Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tarkoitus

kaspaasi 8 (CASP8) on keskeisessä asemassa apoptoottisten polku ja poikkeuksellisesta säätelystä tämän reitin aiheuttaa monia sairauksia kuten syöpää. Geneettisiä variantteja rs3834129 (CTTACT /-) ja rs3769821 (T /C) promoottorialueen

CASP8

geenin dokumentoitu liittyvän useiden kiinteiden syöpien ja non-Hodgkinin lymfooma (NHL), vastaavasti, vaikka joidenkin ristiriitoja. Meidän tavoitteena oli erottaa mahdollisia yhteyksiä näiden kahden vaihtoehdon ja rs113686495 (CTGTCATT /-), sekä

CASP8

mRNA ja proteiinin ilmentyminen tasoilla peräsuolen syöpä (CRC) in Han-kiinalaisia.

Methods

genotyyppi

CASP8

geneettisiä variantteja 305 CRC potilaiden ja 342 terveitä yksilöitä Kunming, Lounais-Kiinassa. Ekspressiotasot

CASP8

mRNA ja proteiini kvantitoitiin pariksi syöpä- ja paracancerous normaaleissa kudoksissa käyttämällä reaaliaikaista kvantitatiivista PCR: ää ja western blot, vastaavasti. Vertasimme taajuudet alleelien, genotyyppien ja haplotyyppien välillä tapausten ja valvontaa. Korrelaatio

CASP8

mRNA ja proteiini ekspressiotasot pariksi syöpä- ja paracancerous normaaleissa kudoksissa potilaista, joilla on eri genotyypit ja kliinisen ilmentymän arvioitiin myös.

Tulokset

Ei ollut yhdistys on

CASP8

geneettisiä variantteja, joissa CRC meidän tapauskontrollitutkimuksessa.

CASP8

geenin mRNA ekspressiotasot syöpä- ja paracancerous normaaleista kudoksista olivat samanlaisia ​​ja ei ollut merkittävää eroa välillä eikä eri genotyypit ja kliinisiä piirteitä. Olemme kuitenkin havainneet, että CASP8 proteiini taso oli merkitsevästi pienempi syöpäkudokset kuin pariksi paracancerous normaaleissa kudoksissa.

Johtopäätökset

Tuloksemme viittaavat siihen, että kolme

CASP8

geneettisiä variantteja voi ei liittyä CRC riski Han kiinalaisia ​​Lounais-Kiinassa. Poikkeava CASP8 proteiinin ilmentyminen voi olla rooli patogeneesissä CRC.

Citation: Xiao M-S, Chang L, Li W-L, Du Y-S, Pan Y, Zhang D-F, et ai. (2013) Genetic polymorfismit

CASP8

geenipromoottorin Välttämättä liittyä peräsuolen syövän Han kiinalaisia ​​Lounais-Kiinassa. PLoS ONE 8 (7): e67577. doi: 10,1371 /journal.pone.0067577

Editor: Jirong Long, Vanderbilt University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 27 maaliskuu 2013; Hyväksytty: 20 toukokuu 2013; Julkaistu: 02 heinäkuu 2013

Copyright: © 2013 Xiao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Top Talents ohjelma Yunnanin maakunnassa (2009CI119), National Natural Science Foundation of China (30925021) ja Kiinan tiedeakatemia. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on yksi yleisimmistä syövistä ympäri maailmaa, jossa on 5-vuoden eloonjäämisaste 30-65% [1]. Vaikka suurin osa CRC (lähes 80%) on satunnaista [2], [3], noin 35% CRC potilaista voidaan katsoa geneettisen taustan tutkimuksen mukaan monozygotic kaksoset [3], mikä tarkoittaa, että molemmat geneettiset ja ympäristötekijät on keskeinen rooli patogeneesissä CRC. Monet ihmiset olivat altistuneet ympäristön riskitekijät, kuten tupakointi [4], juominen [4], epäterveelliset ja elämäntapojen [5], [6], mutta vain osa niistä kärsi CRC, mikä viittaa siihen, että geneettiset variaatiot osittain määrittää alttiuden CRC.

