Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

KRAS

mutaatioita esiintyy 35-45% metastasoituneen kolorektaalisyövän syöpien (metastasoitunutta kolorektaalisyöpää) ja estä vastata EGFR-täsmähoitoihin Setuksimabihoitoa tai Panitumumabilla . Kuitenkin alle 20% potilaista näyttämällä villityypin

KRAS

kasvaimia saavuttaa tavoitteen vastausta. Muutokset muissa efektorien alavirtaan EGFR, kuten BRAF, ja sääntelyn purkamista PIK3CA /PTEN polku on itsenäisesti todettu aiheuttavan vastuksen. Esitämme kattava analyysi

KRAS

,

BRAF

,

PIK3CA

mutaatioita, ja PTEN ilmaisun metastasoitunutta kolorektaalisyöpää Setuksimabihoitoa saaneilla potilailla tai panitumumabi, jonka tavoitteena on selkeyttää suhteellisen edistää näiden molekyylien muutokset vastuksen.

Menetelmät /Principal havainnot

takautuvasti analysoitiin tavoite tuumorivaste, tautivapaa (PFS) ja kokonaiselossaoloaika (OS) yhdessä mutaatiostatuksesta asema

KRAS

,

BRAF

,

PIK3CA

ja ilmentyminen PTEN 132 kasvaimia setuksimabi tai panitumumabipitoisuus käsitelty metastasoituneen kolorektaalisyövän potilaista. Niistä 106 ei reagoi potilailla, 74 (70%) oli kasvaimia, joissa on vähintään yksi molekyyli muutos on neljä merkkiä. Todennäköisyys vaste oli 51% (22/43) potilailla, joilla ei ole muutoksia, 4% (2/47) potilailla, joilla on 1 muutos, ja 0% (0/24) potilailla, joilla ≥2 muutoksia (p 0,0001) . Vastaavasti PFS ja OS olivat yhä huonompi potilailla, joilla on kasvaimia kätkeminen yhtään, 1 tai ≥2 molekyylien muuttaminen (s) (p 0,001).

Johtopäätökset /merkitys

Kun ilmaus PTEN ja mutaatiot

KRAS

,

BRAF

ja

PIK3CA

käytetään samanaikaisesti varmistettu, jopa 70% metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilaista todennäköisesti reagoi EGFR hoitoja voidaan tunnistaa. Ehdotamme määritellä ”

nelinkertaistaa negatiivinen

”, CRC: t puuttuvat muutokset

KRAS

,

BRAF

, PTEN ja

PIK3CA

. Kattava molekyyli leikkely EGFR signalointipolkujen olisi harkittava valita metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilaille cetuximab- tai panitumumabi perustuvia hoitoja.

Citation: Sartore-Bianchi A, Di Nicolantonio F, Nichelatti M, Molinari F De Dosso S , Saletti P, et ai. (2009) Multi-Determinants analyysi Molecular muutostyöt ennustamiseen kliinistä hyötyä EGFR-Kohdennettu Monoclonal Antibodies in peräsuolen syövän. PLoS ONE 4 (10): e7287. doi: 10,1371 /journal.pone.0007287

Editor: Nils Cordes, Dresdenin teknillinen yliopisto, Saksa

vastaanotettu: 5. kesäkuuta, 2009; Hyväksytty: 02 syyskuu 2009; Julkaistu: 02 lokakuu 2009

Copyright: © 2009 SartoreBianchi et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustuksia Italian Association for Cancer Research (AIRC), Italian terveysministeriön Piemonten aluetta Italian valtiovarainministeriön yliopisto ja tutkimus, Association for International Cancer Research (AICR-UK), EU FP6 MCSCs sopimus 037297, CRT Progetto Alfieri, Oncosuisse myöntää OCS-01921-08-2006 ja OCS-02301-08-2008, Fondazione Ticinese per la Ricerca sul Cancro (Tessin Foundation for Cancer Research), ja OCGO (Oncologia Ca Granda Onlus) Fondazione. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on kolmas syy syövän liittyvän kuoleman länsimaissa [1]. Parannuksista huolimatta terapeuttinen armamentarium metastasoineeseen CRC (metastasoitunutta kolorektaalisyöpää), 5 vuoden yleinen (OS) on edelleen heikko, joiden mediaanielossaolosta 18-21 kuukautta [2]. Muita lääkkeitä, sekä edelleen oivalluksia resistenssin, parantamiseksi tarvitaan kliiniseen tulokseen. Hoitovaihtoehtoja metastasoitunutta kolorektaalisyöpää nykyään sisältävät kimeerisen IgG1 monoklonaalinen vasta-aine (moAb) setuksimabin ja ihmisen IgG2 moAb panitumumabipitoisuus [3], [4]. Molemmat molekyylit sitoutuvat epidermaalisen kasvutekijän reseptori (EGFR), joka johtaa inhibitioon sen alavirran signalointia, joka tarjoaa merkityksellistä kliinistä hyötyä. Objektiivisen hoitovasteen valitsemattomat populaatioissa metastasoitunutta kolorektaalisyöpää kuitenkin rajoittuvat 8-12% näitä aineita, kun niitä käytetään monoterapiana ensimmäisessä [5] ja myöhemmin linjat hoidon [4], [6], [7].

