Krooninen sairaus

tiivistelmä

Mahasyöpää (GC) on korkea sairastuvuus ja kuolleisuus eri syöpiä maailmanlaajuisesti. Kehittäminen invasiivisen diagnostisten menetelmien tai teknologioiden seuranta esiintyminen GC on kiireellinen, ja etsimällä luotettavia biomarkkerit on considered.This tutkimuksen tarkoitus suoraan löytää ero biomerkkiaineissa GC kudoksista kahdella ulottuvuus-ero geelielektroforeesilla (2D-DIGE), ja edelleen vahvistaa proteiinin ilmentyminen western blotting (WB) ja immunohistokemia (IHC) .Pairs GC kudosten (mahasyövän kudosten ja viereisen normaaleissa kudoksissa) saatu leikkauksen tutkittiin 2D-DIEG.Five proteiinien wereconfirmed WB ja IHC, kuten glukoosi -regulated proteiini 78 (GRP78), glutationi-s-transferaasin pi (GSTpi), apolipoproteiini AI (ApoAI), alfa-1-antitrypsiini (A1AT) ja gastrokine-1 (GKN-1). Niistä tuloksia, GRP78, GSTpi ja A1ATwere significantlyup-säänneltyjen ja alassäädetty vastaavasti mahasyöpäpotilaista. Lisäksi GRP78 ja ApoAI korreloivat A1AT proteiinin expressions.This tutkimus olettaa nämä proteiinit voivat olla ehdokkaita luotettavien biomarkkereiden mahasyövän.

Citation: Wu JY, Cheng CC, Wang JY, Wu DC, Hsieh JS Lee SC, et ai. (2014) Discovery kasvainmarkkerien mahasyövän mukaan proteomiikka. PLoS ONE 9 (1): e84158. doi: 10,1371 /journal.pone.0084158

Editor: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 19 elokuu 2013; Hyväksytty: 12 marraskuu 2013; Julkaistu: 03 tammikuu 2014

Copyright: © 2014 Wu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustuksia NSC96-3111-P-042A-004-Y, NSC100-2314-B-037-040, ja National Science neuvosto Kiinan tasavallan. Tätä työtä tukivat myös Kaohsiung Medical University Hospital (KMUH97-7R32, KMUH98-8R33). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Vaikka theprevalence mahalaukun syövän vähenee ja vaihtelevia maantieteellisesti, se on edelleen yksi yleisimmistä syövistä Aasian maissa ja on neljänneksi yleisimmin esiintyviä syöpä (9% kaikista syövistä) maailmassa. Ikävakioitu Ilmaantuvuus (ASR) on suurempi kuin 20 100000 korkean riskin maissa, kuten Kiinassa, Japanissa ja Koreassa [1], [2], [3]. Se on myös toiseksi suurin syy syövän kuolemaan molempien sukupuolten maailmanlaajuisesti (737000 kuolemia, 9,7% kokonaismäärästä). Itä-Aasiassa, kuolleisuus on arvioitu noin 28,1 prosenttia 100000 miehillä ja 13,0 prosenttia 100000 naisilla, whilein Pohjois-Amerikassa, ne ovat noin 2,8 ja 1,5 vastaavasti [4].

Viiden vuoden eloonjäämisluvut ovat vaihdelleet 90%: sta alle 5 prosenttia pääasiassa riippuen vaiheessa diagnoosi [5], [6] .Jos mahasyövän voidaan havaita ja käsitellä alkuvaiheessa, viiden vuoden eloonjääminen rateis parempi kuin 90%; kuitenkin, siellä isno näennäinen tai erityisiä oire alkuvaiheen mahalaukun cancer.Thus, varhainen detectionof mahasyöpä becomesmore difficult.Although seerumin pepsinogeeni (PG) testssuch alhaiset PGI pitoisuus ja /tai matala PGI /II-suhde oli viittaavia seulontatestejä korkeaviskoosisessa maihin, kuten Japanissa, he weregood indikaattorit gastriitin sijasta diagnostiset markersof mahasyövän [7] – [9] .Essentially, tähystys on beenthe lupaava työkalu 2,7-4,6-kertainen havaitsemismäärä kuin barium tutkimuksissa [10]. Kuitenkin varhainen mahasyöpä diagnoosin endoscopydependson ammattitaidosta.