Apoptosis, jota kutsutaan myös ohjelmoidun solukuoleman, on mukana ylläpitää kudosten homeostaasin, kehitys ja poistaa ei-toivotut solut monisoluisten organismien [7]. Toimintahäiriö tämä prosessi johtaa kasvaimien syntyyn [8]. Apoptoottisen solukuoleman välittää perheen erittäin konservoituneita kaspaasien (kysteiini-riippuvainen aspartaatti-proteaasien), joka voidaan jakaa ”initiaattori” kaspaasien ja ”efektori” kaspaasien [9]. On lähinnä kaksi apoptoottisia reittejä ihmisen: ulkoista tai reseptorivälitteisen reitin ja luontaisia ​​tai mitokondrion reitissä molemmat käyttävät kaspaaseiksi Cascade [10], [11], [12].

Caspase 8, koodaama

CASP8

geeni (joka sijaitsee kromosomissa 2q33-q34 ja on 14 eksonia), toimii aloitteentekijänä kaspaasi apoptoottisessa koulutusjakson ja ratkaiseva puolustava este vastaan ​​pahanlaatuinen leviämisen ja kasvaimen kehittymisen [7], [8] , [11], [13]. Indel polymorfismi, rs3834129 (CTTACT /-, kirjoitetaan 6 bp /del seuraavassa tekstissä), että promoottorialueen

CASP8

geenin raportoitu liittyvän alttiuteen erilaisia ​​syöpiä, mukaan lukien CRC Kiinan väestö [14]. Vaikka tämä muunnos myöhemmin raportoitu liittyvän riskin hiiliteollisuuden työntekijöille ja virtsarakon syöpien Kiinan väestö [15], [16], positiivista yhteyttä ei toistettu myöhemmissä laajamittaisesti tapausverrokkitutkimukset Euroopan ja Amerikan populaatiot [17 ], [18]. Genotyyppien TC ja CC toisen yhden nukleotidin polymorfismi (SNP), rs3769821 (T /C), joka sijaitsee myös promoottorin alueella

CASP8

-geenin, havaittiin vaikuttavan geneettinen alttius non-Hodgkin-lymfooman (NHL) on yhdistetty analyysi kolmen populaation Yhdysvalloista Amerikan ja Australian [19]. Kuitenkin tämä positiivinen tulos ei vahvistettu viimeaikaisissa geneettinen analyysi Han-kiinalaiset NHL ja lusiferaasianalyysissä [20].

erottaa onko rs3834129 ja rs3769821 edistää geneettinen alttius CRC Han kiinalaisia ​​Lounais-Kiinassa, me genotyyppi nämä kaksi vaihtoehtoa yhdessä rs113686495 (CTGTCATT /-, kirjoitetaan 8 emäsparin /del seuraavassa tekstissä, joka sijaitsee 50 bp alavirtaan rs3769821). Olemme edelleen määrällisesti mRNA ilmentymistason

CASP8

geenin sekä syöpä- ja paracancerous normaaleissa kudoksissa CRC potilaiden eri genotyypit tunnistamaan mahdolliset vaikutukset eri alleelien geenien ilmentymisen. Lisäksi, vertasimme mRNA-tasot CRC potilailla, joilla on erilaiset kliiniset ominaisuudet. CASP8 proteiini taso mitattiin pariksi syöpä- ja paracancerous normaaleissa kudoksissa alkaen yhteensä 39 potilasta, verrata mallia mRNA ilmaisun. Tuloksemme osoittivat, että

CASP8

geneettisiä variantteja ja mRNA: n ilmentymisen taso oli todennäköisesti liittyä CRC Han-kiinalaisia. Olemme kuitenkin havainneet, että syöpäkudokset oli huomattavasti alhaisempi CASP8 proteiinia kuin paracancerous normaaleissa kudoksissa, mikä viittaa siihen, että mahdolliset jälkeinen transkription säätelyyn tämän geenin on aktiivinen rooli kehityksessä CRC.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

tutkimus hyväksyi Institutional Review board of Kunming Institute of Zoology. Kirjallinen suostuu mukainen opinkappaleisiin Helsingin julistuksen saatiin jokaiselle osallistujalle ennen tutkimusta.

