Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Microseminoprotein-beeta (MSMB) säätelee apoptoosin ja käyttämällä genomin laajuinen yhdistys tutkii rs10993994 yhden emäksen monimuotoisuus

MSMB

promoottori on liitetty lisääntynyt riski sairastua eturauhasen syöpä. Promoottori sijainti riskin alleelin, ja sen kyky vähentää promoottorin aktiivisuutta, ehdotti, että rs10993994 riski alleeli voi aiheuttaa alensi MSMB hyvänlaatuisen kudoksen mikä lisää eturauhassyövän riskiä.

Menetelmät /Principal Havainnot

MSMB ilmentymistä hyvänlaatuiset ja pahanlaatuiset eturauhasessa tutkittiin käyttäen immunohistokemia verrattuna rs10993994 genotyyppi. Virtsan MSMB pitoisuudet määritettiin ELISA: lla ja korreloi virtsan PSA, läsnäolo tai puuttuminen syövän, rs10993994 genotyyppi ja alkamisiällä. MSMB tasot eturauhasessa ja virtsa oli vähentää huomattavasti tuumorigeneesiä. Virtsan MSMB oli parempi kuin virtsan PSA erottumaan miesten eturauhassyövän lainkaan Gleason laadut. Suuren riskin alleeli liittyi heterogeenisuuden MSMB värjäystä ja menetys MSMB sekä kudosten ja virtsan hyvänlaatuista eturauhasen.

Johtopäätökset

Nämä tiedot osoittavat, että jotkin suuri riski alleelit löydetty käyttäen genominlaajuisten yhdistys tutkimukset tuottavat fenotyyppivaikutukset mahdollisten kliinistä hyötyä. Tarjoamme yhdistää ensimmäisen kerran alhainen penetrance polymorfismin eturauhassyövän ja mahdollinen testi ihmisen kudoksiin ja kehon nesteiden. On mahdollista kehittää kudosten ja virtsan MSMB varten biomarkkereiden eturauhassyövän riskiä, ​​diagnosointiin ja sairauksien seurantaan.

Citation: Whitaker HC, Kote-Jarai Z, Ross-Adams H, Warren AY, Burge J, George A, et al. (2010) rs10993994 Riskimuodon eturauhassyövän Tulokset kliinisesti merkittäviä muutoksia Microseminoprotein-beta ilmentäminen kudokseen ja virtsaan. PLoS ONE 5 (10): e13363. doi: 10,1371 /journal.pone.0013363

Toimittaja: Andrew Vickers, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 30 kesäkuu 2010; Hyväksytty: 1. syyskuuta 2010 Julkaistu: 13 lokakuu 2010

Copyright: © 2010 Whitaker et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat haluaa kiittää tukea Cambridgen yliopisto, Cancer Research UK (avustus koodit C522 /A8072 ja C5047 /A8385), The Institute of Cancer Research, The Everyman kampanja, EU FP7 Promark työpaketissa ja Hutchison Whampoa Limited ja eturauhasen Cancer Research Foundation. Tekijät haluavat tunnustaa tuella National Institute for Health Research joka rahoittaa Cambridge Bio-lääketieteellinen tutkimuskeskus, Cambridge, Iso-Britannia, Bio-lääketieteellinen tutkimuskeskus The Institute of Cancer Research ja Royal Marsden NHS Foundation Trust ja biolääketieteen tutkimuskeskuksessa Central Manchester Foundation Trust. Tekijät haluavat myös antaa tunnustusta tuella National Cancer Research Eturauhassyöpä: mekanismit Progression ja hoito (PROMPT) yhteistyönä (avustus koodi G0500966 /75466), joka on rahoittanut kudokseen ja virtsaan kokoelmiin Cambridge. Tekijät haluavat myös antaa tunnustusta tukea Cancer neuvostojen Victorian ja South Australiassa, Eturauhassyöpä Foundation of Australia, Victorian Cancer Agency, Jack ja Judy Baker heidän tukensa Northshore University Health System ja Ronald ja Rita McAulay Foundation joka tukee IMPACT tutkimus kokoelma. Douglas Easton on Principal Research Fellow Cancer Research UK. Hans Lilja rahoittaa National Cancer Institute [lupanumeroita R33-CA127768-02]; Swedish Cancer Society [3455]; ja Swedish Research Council (Medicine) [20095]. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Dr. Hans Lilja hallussaan patentteja vapaan PSA ja hK2 määrityksissä. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamiseen ja materiaaleja, yksityiskohtaisena online-oppaassa tekijöille.

