Krooninen sairaus

tiivistelmä

p53- näyttää korreloi ennusteen joissa syöpäpotilaille, mutta sen rooli mahakarsinoo- on pysynyt kiistanalainen. Viime aikoina olemme raportoitu että JWA, ADP-ribosylaatio kaltainen tekijä 6 vuorovaikutuksessa proteiinin 5 (ARL6ip5), oli sekä ennustetekijöitä yleisen selviytymisen ja ennustavat Platinapohjaisen hoidossa mahasyövän. Tässä tutkimuksessa pyrittiin selvittämään p53 ilmaus ennustetyövälineenä ja ennustavan markkerina resektoitavissa mahasyövän, yksin ja yhdessä JWA. P53 tutkittiin kolme suurta potilasaineistoihin (yhteensä n = 1155) mahasyövän. Korkea p53 korreloi merkitsevästi epäsuotuisa ennusteeseen viittaavia parametreja ja pieneni potilaan selviytymistä. Lisäksi potilailla, joilla on korkea p53 ilmentyminen kasvaimissa hankittu merkittävä eloonjäämisen hyödyn adjuvanttia ensilinjan platinapohjaisen kemoterapian. Synergiaa p53 ja JWA ennustamisessa potilaiden hoitotuloksiin osoitettiin, vaikka ei merkittävästi kohonnut ennustearvo koskeva kemoterapiaa havaittiin. Siten p53 ilme on voimakas ennustetekijöitä ja ennakoivan tekijä kokoisen mahasyövän adjuvantti platinapohjaiseen kemoterapiaan. Yhdistetty vaikutus p53 kanssa JWA tehokkaina ennustetekijöiden indikaattorit havaittiin ensimmäisen kerran.

Citation: Liu X, Wang S, Xia X, Chen Y, Zhou Y, Wu X, et al. (2012) Synergistinen Rooli välillä p53 ja JWA: Prognostiset ja Ennakoiva biomarkkerit mahasyövän. PLoS ONE 7 (12): e52348. doi: 10,1371 /journal.pone.0052348

Editor: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 03 elokuu 2012; Hyväksytty: 12 marraskuu 2012; Julkaistu: 21 joulukuu 2012

Copyright: © 2012 Liu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tuettiin osittain rahoittamassa Priority Academic Program Development (papD) Jiangsu korkeakouluista (https://jsycw.ec.js.edu.cn); National Natural Science Foundation of China (30930080 ja 81110027) (https://www.nsfc.gov.cn); Säätiö Cancer Center Nanjing Medical University (08ZLKF08) (https://202.195.178.127/zlsys). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Mahasyöpää vaikuttaa noin miljoona ihmistä vuodessa, on toiseksi suurin syy syöpään liittyvää kuolleisuutta maailmanlaajuisesti kokonaisuudessaan viiden vuoden eloonjäämisaste on alle 30% [1]. Köyhät tulos ei ole pohjimmiltaan muuttunut viime vuosikymmeninä huolimatta parannuksista kirurgiassa kemo- ja sädehoidon [2]. Silmiinpistävää eroja ennusteeseen potilailla jälkeen standardin leikkauksen olemassa, mikä osoittaa erityisiä biomarkkerit tarvitaan pikaisesti [3]. Lisäksi valinta potilaille, jotka hyötyvät kemoterapia on tärkeä kysymys kuin suuri jae unnessesarily käsitellään ja vain saada vakavia sivuvaikutuksia [4]. Siten tehokas molekyylimarkkerit tarvitaan kipeästi välttämiseksi yli- tai undertreatment.

p53-proteiini (jota koodaa ihmisen geeni

TP53

) on ehkä tunnetuin kaikista tuumorisuppressorien, ja tunnettu jonka kyky aiheuttaa solusyklin pysähtymiseen, DNA korjaus, vanhenemista, ja apoptoosin [5]. Mutaation tai toiminnallisen inaktivoinnin p53 on lähes universaali piirre ihmisen syövän, ratkaiseva rooli kasvainten synnyssä, sillä mutantti p53 voidaan hankkia uusia kasvaimia synnyttävän ominaisuuksia [6] – [9]. Lisäksi toisin kuin villityyppinen p53-proteiini, joka hajoaa nopeasti, mutanttimuotoihin on pitkittynyt puoliintumisaika, jotka suosivat intranukleaarinen varastointi, tulossa havaittavissa immunohistokemiallisesti [10] – [12]. Kertymistä p53-proteiinin tapauksessa mahasyövän on yhdistetty ennuste ja ennustaminen hoidon [13], [14]. Kuitenkin siihen liittyvät rooli ja mekanismi tähän asti pysyvät kiistelty [15], [16].