ja muut ovat aiemmin osoittaneet, että somaattisia

KRAS

mutaatioita (a avainefektori EGFR aloitettu signalointi) voi itsenäisesti heikentää tehoa panitumumabin tai setuksimabin [8] – [10]. Tämä johti Yhdysvaltain ja Euroopan terveysviranomaiset rajoittaa näiden lääkkeiden käytön potilaille villin tyypin

KRAS

metastasoitunutta kolorektaalisyöpää vain [11] – [13]. Vaikka tämä päätös odotetaan lievittävän terapeuttisen indeksin tässä valittu väestön objektiivinen hoitovaste on vielä varsin rajallinen. Itse asiassa, se on rajoitettu 17% (

vs

0% vuonna

KRAS

mutatoitu) varten panitumumabi monoterapian [10], 12,8% (vs. 1,2%

KRAS

mutatoitunut) varten setuksimabimonoterapiaan [14] ja 59-61% (

vs

36-33% vuonna

KRAS

mutatoitu) varten setuksimabin plus joko irinotekaania tai oksaliplatiinia kemoterapian, vastaavasti [15], [16]. Nämä havainnot osoittavat selvästi, että muut tekijät, kuten muutokset muissa EGFR -efektiboksejamme jäsenet mukaan luettuina RAS-MAPK tai PI3K väyliä voisi ajaa vastustuskykyä EGFR terapia.

BRAF on pääasiallinen alavirtavaikuttajainhibiittorit KRAS [ ,,,0],17], [18] ja sen onkogeenisten V600E mutaatio sulkevat toisensa pois

KRAS

mutaatioita CRC [19]. Me ja muut ovat viime aikoina osoittaneet, että V600E mutaatio voi myös sulkea pois vastata panitumumabista tai Setuksimabin metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilaiden ja solujen malleja CRC [20].

PIK3CA

geeni on mutatoitunut noin 20% CRC [21].

PIK3CA

mutaatiot esiintyvät ”kuormittajat” sijaitsee eksonissa 9 (E542K, E545K) ja eksonin 20 (H1047R) ovat onkogeenisiä CRC solu mallit [22], [23].

PIK3CA

geeni koodaa lipidikinaasiaktiivisuutta joka säätelee ohella KRAS, signalointipolkujen alavirtaan EGFR. PI3K aloitetaan signalointi estää normaalisti PTEN (fosfataasi ja tensin homologi poistetaan kromosomissa kymmenen). Me ja muut ovat aiemmin osoittaneet, että menetys PTEN ilmaisun, joka esiintyy 30% satunnaisia ​​tapauksia, liittyy vasteen puuttumisen setuksimabin [24], ja että

PIK3CA /PTEN

vapauttaminen voi olla biomerkkiaine resistenssi

KRAS

villin tyypin potilaista [25], [26] ja solujen malleja CRC [27].

Yhteenvetona tiedot retrospektiivisen analyysit osoittavat, että

BRAF

ja

PIK3CA Twitter /PTEN muutoksia voisi edustaa lisävälineitä valitsemiseksi metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilaille EGFR hoitojen [20], [24] – [26]. Kuitenkin selkeä tunnistaminen, jotka biomarkkereiden olisi käytettävä yhdessä

KRAS

kliinisessä ympäristössä on määriteltävä. Tämä johtuu siitä, että näissä retrospektiivinen analyysi: a) eri determinantteja arvioitiin kunkin tutkimuksen; ja b) päällekkäisiä joukossa joitakin näistä biomarkkereita voi ilmetä yksittäisillä potilailla. Tässä tutkimuksessa, teimme ensimmäinen kattava mutaatioanalyysiin