Johdanto

Microseminoprotein-beeta (MSMB) on toiseksi runsain proteiini siemennestelaimenteeseen eturauhasen antigeenin (PSA) [1]. Toisin kuin PSA, MSMB ei suoraan säännellä androgeenien ja sen taso ei vaikuta hormoni manipulointi [2], [3], [4]. Eturauhasen spesifisyys MSMB ilmaisun Aluksi osoitettiin jyrsijöillä [5], [6] ja tukee kehittäminen eturauhasen hiiri mallia käytti

msmb

promoottori /tehostaja-alue kohdistaa eturauhasen ilmaisun [7], [8]. Kuitenkin tutkimukset ihmisillä osoittavat MSMB voidaan ilmaista useilla eritys- ja limakalvokudoksissa, vaikkakin paljon alhaisempi kuin eturauhasen [9], [10], [11], [12], [13], [14].

Kaksi genomin laajuinen yhdistys tutkimukset (GWAS) ovat tunnistaneet tag pieni nukleotidin polymorfismi (SNP), rs10993994, 10q: ssa, joka on vahvasti liittyy suurentunut riski sairastua eturauhassyöpään [15], [16]. Tämä SNP on 5 ’UTR

MSMB

. Riski alleeli on yhteinen, joiden taajuus ~30-40% vuonna eurooppalaisista ja 70-80% miehillä on Afrikkalainen syntyperä, ja antaa suurentunut eturauhassyövän 1,3 (per alleeli riskisuhde). Tämä yhdistys on havaittu sekä eurooppalaisia ​​ja Afrikkalainen-amerikkalaiset ja näyttää olevan riippumaton iästä diagnoosin ja kasvaimen [17]. Hienojakoinen kartoitusta ei ole havainnut mitään muuta itsenäisesti liittyvät variantit alueella. Lisäksi tuoreessa tutkimuksessa solulinjoissa on osoittanut, että riski alleeli (T) vähensi merkittävästi promoottorin aktiivisuus geenin 13%, että matalan riskin alleelin (C) [18]. Koska tämä SNP sijoittuu

MSMB

proksimaalinen promoottorialue vähentää promoottorin aktiivisuus on ehdotettu tapahtua muuttunut transkriptiotekijän sitoutumiskohdat, kuten CREB [19]. Nämä tiedot viittaavat vahvasti siihen, että rs10993994 T-alleelin on syy-yhteydessä eturauhassyövän riskiä, ​​ja että tämä yhdistys voi välittyvän pienentää ilmentymisen MSMB proteiinin hyvänlaatuista eturauhasen kudosta. On raportoitu, että

MSMB

mRNA solulinjoissa oli vähentynyt soluissa homotsygoottisia Riskimuodon, mikä viittaa siihen, hypoteesi, jonka mukaan pienennetään MSMB ilmentymistä yksilöiden rs10993994 Riskimuodon voisi johtaa vähentyneeseen solukasvun säätelyssä ja lisääntynyt riski tuumorigeneesin [19].

Useat ryhmät ovat tutkineet MSMB ilmentyminen eturauhassyövässä, ja kaikki ovat löytäneet korkeampia MSMB hyvänlaatuisia ja normaalin kudoksen tai seerumissa verrattuna materiaalin kasvaimia [2], [ ,,,0],3], [4], [12], [20], [21], [22], [23]. Tähän mennessä ei ole tehty valmiiksi virtsassa. Korkea MSMB hyvänlaatuisen kudos on yhdenmukainen sen hypoteesin kanssa, että MSMB sitoutuu solun pinnan reseptoreihin ja säätelee eturauhasen kasvua säätelemällä apoptoosin mahdollisesti kautta MAP-kinaasi /AKT signalointi [24], [25], [26].