Viimeaikaiset havainnot sekaantunut että JWA, joka tunnetaan myös nimellä ARL6ip5, samanlainen p53 joiltakin osin, on välttämätön solujen eloonjäämistä ja tehokas DNA: n korjaukseen, kun oksidatiivisen DNA-vaurioita sekä kemiallisesti aiheuttama syöpä apoptoosin [17], [18]. Lisäksi JWA ja XRCC1, toinen DNA korjaukseen proteiinia, voi olla ehdokkaana prognostisia ja ennakoivan biomarkkereita potilaille, joilla on mahalaukun syövän [19]. Lisäksi SNP

JWA

geeni liittyy lisääntynyt alttius mahakarsinoo- kiinalaisessa väestöstä [20]. Niinpä olemme huomattavasti kiinnostuneita jos JWA toimisi kuten yhteistyökykyä p53 parantaa ennustavan aktiivisuusedellytykset mahasyövässä.

Tässä pyrittiin valaista translaation merkityksen ja tunnistaa ekspressiokuvioita p53 kolme suurta itsenäistä ikäluokat mahalaukun syöpäpotilaiden ja tutkimaan mahdollisia ennustetekijöiden ja ennakoivan roolin tämä merkki. Enemmän kiehtovan, hypoteesi olisi validoitu ovatko p53 ja JWA voitaisiin yhdistää uutena ennustaja tarkemmaksi pelastusveneiden arvioinnissa.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat ja näytteet

Kolme takautuva potilasaineistoihin tutkittiin. Koulutuksen kohortti ja testaus kohortti kerättiin Nantong Cancer Hospital, Nantong, itä osassa Jiangsun maakunnassa ja validointi kohortti rekrytoitiin Yixingiin Kansan sairaalassa, Yixing eteläosassa Jiangsun maakunnassa Kiinassa. Kudokset saatiin kunkin patologian rajapinnoilla. Sisällyttämiskriteerit olivat mahakarsinoo- hoidettiin radikaali gastrektomia kanssa tai ilman adjuvanttihoitoa. Hylkäämisperusteet olivat potilaille, joilla on mahalaukun syövän tai aktiivinen kuin mahasyöpä. Myös ne, jotka saivat valmiiksi kirurgisia kemo- tai sädehoitoa suljettiin pois. Kirjallinen suostumus saatiin kunkin potilaan ennen kudoksen hankintaa ja ennen leikkausta tehtiin. Institutionaaliset hyväksyntä hankittiin Ethical Review Board of Nanjingin Medical University ennen tätä tutkimusta.

hoidetuista potilaista Surgery Alone

koulutus ryhmä koostui 103 potilasta, jotka vain tehtiin radikaali gastrectomy at Nantong Cancer Hospital 1

st May 1990-1

st kesäkuuta 1995. kuitenkin 20 näytettä jätettiin pois puuttuvien tietojen vuoksi ja yksi näyte oli kadonnut aikana antigeenin hakua tai ilman tuumorisoluja läsnä ytimessä, joten 82 pariksi potilaan kudokset lopuksi arvioitiin p53 ilme.

testaus kohortti koostui kaikista 640 kirurgisten tapausta Nantong Cancer Hospital 1

st joulukuuta 2000 1

st huhtikuuta 2005, ja validointi ryhmä koostui kaikista 1022 kirurginen tapaukset Yixing kansan sairaalassa 1

tammikuuta 1999 ja 31.

st joulukuuta 2006 potilasta hoidettiin leikkauksen ainoastaan ​​tai postoperatiivisen adjuvanttihoitoa (lisätietoja, ks. S1). Jakaumia demografisten ominaisuuksien ja valitun ennusteeseen viittaavia muuttujat potilaiden välillä piirit (Nantong ja Yixing) kuvattiin aiemmin [19]. Puuttuvien Eloonjääntitulokset, vain 578 ja 998 näistä potilaista oli mukana. Lisäksi johtuen kadonnut ytimet tai riittämätön kasvainsoluja kudoksessa, 485 ja 588 kasvainten sydämiä analysoitiin p53 ilmentymistä testaus ja validointi kohortin, vastaavasti.