KRAS, BRAF

, ja

PIK3CA

ohella arvioinnin PTEN ilmaisun kohortin 132 metastasoitunutta kolorektaalisyöpää saaneista potilaista.

tulokset

Jakelu ja päällekkäisyys molekyylitason muutoksia yksittäisissä kasvaimissa

Kuten kuviossa 1, analyysi kasvainten kohortin 132 potilasta (for kliinis-patologisia piirteitä, katso taulukko 1) johti tunnistamiseen 104 molekyylitason muutoksia. Havaitsimme 35

KRAS

mutaatioita (26,5%), 11

BRAF

mutaatioita (8,3%), 17

PIK3CA

mutaatioita (12,3%), ja 41 (pois 114 arvioitavissa) menetys PTEN ilmaisun (36,0%). Mutaatiot

KRAS

esiintyi kodonissa 12 24 tapauksessa (68,6%) ja kodonissa 13 10 tapauksessa (28,6%); kaksinkertainen pistemutaatio mukana sekä kodoneja havaittiin yhdessä tapauksessa (2,9%).

PIK3CA

mutaatioita havaittiin joko eksonissa 9 (4 tapausta) tai eksonissa 20 (13 tapausta). 11 mutaatiot

BRAF

olivat kaikki V600E vaihdot.

mutaatiot

KRAS

ja

BRAF

tapahtui toisensa poissulkevia tavalla, kun taas päällekkäistä malli havaittiin muun muutoksia. Yleisimpiä päällekkäiset sormenjälkien PTEN menetys ja

KRAS

mutaatioita (co-esiintyy 13 potilasta), ja

BRAF

ja

PIK3CA

mutaatioita (7 potilasta) (Kuva 1).

Association kliinisten muuttujien ja objektiivinen tuumorivaste

joukossa kliininen muuttujat (katso taulukko 1), vain ihon myrkyllisyys liittyi objektiivinen vaste (Wald testi: p = 0,002; suuntaan vaste = 0-1-≥2). Muita kliinisiä muuttujia kuten sukupuoli, sivusto primaarituumorin (paksusuoli, sigmoid-peräsuoli risteyksessä, peräsuoli, muille sivuille), ja ikä ei merkittävästi yhteydessä tavoitteena tuumorivaste (p = 0,491, 0,490 ja 0,904, vastaavasti; p-arvot saatiin Fisherin testiä varten sivuston ja sukupuolen ja Wald testi ikä). Koska potilaat valitaan tässä kohortissa hoidettiin sekoitettu riviä edellisten kemoterapiahoitojen (vaikka suurin osa sai 2-3 edellinen riviä hoito, katso taulukko 1), tutkimme myös yhdistyksen välillä useissa aiemmissa kemoterapiaa linjat ja objektiivinen kasvaimen vaste , mikä osoittaa, että tämä muuttuja ei aiheuttanut mitään vaikutusta (Wald testi: p = 0,536).

monimuuttuja analyysit molekyylitason muutoksia ja objektiivinen vaste

Monimuuttuja-analyysi mukaan lukien kaikki neljä molekyylitason muutokset (oikaistu ihon myrkyllisyys ja useat aikaisemmat kemoterapian riviä) osoitti, että vain

KRAS

mutaatioita ja menetys PTEN ilmentämisen itsenäisesti liittyy puute objektiivinen vaste (p = 0,001 ja 0,001, vastaavasti) (taulukko 2). Tärkeää on, että Bayes informatiivinen kriteerin mukaan Schwarz ehdotti, että malli lukien

KRAS

mutaatioita ja menetys PTEN ilmentyminen oli kaiken kaikkiaan paras strategia tunnistamisessa kuin vastanneilla potilailla meidän kohortissa.

monimuuttuja analyysit molekyylitason muutoksia ja selviytymistä

Coxin monimuuttuja-analyysi OS vahvisti, että rooli

KRAS

mutaatioita ja menetys PTEN oli merkittävä annetaan huonompi kliininen tulos (HR = 1,72, p = 0,043 ja HR = 0,54, p = 0,012, tässä järjestyksessä), jossa on myös

BRAF

mutaatioita kohdistamaan haitallista rajatapaus vaikutus (HR = 2,31, p = 0,093). Kuten PFS vain