Eturauhassyöpä on yleisin kiinteä mies syöpä Isossa-Britanniassa. Tällä hetkellä paras diagnostinen työkalu on seerumin PSA taas virtsan pCA3 mRNA käytetään myös hyödyllinen diagnostinen testi erityisesti miesten kohollaan PSA ja alustavan kielteisen koepala [27]. Kuitenkin tarve eturauhasen tentti ennen testausta ettei sitä voida käyttää seulontatyökaluna. Virtsan PSA on raportoitu mahdollisesti hyödyllisenä diagnostinen työkalu miehillä, joilla seerumin PSA 2,5-10 ng /ml ja on erityisen kiinnostava seulonnassa ja seurannassa tauti, koska se on helpompi hyväksyä potilaille. [28].

Olemme käyttäneet immunohistokemiallinen tutkimuksia MSMB hyvänlaatuisen eturauhasen kudosta osoittamaan suhde MSMB proteiinin ilmentymisen ja rs10993994 genotyyppi. Olemme kehittäneet virtsan ELISA-määritystä tutkia yhdistyksen välillä virtsan PSA, MSMB tasoja ja MSMB genotyyppi onko tämä on potentiaalia kliinisesti käyttää seulonta tai diagnostinen työkalu.

Materiaalit ja menetelmät

etiikka lausunto

koko eettinen hyväksyntä saatiin kaikille ihmisille näytekokoelmien joko West Midlandsin Multi-keskuksen tutkimus eettisen komitean tai Trent Multi-keskuksen tutkimus- eettinen komitea. Kaikki näytteet saatiin kirjallinen suostumus ja analysoidaan anonyymisti.

Patient ikäluokat

Tissue, veri- ja virtsanäytteet potilaista, joilla on diagnosoitu eturauhasen syöpä saatiin Addenbrooke sairaalassa, Cambridge, UK (radikaali prostatectomies kerätty vuosina 2001 ja 2008) ja The Institute of Cancer Research (koepala ja trans-virtsaputken prostatectomies kerätään 1995-2002). Normaali /hyvänlaatuinen potilasta rekrytoitiin osana IMPACT tutkimus, tutkimus eturauhassyövän riskiä miehillä, joilla on

BRCA1 /2

ituradan mutaatioita Institute of Cancer Research (05 /MRE07 /25) [29]. Tällä kohortti ei ollut ollut eturauhasen sairaus ja mukana miehiä mutatoitunut ja villin tyypin (ohjaus)

BRCA1

ja

BRCA2

. Mediaani-ikä, PSA ja Gleason tulokset Kohorttien käytetyt esitetään kuviossa S1.

Kaikki potilaat olivat hyvälaatuisia kudosta IHC, DNA genotyypin määritystä varten, seerumin PSA mittauksia ja virtsan käytettävissä. Voit voittaa tämän, potilaat jaettiin kolmeen kohortteja vastaamaan kysymyksiin. 168 potilasta laadukasta kudosta käytettiin IHC tutkimuksen kuviossa 1. Näytteet 133 potilaista tehtiin kudokseen mikrosirulla (TMA), joka sisältää useita ytimiä normaalista /hyvänlaatuinen alueet ( 3), eturauhasen intraepiteelisiin neoplasia (PIN), ja ainakin kaksi erillistä aluetta, kasvaimen kullekin potilaalle. Loput tapaukset olivat osa ylimääräisen TMA nuorten puhkeamista eturauhassyövän potilailla (määritelty diagnosoitu ≤60 vuotta) UK Genetic Eturauhassyöpä Study. Tämä TMA sisältyy useita normaali /hyvänlaatuinen ja kasvaimen alueiden 35 potilasta. n = ilmaisee tapahtumien määrä sen sijaan useita sydämiä tutki so jossa heterogeeninen patologian todettiin molemmilla alueilla pisteytettiin itsenäisesti.

MSMB immunohistokemia suoritettiin TMA käyttäen BondMax Autostaineriin. Kaikkien osien ytimet näkyvät sinisellä ja MSMB värjäytymistä ruskeaksi. (A) MSMB ollut läsnä uroteeliin (vasen paneeli), musta nuoli – uroteeliin, valkoinen nuoli – eturauhasen, siemenrakkuloiden (keskeinen paneeli), musta nuoli – rakkularauhanen, valkoinen nuoli – eturauhasen, virtsarakon (oikea paneeli), musta nuoli – rasvasolujen, valkoinen nuoli – virtsarakon muscularis propria. (B) MSMB värjäys eturauhasessa on spesifinen hyvänlaatuinen rauhaset (valkoiset nuolet) eikä eturauhaskasvainsoluissa (Gleason 3) (mustat nuolet). MSMB myöskään värjää atrofinen hyvänlaatuinen rauhaset. Esimerkkejä värjäyksen perusteet (ei mitään /heikko, kohtalainen ja vahva) levitetään immunohistokemiallisesti. Tulokset värjäytyminen oli erittäin merkittävä laskettu käyttäen Kruskal-Wallisin testiä. n on määrä patologisten tapahtumien teki.