hoidetuista potilaista adjuvanttihoitoa

koulutukseen kohortin yksikään potilaista sai minkäänlaista adjuvantin hoidon. 485 potilasta käytetty analyysi testaus kohortin 111 potilasta (22,9%) käsiteltiin adjuvanttihoitoa jälkeen parantavaa resektio. Hoito-ohjelmien mukana yhdistetyn kemoterapian kanssa fluorourasiilin, leukovoriinin, ja oksaliplatiinin (FLO) (6 tapausta); monoterapian mitomysiini C (46 tapausta); fluoriurasiilijohdannaiset (47 tapausta); ja muita hoitoja (12 tapausta). Niistä 588 potilaasta validointi kohortin hoito-223 potilasta (37,9%) ja leikkauksen jälkeisen kemoterapiaryhmissä yhdistettyä kemoterapiaa FLO (87 tapausta); yhdistettynä solunsalpaajahoitoa fluorourasiilin, leukovoriinin, ja Platinol (FLP) (79 tapausta); yhdistettynä solunsalpaajahoitoa fluorourasiilin ja paklitakselin (FP) (11 tapausta); yhdistettynä kemoterapia etoposidia, leukovoriini, fluorourasiili ja Platinol (ELFP) (28 tapausta); ja muut hoidot (18cases). Mitä kokoisen mahasyöpäpotilaista kemoterapiaa, jakaumia demografisten ominaisuuksien ja valitun ennusteeseen viittaavia muuttujat potilaiden välillä FLO ryhmä ja FLP ryhmä olivat samanlaisia ​​(kaikki

P

0,05), paitsi histologinen tyyppi (

P

= 0,001, taulukko S1). Lisäksi 7 patologisesti vahvistettu mahasyövän ja vastaavat ei-syöpä tuore mahan limakalvon kudoksissa viimeaikaisista potilaista Nantongissa Cancer sairaalan saatiin Western blot-analyysi.

Kokonaiselossaoloaika (OS) oli ensisijainen päätepiste tämän analyysin. Elinaika todettiin alkaen leikkaus kuolinpäivästä tai viimeiseen seurannan. Kuolinpäivä kussakin tapauksessa saatiin potilastietoja tai potilaiden perheet läpi seurannan puhelujen ja lisäksi kahden-varmistettiin paikallisten siviiliasioiden osasto ja yleisen turvallisuuden osasto. Yksityiskohtaiset ennusteeseen viittaavia tietoja on saatu. Lauren kriteerit käytettiin luokitella kasvainten osaksi suoliston tyyppi tai moniin type [21] ja lavastettuja mukaan kasvain, Node, etäpesäke (TNM) suuntaviivat [22].

rakentaminen Tissue Microarray (TMA) ja immunohistokemia

parafinoidut arkistoituja kudoksen kasvain ja ympäröivä normaali mahalaukun kudosta käytettiin TMA rakentamiseen. TMA valmistettiin, kuten aiemmin on julkaistu [19]. Lyhyesti, monistaa 1,0 mm halkaisijaltaan sydämiä kudoksen kustakin näytteestä lävistettiin parafiini kasvainblokki ja vastaavat ei kasvaimen kudokset koulutuksessa kohortissa tai ytimet primaarituumorin koepaloja testaus- ja validointi ikäryhmät. Koska kudoskontrolliryhmä, koepaloja normaalien mahalaukun epiteelin kudoksia istutettiin neljässä kulmassa ja keskelle kunkin dian.

vakioprotokolla käytettiin Immunovärjäyksen että TMA. Yksityiskohtainen menetelmä on kuvattu aiemmin [19]. IHC suoritettiin käyttäen DO7 monoklonaalista vasta-ainetta (1:80; Dako, Carpinteria, CA), joka tunnistaa villin tyypin ja mutanttimuotojen p53-proteiinin kanssa Elivision ™ Super HRP Kits (Maixin-Bio, Fujian, Kiina) soveltaen vaihtelevia havaitseminen ja antigeenin hakumenetelmät. Poisjättäminen ensisijaisen vasta-aineen toimi negatiivisena kontrollina. Värjäytymisen tulokset kudoksen valvonta kussakin microarray dia oli ennalta arvioitiin laadun valvonta Immunovärjäyksen.

arviointi immunohistokemia

Aluksi värjäystä p53 kudoksessa pisteytettiin itsenäisesti kahdella patologit sokaissut kliiniset tiedot, soveltamalla puolikvantitatiivinen immunoreaktiivisuus pistemäärä (IRS) koulutuksessa kohortissa. Pisteytys kriteerit IRS raportoitu muualla [23]. Intensiteetti immunovärjäyksellä on esitetty kuviossa. S2. Konkordanssi IRS värjäystä pisteet p53 kahden patologit oli 74 (90%) 82 kasvainten opetusjoukolla; ja vähän poikkeamia ratkaistiin konsensuksella käyttämällä multihead mikroskooppia. Vaihtelua p53 värjäytymistä oli 4 (5%) päällekkäiset sydämiä 82 kasvaimia. Nämä tapaukset värjättiin kokonaisina slide IHC ja edelleen maalin.

optimaalinen raja-arvo IRS saadaan vastaanotin-operaattori (ROC) analyysi, ja alue käyrän alla (AUC) eri raja-arvot p53 IRS 1, 3 ja 5 vuoden kokonaiselinaika aikaa laskettiin. Optimaalinen arvo sulku oleva p53 IRS Nantong alueella kohortissa (yhdistetty koulutus kohortti ja testaus kohortti) oli 4 johtuen ennustearvo tässä sulku pisteen kuolema oli paras (Fig. S3). Näissä olosuhteissa näytteet IRS 0-4 ja IRS 5-12 luokiteltiin matalan ja korkean p53 kasvaimissa, vastaavasti. Muodostamisen jälkeen immunohistokemiallinen arviointiperusteita Nantong alueella kohortin ilmentymistä p53 Yixingin alueella kohortti (validointi kohortti) teki saman patologit kanssa täsmälleen samaa menettelyä.