Tutkimus väestö- ja Kudosnäytteiden

syöpäkudokset kerättiin 305 han-kiinalaisten kanssa CRC. Nämä potilaista leikattiin First Affiliated sairaala Kunming Medical University vuodesta 2010 vuoteen 2011. Kaikki potilaat histopathogically varmistettiin olevan CRC ja saanut mitään lääketieteellistä hoitoa (paitsi 12 potilasta) ennen leikkaus poistaa kasvain. Vaiheessa syöpä oli luokiteltu seitsemäs painos AJCC Cancer Staging Handbook [21]. Verinäytteet saatiin 342 tervettä henkilöiden (mukaan lukien 133 raportoitu edellisessä tutkimuksessa [20]). Demografiset tiedot ja histopatologiset ominaisuudet CRC potilaiden ja terveiden verrokkien esitetty taulukossa 1. Keräsimme myös paracancerous normaaleissa kudoksissa joillekin potilaille; tämä normaali kudos sijaitsi alueella viisi senttimetriä päässä ovat rajan syöpäkudoksen, ja patologinen tutkimus tämän kudoksen ei havaittu merkkejä pahanlaatuisten solujen.

genotyypitys järjestäjän perimä on CASP8 Gene

Genominen DNA uutettiin syöpäkudoksiin CRC potilaiden ja verinäytteet terveen kontrollin käyttäen standardi fenoli /kloroformilla menetelmällä. Me noudattivat samaa lähestymistapaa ja kunnossa kuvattu edellisessä tutkimuksessa genotyypin kolme perimä

CASP8

promoottorialue [20]. Lyhyesti, 6 bp /del ja 8 bp /del polymorfismit määritettiin polymeraasiketjureaktiolla (PCR) ja polyakryyliamidigeelielektroforeesi (PAGE). SNP rs3769821 genotyypitettiin PCR-RFLP-määritystä.

Kvantitatiivinen RT-PCR CASP8 mRNA Expression

Kokonais-RNA eristettiin pariksi syöpä- ja paracancerous normaaleissa kudoksissa 99 CRC-potilailla, jotka eivät saaneet sädehoitoa ja /tai kemoterapiaa ennen leikkausta käyttäen TRIZOL (Invitrogen, Carlsbad, CA) valmistajan ohjeita. Yksi mikrogramma kokonais-RNA: ta käytettiin syntetisoimaan yhden juosteen cDNA käyttäen oligo (dT) 18-mer alukkeena ja MMLV-käänteistranskriptaasia (Promega, Madison, WI) lopullisessa reaktiotilavuudessa 25 ui. Alukkeet CASP8-F (5′-GCAGAGGGAACCTGGTACAT-3 ’) ja CASP8-R (5′-TCATCCTTGTTGCTTACTTCATAG-3’) käytettiin havaitsemaan

CASP8

mRNA-transkriptien A (GenBank NM_001228.4), B (NM_033355.3), C (NM_033356.3), F (NM_001080124.1) ja G (NM_001080125.1). Reaaliaikainen PCR suoritettiin IQ2 Real-Time PCR-järjestelmä (Bio-Rad, Hercules, CA) ja SYBR

Esisekoite Ex Taq

II (Tli RNaasiH Plus; KaRa, Otsu, Shiga) ja seuraavat vahvistus kunto: ensimmäinen denaturaatio 94 ° C: ssa 3 min, jota seurasi 35 sykliä 94 ° C: ssa 15 s, 50 ° C: ssa 15 s, ja 72 ° C: ssa 20 s, ja lopullinen laajennus sykli 72 ° C: ssa 5 min.