Vain 145 potilaalla oli DNA, joka voidaan käyttää genotyypin, kuten on esitetty kuviossa 2B. Täydellinen radikaali eturauhasen osat tai erittäin suuri kudosleikkeiden oli saatavilla 32 potilaita Addenbrookes kohortissa.

(A) Esimerkki mega-lohkon värjäys suuri eturauhasen kohdat osoittavat homogeeninen (vasen paneeli) tai heterogeeninen (oikea paneeli ) värjäys. MSMB immunohistokemia pisteytettiin ennen kuin vahva, kohtalainen, heikko tai kadonnut kullekin potilaalle ja ryhmiteltynä genotyypin; T – suuri riski, C- alhainen riski. p-arvot laskettiin käyttäen Kruskal-Wallisin testiä. n on määrä patologisten tapahtumien teki.

MSMB ELISA kuviossa 3 89 miesten eturauhassyövän, joka oli kudosta, DNA: ta ja virtsanäytteen käytettiin. Normaali /hyvänlaatuinen potilasta rekrytoitiin osana IMPACT tutkimus, tutkimus eturauhassyövän riskiä miehillä, joilla on

BRCA1 /2

ituradan mutaatioita (n = 215). Kaikki virtsanäytteet otettiin ennen mitään digitaalinen peräsuolesta tentti, eriin ja pakastettiin välittömästi -80 ° C: ssa. Jos on käytettävissä ikä, PSA ja Gleason diagnoosin määritettiin kullekin potilaalle.

Virtsa- MSMB ja PSA-pitoisuudet määritettiin ja normalisoitiin kreatiniinia. (A) Virtsan MSMB määritettiin ELISA: normaali /hyvänlaatuinen potilaan kohortin ja pienempi kohortin kanssa eturauhassyövän diagnoosia. Saman kohortin testattiin myös virtsan PSA ja seerumin PSA-arvot kootaan. ROC dikäyrät; AUC = AUC, luottamusvälit ovat suluissa ja p arvot on annettu 95% luottamusvälejä. Ero virtsan MSMB ja PSA ROC käyrät p = 0,0021. Ero virtsan MSMB ja Tuumorin kohortin edelleen ositettiin Gleason summa pisteet (B). Virtsan MSMB ja PSA alhaisesta Gleason näytteistä (6 ja 7) verrattiin korkean Gleason (8 ja 9) näytteet ja ROC käyrät tuotetaan ja näytetään ennen. Virtsan MSMB myös ositettu mukaan rs10993994 riskin alleelin (C). n = henkilöiden määrä tutkittiin kussakin ryhmässä.

genotyypin

Genotyping valmistui aikaisemmin kuvatulla [15]. DNA uutettiin kokoverestä-sarjan 2 ja 3, joko kaupallisesti GeneProbe tai Qia-amp® DNA Mini Kit (Qiagen) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Genotyypitys näytteitä suoritettiin 5’exonuclease määrityksellä (Taqman ™) käyttämällä ABI Prism 7900HT sekvenssin havaitsemisen mukaisen järjestelmän valmistajan ohjeiden mukaisesti. Alukkeiden ja koettimien toimitettiin suoraan Applied Biosystems kuin määritykset-By-Design ™.

