Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Virtsa biomarkkereita virtsarakon syövän havaitsemiseen rajoittavat riittämätön herkkyys tai spesifisyys. Täällä diagnoositietoja tarkkuutta Mcm5, uusi solusyklin biomarkkereiden poikkeavan kasvun, yksin ja yhdessä NMP22.

Methods

1677 peräkkäistä potilasta tutkittavana virtsateiden maligniteetin rekrytoitiin prospektiivinen sokaissut havainnointitutkimuksen. Kaikki potilaat kävivät ultraääni, laskimoon urography, kystoskopia, virtsan kulttuuri ja cytologic analyysi. -fluorometrinen Määritystä käytettiin mittaamaan Mcm5 tasot virtsassa solussa sedimenteissä. NMP22 virtsan tasot määritettiin FDA-hyväksytty NMP22® Test Kit.

Tulokset

Sukupuoli- ja virtsateiden syövät todettiin 210/1564 (13%) potilailla, joilla on Mcm5 tuloksen ja 195/1396 (14%) potilailla, joilla on NMP22 tuloksen. Tällä määritys cut-piste, jossa herkkyys ja tarkkuus olivat samat, Mcm5 testi havaita primääristen ja uusiutuvien virtsarakon syöpiä 69% herkkyys (95% luottamusväli = 62-75%) ja 93% negatiivinen ennustearvo (95% CI = 92- 95%). Viljelyala vastaanotin toimii ominaiskäyrä Mcm5 oli 0,75 (95% CI = 0,71-0,79) ja 0,72 (95% CI = 0,67-0,77) varten NMP22. Tärkeää on, Mcm5 yhdistettynä NMP22 tunnistettu 95% (79/83; 95% CI = 88-99%) mahdollisesti hengenvaarallisia diagnooseja (esim asteen 3 tai karsinooma in situ tai vaiheeseen ≥pT1) korkea spesifisyys (72%, 95% CI = 69-74%).

Johtopäätökset

Mcm5 immunomääritys on ei-invasiivisia testi tunnistaa potilaat, joilla urothelial syöpiä samanlaisia ​​tarkkuudella FDA-hyväksytty NMP22 ELISA Test Kit. Yhdistelmä Mcm5 plus NMP22 parantaa havaitsemista UCC ja tunnistaa 95% kliinisesti merkittävä sairaus. Trials of kaupallisesti kehitetty Mcm5 määritys sopii loppukäyttäjälle laboratorion rinnalla NMP22 on arvioitava niiden mahdolliset kliiniset hyödyllisyys parantamisessa diagnostiikkaan ja valvontaan hoitoketjujen.

Citation: Kelly JD, Dudderidge TJ, Wollenschlaeger A, Okoturo O, Burling K, Tulloch F, et ai. (2012) Virtsarakon syövän diagnoosi ja tunnistaminen oli kliinisesti merkitsevä Disease yhdistetyn Virtsa havaitseminen Mcm5 ja Nuclear Matrix Protein 22. PLoS ONE 7 (7): e40305. doi: 10,1371 /journal.pone.0040305

Editor: Clive Shiff, Johns Hopkins University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 23 helmikuu 2012; Hyväksytty 4. kesäkuuta 2012 Julkaistu: 09 heinäkuu 2012

Copyright: © 2012 Kelly et ai. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Cancer Research UK (lupanumeroon C428 /A3441 KS ja GHW). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

uroteelisyövässä (UCC) virtsarakon on 4th yleisin syöpä Yhdysvalloissa, arviolta 73510 uutta tapausta ja 14880 kuolemantapaukset virtsarakon syöpään vuonna 2012 [1]. Kystoskopia on tavanomaista virtsarakkokasvain havaitseminen, mutta se on invasiivinen, epämiellyttävä ja kallis menettely, joka johtaa virtsatietulehdus jopa 5%: ssa tapauksista [2]. Detection virtsarakon syövän ei-invasiivisia tuumorimarkkeri testi voisi mahdollisesti parantaa hallintaa taudin lisäämällä tarkkuutta ja vähentää sairastuvuutta liittyy nykyiseen diagnostisten ja valvonta polkuja. Kautta harventamisesta cystoscopies parannuksia potilaan elämänlaatua ja kustannustehokkuutta voidaan nähdä.