KRAS

mutaatioita liittyi vähentynyt selviytymisen (HR = 1,65, p = 0,033), kun taas yksikään muista molekyyli muutokset osoitettiin itsenäisesti vaikuttaa kliiniseen tulokseen (taulukko 3).

monimuuttuja analyysit molekyylitason muutoksia ja kliinistä tulosta potilaille, joilla on villin tyypin

KRAS

metastasoitunutta kolorektaalisyöpää

Meidän kohortti koostuu retrospektiivinen tapauksissa ja, tästä syystä myös

KRAS

mutatoitunut potilasta otettiin mukaan analyysiin. Päätöksen jälkeen terveysviranomaisten rajoittaa käyttöä setuksimabin ja panitumumabi villityyppiin

KRAS

metastasoitunutta kolorektaalisyöpää [11] – [13], [28], tämä alaryhmä on saavuttanut äärimmäisen merkityksellinen. Niinpä fokusoimme analyysi vaikutuksesta

BRAF

ja

PIK3CA

mutaatioita ja menetys PTEN jäljellä 96 villityypin

KRAS

potilaille. Tällä Monimuuttuja-analyysissä menetys PTEN vahvisti merkittävästi yhdessä puute vasteen (p 0,001), kun taas

BRAF

ja

PIK3CA

eivät olleet merkittäviä (p = 0,265, 0,075, tässä järjestyksessä) ( taulukko 4).

Survival analyysit esitetään taulukossa 5 osoitetaan, että

BRAF

mutaatioita (HR = 3,75, p = 0,015) ja tappio PTEN (HR = 0,43, p = 0,009 ), mutta ei

PIK3CA

mutaatioita (HR = 1,20, p = 0,672), liittyivät merkittävästi vähentynyt OS, kun taas yksikään näistä muutoksista oli merkitsevästi yhteydessä PFS.

Effect määrän molekyyli muutoksia hoitotulokseen

Kun otetaan huomioon esiintyminen useiden molekyylitason muutoksia samassa kasvain, tutkimme meidän kohortin erottamalla potilaat mukaan todellinen määrä molekyyli poikkeavuuksien samassa kasvain, eli mikään

vs

1

vs

≥2 muutoksia. Koska molekyyli tilan yhtä merkkiainetta joukossa PTEN,

PIK3CA

ja

BRAF

oli määrittelemätön 18 kasvaimissa, päätimme tehdä tämän analyysin jäljellä 114 potilasta.

todennäköisyys vaste oli 51,1% (22/43) potilailla, joilla ei ole muutoksia, 4,2% (2/47) ja 1 muutos, ja 0% (0/24) ja ≥2 muutoksia, ja nämä ero oli tilastollisesti merkitsevä (p 0,0001 Fisherin tarkka testi). Kuvio 2 esittää lukumäärän jakauma mutaatioiden kohortin ja vastaus EGFR-täsmähoitoihin lukumäärän mukaan molekyyli poikkeavuuksia yksittäisissä kasvainnäytteestä. Haitallisen vaikutuksen kasaantua muutoksia vahvistettiin myös logistinen malli, joka osoittaa, että keskimäärin yhtenäiseksi kasvu määrän muutos (s), merkitsisi vähenemistä kertoimella vastetta 96% (riskisuhde = 0,04; p 0,00001). Yhdessä nämä havainnot tarkoita, että välttämätön mutta ei riittävä ehto saavuttamaan tavoite vastaus on saada enintään yksi neljästä molekyyli muutoksia. Samoin selviytyminen analyysit osoittivat, että potilaat näkyvät eri PFS ja OS lukumäärästä riippuen molekyylitason muutoksia niiden kasvaimia. Kuviot 3 ja 4 osoittavat, että PFS ja OS olivat yhä huonompia yhtään, 1 tai ≥2 molekyylitason muutoksia (p = 0,0002 sekä PFS ja OS; logrank testi). Pareittain testit oikaistu monimuuttujille dokumentoitu, että huonompaa kliininen tulos havaittiin potilailla, joiden kasvaimissa laakeri ≥2 muutoksiin

vs

1 (p = 0,0198 ja 0,0213 PFS ja OS, vastaavasti) ja ≥2

vs

none (p = 0,0002 sekä PFS ja OS), mutta ei potilailla, joilla 1 muuttaminen

vs

kukaan (p = 0,3852 ja 0,3807 PFS ja OS, vastaavasti). Mediaani PFS oli 2,8 kk (5,0, 2,8 ja 1,7 potilaille kätkeminen ei yhtään, yksi tai ≥2 muutokset, tässä järjestyksessä); mediaani oli 9,4 kuukautta (14,6, 9,3 ja 7,3 potilaille kätkeminen ei yhtään, yksi tai ≥2 muutokset, vastaavasti).