immunohistokemia

Kaikki immunohistokemia (IHC) suoritettiin käyttäen Bondmax automatisoitua stainer ja anti-MSMB vasta-ainetta (Abcam) (1:400) kudosten sarjasta 1 ja 2. multi-normaali /kasvaimen array 48 ydin TMA alkaen Stretton Scientific käytettiin. Tumat vastavärjättiin hematoksyliinillä ja dioja kuvattiin käyttäen Aperio skannaus järjestelmä. Patologian varmistettiin asiantuntija uro-patologi (AW) ennen pisteytystä mitään immunohistokemiallisella värjäyksellä. Pisteytys suoritettiin kaksi tarkkailijaa, joista yksi oli uro-patologi (AW), ja konsensukseen. Juokseva hematoksyliinillä ja eosiinilla värjätyt leikkeet käytetään vahvistamaan patologian. Värjäys luokiteltiin; ”Ei mitään” – mitään värjäytymistä, ”heikko” – eivät kaikki epiteelisolujen värjätään ja kalpea värjäys, ”kohtalainen” – suurin osa tai kaikki epiteelisolut värjätään kohtalaisen, ”vahva” – kaikki epiteelisolujen värjätty voimakkaasti (kuvio 1 B). Jos jaksoihin on heterogeeninen värjäystä yleiseen yhteisymmärrykseen saavutettiin perustuu suhteelliset osuudet eri tulokset. Jos heterogeeninen patologia olemassa sisällä ytimien esim hyvänlaatuinen ja kasvain alueet side-by-side, kunkin alueen pisteytettiin erillisenä tapahtumana. n = ilmaisee tapahtumien määrä sen sijaan useita sydämiä tutkittiin.

PSA ja MSMB mittaukset

Seerumin ja virtsan PSA (vapaa Yhteensä) kreatiniinin määritykset suoritetaan NIHR Cambridge Biomedical Research Centre Core Biokemian Pitoisuus Laboratory, Addenbrookes sairaala käyttäen ProStratus Free /Total PSA DELFIA (Perkin Elmer Life Analytical Sciences) ja Dimension RXL analysaattori (Siemens Healthcare). Sillä MSMB ELISA kaikki menettelyt suoritettiin ravistellen huoneenlämpötilassa. Kuopat pestiin kunkin vaiheen välillä kolme kertaa 0,05% PBS-Tween ja BioTek Elx50 platewasher. Yhdeksänkymmentäkuusi kuoppalevyille (Fisher Scientific) päällystettiin yön yli 4 ° C: ssa hiiren anti-PSP94-vasta-aine (1:1000, Abcam) laimennettuna PBS: ään. Kuopat salvattiin 1% BSA: ta (Sigma) 1 tunnin ajan, ennen kuin 50 ui näytettä tai standardia lisättiin kuhunkin kuoppaan kahtena kappaleena, ja inkuboitiin vielä 2 tuntia. Sarjalaimennoksia (25-0,78 ng /ul), yhdistelmä-PSP94 (rPSP94, R 20% vaihtelua Standardikäyrä katsotaan epäonnistuneen ja toistuvia. Sisäiset ja määritysten välinen vaihtelu oli 8,8% ja 22% vastaavasti. Vaikutukset proteiinin stabiiliuden osoitettiin olevan 20% testauksen jälkeen jäädytys sulatus 3 kertaa ennen analysoimalla tai inkuboidaan esilaimennettua rPSP94 -3 4 tunnin ajan huoneenlämmössä ennen määrityksiin. Toipuminen eri nesteiden määritettiin 20% laimentamalla rPRDX-3 joko PBS, 0,1% naudan seerumin albumiinia (Sigma) tai 10% vuohen seerumia (Dako Cytomation). MSMB konsentraatio määritettiin interpoloimalla arvot epälineaarisen regression sigmoidinen standardikäyrän. Pitoisuus kaikki virtsanäytteet normalisoitiin käyttäen kreatiniini mitattiin käyttäen kreatiniinin määritystä Kit (R 0,0001, Kuvio 1B ja kuvio S1) [2], [3], [4], [12], [20], [21], [22], [23]. MSMB värjäys myös johdonmukaisesti menetettiin eturauhasen intraepiteelisiin neoplasia (PIN) verrattuna hyvänlaatuinen kudokseen (p 0,0001) viittaa siihen, että se saattaa olla varhainen, syy, tapahtuma tuumorigeneesiä. Värjäys MSMB hyvänlaatuisen kudoksen vaihteli homogeeninen, jota yleisimmin nähty vahva värjäytyminen (kuvio 2A, vasen paneeli) ja vaihteleva, heterogeeninen värjäys usein nähty heikkoja ja kohtalainen värjäytymistä (kuvio 2A, oikea paneeli).