GAPDH

(Glyseraldehydi 3-fosfaattidehydrogenaasi) -geeni monistettiin normalisoimiseksi. Käytimme alukeparia 5’CAACTACATGGTTTACATGTTC -3 ’/5′-GCCAGTGGACTCCACGAC-3’ ja samaan lämpökäsittelyyn parametrit (lukuun ottamatta muutosta hehkutus lämpötila 55 ° C) kuin

CASP8

geeni vahvistamaan

GAPDH

geeni. Jokainen näyte suoritettiin kaksi kaksoiskappaleet.

Western Blot analyysi CASP8 Protein

Kudokset pestiin kylmällä ACK puskurilla poistaa punasolut ja survottiin lyysipuskuriin toimitetaan proteaasinestäjien kanssa käyttämällä pellettitoimintatila Pestle (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Proteiinikonsentraatiot määritettiin BCA-määrityksellä mukaisesti valmistajan ohjeiden (Beyotime, Haimen, Jiangsu) käyttäen naudan seerumin albumiinia standardina. Kaksikymmentäviisi ug kokonaisproteiinia erotettiin 15% SDS-PAGE: lla ja siirrettiin PVDF-kalvolle (Roche Diagnosis, Indianapolis, IN). Kun oli salvattu 5% rasvatonta maitoa 2 tuntia huoneenlämpötilassa, kalvo blotattiin hiiren anti-kaspaasi-8-vasta-ainetta (1:4000, Cell Signaling Technology, Danvers, MA) 4 ° C: ssa yön yli. Kalvo pestiin TBST: llä kolme kertaa 10 minuuttia kutakin, mitä seurasi inkubointi vuohen anti-hiiren IgG sekundääristä vasta-ainetta (1:10000, KPL, Gaithersburg, MD) 1 h huoneen lämpötilassa. Kalvo pestiin TBST: llä, kuten edellä on kuvattu ja kehitettiin käyttäen Immobilon Western Chemiluminescent HRP-substraattia (Millipore, Billerica, MA). Β-aktiini kvantifioitiin kunkin näytteen seuraavissa samaa menettelyä käyttäen hiiren anti-β-aktiini vasta-aineella (1:100000, Zhongshan Goden Bridge Biotechnology Co., Ltd, Peking) ja normalisointi. Tiheys kunkin proteiinin kaistan laskettiin käyttäen Image J ohjelmisto (NIH, Bethesda, MD).

Tilastollinen analyysi

Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttäen R-ohjelma (versio 2.11.1, Wien , Itävalta) ja

P

arvo alle 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä. Virrankulutus- suoritettiin käyttäen Quanto ohjelmistoa [22]. Poikkeama Hardy-Weinberg tasapaino (HWE) arvioitiin kullekin vaihtoehdolle käyttämällä

χ

2-testi (df = 1). Alleelifrekvenssit kolmesta varianttien tapausten ja kontrollien välillä verrattiin myös käyttämällä

χ

2-testi. Pareittain D ”arvosta eri variantteja rs3834129, rs3769821 ja rs113686495 tapauksissa ja valvonta määritettiin Haploview v4.2 [23]. Haplotypes ja niiden taajuudet arvioitiin perustuen Bayesin menetelmään käyttämällä vaiheen 2.1 [24]. Ehdoton regressioanalyysimme käytettiin laskemaan kerroinsuhde (OR) ja 95% luottamusvälit (CI), arvioimiseksi mahdollisia yhteyksiä eri genotyyppien rs3834129, rs3769821, ja rs113686495 CRC. Genotyypit 6 kp /6 bp rs3834129, TT of rs3769821, ja del /del of rs113686495 ja tärkeimmät haplotyyppi käytettiin vertailukohtana ikä- (≤50 ja 50 vuotias) ja sukupuoli. Parilliset

t

-testiä käytettiin määrittämään ero

CASP8

geeniekspressiotasot kahden ryhmän välillä. ANOVA käytettiin vertaamaan keskimääräisen tason

CASP8

geeniekspressiota ryhmissä enemmän kuin kaksi.