Tiedot kohortin potilaan tiedetään molekyyli- tilan kaikki neljä merkkiä.

tiedot kohortin potilaan tiedetään molekyyli- tilan kaikki neljä merkkiä.

keskustelu

huolimatta viimeaikaisista suositusta ASCO [28] ja terveydenhuollon viranomaiset Euroopassa [11], [12] ja Yhdysvalloissa [13]

KRAS

testaus diagnostisena edellytyksenä EGFR kohdistetuissa cetuximab- tai panitumumabipitoisuus perustuvia hoitoja metastasoituneen kolorektaalisyövän, vastausprosentti joko näiden lääkkeiden on rajoitettu alle 20% villityypin

KRAS

potilaille [10], [14]. Viimeaikaiset tiedot osoittavat, että

BRAF

tai

PIK3CA

mutaatiot voivat myötävaikuttaa ylimääräisiä 20-30% vastus [20], [25], [26]. Lisäksi, myös PTEN on ehdotettu itsenäisenä ennustava tekijä setuksimabin tehon [24], [25], [27]. Kuitenkin suhteellinen ja kokonaisvaikutuksesta kaikkien näiden molekyylien muutokset kliinisen päätöksenteon jää epäselväksi. Lisäksi onko ja missä määrin esiintyminen useiden molekyylitason muutokset vaikuttavat kliinisen vasteen ja potilaan eloonjääminen on tällä hetkellä tuntematon.

EGFR

kopioluvun arvioi FISH on myös ehdotettu olevan ennustettavissa kliinisen lopputulokseen EGFR-kohdistettuja hoitomuotoja [29] – [33]. Kuitenkin

EGFR

FISH varten metastasoitunutta kolorektaalisyöpää on käynnissä laboratorionväliset standardoinnin [30] ja välttää käyttöönoton sekoittavia tekijöitä valitsimme olla suorittamatta tämän analyysin. Täällä hyödynnetty kattava molekyylitason analyysi EGFR loppupään efektorien selvittämään niiden rooli ennustettaessa vastauksena /kestävyys setuksimabia tai panitumumabia metastasoituneen kolorektaalisyövän. Samanaikainen arviointi neljän molekyyli muutoksia, pystyimme tunnistamaan jopa 70% ei-vastaajan potilaille, että tulos ei ole koskaan saavutettu ennen. Erityisesti vain kolme potilasta, joilla kasvaimia kuljettaa yhdellä muutos oli alaryhmässä vasteen, (kaksi potilasta, joilla

KRAS

mutaatioita ja yksi potilas, jolla tappio PTEN ilmaisun), kun taas ei toiset osoittivat mitään muutoksia ( ”nelinkertaistaa negatiivinen ”kasvaimet). Tämä viittaa siihen, että aiemmin on raportoitu poikkeavuuksien eli hyvin harvoja metastasoituneen kolorektaalisyövän kanssa

KRAS

mutaatioita vastaa terapiassa [9], [14], [29], [34] voi olla potilailla, kätkeminen vain yksi näistä molekyyli muutoksia, mikä ei samanaikaisesti sääntelyn purkamisesta sekä MAPK ja PI3K polkuja.

tulokset osoittavat, että yhden tai useamman mutaation

KRAS

,

BRAF

tai

PIK3CA

epäedullisesti vaikuttaa kliininen lopputulos cetuximab- tai panitumumabipitoisuus perustuvien hoitojen; kuitenkin, se mahdollisuus, että molekyyli muutokset eivät voi olla negatiivinen prognostisia biomarkkereita riippumatta kohdennettuja hoitoja olisi otettava huomioon. Rascal retrospektiivinen tutkimus suoritettiin 2721 CRC potilaista osoitti, että läsnäolo

KRAS

mutaatioita liittyy 26% suurempi riski kuolemaan johtaneita [35]. Kuitenkin ristiriitaisia ​​tietoja samasta aiheesta on äskettäin julkaistu. Vaiheen III tutkimuksessa raportoineet Karapetis et al. [14], kliinistä hyötyä potilaille, joilla on villin tyypin