MSMB värjäytyminen kudoksessa oli merkittävästi liittyy rs10993994 genotyyppi (p 0,0001), värjäys on heikoin miehillä homotsygoottisia suuren riskin alleelin (TT) ja voimakkainta CC homozygoottien (kuvio 2B). Ei ollut todisteita yhdistyksen välillä MSMB värjäystä ja ikä tai PSA diagnoosin tässä pahanlaatuinen sarjassa miesten (kuva S3).

määritettiin virtsan tasoa MSMB 215 normaali /hyvänlaatuinen miehiä joilla ei ole ollut eturauhasen tauti ja 89 miesten eturauhassyövän (kuva S4). Yhdenmukainen yhdistyksen eturauhaskudoksessa oli merkittävä väheneminen virtsan MSMB miehillä kasvaimissa verrattuna miehiin, joilla ei ollut eturauhasen sairaus (tukeminen Document 4A) (p 0,0001). Virtsan MSMB merkittävästi parannettava virtsan PSA, mutta ei seerumin PSA, eturauhassyövän diagnosointiin tässä kohortissa (ero virtsan MSMB ja PSA ROC käyrät 0,21, 95% CI: 0,075, 0,34, p = 0,0021) (kuvio 3A). Kun kasvain näytteet kerrostuu alhainen (6 ja 7) ja korkea (8 ja 9) summan Gleason tulokset virtsan MSMB osoittivat korkeita spesifisyys ja herkkyys varsinkin verrattuna virtsan PSA (kuvio 3B). Oli merkittävä lasku virtsan MSMB kanssa korkean riskin alleeli verrattuna (TT) ja matalan riskin alleelin (CC) (kuvio 3C) (p = 0,0319), vaikka sitä ei näkynyt merkittävää eroa ROC käyriä. Raised hyvänlaatuinen virtsan MSMB ei todennäköisesti kuvastaa lisääntynyttä hyvänlaatuinen eturauhasen tilavuuden koska ei ollut merkittävää kasvua virtsan MSMB iän (tukeminen Document 4B) (p = 0,543). Sen osoittamiseksi, että korrelaatio oli spesifinen rs10993994 genotyypin vertasimme virtsan MSMB tasoilla ja BRCA1 ja BRCA2 ituradan mutaatio asema, joiden tiedetään eturauhassyövän riskitekijöitä [30], [31], ja löytänyt mitään yhteyttä (kuva S4).

keskustelu

Tämä on ensimmäinen tutkimus, kuvaamaan suhdetta riskin alleelin tunnisteen SNP rs10993994 ja MSMB tasoilla hyvänlaatuinen ja kasvain eturauhasessa ja korreloida proteiinin taso genotyypin ja aggressiivisuus eturauhasen syöpä. Lähes täydellinen menetys MSMB PIN (kuvio 1 B) esittää, että alennettu MSMB on varhainen tapahtuma tuumorigeneesiä sopusoinnussa yhdistyksen välillä eturauhassyövän riskiä ja rs10993994 genotyyppi.

On olemassa vahvaa näyttöä yhdistää rs10993994 SNP

MSMB

promoottorialueen lisääntyneeseen riskiin sairastua eturauhassyöpään [15], [16]. MSMB on tutkittu suuri määrä ryhmiä kuin otaksutun eturauhassyövän biomarkkerit, koska tasot kudoksessa ja seerumin vähenee tai katoaa syövän kehitykseen [2], [3], [4], [12], [20], [ ,,,0],21], [22], [23] (kuvio 1 B). Olemme vahvistaneet nämä havainnot ja lisäksi, että MSMB on suurelta osin prostataspesifisen proteiinitasolla kudoksessa (kuvio 1A ja kuvio S2). Viimeaikaiset todisteet viittaavat siihen, että kun eturauhasen kasvaimia ovat kehittäneet rs10993994 on vain vähäinen vaikutus sairauden etenemiseen osoittaa, että riskin lisääntyminen vaikuttaa hyvänlaatuinen rauhanen ja alkuvaiheen kasvainten kehittymiseen [17]. Tämä on sopusoinnussa menetys MSMB että olemme panneet merkille PIN, mikä viittaa siihen, että vähentynyt tai kadonnut MSMB ilmentymisen hyvänlaatuista eturauhasen tarvitaan pahanlaatuisiin. Välinen yhteys MSMB riskin alleeli ilmentymistä kudoksessa oli erittäin merkitsevä (p 0,0001) (kuvio 2B). Äännettyinä heterogeenisyys havaittiin myös kudoksen kohtalaisesta heikkoa ilmentymistä yleisimmin liitetty TT alleelin (kuvio 2A).