Joitakin ei-invasiivisia biomarkkereita diagnosointiin tai seurantaan ruoansulatuskanavan ja maksan tumorshave raportoitu. Esimerkiksi Alfafetoproteiini (AFP) on yksi kliinisesti käyttökelpoinen biomarkkereiden diagnosointiin ja seurantaan maksasolusyövän (HCC) .AFP oli kohonnut yli 20 ng /ml yhdessä tutkimuksessa yli 70%: lla HCC [11]. Mukaan päätelmien Barcelona-2000 European Association for Study of maksan (EASL) konferenssi, HCC voitaisiin diagnosoida ilman biopsyin tapauksissa, joissa AFP on yli 400 ng /ml, jossa on kyhmy on suurempi kuin 2 cm, joissa ilmenee valtimon hypervascularization Kirroosipotilaiden [12] .Incolorectal karsinooma (CRC), preoperatiivinen karsinoembryonaalisesta antigeeni (CEA) taso on erittäin merkittävä prognostisia kovariaatin ja on suositeltavaa, American Society of Clinical Oncology (ASCO) että se on testattava ennen leikkausta ja antaa varoituksia syntymässä olevista [13]. Serial kohoamista CEA osoittavat suurempi mahdollisuus toistumisen CRC. Kuitenkin, ei ole olemassa luotettavaa biomarkkereiden mahasyövän.

Siksi etsivät luotettavia biomarkkereita mahasyövän on erittäin tärkeää kliinisessä käytännössä. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli löytää luotettava proteiinia biomerkkiaineissa täsmäsi kudoksista (kasvain ja viereisten normaaleissa kudoksissa) kahdella ulottuvuus-ero geelielektroforeesilla (2D-DIGE), ja tunnistaa proteiinien matriisi laserdesorptio /ionisaatio-kuvantaminen (MALDI -IMS).

Materiaalit ja menetelmät

kudosnäytteitä

otettiin kudosnäytteet jälkeen ilmoittaa suostumukset tehtiin. Pariksi samplesincluding kasvain ja vieressä normaali tissuesfrom potilaat olivat peräisin endoskooppinen koepaloja tai surgery.The kasvaimen laadut määritettiin mukaan American Joint Commission Cancer Staging (AJCCS) järjestelmän patologit alla metyleenisininen staining.Clinical tietoa potilaiden kirjattiin, mukaan lukien ikä, sukupuoli, kasvaimen tyyppi, invaasio ja selviytymistä. Lisäksi CEA pitoisuus seerumissa mitattiin myös radioaktiivisia immunoassay lääketieteellises- diagnosis.The individualsenrolled tässä tutkimuksessa ovat antaneet kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen julkaista nämä asia details.This tutkimuksen hyväksyi Institutional Review Board of Kaohsiung Medical University Chung- Ho Memorial Hospital (KMUH-IRB-980382).