Western-blottaus

Western-blottaus suoritettiin, kuten aikaisemmin on kuvattu [19]. Hiiren monoklonaalinen anti-p53-vasta-ainetta (1:1000; Dako, Carpinteria, CA), ja hiiren monoklonaalinen anti-β-aktiini-vasta-aine (1:2000; Beyotime Biotechnology, Nantong, Kiina) käytettiin primaarisen vasta-aineen. Immunoreaktiivisia vyöhykkeet havaittiin kanssa Phototope-HRP Western blot havaitseminen kit (Cell Signaling Technology Inc, Beverly, MA, USA). Sillä Densitometrinen analyysi, p53-proteiinin bändejä blotit mitattiin Image J ohjelmisto (versio 1.44, Wayne Rasband, National Institutes of Health, USA), normalisoinnin jälkeen vastaavaksi β-aktiini tason.

Tilastollinen analyysi

välinen yhteys p53 ilmaisun ja ennusteeseen viittaavia parametreja arvioitiin Fisherin testiä. Differentiaalinen ilmentymistä p53 primaarikasvainten ja niitä vastaavat ei-kasvaimia arvioitiin Wilcoxonin testi (ryhmitelty) ja Spearmanin kertaluvun korrelaatio (raaka tulokset). Korrelaatio p53 ja JWA perustettiin Spearmanin kertaluvun korrelaatio (raaka tulokset) ja Fisherin testiä (ryhmitelty). Todennäköisyys erot OS funktiona ajan varmistettiin käyttämällä Kaplan-Meier menetelmä, jossa log-rank testi merkitys. Univariate tai monimuuttuja Coxin regressioanalyysi suoritettiin arvioida raakaa hazard ratio (t), säädettiin tuntia ja niiden 95% luottamusväli (CI), jossa säätö mahdollisten sekoittavien tekijöiden. Sitten analysoitiin ennustearvo parametreja käyttäen ajasta riippuvat ROC käyrä analyysi sensuroitiin tiedot ja lasketaan AUC ROC käyrät. Arvioimme esityksiä eri tulokset piirtämällä (t, AUC [t]) eri arvoilla seuranta-ajan (t). Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin Statistical Analysis System (versio 9.1.3, SAS Institute, Cary, NC), STATA tilasto-ohjelmalla (versio 10.1, StataCorp, College Station, TX), ja R (versio 2.10.1; R Foundation for Statistical Computing). P-arvo 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Lisääntynyt p53 Expression mahasyövän Versus Vieressä Normaali Kudokset

Seitsemän paria ihmisen mahasyövän näytteitä luokilta mahasyövän kudosten ja vastaaviin normaaleihin mahalaukun limakalvon valittiin testaamaan p53-proteiinin ilmentymistä Western blotilla. Kohonnut p53 tapahtunut 6 7 mahalaukun kasvaimet verrattuna pariksi normaali mahan limakalvon (Fig. 1A). Immunohistokemiallinen värjäys mahalaukun kudoksen microarray (TMA) käytettiin edelleen vahvistamaan p53 ilmentymistä 82 mahasyöpäpotilaista koulutuksessa kohortissa. On osoitettu, että p53: n värjäytyminen oli pääasiassa lokalisoitu ytimet (Fig. 1 B). Jakauman eroja IRS p53 ilmentymistä kasvaimissa ja Hyväksytty ei-kasvainten kuvassa. 1C. Lisäksi p53 ilmentyminen oli lisääntynyt 65 82 (79,2%) mahasyövistä verrattuna vastaaviin normaaleihin mahan kudoksissa (

P

0,001, Wilcoxonin testi, Fig. 1 C). Kaikissa kolmessa riippumatonta kohorttien saaneista potilaista vain leikkaus vain, ilmentymistä p53 oli negatiivinen korrelaatio JWA vuonna syöpäkudokset (

P

0,001 kaikille korrelaatiota, taulukko 1).