Useat ryhmät ovat tutkineet MSMB seerumissa osoitetaan ennusteen arvioinnissa jälkeen eturauhasen [3], [32 ]. Yhdenmukainen menetys MSMB in kasvaimia rauhaset (kuvio 1 B) olemme osoittaneet erittäin merkittävä menetys MSMB virtsasta potilailta sekä alhaisen että korkean Gleason asteen eturauhassyöpä verrattiin niihin, joilla ei ole tunnettua eturauhasen sairaus (kuvio 3A). Nämä tulokset hyvin verrattuna virtsan PSA joka on aiemmin raportoitu olevan potentiaalia kliinistä hyötyä potilaille, joiden seerumin PSA 4-10 ng /ml [28]. Virtsan MSMB ei ollut yhtä tarkka kuin seerumin PSA, nykyinen kultakanta testi diagnosoimiseksi eturauhassyövän (AUC 0,97 seerumin PSA ja 0,77 virtsasta MSMB. Kuitenkin meidän ikäluokat ei edusta vääriä positiivisia ja negatiivisia nähdä, kun PSA käytetään väestöseulonnan viittaa vähemmän puolueellinen kohortti tulisi testata luoda todellinen hyöty virtsan MSMB eturauhassyövän seulontaan. Vaikka on ehkä yllättävää, että tällaiset muutokset ovat niin helposti havaittavissa annetaan mahdollisesti pieni määrä kasvaimia rauhasten sisällä muuten hyvänlaatuinen eturauhasen. kuitenkin olemme osoittaneet lähes valmis eturauhasen spesifisyys MSMB proteiini viittaa on epätodennäköistä, että merkittävä määrä MSMB syntyvät tahansa muun kudoksen. on todennäköistä, että osa miehistä normaalin /hyvänlaatuinen tutkimuksessa (mediaani-ikä 53 vuotta) on jonkin verran eturauhasen hyvänlaatuisen liikakasvun (BPH), mutta olemme huomanneet mitään merkittävää kasvua virtsan MSMB iän myötä mikä viittaa siihen, että lisääntynyt eturauhasen tilavuus on vain vähän vaikutusta virtsan MSMB (kuva S4).

Virtsa eroja MSMB riskiin alleeli oli huomattava mutta ei riittävästi syrjiviä meidän suhteellisen pieni kohortin. Muutokset olivat riippumattomia muihin olemassa geneettisiä riskitekijöitä kuten

BRCA1

ja

BRCA2

mutaatio (kuva S4). Lisääntynyt määrityksen herkkyys ja testaus edustava väestöpohjaisella kohortti verrattuna PSA todennäköisemmin osoittaa mitään todellista kliinistä merkitystä käyttäen virtsan MSMB arvioida riskejä ja diagnosoimaan eturauhassyöpä. Virtsa on erittäin hyväksyttävä biologinen toimenpide potilaille ja meidän havainnot osoittavat, että MSMB on potentiaalinen kohde lisätutkimuksia virtsa- biomarkkeri eturauhassyövän seulontaan ja diagnosointiin, ilman eturauhasen tentti. Toisin kuin PSA, aiemmat raportit ovat ehdottaneet, että MSMB tasot eivät vaikuta hormoniablaatioterapia usein käytetään eturauhassyövän hoitoon ja meidän täytyy selvittää, onko MSMB saattaisi olla hyödyllistä seurannassa tautikuormituksesta potilailla, joille tehdään eri hoitomuotoja [2], [3] [4]. MSMB voi osoittautua hyödylliseksi myös havaitsemaan ne potilaat, joilla nostetaan PSA mutta kielteinen koepala jotka hyötyisivät lisätutkimuksia.