kaksi ulottuvuutta-ero geelielektroforeesilla

One (taulukko 1) pari kudosnäytteistä washomogenized (PRO 200, Bertec, Taiwan) kohtalaista tilavuus lyysipuskuria (50 mM Tris-HCl, 8M ureaa, 4% (w /v) 3 – [(3-kolamidopropyyli) dimetyyliammonio] -1-propaanisulfonaatti, ja pH 8,5). Yksittäisten 50 ug näytettä proteiinia leimattiin 400 pmol Cy3 tai Cy5 erikseen 30 minuutin ajan (Fig. 1 B). Lisäksi yhdistetty näyte seosta (100 ug) leimattiin 800 pmol CY2 sisäisenä standardina samanaikaisesti. Tämän jälkeen merkinnät reactionswere pysäytettiin inkuboimalla 1 ui 10 mM lysiiniä puskurissa 30 minuutin ajan, sitten yksi-kertainen tilavuus näytepuskuria (8 M ureaa, 20 mM ditiotreitolia, 4% (w /v) 3 – [(3 -Cholamidopropyl) dimetyyliammo-] -1-propaanisulfonaatti, 0,5% (v /v) IPG-puskuria ja muutaman bromifenolisinistä) oli added.The ensimmäisessä erotuksessa, isoelektrinen fokusointi, suoritettiin käyttäen cap lastataan geeli liuskat (7 cm, pl 4- 7) 20 ° C: ssa pitäen alle 15000voltage-tuntia (IPGphor järjestelmä, GE Healthcare). Tasapainotuksen jälkeen natriumdodekyylisulfaattia, toinen separationwas suoritetaan using4-12% natriumdodekyylisulfaattia-polyakryyliamidi geelielektroforeesilla. Geeli kuvat on hankittu (Typhoon TRIO Variable tila Imager, GE Healthcare) käyttäen 488, 532, ja 633 nm laserit kanssa emissiosuotimen 520, 532, ja 670 nm vastaavasti. Kaikki kuvat analysoitiin DeCyder 6,5 ohjelmisto (GE Healthcare) valitaksesi ero proteiineja, jotka wereselected riippuen onthe sijoitus alapuolella merkittävän arvon 0,05 mukaan Student

t

-testissä.

ero proteiineja esitetty geelejä. (Vasen): normaali; (Oikea): syöpä. Kolmekymmentä kuusi proteiinit poimittiin DeCyder tilasto-ohjelmalla, mutta vain viisitoista proteiinit tunnistettiin PMF tai PFF tekniikkaa. Geeli olosuhteet: pl: 4-7; geeli: 4-12% kantavassa analyyttiset vaihteluvälit olivat pl 4-7 forisoelectric kohdentaminen ja 4%: sta 12% kaltevuus geeli natriumdodekyylisulfaatti sulfaatti- polyakryyliamidi geelielektroforeesi.

In-geeli tryptinen digestio

geelit värjättiin Sybro Ruby (sigma) myöhemmin väri poistettiin 10% metanolia ja 7% etikkahappoa deionisoitua vettä tarkalleen 30 min.The näkyvän täplät geeleillä UV transilluminaattoria (Spectroline) oli käytetyt kaivaa mielenkiintoinen proteiinien manuaalisesti. Nämä Geelihiukkaset pestiin 100 ul: aan 25 mM ammoniumbikarbonaattia 50% asetonitriiliä 15 minuutin ajan, ja pestiin sitten 200 ul: aan 25 mM ammoniumbikarbonaattia deionisoidussa vedessä 15 minuutin ajan kaksi kertaa, ja sen jälkeen, niin lisättiin asetonitriiliä kutistaa geelipartikkelit. Kuivauksen jälkeen alas, yksittäiset geelin particleswereincubated 3 ui 20 ng /gl trypsiiniä 25 mM ammoniumbikarbonaattia 4 ° C: ssa 1 tunnin ajan ja sen jälkeen 3 ui 25 mM ammoniumbikarbonaattia lisättiin proteiinien sulattamisen 56 ° C: ssa 1 tunti. Jälkeen In-gel ruoansulatusta, 2 ui 100% asetonitriiliä, 1% trifluorietikkahapolla lisättiin liuosten ja sitten näytteet sonikoitiin 10 min vapauttaa peptidien geelihiukkasia.