(A) p53-proteiinin pitoisuuksia 7 syöpäkudoksissa ja pariksi ei-syöpä normaaleissa kudoksissa mahasyöpäpotilaista analysoitiin Western-blottauksella. Taso kunkin proteiinin normalisoitui vastaan ​​β-aktiini, ja proteiini tasoilla syövän kudoksissa osoitti sen määrän suhteessa pariksi ei-syöpä normaaleja kudoksia. Huomaa: N, syövätöntä normaali kudos; T, Tuumorikudos. (B) edustaja immunohistokemiallisella värjäyksellä p53 TMA. T, mahalaukun syöpä kudos; N, pariksi syövätöntä mahalaukun kudosta. Ylälevy: Mittakaavapalkki, 250 m; pohjapaneeli: Mittakaavapalkki, 50 pm. (C) jakautuminen ero p53 värjäyksen (Δ IRS = IRS T-IRS N).

P

arvot laskettiin kanssa Wilcoxonin testi. IRS, immunoreaktiivisuus pisteet.

korrelaatio p53 Expression ja kliinis-hoitoa saaneilla potilailla Surgery Alone

Kaikissa kolmessa ikäluokat, olemme todistaneet, että p53 ilmentymistä syöpäkudokset oli korreloi merkitsevästi imusolmuke etäpesäke (N-luokka). Lisääntynyt p53 oli tiiviisti korkeampi TNM koulutukseen ja testaus ikäluokat, mutta ilman merkitystä validointi kohortissa. Lisäksi lisääntynyt p53 oli erityisesti liittyvät muut kliinis ominaisuuksia, kuten syvyys invaasio (T-luokka), kaukainen etäpesäke (M-luokka), kasvain halkaisija ja histologinen tyyppi vastaavissa kohortissa. Mielenkiintoista on, että kaikissa saaneilla potilailla leikkaus yksinään (n = 817), löysimme lisää suoliston-tyyppinen potilailla havaittiin vähäisiä hajanaisempi-tyyppinen potilailla havaittiin korkea p53 ilmaus (

P

0,001, tuloksia ei ole esitetty ). P53 ei ollut korrelaatiota iän ja sukupuolen (taulukko 1).

Korrelaatio p53 Expression ja OS saaneilla potilailla Surgery Alone

koulutus kohortin 82 primäärikasvain näytteitä soveltuu analyysi osoitti tilastollisesti merkittävä negatiivinen korrelaatio p53 ilmaisun ja yleistä 5 vuoden pysyvyys käyttäen Kaplan-Meierin eloonjäämiskäyrien (

P

0,001). Näitä havaintoja validoitu kaksi itsenäistä ja suuremmat ikäluokat mahalaukun syöpäpotilaat vähintään viisi vuotta seurannassa (n = 374 ja n = 365, tässä järjestyksessä) (Fig. 2A-C). Muita merkittäviä kielteisiä ennustavat eloonjäämisen yhden muuttujan analyysin kolme riippumatonta ikäluokat olivat imusolmuke etäpesäke (N-luokka,

P

0,01 kaikille, taulukko S2) ja kliinisen TNM (

P

≤.001 kaikille, taulukko S2).

(A-C) Kaplan-Meier-käyrät kuvaavat eloonjäämiseen mukainen ekspressiokuviota p53. (D-F) Kaplan-Meier käyrät kuvaavat eloonjäämiseen mukaan ekspressiokuviota p53 /JWA.

P

arvot laskettiin log-rank-testi.

Coxin monimuuttuja regressioanalyysi osoitti, että alhainen p53: n ilmentyminen oli itsenäinen positiivinen ennustetekijä mahasyövän kaikissa kolmessa kohorttien (

P

0,001 kaikille, taulukko 2). Arvioitava edelleen ennusteen arvioinnissa p53 ilmaisun teimme ajasta riippuva ROC analyysi sensuroitiin tiedot, joiden mukaan yhdistelmä kliinisen riskiluku (TNM-luokitus, histologinen tyyppi ja kasvaimen halkaisija) ja p53 vaikutti paljon enemmän kuin kliiniset parametrit yksinään sekä koulutusta ja testaus kohortteja (Fig. 3). Esimerkiksi testaukseen kohortin AUC vuosi 5 oli 0,707 (95% CI = 0,653-0,761) kliinisiin riskiluku, vaikka se oli merkittävästi nousi 0,856 (95% CI = ,818-+0,894) yhdistettynä p53 riski pisteet. Kuitenkin tämä vaikutus ei ollut merkittävä validointi kohortin johtuen suhteellisen suurempi AUC (noin 0,8) kliinisten ennustavat (Fig. S4).