Virtsa biomarkkereiden havaitsemiseksi virtsarakon syövän lupaavia ja samalla lukuisia markkereita on viranomaishyväksynnän yksikään on hyväksytty standardi diagnostinen menettely [3]. Virtsa sytologia on yleisimmin käytetty, koska korkeat spesifisyys vaikka huono herkkyys. Uudet teknologiat ja biomarkkereita on kuitenkin mahdollista parantaa diagnostista tarkkuutta, jossa tehokkain diagnostinen ja valvonta strategioita mennessä hyödyntäen fotodynaaminen cystoscopy ja biomarkkerit [4]. Nuclear matriksiproteiini 22 (NMP22), esimerkiksi, on ydinvoima mitoottisen joka säätelee kromatidin ja tytär solujen erottaminen [5], [6] ja on noussut yhdeksi lupaavista virtsan biomarkkereita UCC [3]. FDA-hyväksytty, laboratorio-pohjainen kvantitatiivinen NMP22® Test Kit immunomääritys (Matritech, Freiburg, Saksa) ja laadullinen point-of-care -testi, NMP22® BladderChek® (Matritech; ® symboli pois jäljempänä), ovat nyt saatavilla kliiniseen käyttöön . Vaikka virtsan NMP22 tasot ovat kohonneet virtsarakon syöpä, kuolleita ja kuolevia urothelial solujen monet ei-pahanlaatuisten ja tulehduksellisten tilojen voi myös vapauttaa NMP22, mikä vähentää spesifisyys. Lisäksi laaja merkitty alue testissä suorituskyky on raportoitu eri tutkimusten avulla NMP22, jossa herkkyys vaihtelee 33%: sta 100% ja spesifisyys 40%: sta 93% [4].

rajoitettu tarkkuus käytettävissä biomarkkerit sekä niiden kuluja, on sen vuoksi rajoitettu käyttöönotto virtsan biomarkkereiden osaksi rutiinia kliinistä käytäntöä. Siksi on edelleen kiireellinen tarve tunnistaa uusia biomarkkereita, jotka saattavat parantaa diagnostista tarkkuutta, joko käytettynä yksinään tai yhdessä nykyisten biomerkkiainetestejä [7].

DNA: n kahdentuminen aloittamisesta koneet edustaa lopullista ja kriittinen vaihe kasvu ohjaus alavirtaan monimutkaisia ​​tarpeeton onkogeenisten signalointireittejä ja on siksi potentiaalisesti houkutteleva diagnostinen ja terapeuttinen kohde [8]. Proteiinit minikro- huolto (Mcm) perhe (Mcm2-7, joita kutsutaan yhteisesti MCM), koota osaksi heksameeristen komplekseja, jotka ovat DNA helikaasiaktiivisuutta, joka on välttämätön aloittamiseksi DNA-synteesin [9], [10]. In epiteelipäällystetty elinjärjestelmien MCM valkuaisesta säädeltyyn ja yli-ilmentynyt hyperproliferatiivisissa dysplastic (preinvasive) ja pahanlaatuinen todetaan, [8], [11] – [13]. Itse aste ilmentymisen MCM2 ja Mcm5 on osoitettu ennustaa toistumisen ja kuolemaan potilailla, joilla on virtsarakon syöpä [14] – [16]. Mcm2-7 proteiinin ilmentyminen normaaliepiteelissä rajoittuu pohjapinta varsi /kauttakulku osastoja ja on poissa pintakerroksia kuin solut omaksumaan täysin eriytetty fenotyyppi. In premaligni /dysplastic epiteelisolujen vauriot on laajennus proliferatiivisen osaston kytketty pidätettiin erilaistumista, jolloin ulkonäkö pyöräily MCM-positiivisten solujen pintakerroksiin. Havaitseminen kuorinnan MCM-positiivisten solujen kliinisissä näytteissä tarjoaa siksi mahdollisesti herkkä menetelmä havaitsemiseksi preinvasive ja invasiivisia syöpiä [8], [17], [18]. In proof-of-periaate tutkimus me aikaisemmin osoittaneet, että kohonnut Mcm5 tasot soluissa virtsassa sedimenteissä ennustaa läsnä virtsarakon syöpä [19].

Tämän tutkimuksen tavoitteena oli arvioida Mcm5 biomarkkerina toteamiseen virtsarakon syövän yksin verrattuna ja yhdistettynä NMP22. Mahdollisen sokaissut havainnoiva tutkimus hyödyntää -fluorometrinen määritys mittaamaan Mcm5 ja FDA-hyväksytty NMP22 Test Kit.

Methods

Tutkimus aiheet

Yhden mitätöity virtsanäytteiden saatiin 1677 potilaat osallistuvat yhden luukun diagnostinen klinikan tutkinnan hematuria. Diagnoosi perustettiin seuraava arvio kystoskopian, ylempi virtsatietulehdusten kuvantaminen, virtsan sytologia ja kulttuuriin. Histologinen vahvistus virtsarakon syövän myöhemmässä trans-virtsaputken resektio oli vertailuvakiona ja kaikkia potilaita seurattiin ajan kuuden kuukauden ajan alkuperäisen tutkinnan. Potilailla, joilla on ollut äskettäin urogenitaalisia instrumentointi tai leikkaus kahden edeltävän viikon ajan ulkopuolelle. Potilailla, joilla on ollut samanaikaista maligniteetti tai muu maligniteetti viiden vuoden aikana ennen tutkimusta oli myös suljettu pois. Näillä poikkeuksin kaikkia peräkkäisiä potilaita hoitava tutkittavaksi tutkimusjakson aikana lähestyttiin rekrytointiin mukaan tutkimukseen.