KRAS

metastasoitunutta kolorektaalisyöpää todettiin Setuksimabin hoidetuilla potilailla, mutta ei verrokeilla hoidettiin oireenmukaista hoitoa vain, mikä osoittaa, että hyöty ei johtunut ennusteenluonteinen vaikutus on

KRAS

. Lisäksi, Roth et ai. [Proc Am Soc Clin Oncol gastrointestinaalisten syöpien Symposium 206, 2009; Abstr 288] testasivat ennusteen arvioinnissa per vaihe

KRAS

ja

BRAF

mutaatioita käyttäen CRC kasvain näytteet adjuvantti PETACC3 tutkimuksessa ja he eivät löytäneet mitään merkittäviä vaikutuksia uusiutumisen elinaika molempien mutaatioiden kumpikaan toisessa vaiheessa eikä vaiheessa III. Tutkimukset vaikutuksia arvioitaessa muiden molekyylien muutosten sijaan

KRAS

mutaatiot ovat rajalliset. Mitä ennustetekijöiden rooli

PIK3CA

ja

BRAF

, tutkimuksessa lukien 586 potilasta, jonka Barault et al., Laski määriä 3 vuoden pysyvyys liittyi mutaatioita ainakin yhden geenin keskuudessa

KRAS

,

BRAF

ja

PIK3CA

[36]. Tuoreessa raportissa Toi et ai. havaitsivat, että läsnäolo BRAF V600E mutaatio oli negatiivinen prognostinen markkeri 516 Metastasoivassa kolorektaalisyöpä hoidettu kapesitabiinin, oksaliplatiinin ja bevasitsumabin pohjaiset hoidot [37]. Lopuksi, Ogino et ai. raportoi, että joukko 450 potilailla, joilla on vaiheen I-III CRC joille tehtiin parantava leikkaus, kasvain

PIK3CA

mutaatio liittyy lyhyempi syöpää erityisiä selviytymisen. Tällainen haitallinen vaikutus

PIK3CA

mutaatio ennuste oli yhdenmukainen useimpien kerrostumissa kliinisten ja kasvaimen ennustavat potilaiden hoitotuloksiin. Kiinnostavaa kyllä, tämä haitallinen vaikutus rajoittui lähinnä potilailla, joilla on

KRAS

villityypin kasvaimia [38]

Yhteenvetona me dokumentoida että samanaikainen havaitseminen

KRAS, BRAF

ja

PIK3CA

mutaatioita ja arviointi menetys PTEN ilmaisun metastasoituneen kolorektaalisyövän potilaalla on merkittävä kliininen merkitys lisäämällä kyky ennustaa lopputulos EGFR-kohdistettuja hoitoja. Kun otetaan huomioon luonne meidän potilaan sarjassa, luotettavin indikaattori ennustearvo biomarkkereiden (t) on objektiivista tuumorivasteita. Tulkinta selviytymisen analyysien pitäisi todellakin otettava huomioon mahdollinen rajoitus johtuu hoidetuilla potilailla sekoitettu edellinen rivi (t) kemoterapian sisältää 10% (13/132) potilaista, jotka saivat ensilinjan setuksimabimonoterapian. Toisaalta, tutkimus tällaisia ​​potilaita on ainutlaatuinen mahdollisuus todeta ennustearvo tietyn biomarkkereiden ilman vaikutusta kemoterapiaa, joko samanaikaisesti tai edelliseen, sekä valinnan kohdistaman muita hoitoja. Kun otetaan huomioon nämä seikat, ehdotamme tässä uuden algoritmin päättää kliinisen käytön EGFR-kohdistettuja monoklonaalisia vasta-aineita, jotka perustuvat objektiivisen hoitovasteen (kuviot 5 ja 6). Tämä uusi lähestymistapa ansaitsee validointi prospektiivisissa tutkimuksissa cetuximab- tai panitumumabipitoisuus perustuvia hoitoja metastasoitunutta kolorektaalisyöpää ennen vaikuttaa kuin kliinisessä käytännössä muuttuva. Mikä tärkeintä, olemme huomanneet, että noin 20% metastasoituneen kolorektaalisyövän hoitoon vastaamattomia eivät satama mutaatioita