(A) aika riippuva ROC analysoi koulutuksessa kohortissa. (B) Aika-riippuvaisten ROC analyysit testaus kohortissa. AUC = AUC.

korrelaatio p53 Expression ja OS potilailla, joilla adjuvanttihoitoa

testaus ja validointi ikäluokat, OS analysoitiin välillä potilailla, jotka saivat adjuvanttihoitoa verrattuna niihin, jotka eivät. Tiedot osoittivat eroa OS välillä leikkauksen vain ryhmän ja hoito postoperatiivisen adjuvanttihoitoa (tuloksia ei esitetty), paitsi ryhmässä, joka sai fluoroursiiilia leukovoriiniin-oksaliplatiinin (FLO) (n = 87, log-rank testi,

P

= 0,032, Fig. 4). Monimuuttujafunktiokehitettiin Coxin regressioanalyysi joista kuusi (ikä, sukupuoli, TNM, histologiset tyypit, kasvaimen halkaisija ja kemoterapia) suoritettiin osoittamaan hyötyä kemoterapian OS. Tilastollisesti merkittävää hyötyä niille, jotka saivat FLO kemoterapiaa leikkauksen jälkeen yli leikkaus yksin ryhmä (HR = 0,55; 95% CI = 0,37-0,82, tuloksia ei ole esitetty). Erityisesti tämä vaikutus oli vain todettu potilailla, joilla on korkea p53 ilme jossa adjuvantti FLO ilmeisesti lisännyt OS verrattuna pelkkä leikkaus (HR = 0,56; 95% CI = ,35-+0,89, taulukko S3, log-rank testi,

P

= 0,014, Fig. 4).

P

arvot laskettiin log-rank-testi. Huomautus: S, leikkaus yksin; FLO, fluorourasiili-leukovoriini-oksaliplatiini.

analysoitiin myös merkitystä toisen platinapohjaisen kemoterapian, fluorourasiili-leukovoriinin-Platinol (FLP) hoito (n = 79) in kokoisen mahasyövän. Tulokset eivät aiheuta merkittävää selviytymisen ero (log-rank testi,

P

= 0,134, Kuva. S5), kun taas potilailla, joilla on alhainen p53 ilme sai FLP hoito jopa asettanut esille elinajan verrattuna saaneisiin leikkaus vain (

P

= 0,003, Kuva. S5). Lisäksi potilailla, jotka saavat FLP hoito suurilla p53 ilme ei ollut merkittävää selviytymisen ero verrattuna niihin, joilla pelkkä leikkaus (

P

= 0,648, Kuva. S5). Edelleen monimuuttujamenetelmin selvitetty, että suurempi riski kuolleisuutta potilailla havaittiin alhaisen p53 ilme sai FLP hoitoa verrattuna leikkausta vain (HR = 1,91, 95% CI = 1,08-3,36, taulukko S4).

Synerginen vaikutus p53 kanssa JWA Expression OS saaneilla potilailla leikkaus ainoastaan ​​tai adjuvanttihoitoa

potilailla, joilla pelkkä leikkaus oli vielä ositettu kolmeen eri ryhmään sen perusteella, värjäystä p53 ja JWA: p53 korkea JWA alhainen, p53 vähäistä JWA korkea ja sekä korkean tai molempia alhainen. On osoitettu, että potilailla, joilla on p53 matalan ja JWA korkea oli paras tulos selviytymisen näissä kolmessa ryhmässä (

P

0,001, log-rank testi, Fig. 2D-F). Monimuuttuja Coxin regressioanalyysiä osoitti, että yhdistetty ilmentymisen alhainen p53 ja korkea JWA oli itsenäinen positiivinen ennustetekijä mahasyövän kaikissa kolmessa ikäluokat (

P

0,001 kaikille, taulukko 2). Arvioitava edelleen ennusteen arvioinnissa p53 plus JWA ilme, teimme toinen aikariippuvainen ROC-analyysi, joka osoitti, että yhdistelmä kliinisen riskin pisteet ja p53 plus JWA vaikuttanut enemmän kuin yhteistyötä kliinisen riskiluvun vain p53 kummassakin koulutus ja testaus kohortteja (Fig. 3). Esimerkiksi koulutukseen kohortin AUC vuosi 5 oli 0,568 (95% CI = 0,400-0,737) kliiniseen riskiluvun plus p53 riskiluku, vaikka se oli merkittävästi nousi 0,865 (95% CI = +0,786-,944), kun yhdistelmä kliinisen riskiluku p53 plus JWA riskiluku käytettiin. Kuitenkin tämä vaikutus oli taas ei ilmeiseksi validointi kohortin johtuu edellä mainitusta syystä (Fig. S4).

Perustuu panoksesta p53 ilmentymistason kemoterapiaa lopputulokseen, me kerrostunut tällaisia ​​potilaita koordinoidusti JWA kuin seuraavasti: FLO hoitoryhmässä korkean p53 ilmentymistä jaettu p53 korkea JWA matala ja p53 korkea JWA korkea; ja FLP hoitoryhmässä matalalla p53 ilmentymistä myös luokiteltiin p53 vähäistä JWA alhainen ja p53 alhainen JWA korkea. OS on arvioitava uudelleen näiden alaryhmien. Kuitenkaan mitään selvää eloonjääminen erot esiteltiin synerginen kuvion JWA (Fig. S6).