virtsanäytteet jaettiin tasapuolisesti: (i) virtsa-analyysi ja mikrobiologiset kulttuuri, (ii) Sytologisten analyysi, (iii ) Mcm5 mittaus- ja (iv) NMP22 mittaus. Potilaille tehtiin ylempi virtsatietulehdusten kuvantamisen kuten ultraääni ja laskimoon urografiaa. Miespotilaat tutkittiin eturauhasen läsnäolon kliinisesti havaittavissa eturauhasen sairaus. Eturauhasen-antigeenin (PSA) testaus ole valtuuksia ja PSA-tasot tarkastettiin suhteessa tapausten joista syöpä epäiltiin tai joka pyysi testiä. Jos PSA-tasot olivat koholla potilaat saivat trans-peräsuolen ultraääni ohjattu ydin koepaloja eturauhasen. Tyypillisesti kaikki hematuria testit kestää yli 24 tuntia ja kahden viikon kuluessa kaikille potilaille. Kliiniset tiedot tallennetaan tietokantaan takautuvasti ennen Mcm5 ja NMP22 analyysi. Viittaus standardi havaitsemiseksi virtsarakon syöpä oli patologinen vahvistus seuraavat trans-virtsaputken resektio.

virtsanäytteet analysoitiin sokkona varten Mcm5 havaitsemiseen, NMP22 testaus, ja cytologic analyysit. Päätyttyä tutkimuksessa olemme dekoodattu potilaan tiedot ja verrataan -fluorometrinen Mcm5 signaaleja ja NMP22 tuloksia kliinisen diagnoosi perustuu kystoskopialla, biopsian histologian, kuvantaminen ja virtsan sytologia. Staging ja luokittelu pahanlaatuisten kasvainten suoritettiin asiantuntijan uro-patologi käyttäen TNM (tuumori-solmu-etäpesäke) luokitusjärjestelmän [20] ja vuoden 1973 Maailman terveysjärjestö (WHO) pisteytysjärjestelmä vastaavasti [21].

etiikka lausunto

Eettinen hyväksyntä saatiin yhteisen UCL /UCLH valiokuntien eettisen Human Research (04 /Q0502 /1), Addenbrooke sairaala eettisen komitean (00/236) ja Newcastle ja Pohjois Tyneside Research eettisen komitean (2002/161). Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta osapuolilta.

Virtsa sytologia

virtsanäytteet (50 ml) sentrifugoitiin nopeudella 1500 g 5 min. Cytospin valmisteet valmistettiin poly-L-lysiinillä päällystetty dioja käyttäen Shandon Sytospin putket ja cytocentrifuge mukaan valmistajan ohjeiden (Thermo Shandon, Runcorn, Yhdistynyt kuningaskunta). Näytteet kiinnitettiin teollisuus- sprii ja värjättiin käyttäen Papanicolaou tekniikka leviää [20]. Näytteet arvioitiin konsultti sytologi kokemusta uro-patologian. Sytologia pisteytettiin positiiviseksi, jos epätyypillinen tai pahanlaatuisia soluja tunnistettiin.

NMP22 Pitoisuus

NMP22 mitattiin entsyymi-immunosorbenttimääritys (ELISA) käyttäen FDA: n hyväksymä NMP22 Test Kit tuotettu Matritech (Freiburg, Saksa). Määritys ajettiin Dade Behring BEP 2000 automatisoitu ELISA prosessori (nyt Siemens Healthcare). Kaikki reagenssit, kalibraattorit ja valvonta olivat valmiit kuin valmistajan suosittelemia. Kaikki standardit, laadunvalvontaa ja näytteet analysoitiin kahtena kappaleena. Tulokset laskettiin käyttäen tietojenkäsittely mukana toimitetun ohjelmiston BEP 2000. alaraja määritysrajan havaittiin olevan 2 U /ml. Näytteet, joissa pitoisuus on yli alkuun standardi toistettiin laimentamisen jälkeen määrityspuskuriin. Välillä-erän variaatiokerroin oli 13,3% pitoisuudessa 11,3 U /ml, 8,8%: iin 34 U /ml, ja 9,5% 65 U /ml. Tulos varten NMP22 testi oli saatavilla 1396 potilaalla, joista 195 potilasta (14%), jossa on urothelial kasvain.