KRAS

,

BRAF

,

PIK3CA

eikä menetys PTEN ilmaisun ja ehdotamme määritellä nämä kasvaimet kuin ”nelinkertaistaa negatiivinen”. Puute vaste neljän negatiivisilla potilailla saattaa johtua useita syitä, mukaan lukien, mutta ei rajoitu: a) rajallinen herkkyys nykyisen sekvensointi menetelmistä pistemutaatioiden havaitsemiseksi DNA: ta FFPE kasvaimista [39]; b) kasvaimia synnyttävän vapauttaminen saman neljän geenien mekanismilla muut sitten mutaatioita (esimerkiksi monistuma raportoitu

PIK3CA

); c) esiintyminen muutoksia muissa avaintekijöitä EGFR riippuvan signaalin Cascade (kuten esimerkiksi AKT tai MAPK); ja d) läsnäolo geneettisten muutosten tyrosiinikinaasireseptorit muu kuin EGFR, joka tarjoaa vaihtoehtoisen reitin säilyminen ja /tai lisääntymistä. Edelleen molekyyli dissections EGFR-aloittanut onkogeenisiä signalointi cascade ovat todennäköisesti osaltaan parantaa räätälöinti EGFR kohdennettuja hoitoja. Kaiken kaikkiaan tuloksemme korostavat merkitystä käyttäen molekyyli-pohjainen algoritmien siirtää kiinteiden kasvaimien hoitoon osaksi aikakauden henkilökohtaisen syöpä lääkettä.

on merkitty harmaalla alueella katkoviiva kehikossa kuvataan hypoteesi syntyy tässä tutkimus.

Ehdotamme määritellä ”nelinkertaistaa negatiivinen” THE mCRCs puuttuu muutoksia

KRAS

,

BRAF

, PTEN ja

PIK3CA

.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

näytteitä kerättiin mukaisesti eettisiä ohjeita ja määräyksiä ja kirjallista suostumusta hyväksymä tarkistus hallituksen Ospedale Niguarda Ca ’Granda, Milano, Italia ja Ospedale San Giovanni, Bellinzona, Sveitsi.

Potilasjoukko ja hoito-ohjelmien

takautuvasti analysoitiin 132 potilasta, joilla EGFR-positiivisten metastasoitunutta kolorektaalisyöpää at Ospedale Niguarda Ca ’Granda (Milano, Italia), klo Oncogenomics Center, Institute for Cancer Research and Treatment, (Candiolo, Italia), tai Institute of Pathology (Locarno, Sveitsi). Potilaat antoivat tietoon perustuvan suostumuksen ja hoidettiin panitumumab- tai setuksimabin-pohjaiset hoidot at Ospedale Niguarda Ca ’Granda tai onkologian Institute of Southern Sveitsi (Bellinzona, Sveitsi). Potilaat valittiin perusteltu näyttö, hoitotuloksia voi johtua vain antoa panitumumabin tai setuksimabi. Potilaiden kliiniset ominaisuudet on esitetty taulukossa 1. Lukuun ottamatta 13 potilasta, jotka saivat setuksimabia kuin etulinjan monoterapiana [5], muut olivat epäonnistuneet vähintään yksi aikaisempi solunsalpaajahoito. Kaksikymmentä kolme (17,4%) sai panitumumabia monoterapiana, viisitoista (11,4%) potilaista setuksimabimonoterapiaan, ja yhdeksänkymmentäneljä (71,2%) setuksimabin plus irinotekaania kemoterapian. Potilailla, jotka edennyt irinotekaania kemoterapian setuksimabia annosteltiin irinotekaaniin samalla annoksella ja aikataulua, johon ne olivat resistenttejä. Hoitoa jatkettiin kunnes etenevä sairaus (PD) tai myrkyllisyys tapahtui, kuten per vakioperusteita [40].

Kliininen arviointi ja kasvaimen vasteen kriteerit

Kliininen vaste arvioitiin 6-8 viikon välein yhdessä radiologisten tutkimus (CT tai MR) mukaan RECIST kriteerien. Tavoite tuumorivasteita luokiteltiin osittaisen vasteen (PR), vakaa tauti (SD), ja PD. Potilaat, joilla on SD- tai PD myös määrittää ei-vastetta. Hoitovaste arvioitiin myös jälkikäteen riippumattomien radiologien.