Massaspektrometrinen analyysi proteiinien tunnistamiseen

Jokainen proteiiniliuos pilkottu trypsiinillä sekoitettiin 01:01 10 mg /mlof α-syano-4-hydroksikanelihappoa liuotettiin 50% asetonitriili /0,1% trifluorietikkahappoa, ja täpliksi AnchorChip MALDI kohde (Bruker Daltonics GmbH , Bremen, Saksa), kunnes kuiva. Peptidit analysoitiin MALDI-TOF /TOF UltraflexIII (Bruker Daltonics) alle 20 KV positiivista malli, ja huippu data siirrettiin FlexAnalysis ™ 3.0 -ohjelmiston (Bruker Daltonics) pitkälle laskennan ja kalibrointia. MASCOT 2.2 (Matrix Science) käytettiin vastaamaan peptidien NCBI tai Swiss-Prot-tietokannan proteiinien tunnistamiseen. Asetus on rajoitettu ihmisen taksonomian parameters.Meanwhile, karbamidometyyli kysteiiniä on käytetty kiinteä muutos, ja hapettunut metioniini muuttujana muutoksia. Todennäköisyys (P) perustui mowse pisteet lasketaan -10 x Log (P). Proteiini pistemäärä yli 56 oli merkitsevä (

p

0,05). Lisäksi yksi tärkeimmistä peptidin huiput esiintyvät spektrin käytettiin vahvistamaan samat tulokset tunnistamalla aminohapposekvenssi, jota kutsutaan peptidifragmentin sormenjäljen.

Western blotting

paria ja kudosnäytteet homogenisoitiin (Pro 200, Bertec) on hajotuspuskuria (10 mM natriumfosfaatti, 0,9% natriumkloridia, 1% triton-X100, pH 7,4), ja inkuboitiin ravistellen 4 ° C: ssa 1 tunnin ajan. Jälkeen päästä eroon saostunut pellettien nopeiden sentrifugoimalla (10000 rpm, 5 minuuttia), pipetoitavat supernatantit lisättiin näyte puskuriin (10 mM natriumfosfaatti, 0,9% natriumkloridia, 8 M ureaa, 30% glyserolia, 2 % natriumdodekyylisulfaattia, 0,1% β-merkaptoetanolia ja 0,1% bromifenolisinistä), jonka 1: 1 suhteen ja keitettiin 100 ° C: ssa 5 min proteiinin denature.Approximately 20 ug kutakin näytettä proteiinia ladattiin yksittäisten verkkoon 4- 12% natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-PAGE, Invitrogen). Iblot kuiva blottauksella järjestelmä (Invitrogen), jota käytetään muuntamaan proteiinien polyvinylideenifluoridia (PVDF) kalvo, joka perustuu ionin virtaa yhdessä kuparin elektrodi. Jälkeen käyttäen 0,5% maitoa imupaperilla PVDF-kalvolle 30 min, theindividual primaarinen vasta-aine (2 ug /ml) lisättiin inkubaation 2 tuntia ravistamalla. Johdonmukaisesti sekundääriset vasta-aineet on konjugoitu piparjuuriperoksidaasiin (HRP) (2 ug /ml) inkuboitiin 1 tunti ravistellen peräkkäin. Välillä inkuboimalla prosesseja, repeatedlywashings PBS-puskurissa (10 mM natriumfosfaattia, pH 7,4, ja 0,9% natriumkloridia) weredone. ECL tunnistusjärjestelmä (Millipore) suoritettiin, ja kuvat hankittiin Imaging System (Gel Doc XR System, Bio-Rad) riippuen maltillinen tutkia ajan.