-fluorometrinen Pitoisuus mitata Mcm5 virtsasta sedimenttien

Mcm5 mitattiin kaksi -site aikaerotteinen fluoresenssi-immunomääritys on Autodelfialla analysaattori (Perkin Elmer). Kaikki standardit, laadunvalvontaa ja virtsanäytteet valmistettiin ja käsiteltiin kuvatulla [19]. Nunc Maxisorp mikrotiitterilevyt (Perkin Elmer) päällystettiin 12A7 hiiren anti-humaani Mcm5 monoklonaalinen vasta-aine [19] pitoisuutena 8 mg /l, jonka Dako UK Ltd (Ely, UK). Suuri erä (noin 200)-levyt valmistettiin Dako ja käytettiin koko tutkimuksen ajan. Levyt saatiin esitukittiin ja käyttövalmiina. Toinen hiiren anti-humaani Mcm5 monoklonaalinen vasta-aine (4B4) [19] konjugoitiin europiumilla Dako. Europium-leimattu vasta-aine oli pitoisuutena 1,75 mg /ml. HeLa S3-solut hankittiin kaupallisesti (Health Protection Agency Culture kokoelmat, Porton Down, UK) ja määritys kalibroitiin käsitelty HeLasoluista standardeja pitoisuutena 150000 solua /kuoppa. Useita standardien ulottuu pitoisuusalueella 150000-1500 solua /kuoppa valmistettiin laimentamalla standardikantaliuosta fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa, joka sisälsi 0,04% SDS: ää ja 0,02% natriumatsidia. Laadunvalvonta näytteet sisältää neljä eri pitoisuuksia HeLa-solut analysoitiin alussa ja lopussa kunkin erän. Protokolla Autodelfialla määrityksessä oli seuraava. 50 ui standardia, näyte tai laadunvalvontaan lisättiin (kahtena) ja vasta-aine-pinnoitettu mikrotiitterilevyn yhdessä 100 ui DELFIA multibuffer (Perkin Elmer tuotekoodi 1380-3614). Levyä inkuboitiin 2,5 h jatkuvasti ravistellen. Sen jälkeen levy pestiin neljä kertaa DELFIA pesupuskurilla (Perkin Elmer tuotekoodi B117-100). Europium-leimattua vasta-ainetta 4B4 laimennettiin 1:1,800 in DELFIA multibuffer. 100 ui laimennettua vasta-ainetta lisättiin kuhunkin kuoppaan ja levyä inkuboitiin vielä 4 h jatkuvasti ravistellen. Sen jälkeen levy pestiin kuusi kertaa DELFIA pesupuskurilla ja 200 ui DELFIA tehostusliuosta (Perkin Elmer tuotekoodi B118-100) lisättiin kuhunkin kuoppaan. Levyä inkuboitiin ravistelijassa edelleen 10 min. Määrä europium kussakin kuopassa mitattiin Autodelfialla levylukijalla. Tietoja automaattisesti siirrettiin MultiCalc ohjelmistopaketti (Perkin Elmer), jota käytettiin tuottamaan kalibrointikäyrän ja pitoisuuden laskemiseen tuntemattomien. Alaraja määritysrajan havaittiin olevan 1000 solua /kuoppa. Näytteet, joissa pitoisuus on yli alkuun standardi toistettiin sekoitettuna standardin laimennus puskuriin. Välillä-erän variaatiokerroin oli 11,5% pitoisuutena 2648 solua /kuoppa, ja 11,0%: iin 26382 solua /kuoppa. Tulos varten -fluorometrinen Mcm5 testi oli saatavilla 1564-potilailla 210 potilasta (13%) ja urothelial kasvain.

Tilastollinen analyysi

Herkkyys ja spesifisyys ominaisuudet Mcm5 ja NMP22 havaitsemiseen UCC virtsarakon esitetään vastaanottimen toiminta (ROC) käyriä. Alueella alla nonparametric ROC käyrä käytettiin arvioitaessa yleistä diagnostinen suorituskyky jokaisen testin. Kolme leikata-pisteet käytettiin osoittamaan testin suoritustaso erilaisissa olosuhteissa Mcm5 seuraavasti: (i) alempi detektioraja määrityksen, jossa testin herkkyys oli maksimaalinen (1000 solua /kuoppa) (ii) herkkyys sama spesifisyys (2150 solua /kuoppa) ja (iii) 95%: n spesifisyys (8500 solua /kuoppa). Negatiivinen ennustearvo (NPV) ja positiivinen ennustearvo (PPV) Lisäksi arvioitiin. Tarkka 95%: n luottamusväli (CI) kunkin osan, myös herkkyys, spesifisyys ja ennustava arvoja Mcm5 ja NMP22, johdettiin olettaen binomijakauman. Valmistajan suosittelemaa cut-pisteen NMP22, 10 U /ml käytettiin kaikissa analyyseissä, ellei toisin mainita.