Molecular analysoi

Formaliinifiksoidusta parafinoidut (FFPE) kasvainkudospalasta tarkistettiin laadun ja kasvaimen sisältöä. Yksi edustaja lohkon, joko primaarikasvaimen tai maksan etäpesäkkeiden saatavuudesta riippuen, joka sisältää vähintään 70% pahanlaatuisten solujen, valittiin kussakin tapauksessa. Genomi-DNA uutettiin käyttäen QIAamp Mini Kit (Qiagen, Chatsworth, CA, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Molecular analyysit suoritettiin kudosnäyte primäärikasvain käytettiin alustavan diagnoosin 130 ulos 132 tapausta. Kahdessa tapauksessa vain analyysi suoritettiin metastaasien (maksa).

PTEN ilmaisu

PTEN-proteiinin ilmentymistä arvioitiin immunohistokemiallisesti 3 um FFPE kudosleikkeiden raportoitu [24] muutamin muutoksin . Lyhyesti, anti-PTEN Ab4 (Thermo Fisher Scientific, CA, USA) 1:200 laimennus ja PTEN Ab2 (Neomarkers, Fremont, CA) 1:50 käytettiin klo Niguarda sairaalan ja Institute of Pathology Locarnon vastaavasti. PTEN-proteiinin ilmentymistä pääasiassa havaittu sytoplasminen tasolla, kun taas hyvin harvat tapaukset osoittavat myös ydin- positiivisuutta. Kasvaimet pidetään negatiivisena, eli menetys PTEN ilmaisun, kun puuttuminen tai väheneminen Immunovärjäyksen nähtiin yli 50% soluista verrattuna sisäisen valvonnan (eli verisuonten endoteelisolujen ja hermoja). Normaali endometrium käytettiin ulkoisena positiivisena kontrollina. Arvioinnit suoritettiin kaksi riippumatonta patologia ilman tietoa kliinisten tietojen tai tulosten molekyyli- analyysejä.

mutaatioanalyysiin

KRAS

,

BRAF

ja

PIK3CA

tuumorinäytteissä

etsitään

KRAS

(eksoni 2), ja

BRAF

(eksoni 15) ja

PIK3CA

(eksonit 9 ja 20) mutaatioita.

KRAS

eksoni 2 sisältää kodonit 12 ja 13,

BRAF

eksoni 15 sisältää kodonin 600,

PIK3CA

eksoni 9 sisältää kodoneja 542 ja 545 ja

PIK3CA

eksoni 20 sisältää kodonin 1047, jossa valtaosa mutaatioita tapahtuu näiden geenien [29]. Luettelo käytettyjen alukkeiden mutaatioanalyysi on saatavilla tekijöiden pyynnöstä. Kaikki näytteet suoritettiin automatisoitu sekvensointi ABI PRISM 3730 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Kaikki mutatoidut tapausta vahvistettiin kahdesti riippumattoman PCR-reaktioissa.

Tilastolliset analyysit

Kaikki tiedot analysoitiin sopivia kuvailevia tilastollisia menetelmiä, tarkistettuaan niiden jakaumia avulla Shapiro-Wilk testi. Ristiintaulukointeja laadullisten muuttujien analysoitiin Fisherin testiä, kun taas vertailun jatkuvia muuttujia suoritettiin Studentin t tai Mann-Whitney U testejä. Logistinen regressio kanssa Wald testi, ja tarkka logistinen regressio (käsittelevät yksisuuntainen syy, kuten tapauksessa, jossa kaikki potilaat ryhmässä on positiivinen tai negatiivinen tulos), jossa on tarkka p-arvo (kuten todennäköisyys tarkkailemaan äärimmäisissä arvoa suhteessa riittäviä tilastoja tietyn regressio parametri) arviointiin käytettiin yhden ja usean analyysi binary päätepiste. Selviytyminen analyysi suoritettiin Kaplan-Meier perhe toiminto seuraa logrank testi, ja Coxin mallin; suhteellinen vaara oletus tarkistettiin käyttäen Schoenfeld jäännöksiä. Tilastollinen merkittävyys oletettiin p 0,05. Kaikki tilastolliset analyysit tehtiin käyttäen Stata /SE 10,1 (jäljempänä StataCorp, College Station, TX-USA).

Kiitokset

Kiitämme Salvatore Artale kliinistä hoitoa, Federico Pozzi tiedonhallinnan, Carlo Zanon ja Silvia Benvenuti varten sekvenssianalyysillä ja tiedonhallinnan, ja Roberta Schiavo valvonnasta kasvaimen näytteiden hankinnan.