainen ja toimivat yhdessä, tutkimme

c-Jun

geeniekspressiota näissä näytteissä ja löysi samankaltaisia ​​tuloksia (Fig. 6A-B).

EGFR

ja

Igf2r

koodaavat epidermaalisen kasvutekijän reseptorin (EGFR) ja insuliinin kaltainen kasvutekijä 2-reseptorin (IGF2R), vastaavasti. Nämä ovat tärkeitä solukalvon reseptorit, jotka lähettävät avain solunulkoisia signaaleja tumaan aktivoimalla MAP-kinaasin porrastetusti. Fosforyloitu ja aktivoitu MAP-kinaasien translokoituvat sytoplasmasta tumaan välittäjänä C-FOS ja c-Jun-transkription aktivaatio. Jotkut tutkimukset osoittivat, että YAP säädellään TEAD geenien säätää ylös

Areg

-geeni, joka on vuorovaikutuksessa EGF /TGF-alfa-reseptorin kasvun edistämiseksi normaalien epiteelisolujen [29], [30]. Näin ollen meidän tulokset viittaavat siihen, että näiden geenien MAPK reitit voivat olla mukana YAP ylläpidetään OCIC pluripotenttisuuden.

. Reaaliaikainen RT-PCR-tulokset osoittavat, että ilmoitetut geenit ilmennettiin OCICs korkeammalla tasolla kuin ensisijainen munasarjasyöpäsoluja (kontrolli). B. Reaaliaikainen RT-PCR tulokset osoittavat, että ilmoitetut geenit ”ekspressiotasot olivat merkittävästi säädellä vähentävästi OCICs kanssa

Yap Twitter /

Tead1 /3/4

RNAi.

keskustelu

Kasvaimen esiintyminen ja eteneminen ovat läheistä sukua epänormaali somaattisten solujen kehitystä ja erilaistumista. On pieniä määriä tiettyjä soluja tai niin sanotut kantasolujen kehomme mukana munasarjakudoksen jotka kykenevät uudistamaan itsensä ja suuntaava eriyttäminen [31] – [33]. Osana näiden solujen, syövän kantasoluja on viime aikoina herättänyt huomiota. Aiemmassa tutkimuksessa on osoitettu, että paljon pienempi syöpä kantasolupopulaatiosta todellakin olemassa joitakin syövän kudoksissa, joka alkoi kehittää syöpäsoluja ja liittyi kantasolujen kiinteistönhoidon, tuumorigeneesiprosessin pahanlaatuinen etäpesäke, ja toistumisen [34]. Syöpä kantasolut on useita tärkeitä ominaisuuksia, mukana klooni kykyä muodostaa Ilmaisulla kantasolujen merkkiaineiden ja erityisiä solunpintamarkkereiden, solujen erilaistumista ja morfologiset tunnistaminen, ja vahva tuumorigeenisia kapasiteettia.

Tässä tutkimuksessa olemme menestyksellisesti eristetty munasarjojen syövän kantasoluja kaltaisten solujen tuumoreita kantavaa hiirtä ja osoittaa, että nämä solut olivat syövän kantasoluja yllä kuvatut ominaisuudet. Noin yksi kuukausi kulttuurin OCICs muodostuu klustereita, jotka sisälsivät lukuisia soluja ja oli halkaisijaltaan jopa 500 um. OCICs ei vain ollut vahva klonogeeniset kyky mutta myös ilmaisi syövän kantasolujen merkkiaineiden korkealla tasolla. Solujen erilaistumisen tulokset osoittivat, että palloset meillä eristetty todellakin oli ominaisuudet munasarjan epiteelin syövän. Kasvaimia hinnat Näiden OCICs olivat merkittävästi korkeammat kuin ensisijainen munasarjasyövän solujen ja näitä tietoja ei ole esitetty kuviossa 2.

Monet signalointireittejä, kuten Wnt, PI3K, MAPK signalointireittien, ovat olleet raportoitu tiiviisti kantasolujen ja Hippo polku [18], [19]. Hippo polku on saanut paljon huomiota osalta kantasolujen sääntelyä ja kasvaimen kehittymisen mekanismien [23], [35], [36]. Jotkut tutkimukset osoittavat, että YAP geeni säädellä epiteelisolujen kantasolujen korjaus ja suoliston kantasolujen ja hematopoieettisten kantasolujen toiminto [37] – [40]. Kasvain-lisäys soluihin ja toiminta osaltaan keuhko kasvainprogression ja etäpesäkkeiden CD24-riippuvaista ja Yap /Taz riippuva reittien [41]. YAP estyi kateniinin aikana orvaskeden kantasolujen lisääntymistä ja ihosyövän kehityksen kautta Wnt signaalireitin [42]. Sen sijaan, YAP rajoitettu Wnt signaaleja aikana suoliston uudistumista. Tutkimuksessamme AKT ja MAPK fosforylaatio tasot olivat merkittävästi suurempi ekspressio ei ainoastaan ​​OCIC kasvainkudoksissa, mutta myös OCICs.

Siirtogeeninen ekspressio YAP vähentää Wnt kohdegeenin ilmentyminen ja tuloksena nopea menetys suoliston kryptissa. Lisäksi menetys YAP johti liikakasvun ja laajentamiseen suoliston kantasolujen (ISC) ja kapealla soluihin [38].