Tulokset

puute Association between Kolme Geneettiset variantit CASP8 Järjestäjä ja CRC

otoskoko (305 potilasta vs. 342 kontrollit) alle sovitetun tapaus-verrokki muotoilu log-lisäaine perintö tilassa oli riittävä tilastollinen voima yhdistyksen tutkimusta. Niistä kolme vaihtoehtoa analysoitiin vertailupopulaatiossa vähäisiä alleelin taajuus (MMM) vaihteli 21,1%: sta 26,7%. Ottaen huomioon MAF on 0,211, tilastollisen tehon havaitsemaan kerroinsuhde (OR) arvo 1,5 riskien alleelin odotettiin olevan 85%, kun taas virtaa MAF 0,267 odotettiin olevan 90%.

alleelifrekvenssien rs3834129, rs3769821, ja rs113686495 on

CASP8

geenin promoottorin tapauksessa ja kontrolliryhmissä oli taulukossa 2 luetellut genotyyppi jakautuminen kaikkien näiden variantit ei poikennut HWE. Mitään tilastollisesti merkitsevää eroa ei havaittu välillä tapausten ja kontrollien kunkin alleelin rs3834129, rs3769821, ja rs113686495. Huomaa, että joitakin vähäisiä eroja alleelifrekvenssien rs3834129 meidän näytteet ja CRC näytteet Sun et al. [14] (taulukko 2), mikä saattaa heijastaa alueellisen eron. Ei ollut yhdistys tiettyjen genotyypin kolmen varianttien kanssa CRC (taulukko 3).

Koska variantteja rs3769821 ja rs113686495 olivat vahvoja kytkentäepätasapainossa sekä tapauksessa ja kontrollipopulaatioissa (kuvio 1) olemme päätellä haplotyyppien perustuvat variantit rs3834129 ja rs3769821 vain ja arvioidaan mahdollisten välinen yhteys haplotyypin ja CRC riski. Samoin emme havainneet yhdistys haplotyypin kanssa CRC (taulukko 4). Yhdessä tuloksemme ehdotti, että geneettisiä variantteja

CASP8

geenipromoottorialueen ei todennäköisesti anna merkittävää riskiä CRC Han kiinalaisia ​​Lounais-Kiinassa.

Numerot sisällä neliöt näkyvissä D ’ja r

2 tulokset (x100) pareittain kytkentäepätasapaino- (LD) punaisella tai valkoisia kaltevuus kuvastaa suurempia alentaa LD tulokset.

CASP8 mRNA Expression tasot CRC kudokset ja vastaava normaali kudokset Samanlaisia ​​

tutkia

CASP8

ekspressiotasot eroa potilaiden välillä ja sisällä vastaaviin normaaleihin ja kasvaimen näytteet ja sitten käsitellä onko korrelaatio genotyyppi olemme analysoineet

CASP8

mRNA ekspressiotaso pariksi syöpä- ja paracancerous normaaleissa kudoksissa 99 potilailla, jotka eivät saaneet mitään hoitoa ennen leikkausta. Samanlaisia ​​perimän tulos ei ollut tilastollisesti merkitsevää eroa, että

CASP8

mRNA-tasolla joko syöpä- tai paracancerous normaaleissa kudoksissa potilailla, joilla on eri genotyypit (kuva 2). Huomaa, että mRNA: n ilmentymisen kudoksissa, joiden genotyyppiä del /del of rs3834129, CC rs3769821, ja 8 bp /8 bp rs113686495 oli suhteellisen alempaan arvoon kuin muiden genotyyppien (kuvio 2), ja tämä saattaa johtua pienempi määrä potilaita, joilla on näitä genotyypit jos ei aiheuttama cis-asetusta, koska nämä SNP ovat promoottorialueen

CASP8

geeni.