immunohistokemia

immunohistokemia performedusing standardi peroksidaasiin perustuva värjäysmenetelmällä. Kudosnäytteet leikattiin kryostaatilla (HM525, Microm) .Fresh kudosnäytteiden (10 um) on lysiinillä päällystettyihin liukuu olivat driedon lämmittimen 37 ° C: ssa ja peräkkäin upotettiin peräkkäin 75%, 95% ja 100% etanolissa 1 minuutti proteiinin kiinnitystä. Lyhyesti, endogeeninen peroksidaasiaktiivisuus pysäytettiin 3% vetyperoksidia 10 minuuttia. Antigeeni episodi oli altistunut upottamalla kudos luistin 10 mM sitraattihappoa sisällä kiehuvassa vedessä 25 minuuttia. Peräkkäiset inkubaatioista yksittäisten ensisijainen antibodyandthe HRP-konjugoidun sekundaarisen vasta tehtiin yksittäisten 1 tunti ravistellen. AEC-kittiä (Sigma) käytettiin värjäämään kudoksiin, ja toiminta seuraa liitteenä käsikirja. Lyhyesti, themixed liuos, jossa oli 2,5 M asetaattipuskuria, AEC kromogeeninen (3-amino-9ethylcarbazole) ja 3% vetyperoksidia wasperformed nopeasti ja peräkkäin inkuboitiin kudoksen slides.The kuvan värjäystä dioja havaittiin ja hankitusta mikroskopia (BX51, Olympus) .

tilastot analyysi

tilastollinen ohjelmisto SPSS suoritettiin laskea merkitys mukaan Student

t

-testin ja korrelaatio GRP78, GSTpi, A1AT, ApoAI ja GKN- 1. Significantdifference (

p

arvo) oli hyväksyttävissä, koska alle 0,5.

Tulokset

biomarkkerit löytö perustuu 2D-DIGE

Mahasyöpää kudosta analysoitiin 2D-DIGE ja verrattuna pariksi normaaleissa kudoksissa etsiä oletetun biomarkkerit mahasyövän. Erot proteinexpressions suurempi kuin 1,2 kertainen olivat otaksuttu ehdokkaita. Geeli kuva oli esittely proteiinien sijainti merkitty cy-väriaine (Fig. 1). Viisitoista proteiineja voitiin tunnistaa, mukaan lukien glukoosin säätelemä proteiini 78 (GRP78) lämpösokkipromoottoreita sukulais 71 kDa: n proteiinin (HSC70), proteiini disulfidi-isomeraasia A3 (PDIA3), mitokondrioiden ATP syntaasi alayksikön beta (ATPB), proteiini-isomeraasin kaltainen proteiini 5 (PDIRP5), gastriksiini, glutationi-s-transferaasin pi (GSTpi), apolipoproteiini AI (ApoAI), alfa-1 antitrypsiini (A1AT) ja gastrokine-1 (GKN-1) .Vuonna 3 monistaa toistoa, jotkut samanlaisia ​​proteiineja löydettiin eri paikoissa geeliä ja jätetty alla epäilyksen posttranslationaalisten muutos. Lopuksi viisi proteiineja kuten GRP78, GSTpi, ApoAI, A1AT ja GKN-1 vahvistettiin ja edelleen validoitu otaksuttu markkereita mahasyövän. Yksityiskohtaisia ​​vertailuja stereopicture ja laajentuneen geeli imageswere esitetty kuviossa 2.

Valittu mahdollisia proteiineja esitettiin stereopictures ja laajentuneen vaaka geelin kuvia. Nämä proteiinit valittiin mukaan merkittävää eroa alle 0,05 (

p

0,05). Lisäksi monistaa tunnistaminen ATPB, PDIRP5, ApoAI ja GSTpi viereisillä paikkoja ilmoitti, että heillä oli erilainen muutos.

Western blotting ja tilastollinen analyysi

Twelvepairs kudosten mahalaukun syöpäpotilaita käytettiin validointi ryhmässä. Neljä potilasta oli vaihe I, 3 potilasta oli vaihe II, 2 potilasta oli vaiheen III, ja 3 potilaat olivat vaiheessa IV. Kliiniset tiedot taulukossa 1.Five proteiinien (GRP78, GSTpi, ApoAI, A1AT ja GKN-1) vahvistettiin Western blotting.Amongthe tuloksia, GRP78 ja GSTpiwere significantlyup-säänneltyjä, kun taas A1AT oli merkitsevästi alassäädetty mahalaukun syöpä kudoksiin verrattuna normaaleihin kudoksiin (Fig. 3) .For GSTpi, nineout 12 potilasta (75%) oli säädelty proteiini ilmaukset tumortissues; Toisaalta, 10 potilasta 12 (83%) on alassäädetty A1AT proteiini expression.Regarding suhdetta proteiinin ilmaisuja ja kliinisen vaiheen, GRP78 on suuntaus kasvattaa vaiheesta I vaiheeseen IValthough ole tilastollista merkitystä löytyisi. Ilmaus GSTpi ja A1AT ei korreloi kliinisten vaiheiden (kuvio 4).