vääriä positiivisia hinnat (FPR) varten Mcm5 ja NMP22 testit, joilla on hyvänlaatuinen diagnoosi verrattiin selkeä normaali potilaat käyttäen Chi-neliö testi. Mcm5 ja NMP22 arvot tiivistää käyttämällä mediaanit ja kvartiiliväliä (IQR) ja verrataan selkeä normaaleilla potilailla käyttäen Mann-Whitneyn U-testiä. Kunkin biomarkkereiden, ROC-analyysi toistettiin miehillä ja naisilla erikseen ja alueilla ROC käyrät verrattiin käyttäen Chi-squared testi yhden vapausasteen. ROC-analyysi oli myös sitoutunut tarkastelemaan herkkyyttä keskeiset tulokset poissulkien joilla hyvänlaatuinen tauti. Arvot virtsan biomarkkereita potilailla, joilla on eri kasvain laadut ja vaiheet ja normaaleilla potilailla verrattiin käyttämällä Mann-Whitneyn U-testien välillä naapurimaiden luokkien, ja käyttäen Jonckheere-Terpstra testi trendi kaikkialla laadut ja vaiheet. Chi-neliö testi lineaarinen lineaarinen yhdistys käytettiin arvioimaan näyttöä suuntaus väärien positiivisten lisäämällä kasvaimen ja vaihe. Herkkyys määritettiin virtsan sytologia verrattiin kuin -fluorometrinen Mcm5 testin avulla McNemarin testi pariksi mittasuhteet. Tarkkuus biomarkkereiden määriteltiin arvon herkkyyden ja spesifisyyden, joiden leikkaus pisteen edellyttäen, että nämä on yhtä suuri. Tarkkuus kaksi biomerkkiainetestejä verrattiin käyttämällä mcnemarin testi. Mcnemarin testi käytettiin myös vertaamaan herkkyyttä sytologia kanssa jokaisen biomarkkereiden at cut-pistettä tarjoavat sama spesifisyys kuin havaittu sytologian. Spearmanin korrelaatio käytettiin arvioimaan, missä määrin biomarkkereita olivat erottuva UCC tapauksessa ja normaalissa kontrolliryhmissä. Kaikki tilastolliset testit olivat kaksisuuntaisia, ja 5%: n tasolla käytettiin osoittamaan tilastollista merkittävyyttä.

Multi-ROC analyysi [22] tehtiin määrittämiseksi ylimääräinen suorituskyky johtuvat molemmilla biomarkkereita yhdessä. Tässä analyysissä NMP22 oli pidetään kiinteänä suositellulla cut-pisteen 10 U /ml ja Mcm5 oli mukana vaihtelevalla cut-pisteen. Raised arvot joko merkki voisi ennustaa positiivinen UCC. Ylimääräinen suorituskyky Mcm5 yli jotka on saatu NMP22 (10 U /ml cut-piste) arvioitiin käyttäen epäparametrisia ala multi-ROC käyrä ja arvioitiin tilastollista merkittävyyttä käyttäen Chi-squared testi yhden vapausasteen. Osoittaakseen testin suoritustaso, Mcm5 sitten vahvistettu raja-pisteen säädettyä vastaava herkkyys ja tarkkuus on multi-ROC käyrä käyttämästä yhdistettyä markkereita. Tämä yhdistelmä testi tarkkuutta verrattiin testin tarkkuutta käyttämällä saatu NMP22 yksinään käyttää mcnemarin testi.

Tulokset

Yleisötiedot ja Clinical Investigation

demografisia ominaisuuksia, esitystapa , lopullinen diagnoosi, ja kasvaimen ja näyttämön 1677 potilaiden mukana tässä tutkimuksessa on koottu taulukkoon 1. tutkimus koostui pääasiassa miehiä (62%) ja keskimääräinen ikä oli 60,7 vuotta (keskihajonta, 16,3 vuotta). Aineella on tallennettu esitys, 54%: lla oli näkyvä hematuriaa ja 46%: lla oli ei-näkyvissä hematuria. Nämä potilaat oli hiljattain esittämistä tapauksissa, vaikka neljä potilasta rekrytoitiin, myöhemmin paljasti aiempi UCC. Tutkimukset oli jätetty pois suhteessa tapauksissa seuraavasti: kystoskopian ei suoritettu 20 potilasta, ultraäänitutkimus 186 potilasta ja laskimoon urography 223 potilaalla. Virtsa sytologia oli poissa käytöstä 109 potilasta riittämättömän Näytekokoelmatodistuksen tai vaihtoehtoisesti koska testiä ei ole toteutettu. Kumpikaan ultraäänitutkimus eikä laskimoon urografiaa suoritettiin 77 potilaalla. Kaikilla potilailla oli kliininen diagnoosi niille määräämä niiden lääkäri. Tiedot eivät ole virallisesti kerätty haittavaikutuksia normaaliin kliiniseen testaukseen ja ilman haitallisia vaikutuksia virtsan testaus Mcm5 tai NMP22 kirjattiin.