Niistä 99 hoitamattomista potilaista mitattiin

CASP8

mRNA ilmaisun, yksi potilas ei genotyyppi ja jätettiin pois.

havaita mahdolliset vaikutukset

CASP8

geenin synnyssä ja kliiniset ominaisuudet CRC vertasimme

CASP8

mRNA ekspressiotasot syöpä- kudoksissa ja paracancerous normaaleista kudoksista kaikilla potilailla, mutta havaittu merkitsevää eroa (

P

= 0,102; Kuva 3a). Samoin

CASP8

mRNA: n ilmentymisen syöpäsoluissa kudoksissa potilailla, joilla on eri kliinisiä piirteitä ei osoittanut mitään merkittävää eroa (kuviot 3b, c, d, e, f). Syöpä- ja paracancerous normaaleissa kudoksissa potilaista eri vaiheissa syövän kehittymisen ja etenemisen oli samanlainen taso

CASP8

mRNA ilmaisu (kuvio 4), vaikka syöpäkudokset potilailta T4 vaiheessa oli marginaalisesti merkitsevä korkeampi mRNA ilmaisu kuin pariksi paracancerous normaalien kudosten (

P

= 0,045; Kuva 4c). Ilmeisesti

CASP8

geenin mRNA-ilmentymisen määrä ei tiukasti liittynyt CRC meidän potilailla.

TNM lavastus oli luokiteltu seitsemäs painos AJCC Cancer Staging Handbook [21], ja sijainti ja erilaistumista syöpäkudoksen määritettiin kirurgisten ja histopatologinen tutkimus, vastaavasti. Ei ollut merkittävää eroa

CASP8

mRNA: n ekspression syöpä- ja paracancerous normaaleissa kudoksissa kaikki 99 potilasta (a).

CASP8

mRNA: n ilmentymisen syöpäsoluissa kudoksissa potilailla, joilla on eri kliinisiä piirteitä ei osoittanut mitään merkittävää eroa (b-f). A-paksusuoli, T-paksusuoli, D-paksusuolen ja peräsuolen seistä nouseva paksusuoli, poikittainen paksusuoli, laskeva paksusuoli ja peräsuoli, vastaavasti.

TNM lavastus oli luokiteltu seitsemäs painos AJCC Cancer lavastus Handbook [21].

CASP8 proteiini taso laski merkittävästi vuonna syöpäkudokset Verrattaessa Paired Paracancerous Normaali kudokset

Monet geenit säädellään kautta transkription jälkeinen mekanismi, esimerkiksi säätelyä istukan kasvutekijä verisuonten endoteelisolujen kasvutekijän endoteelisoluissa [25]. Tutkia, onko

CASP8

geenillä on rooli CRC kehittämisessä läpi post-transkription säätelyyn, valitsimme pariksi syöpä- ja paracancerous normaaleissa kudoksissa 39 potilasta, joilla on erilaiset

CASP8

promoottori genotyyppejä, mRNA ilmaisu ja määrällisesti ekspressiotaso (taulukko S1). Havaitsimme merkittävän alhaisempi CASP8 proteiinin syöpäkudokset kuin paracancerous kudoksia (

P

= 0,005), vaikka

CASP8

mRNA tasot näistä näytteistä olivat samanlaisia ​​(

P

= 0,464, kuva 5).

genotyyppi ja kliiniset tiedot näistä potilaista on lueteltu taulukossa S1.

keskustelu

kaspaasi 8 (

CASP8

) on tunnettu hankkija kuoleman signaalin apoptoottisen reitin, joka oli mukana syöttämällä reseptorin stimulaation, permeabilisation ulomman mitokondrion kalvon ja vapautumista pro-apoptoottisten proteiinien sytosoliin mitokondrioista [26]. Se toimii ratkaiseva puolustava este vastaan ​​pahanlaatuinen leviämisen ja kasvaimen kehittymisen [7], [10], [27]. Aiemmat tutkimukset ovat esittäneet ristiriitaisia ​​tuloksia koskien mahdollista roolia geneettisiä variantteja

CASP8

geenin promoottorialue kasvainten synnyssä [14], [15], [16], [17], [18], [20] , [28], [29], [30]. Vuonna edelläkävijä tutkimuksessa, geneettinen variantti (rs3834129)

CASP8

promoottorialue liittyi monenlaisia ​​kiinteitä syöpiä, kuten keuhko-, ruokatorven, mahalaukun, peräsuolen, kohdunkaulan, ja rintasyöpiä Kiinan väestön vaikuttamalla sp1 transkriptiotekijä sidoskohdan ja