(A) Western-blottauksella, 12 pariksi ja mahalaukun syövän normaaleissa kudoksissa käytettiin validoimiseksi mahdollisia proteiineja, mukaan lukien GRP78, GSTpi, A1AT, ApoAI ja GKN-1. (B) toinen GSTpi ja GRP78 ylittyivät huomattavasti ilmaistu mahasyövässä tissues.Down-ilmauksia A1AT, ApoAI ja GKN-1 havaittiin. **

p

0,01. *

p

0,05.

Vaikka GRP78 ja GSTpi korotettiin eri vaiheissa mahasyövän, ei tilastollista merkittävyyttä ei löytynyt. Suuntaus on korotuksen kanssa kliinisessä vaiheessa löydettiin GRP78.

Mielenkiintoista, proteiini ilmauksia GRP78 näiden parien kudosten vastasivat edellä ApoAI (r

2: -0,61,

p

0,01) ja A1AT (r

2: -0,49,

p

0,05) (Fig. 5). Samaan aikaan proteiinin ilmentymistä ApoAI oli korreloivat A1AT (r

2: 0,62,

p

0,01, Fig. 4). Tulokset osoittivat, että nämä kolmen oletetun biomarkkereita, GRP78, ApoAI ja A1AT, liittyi keskenään proteiiniekspressiossa. On sijaan GSTpi ja GKN-1 näytti olevan riippumaton proteiinin ilmentymisen.

GRP78 näissä 12 paria kudosten ilmaistiin Vastaavuussuhteessa kanssa, ApoAI (r2: -0,61) ja A1AT (r2: – 0,49) erikseen. Samaan aikaan ApoAI ilmaistiin Vastaavuussuhteessa kanssa, A1AT (r2: 0,62). Kuitenkin GSTpi ja GKN-1 näytti olevan riippumaton. ** P 0,01. * P 0,05.

immunohistokemia

DespiteGRP78, GSTpi ja A1AT on statisticallydifferent merkittävästi, ilmaisulliset suuntaus muiden proteiinien oli sama kuin havainto, että 2D-DIGE kokeessa. Immunohistokemiaa käytettiin varmentamaan hankitut tulokset western blotting kokeilu. GRP78, GSTpi, ApoAI, GKN-1, ja A1AT validoitu mahasyövän kudoksissa ja ei-syöpä kudoksiin kuten kuvassa 6.Physalis proteiinia ilmaisuja paria kudoksissa vastasivat havainnon Länsi-blottauksella. Erityisesti säädelty proteiineja, GRP78 ja GSTpi, olivat nimenomaan sijaitsee mahalaukun adenokarsinoomaa soluja. Toisaalta, alas-säädellä proteiineja kuten ApoAI ja A1AT olivat läsnä normaalissa maharauhanen. Toinen alassäädetty proteiini, GKN-1, näkyi, joka ilmestyi limakalvon mahalaukun kudoksesta.

sääteli proteiineja, GRP78 ja GSTpi, olivat nimenomaan sijaitsee mahalaukun adenokarsinoomaa soluja. Päinvastoin, alas-säädellä proteiineja kuten ApoAI ja A1AT olivat läsnä normaalissa maharauhanen. Toinen alassäädetty proteiini, GKN-1, osoitettiin näkyvän limakalvon mahalaukun kudoksesta.