Keskustelu

Mahalaukun syöpä on heterogeeninen sairaus, jossa lopputulos vaihtelee myös potilailla, joilla on samanlaiset kliiniset ja patologiset ominaisuudet. Vaikka leikkaus alkuvaiheessa, ennuste voi olla synkkä, ja adjuvanttihoitoa on tehokas vain potilasalaryhmissä. Uusia molekyylimarkkerit tarvitaan perinteisiä lavastus järjestelmiä mahasyövän eivät riitä ennustamaan tuloksia [24]. Tässä tutkimuksessa me kirjataan ja osoittaneet, että korkeat p53 korreloi merkitsevästi epäsuotuisa ennusteeseen viittaavia parametreja ja pieneni potilaan selviytymistä. Lisäksi potilailla, joilla on korkea p53 ilmentyminen kasvaimissa hankittu merkittävä eloonjäämisen hyödyn adjuvanttia ensilinjan platinapohjaisen kemoterapian (FLO tai FLP). Synergiaa p53 ja JWA ennustamisessa potilaiden hoitotuloksiin osoitettiin, vaikka mitään ilmeistä koholla ennustearvo koskeva kemoterapia ei havaittu.

Tässä tutkimuksessa, löysimme ilmeisesti lisääntynyt p53-proteiinin mahasyövässä kudoksissa verrattuna vastaaviin normaaleihin limakalvon, mikä viittaa mahdollisesti tärkeä asema p53 mahasyövän. Kertoman,

p53

geeni on mutatoitunut lähes 50% kaikista ihmisen kasvaimista myös mahasyövän [25] ja mutatoitunut proteiini pysyy solujen sisällä pidemmän aikaa, jolloin havaitsemisen immunohistokemiallisesti [26], [27 ]. Näin ollen on yleisesti hyväksyttyä, että positiivista värjäytymistä pääasiassa edustaa mutanttimuotojen p53, kun taas villin tyypin p53-proteiini hajoaa nopeammin ja tulee heikko tai negatiivinen värjäys [10], [26]. Tuloksemme olivat yhdenmukaiset tutkimuksissa muiden tutkijat, joka osoitti positiivista p53 ilmentyminen liittyy epäedullinen ennusteeseen viittaavia ominaisuuksia ja huono ennuste mahasyövän saaneille potilaille parantava gastrectomy [28] – [30]. On syytä huomata, että joitakin eroja viittaavia tekijöitä välillä Nantong ja Yixing ikäryhmät. Koska Nantong Syöpä sairaala on syöpä erityinen sairaalassa taas Yixing Kansan sairaalassa on kattava yksi potilaat entisestä ovat usein pitemmälle kuin jälkimmäinen. Siten potilaat Nantong kohortissa osoitti huonompi ennusteeseen viittaavia ominaisuuksia. Lisäksi, p53 ja JWA ilmentymistä havaittiin vain kudoksissa täällä, mutta ei veressä tai seerumissa mahalaukun syövän potilaiden, koska ne eivät ole eritettyjä proteiineja. Mielenkiintoista, aikaisemmassa tutkimuksessa osoitti vahvan korrelaation korkea p53 autovasta-aineiden seerumissa mahalaukun adenokarsinoomaa potilaiden ja huono ennuste, imusolmuke etäpesäke ja alhainen eriyttäminen [31]. Lisäksi osoitettiin, että p53 ilmentymistä mahasyövän kudoksissa korreloivat seerumin p53-vasta-aineita [32]. Meillä ei ollut seerumia kerätä samanlainen analyysi, mutta tämä olisi erittäin mielenkiintoinen verikoe on yksinkertaisempi ja luultavasti enemmän toistettavissa kuin immonohistochemistry. Mitä JWA, seerumin testi on edelleen kesken, ja on osoitettava tulevaisuudessa.