CASP8

geeniekspressiota [14]. Tämä alustava havainto varmistettiin myöhemmin tapaus-verrokki-yhdistys tutkimukset itsenäinen kiinalainen näytteissä virtsarakon syöpä [16] ja hiili työntekijöiden pneumokonioosista [15]. Kuitenkin useat muut selonteot eivät jäljitellä yhdistyksen välinen 6 kp /del polymorfismi ja useita syöpiä eri väestöissä [18], [30], [31], [32]. Nämä epäjohdonmukainen tulokset saattavat selittyä eri geneettisissä taustoissa väestön eri tutkimuksissa [33], koska taajuus 6-emäsparin del alleeli oli merkitsevää eroa Aasian ja valkoihoinen väestö (22,4% vs. 49,1%) [32], [34 ]. Tuoreessa tutkimuksessa, Lan ja työtoverit [19] esittänyt todisteita siitä, että toinen SNP rs3769821

CASP8

promoottorialue merkitsevästi yhteydessä geneettinen riski NHL. Kuitenkin emme onnistuneet toistamaan tämän tuloksen Han Chinese NHL ja solujen lusiferaasianalyysissä ei osoittanut mitään eroa promoottorialueen, joka sisältää eri alleelien [20]. Tähän asti, onko

CASP8

geeniekspressiota voi vaikuttaa patogeneesi CRC on edelleen kiistanalainen [35], [36], [37]. On välttämätöntä arvioida uudelleen mahdollista vaikutusta promoottorivariantteja ja ilmentymistä

CASP8

geenin CRC.

Tässä tutkimuksessa analysoimalla CRC potilaita Kunming, Yunnanin maakunnassa, meidän tarkoitus vastata onko

CASP8

geeni oli aktiivisesti mukana kehittämässä CRC. Ensin seulottiin kolme geneettisiä variantteja

CASP8

-geenin promoottorialueen, jossa kaksi on raportoitu liittyvän joilla on kiinteitä kasvaimia (rs3834129; [14]) ja NHL (rs3769821; [19]). Sitten määrällisesti

CASP8

mRNA tasolla pariksi syöpä- ja paracancerous normaaleissa kudoksissa edelleen erottaa mahdollisia korrelaatio

CASP8

genotyypit ja mRNA: n ilmentymisen. Emme löytäneet yhdistys

CASP8

promoottori variantteja CRC ollessa kyseessä ja vertailunäytteet (taulukot 2 ja 3). Lisäksi emme löytäneet tilastollisesti merkittävää eroa

CASP8

mRNA-tasolla, jos potilaalla on eri genotyypit (kuva 2). Nämä negatiiviset tulokset olivat yhdenmukaisia ​​aiempien lusiferaasianalyysissä [20], jossa havaitsimme eroa vektoreille eri alleelien

CASP8

promoottori.

Käytettävissä olevat kliiniset tiedot potilaille tarjosi meille mahdollisuuden arvioida korrelaatio

CASP8

geenien ilmentyminen ja kehittämiseen CRC. Ryhmittelemällä potilailla mukainen kasvaimen vaiheessa, etäpesäke, ja erilaistumisen tilasta, ei havaittu olevan merkittävää eroa

CASP8

mRNA: n ekspression tasojen syöpä- ja paracancerous normaaleista kudoksista, ja potilaiden välillä, joilla on erilaiset kliiniset piirteet (kuviot 3 ja 4), viittaa siihen, että

CASP8

mRNA ilmaisu ei ehkä ratkaiseva rooli CRC. Samanlainen kuin meidän havainto, Pan et al. [36] myös ei havaittu merkittävää eroa

CASP8

mRNA-tasot normaaleissa limakalvo, polyypit, ja CRC. Kuitenkin toisin kuin kaksi aikaisemmin raportoidussa tutkimuksessa, että

CASP8

ilmentyminen säädeltiin aikana ja peräsuolen syövän synnyn [35], [37], osoitimme, että CASP8 proteiinin taso syöpäkudoksiin oli merkittävästi pienempi kuin pariksi paracancerous normaaleissa kudoksissa (kuvio 5). Epäjohdonmukainen kuvio

CASP8

mRNA ja proteiini ekspressiotasot Tässä tutkimuksessa todettiin, että transkription jälkeinen sääntely, kuten liiallinen ubikitiinipromoottori of CASP8 proteiinin kasvainkudoksessa ja /tai miRNA asetusta, voi olla ratkaiseva merkitys kehittäminen CRC. Lisäkarakterisointia tulisi suorittaa tulevaisuudessa jähmettyä tätä spekulointia.