Keskustelu

On tärkeää saada biomarkkereiden diagnosointiin ja seurantaan mahalaukun cancer.However antigeeni, karsinoembryonaalinen antigeeni (CEA), hiilihydraatti-antigeeni (CA19-9) ja CA72-4 joita ei yleisesti käytetty kliinisissä practices.The esillä olevassa tutkimuksessa, jonka tarkoituksena paljastaa oletetun biomarkkereiden vertaamalla ero proteiinien välillä täsmäsi syövän ja normaaleissa kudoksissa .Afterward, näiden oletettujen biomarkkereita tutkittiin validointi group.Five mahdollisia proteiineja, mukaan lukien GRP78, GSTpi, ApoAI, A1AT ja GKN-1, tunnistettiin kaksi dimensiondifference geelielektroforeesi (2D-DIGE), andmatrix laserdesorptio /ionisaatio -imaging (MALDI-IMS) ja fatherlyvalidated 12 kliinisessä patients.Among viisi mahdollisia proteiineja, GRP78 ja GSTpi olivat merkittävästi säädelty ja erityisesti parannettu syöpäsoluissa western-blottauksella ja immunohistochemistry.In sijaan A1AT wassignificantlydown-säännelty ja oli positiivinen ja negatiivinen korrelaatio ilmaus ApoAI ja GRP78.

Monet otaksuttu biomarkkerit mahasyövän on ehdotettu aikaisemmissa studies.High tasoilla GSTpi vuonna Mahasyöpien osoitettiin [14] kantavassa ilmauksia GSTpi olivat myös korreloi mahasyöpä stagewhere koholla GSTpi werefound 50% vaiheissa I tai II, ja 80% vaiheiden III tai IV mahasyöpäpotilaista [15] .A edellinen tutkimus osoitti, että GSTpi-positiiviset potilaat olivat vähemmän viiden vuoden tautivapaan elinajan hinnat (49,0%) verrattuna GSTpi-negatiivisten potilaiden (75,0%), osoitti GSTpi oli merkki prognoosi- merkitystä [16] .Vuonna esillä olevassa tutkimuksessa, yli-ilmentyminen GSTpi 75% mahalaukun syövän potilaiden oli myös demonstrated.However laajuus yli-ilmentyminen GSTpi ei korreloi kliinisten vaiheiden (Fig. 4).

Yli-expressionof GRP78 proteiini myös raportoitu oletetun biomarkkereiden ruoansulatuskanavan cancers.GRP78 yli-ilmaisuja voidaan havaita ja niihin liittyvien lavalle ja ennusteen ruokatorven adenokarsinooma [17], ja peräsuolen syöpä [ ,,,0],18]. Se on yksi solun stressivasteen proteiineja, joilla on tärkeä rooli kasvaimen biologiaan, kuten apoptoosin säätelyyn ja säilyttää solunsisäisen kalsiumin tasapaino [19], [20]. On myös raportoitu, että yli-ilmaukset GRP78 immunohistokemiallisesti mahasyövän yksilöiden ja metastasoitunut imusolmukkeet korreloi käänteisesti elossaololuku [21]. Kuitenkin menetelmiä käytetään esillä olevassa tutkimuksessa olivat erilaiset Zhang raportti. Tutkimme ehdokas proteiinien 2D-DIGE erottamiseksi ero proteiinien ja MALDI-TOF /TOF tunnistaa peptidejä täsmäsi syövän ja normaali tissues.In Tutkimuksessamme yliekspressio GRP78 lisättiin ja oli suuntaus korrelaatio kliinisen vaiheissa, vaikka ei tilastollista merkittävyyttä johtuu rajoittamisesta asianumeroille.