Kiehtova ja tärkeä kysymys houkutella meitä eniten Siksi voisi korkea p53 pelata täsmälleen päinvastainen rooleja prognoosi- ja ennakoiva vaikutus. Tämä ilmiö voi johtua eri muotoja p53 ja niiden erilliset ominaisuudet syövän biologian ja hoitoon vastus. On yleisesti tiedossa, mutantti p53-proteiineja ekspressoidaan voimakkaasti useissa syövissä ja edistää pahanlaatuisiksi, leviämisen ja metastaasin osittain estämällä villityypin p53 sekä muut jäsenet p53 perheen [6], [33]. Hiiri mallit laakeri knock-in mutaatioita p53 osoitti, että mutantti p53 proteiinit voivat ajaa kasvaimen muodostumisen, invaasio ja etäpesäkkeiden kautta hallitseva negatiivinen esto villityyppisen p53 sekä voitto-of-function tai ”neomorphic toimintaa, joka voi estää tai aktivoida toiminnon muiden proteiinien [34], [35]. Samoin tutkimuksessamme, korkea p53 ilmentymistä mahalaukun kasvaimet korreloivat imusolmuke etäpesäke, korkeammat TNM ja muita epäedullisia viittaavia tekijöitä, mikä aggressiivisemman fenotyypin huonommalla ennuste kun hoitamatta. Sen sijaan, positiivinen ennustearvo vaikutus korkean p53 ilmentymisen eloonjäämiseen sekä platinalla hoidettujen potilaiden voi viitata kaksoisrooli p53 Chemo-resistenssin. Tällä hetkellä suurin este platinaa kemoterapia korjaus platinaa vaurioitunut DNA, joka johtaa lisääntyneeseen vastus, vähentää apoptoosin, ja lopulta hoidon epäonnistuminen. Villityyppinen p53 voi osittain pelata tällaisen tehtävän tässä prosessissa kautta solusyklin pysähtymiseen ja korjauksen jälkeen aiheuttaman vaurion kemiallisten aineiden [36] – [39]. Sitä vastoin mutantti p53-proteiinien eivät pysty toimimaan DNA vahinkosaneeraus kuin niiden villityypin vastine, jossa potilaat yhä herkemmin kemikaaleille [36], [40], [41]. Kuitenkin yksityiskohtainen mekanismi mutantti p53 platinaa hoidossa on edelleen tutkittava. On huomattava, että potilaat saivat lisää eloonjäämistä hyötyä FLO kuin mistä FLP, joka voi olla osin johtuu, että FLO vähentää toksisuutta verrattuna FLP, kuten edellä on todettu [19].

JWA on tyypillinen stressivasteen geenin sekä tuumorisuppressorina [18], [42]. In vitro ja in vivo tutkimukset vahvistivat, että menetys JWA tukahdutetaan solujen erilaistumista ja lisääntynyt solujen vaeltaminen ja etäpesäkkeiden [42] – [44]. Uusin tulokset ilmenevät alhainen JWA ilmentymistä mahalaukun kasvaimet korreloivat epäsuotuisa ennusteeseen viittaavia indikaattoreita mutta parempi kemoterapiaa tulos [19]. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että JWA paransi ennusteen arvioinnissa p53, mikä viittaa siihen, että menetys JWA yhdistettynä p53-mutaatio voi lisätä kasvaimen aggressiivisuus ja etäpesäkkeiden, mikä luultavasti koska JWA on myös jäsenenä DNA korjaukseen liittyvä reitti ja mahdollisesti olla keskinäinen asema in mahasyövän. Kiehtovan, vaikka molemmat merkkiaineet erikseen olivat ennustavan platinan hoitoon, yhdistelmä ei parantunut ennustearvo, mutta tämä tulos ei haittaa pieni joukko potilaita alaryhmiin. Suurempi määrä saavilla potilailla platinapohjaisen kemoterapian hoito pitäisi sisällyttää tulevaisuuden tutkimuksessa entisestään vahvistaa tuloksemme. Lisäksi ei ole suoraa sääntelyn vaikutusta osoitettiin välillä p53 ja JWA (tietoja ei ole esitetty), ehkä ne toimivat eri korjaus reittejä [17], [18], [45] – [48] ja epäsuorat välillä on niiden tietyissä tilanteissa. Lisäksi p53 ja JWA voivat synergistisesti säädellä samaa molekyylien tai signaalien kulkureiteillä, jota on selvitetty lisätutkimuksia.

Yhteenvetona paljasti yhteenlaskettu arvo kasvainten p53 kanssa JWA tehokkaina ennustetekijöitä ensimmäistä kertaa , Parhaan tietomme mukaan. Vaikka selvä yhteistoimintaa näiden kahden proteiinien vielä todistettu, että se voi esittää mahdollisia ennustavat adjuvanttihoitoa kanssa platina-pohjainen hoito.

tukeminen Information

Kuva S1.

Consort kaavio kudoksen mikrosiru tutkimuksessa.

doi: 10,1371 /journal.pone.0052348.s001

(TIF) B Kuva S2.

Kuvat ovat p53 immunohistokemiallisella värjäyksellä ihmisen mahasyövän. A, negatiivinen värjäys; B, heikko positiivinen värjäytyminen; C, kohtalainen positiivinen värjäytyminen; D, vahva positiivinen värjäytyminen (A-D: asteikko bar, 25 pm).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0052348.s002

(TIF) B Kuva S3.