jälkeen kliinisen tutkimuksen, virtsateiden kasvaimet todettiin 222/1677 potilailla (13%). Lähes kaikki kasvaimet olivat UCCS, mutta tutkimus yksilöi yhden tapauksessa adenokarsinooma ja kahdessa tapauksessa okasolusyöpä virtsarakon. UCCS olivat pääasiassa rakkokasvaimista, vain seitsemän potilasta, joilla ylempi suolikanavan kasvaimia. Ylempi suolikanavan UCCS sisältyvät rinnalla virtsarakon kasvainten analysointiin raportoitu alla. Diagnoosit jäljellä potilaista muiden pahanlaatuisten kasvainten hyvänlaatuisia vaurioita tai kystat munuaisissa, hyvänlaatuinen tulehduksellisten ja synnynnäisiä sairauksia, virtsakivitauti, eturauhasen hyvänlaatuinen liikakasvu ja nefrologian sairauksia. Että diagnoosit taulukossa S1. Koska osa diagnostisten koulutusjakson, virtsan sytologia herkkyys oli 9% (95% CI, 5-14%; mukaan lukien epätyypilliset irtosolututkimus positiivisena), spesifisyys 88% (95% CI, 86-89%) ja PPV 10% (95% CI, 7-15%).

Mcm5 ja NMP22 Test Performance

Mcm5 testi syrjitty, joilla on korkea spesifisyys ja herkkyys, potilaiden välillä ja ilman virtsarakon syövän osoittaa laaja alue ROC-käyrän alla (AUC) (0,75 [95% CI = 0,71-0,79]) (kuvio 1), tilastollisesti merkittävästi suurempi kuin alueen olettaa nollahypoteesi (0,5; P 0,001), ja se perustuu 210 ja 1354 potilasta vastaavasti ja ilman UCC.

herkkyys, spesifisyys, sekä positiiviset ja negatiiviset ennustearvot (PPV ja NPV) ja Mcm5 on esitetty taulukossa 2. cut-pisteen analyysi (cut -yksikköä vastaavat (i) alempi detektioraja määritys, (ii), jossa herkkyys on sama spesifisyys, ja (iii) spesifisyys 95% kaikkien potilaiden testattu), osoitti monenlaisia ​​testin suorituskyvyn tasolla (taulukko 2) . Alemmalla toteamisraja määrityksen, testi oli 80% (167/210) (95% CI = 73-85%), herkkyys ja 20% (167/846) (95% CI = 17-23%) PPV. Kun herkkyys on sama spesifisyys, testi oli 69% (145/210) (95% CI = 62-75%), herkkyys ja 26% (145/565) (95% CI = 22-30%) PPV. 95%: n spesifisyys (1286/1354), testi oli 42% (89/210) (95% CI = 36-49%) herkkyys ja 57% (89/157) (95% CI = 49-65%) PPV .

NMP22 testi syrjitty korkea spesifisyys ja herkkyys ovat osoituksena suuri AUC (0,72 [95% CI = 0,67-0,77]; nollahypoteesi [0,5; P 0,001] (kuva 1) ) ja joka perustuu 195 ja 1201 potilasta vastaavasti ja ilman UCC. Herkkyys, spesifisyys, sekä positiiviset ja negatiiviset ennustava arvoja NMP22 suositellulla 10 U /ml cut-piste on esitetty taulukossa 2. Herkkyys oli 53% (104/195) (95% CI = 46-60%) ja PPV 36% (104/291) (95% CI = 30-42%).

jotta voitaisiin arvioida suorituskykyä testin potilailla, joilla on eri vaiheissa ja laatuja taudin True positiivisten määrä (TPR) oli laskettu Mcm5 (at eri cut-pistettä), NMP22 ja sytologia lihasten invasiivisia vs ei-lihas- invasiivisia (taulukko S2) ja luokkien välillä (taulukko S3). Testi parani kaikissa testeissä korkeampiin vaiheessa ja arvosana luokkia.

Jos spesifisyys NMP22 (cut-piste 12,1) oli sama kuin positiivisen sytologia (88%, 989/1128), herkkyys NMP22 oli merkitsevästi suurempi (P 0,001) (51%, 91/177 verrattuna 8%, 14/177). Jossa spesifisyys Mcm5 (5150-cell cut-piste) oli sama kuin sytologia (87%, 1109/1271) herkkyys Mcm5 oli merkitsevästi suurempi (P 0,001) (52%, 100/193 vs. 9% , 17/193).