Down-regulation proteiinien voi olla tärkeä rooli syövän synnyssä. Esillä olevassa tutkimuksessa, kolme proteiinia, ApoAI, A1AT, ja GKN-1, oli alassäädetty normaalissa mahalaukun kudoksissa verrattuna mahasyövän tissues.The suhde ApoAI ja mahasyövän ei ole raportoitu. ApoAI on yksi tärkeimmistä proteiinirakenneosissa HDL-kolesterolin (HDL-C), ja sillä on ensisijainen rooli ylläpitää kolesterolin kuljetukseen ja valtimoa vaikutus HDL-C [22] .Apolipoproteins kuten ApoAI voi moduloida lipopolysakkaridin inducedinflammatory vasteen sepsis [23]. Esillä olevassa tutkimuksessa, on mahdollista, että vähentynyt ApoAI on heijastus krooninen tulehdus, joka on syy syövän. Lisätutkimukset ovat tarpeen osoittaa välistä yhteyttä laskua ApoAI ja dys-sääntelyn tulehduksen.

Vaikka lisääntynyt A1AT vuonna alkuvaiheissa ja korrelaatio edistymistä mahasyövän vaiheissa havaittiin Bernacka K. et al. [ ,,,0],24], rajoitetusti tietoa voisi valaista kasvoi A1AT kuin tuumorimarkkeri mahasyövän. Sen sijaan väheni A1AT mahasyövän todettiin tutkimuksessamme. A1AT jolla on anti-inflammatorista aktiivisuutta in vitro, ja edistää tukahduttaminen proinflammatoristen sytokiinin synteesiä, kuten interleukiini-8, TNF-alfa, interleukiini-1 beta [25]. On raportoitu, että isäntä geneettiset tekijät, jotka vaikuttavat interleukiini-1-beeta voi määritellä sairausfenotyyppi Helikobakteeri-infektion [26]. On mahdollista, että vähentynyt A1AT estää tulehdusta edistävä sytokiini, vaimentava vaikutus. [25]. Tutkimuksessamme korrelaatio laski A1AT ja ApoA1 oletettiin indikaattorina kroonisen tulehduksen.

Gastrokine-1 (GKN-1), jolla jotkut mitogeenisiä vaikutuksia suolen epiteelisolujen (IEC-6), väheni -regulated mahasyövän kudoksessa verrattuna vastaaviin normaaleihin mahan limakalvon tutkimuksessamme. Mahalaukun limakalvon palauttaminen loukkaantumisen jälkeen voi vaikeutua, jos GKN-1 säätyy alas [27], [28] .Se on raportoitu, että GKN1 liittyy apoptoottisia signaaleja, jotka ovat tärkeitä kudosten korjaamiseen aikana neoplastisen transformaation [29]. Aineisto Tämän tutkimuksen ehdottaa myös laski GKN-1 löytyvät mahasyövässä kudoksissa.

Proteomiikka perustuvaa menetelmää tunnistaa apoptoosin liittyviin proteiineihin mahasyövässä aiemmin raportoineet Bai Z. et al [ ,,,0],30] .Nevertheless, differentiaalikaavojen proteiinit tässä tutkimuksessa eivät olleet identtisiä Bai n raportissa esittänyt ENO1, GRP78, GRP94, PPIA, PRDX1 ja PTEN mahdollisina mahasyövän biomarkers.Regarding kehittämiseen mahalaukun syövän, se on monimutkainen prosessi, ja näyttelyissä vuorovaikutuksia isäntä, ympäristön, ja bakteerit, kuten

Helicobacter pylori

.A yhden tekijän tai proteiinin ei kyetä ennustamaan esiintyminen ja etenemistä mahasyövän. Esillä olevassa tutkimuksessa, viisi mahdollisia proteiineja havaittiin ilmentyä erilailla täsmäsi kudoksissa (kasvain ja viereisen normaalin kudoksen). Kaksi niistä (GRP78 ja GSTpi) kasvoi säädelty ja muut (ApoAI, A1AT, ja GKN-1) on alassäädetty. Lisätutkimukset ovat tarpeen selvittää theseproteins asbiomarkers havaitsemiseksi mahasyövän.