Tutkimuksemme oli useita rajoituksia. Ensinnäkin, otoskoko (305 tapausta ja 342 kontrollit) assosiaatio analyysi oli suhteellisen pieni ja vain kolme variantit promoottorialueen

CASP8

geeni genotyypattiin, jotka eivät ehkä ole riittävästi voima havaita vaikutuksia olettaen suhteellisen alhainen riskisuhde. Lisätutkimukset suurempi määrä näytteitä ja geneettisiä variantteja on välttämätöntä tarkistaa johtopäätöksemme. Toiseksi, meidän vain analysoitiin

CASP8

mRNA ja proteiinin ilmentyminen alaryhmässä CRC potilailla. Kuten edellä on mainittu, olemme havainneet vähentää ilmentymisen tietyn genotyypin (kuvio 2). Enemmän potilailla tulee selvittää varmasti sulkea pois mahdollisia aiheuttama harha pieni määrä potilaita näissä ryhmissä. Kolmanneksi, emme poimia kaikki

CASP8

transkriptien /lähtöaineiden tässä tutkimuksessa. Meidän mittaus

CASP8

mRNA-transkriptien A, B, C, G ja G yhdessä määrityksessä voinut erottaa mikä transkriptio on tärkeä rooli kiinnostavaan kudokseen. Lopuksi, emme näytön mutaation koodaava alue

CASP8

geenin. On edelleen epäselvää, onko tietty CASP8 mutantti vaikuttaa CRC kehitykseen. Kim ja työtoverit [38] on raportoitu, että mutaatioiden läsnäolon

CASP8

-geenin koodaava alue voi aiheuttaa toimintahäiriöitä apoptoottisen reitin, mikä voi lopulta edistää CRC.

Yhdessä me arveltu, että

CASP8

geeni voi aloittaa CRC kehittymistä ja etenemistä, jos sellaisia ​​on, säätelemällä proteiinin tason ja /tai koodaavan alueen toiminnallinen mutaatio (t), sen sijaan, että mRNA: n ilmentymisen.

Johtopäätökset

Huomasimme, että geneettisiä variantteja rs3834129, rs3769821 ja rs113686495

CASP8

promoottorialue eivät liittyneet geneettinen alttius CRC Han-kiinalaiset Lounais Kiinasta. Edelleen analyysit

CASP8

geeniekspression syöpä- ja paracancerous kudoksiin eikä korreloinut mRNA ilmaisun tasolla eri genotyypit ja etenemisestä CRC. Olemme kuitenkin havainneet, että CASP8 proteiini oli merkittävä pienempi syöpäkudokset kuin pariksi paracancerous normaaleissa kudoksissa, vaikkakin molemmissa näytteissä oli samanlaiset mRNA-ilmentymisen tasoa. Nämä tulokset viittaavat siihen, poikkeava ilmaisu ja /tai toimintahäiriön CASP8 proteiini on aktiivinen rooli CRC kehittymistä ja etenemistä. Independent väestö suurempia otoskoko ja funktionaalisia määrityksiä tarvitaan edelleen vahvistaa havaintomme.

tukeminen Information

Taulukko S1.

genotyypin ja patologinen tiedot 39 potilasta, jotka analysoitiin CASP8 proteiinin ilmentymisen.

doi: 10,1371 /journal.pone.0067577.s001

(DOC) B

Kiitokset

Kiitämme potilaita lahjoittamisesta kudoksia. Kiitämme myös kaksi anonyymi tuomarit heidän rakentavia kommentteja.