biomarkkereiden False Positive Analysis

Väärät löytyivät 400/1301 (31%) kirkasta normaali ja hyvänlaatuiset diagnoosi potilaiden kanssa Mcm5 testit 2150-cell cut-pisteen. Oli merkittävästi korkeampi vääriä positiivisia tuloksia naispotilaiden, 38% (200/520) verrattuna miehillä 26% (200/781) (P 0,001). Virtsan Mcm5 tasot olivat merkittävästi korkeampia normaaleissa /hyvänlaatuinen miehiin verrattuna (mediaani 1560 solua /kuoppa [IQR = 1000-3675 solua /kuoppa] vs. mediaani 1000 solua /kuoppa [IQR = 1000-2180 soluja /no], P 0,001). Lisäksi verrattuna normaaliin potilaille, joilla on, virtsakiviä oli merkitsevästi suurempi vääriä positiivisia (44% [47/106] vs. 30% [201/661], P = 0,004) ja korkeampia virtsan tasoja Mcm5 proteiinin (mediaani 1840 solua /kuoppa [ 1000-3963 solua /kuoppa] vs 1040 solua /kuoppa [ 1000-2645 solua /kuoppa], P 0,001; taulukko 3). Ei ollut todisteita yhdistyksen välisen vääriä positiivisia ja jollekin muulle hyvänlaatuinen ryhmien, kuten tulehdustiloja ja eturauhasen hyvänlaatuista liikakasvua. Kirkkaassa normaali ja hyvänlaatuiset potilasryhmille ei ollut merkittäviä eroja (p = 0,99) in NMP22 tasojen miesten ja naisten välillä. Nostettu NMP22 signaali ja lisääntynyt vääriä positiivisia havaittiin niille potilaille virtsatietulehdus (FPR: 22% vs. 11%, P = 0,001; mediaani NMP22 tulos: 3,35 U /ml vs. 2,2 U /ml, P 0,001) ja Virtsakivien (FPR: 23% vs 11%, P = 0,001; NMP22:2.55 U /ml vs. 2,2 U /ml, p = 0,047) (taulukko 3).

ROC-analyysi Mcm5 ja NMP22 toistettiin havainnoimalla tuloksia kaikissa miehillä ja naisilla (taulukko S4 ja kuvio S1). Ei ollut merkittäviä eroja AUC-arvot Mcm5 Miesten ja naisten välillä (P = 0,76), mutta oli merkittävä ero NMP22 AUC-arvo Miesten ja naisten välillä (AUC 0,69 miehillä vs 0,80 naisilla, P = 0,025), liittyy ilmeisesti suurempi NMP22 herkkyyttä naisilla.

biomarkkereiden väärä negatiivinen Analysis

Taulukko 4 ja taulukon S5 esittävät väärien negatiivisten tulosten osuuden virtsa- Mcm5 ja NMP22 ryhmitelty kasvaimen ja vaihe. Oli todisteita laskeva suuntaus väärien negatiivisten tulosten osuus yhä kasvaimen ja vaihe molemmat virtsan biomarkkereita. Luokilla 1, 2 ja 3 vastaavasti, vääriä negatiivisia hinnat virtsan Mcm5 klo 2150-solu cut-piste oli 52% (95% CI = 31-73%), 37% (95% CI = 28-46%) ja 11% (95% CI = 4-22%; suuntaus P 0,001). Sillä NMP22 klo 10 U /ml cut-ajankohtana vastaavat väärät negatiiviset luvut olivat 80% (95% CI = 59-93%), 49% (95% CI = 40-59%) ja 25% (95% CI = 14-40%; kehitys P 0,001). Samanlaisia ​​suuntauksia havaittiin kasvaimen vaiheesta. Merkittävä väheneminen amplitudi Mcm5 ja NMP22 signaalin alempi kasvaimen ja vaihe havaittiin, sopusoinnussa yhä väärien negatiivisten tulosten osuuden havaittiin näiden ryhmien (taulukko 4 ja taulukko S5).

Yhdistetty biomarkkereiden Multi -ROC Analysis

oli 183 virtsarakon UCCS 1100 normaaleilla potilailla, joilla koetulokset saatavilla sekä virtsan merkkiaineita. Näille potilaille, joka on Mcm5 cut-pisteen 2180 solua /kuoppa tarjotaan vastaava herkkyys ja spesifisyys 71% (130/183 ja 777/1100), ja NMP22 cut-pisteen 4,6 U /ml tarjotaan vastaava herkkyys ja spesifisyys 67% (123/183 ja 742/1100). Vaikka oli vaatimattomasti suurempaa suorituskykyä Mcm5 verrattuna NMP22 tarkkuuden (71% vs. 67%, ero 3,3%, 95% CI = -0,2-6,7%), tämä ero ei ollut tilastollisesti merkitsevä (mcnemarin testi: P = 0,067).

Spearmanin korrelaatiokertoimet välillä Mcm5 ja NMP22 olivat kohtalaisen korkea (rho = 0,54) ja UCC tapauksissa ja mitätön (rho = 0,08) normaalin ryhmä, joka osoittaa mahdollisuudet biomarkkerit tarjota erillisiä rooleja yhdistelmä. Pohjalta multi-ROC analyysi, immuno- Mcm5 testin yhdessä NMP22 suositellulla 10 U /ml cut-pisteen, tarjoaa tilastollisesti merkittävän kasvun suorituskykyä (P 0,001) verrattuna NMP22 yksinään suositellulla cut- kohta (ala multi-ROC käyrä = 0,65, 95% CI = 0,58-,71). Osoituksena, jos jompikumpi NMP22 yli 10 U /ml tai Mcm5 ylittää 4200-solun cut-kohta, tämä yhdistelmä antaa herkkyyden (131/183) ja spesifisyys (789/1100) sekä yhtä suuri kuin 72%, mikä ilmaisee parannus käyttö NMP22 yksinään jossa herkkyys (123/183) ja spesifisyys (742/1100) sekä yhtä suuri 67% (72% vs. 67%, ero = 4,3% [95% CI = 1,5-7,0%], mcnemarin testi P = 0,002) . Yhdessä NMP22 10 U /ml MCM5 testi poistaa vääriä negatiivisia päässä NMP22 testi, joka tarjoaa parannus 54% herkkyys NMP22 yksin 75% herkkyys 65% tarkkuus (2800-cell cut-piste), tai 80% herkkyys 58% tarkkuus (1900-cell cut-piste) tai maksimaalinen herkkyys 85% 45% spesifisyys (1000-cell cut-piste).

yhdistelmä analyysi, jossa NMP22 ( 10 U /ml cut-piste) ja Mcm5 (4200-cell cut-pisteen, jossa herkkyys ja spesifisyys ovat yhtä), 100% (31/31) lihaksen invasiivisia syöpiä (eli vaihe ≥ T2), 93% (40/43 ) of pT1 kasvaimia ja 53% (54/102) PTA kasvainten havaittiin. Kokonaismäärä sairastavien potilaiden carcinoma in situ oli alhainen ja 86% (6/7) havaittiin. Grade 1 tauti tunnistettiin 46% (10/22), luokka 2 taudin 64% (68/106) ja 3. asteen taudin 96% (53/55) tapauksista (mukaan lukien 6/7 tapausta carcinoma in situ) . Tärkeää on, Mcm5 yhdistettynä NMP22 tunnistettu 95% (79/83, 95% CI = 88-99%) mahdollisesti hengenvaarallisia diagnooseja (esim asteen 3 tai CIS tai vaiheeseen ≥pT1) korkea spesifisyys (72%, 95% CI = 69-74%).

keskustelu

aiemmassa proof-of-concept tutkimuksessa osoitimme, että kohonneet Mcm5 tasot virtsassa solussa sedimenteissä ovat prediktiivisille virtsarakon syöpään [19]. Mahdollisen sokaissut havaintoihin tutkimuksessa raportoitu täällä, johon suuri potilaan kohortin vahvistaa alkuperäistä havaintojen Mcm5 on herkkä ja spesifinen biomarkkereiden havaitsemiseen UCC. Tärkeää on, kautta multi-ROC analyysi, osoitamme tässä, että Mcm5 testi, yhdistettynä NMP22 on perustettu cut pisteen 10 U /ml, parantaa diagnostista tarkkuutta NMP22 erillään ja tunnistaa lähes kaikki mahdollisesti henkeä uhkaava sairaus.

huolimatta lukuisista tutkimuksista viime vuosikymmenen aikana on raportoitu tarkkuus NMP22 testi on erittäin vaihteleva. Monet aikaisempien tutkimusten rekrytoitiin pieniä tai kohtalaisia ​​määriä aiheita ja raportoitu korkea herkkyydet ja erityispiirteet, yli 80% [23] – [26]. Kuitenkin monenlaisia ​​testissä suorituskyky on havaittu uudemmissa tutkimuksissa herkkyys vaihtelee 33%: sta 100% ja spesifisyys 40%: sta 93% [4]. Yhdistetty analyysi myös uudempia tutkimuksissa viittaa herkkyys on noin 68% ja spesifisyys 79% [4]. Tuore suuri multi toimielinten kansainvälinen tutkimus paljasti selvästi vaihtelua suorituskykyä NMP22 testin kaikille osallistuville toimielimille herkkyys ja spesifisyys vaihtelevat 36%: sta 86% ja 50%: sta 94%: lla [27]. Vaihtelevuus syyksi on monia häiritsevien tekijöiden, kuten biologisten, analyyttinen ja epidemiologinen muuttujat ja menetelmiin bias.

Tutkimuksemme on suurin mahdollinen havainto tutkimuksessa koskaan ryhtynyt käyttäen NMP22 virtsan biomarkkereiden. Huomattavaa on, että suorituskykyä 10 U /ml cut-pisteen, joiden herkkyys on 53% ja spesifisyys 84%, on hieman alle raportoitu yhdistetyssä analyysissä, mutta lähes sama kuin diagnostinen suorituskyky raportoitu Matritech tuettu suuri potilas kohortti tutkimuksesta käyttäen NMP22 point-of-care proteomic määritys [4], [28]. Mielenkiintoista havaitsimme huomattavasti suurempi diagnostista tarkkuutta NMP22 naisilla kuin miehillä.