kvantitatiivinen RT-PCR tutkimukset solulinjojen on aiemmin osoittanut yhteyden rs109939994 T-alleelin ja alensi MSMB mRNA, todennäköisesti johtuu muuttunut transkriptiotekijän sitova [19]. Osoittaminen samanlaisen yhdessä virtsan MSMB ja MSMB värjäytymistä hyvänlaatuista eturauhasen kudosta vahvistaa syy-yhteydestä MSMB ilmaisun ja eturauhassyöpää. Eturauhasessa MSMB uskotaan säätelevät apoptoosin solun pinnan reseptoreihin, MAP-kinaasi ja AKT [24], [25]. Me hypoteesin, että vähennetään MSMB ilmentyminen miehillä suuren riskin alleeli voi vähentää eturauhasen solujen apoptoosin ja viime kädessä edistää vähemmän kontrolloitua eturauhasen kasvua. Menetys niin merkittävä sääntely polku voisi edistää tuumorigeneesiä ja tarjoavat selityksen lisääntynyt riski sairastua eturauhassyöpään sillä on vain vähän vaikutusta lopputulokseen, kun syöpä on kehittynyt [17].

havainnot esiin mahdollisuuden, että virtsan MSMB liittyvät genotyyppi voi olla hyödyllinen biomarkkereiden seulontaan eturauhassyövän riskiä ja kehitystä. Tämä on tutkittava edelleen kohdentaa niille miehille lisääntynyt riski tehostettu valvonta ja varhaisen puuttumisen ja tunnistaa ne miesten eturauhassyövän.

tukeminen Information

Kuva S1.

(A) Yhteensä 168 kasvain potilasta tutkittiin, mutta ei joka potilaalla oli kudosta, DNA ja virtsan käytettävissä. Vuodesta kohortti 168 oli kudosta, joka sisälsi hyvänlaatuinen, jota käytettiin kuviossa 1 145 potilasta oli kudosten ja DNA: ta ja otettiin mukaan kuvioon 2. 89 potilasta oli myös virtsanäyte ja voitaisiin käyttää ELISA kuviossa 3 (B ) tiedot hyvänlaatuinen ja kasvain kohortteja käytetään tutkimuksessa.

doi: 10,1371 /journal.pone.0013363.s001

(0,73 MB EPS) B Kuva S2.

MSMB on prostataspesifisen normaaleissa ja tuumorikudoksissa. Multi-normaali kudos TMA värjättiin MSMB käyttämällä immunohostochemistry ja Bondmax Autostaineriin. Array oli useita ytimiä seuraavista kudoksista; iho, rintojen, kilpirauhasen, ruokatorvi, munuais-, virtsarakko-, keuhko-, paksusuoli-, maksa, munasarja, kohtu ja vatsaan. Edustavia kuvia kivekset (seminoomasta kasvain), rinta- ja eturauhassyövän näkyvät. MSMB värjäytyminen on ruskea, ytimet ovat sinisiä.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0013363.s002

(7,19 MB EPS) B Kuva S3.

Korrelaatio genotyypin ja ikä /PSA diagnoosin ja immunohistokemiallinen värjäys ja ikä /PSA diagnoosin. n = henkilöiden määrä tutkittiin kussakin ryhmässä. p-arvot laskettiin käyttäen 1-suuntainen ANOVA Kruskal-Wallis korjauksen.

doi: 10,1371 /journal.pone.0013363.s003

(1,21 MB EPS)

Kuva S4.

(A) Virtsan MSMB tasot verrattiin ELISA: lla ja 2-suuntaisella t-testillä. (B) Virtsan MSMB arvot analysoitiin iän yksilön (vuosia) ajankohtana näytteenotosta. (C) PSA mittaukset hyvänlaatuinen kohortin ositettu mukaan rs10993994 genotyyppi. (D) Virtsan MSMB ei muuta kanssa BRCA mutaatioita. Hyvänlaatuinen miesten kohortti 3 genotyypattiin mutaatioita BRCA 1 ja BRCA2, joiden tiedetään antavan riski sairastua eturauhassyöpään. BRCA genotyyppi verrattiin virtsan MSMB. Ohjaus – ei mutaatiota, BRCA1 – mutaatio BRCA1, BRCA2 – mutaation BRCA 2. kaikki graafit n = analysoitujen näytteiden ja p-arvot laskettiin käyttäen 1-suuntainen ANOVA Kruskal-Wallis korjaus.

doi: 10,1371 /journal.pone.0013363.s004

(2,03 MB EPS) B

Kiitokset

Haluamme kiittää tohtori William J. Howat ja histopatologia /ISH Facility, Cancer Research UK Cambridge Research Institute for the help kanssa MSMB immunohistokemiallisesti. Haluamme myös kiittää Cancer Research UK Cambridge Research Institute Bioinformatics Core tilastollisiin apua. Olemme hyvin kiitollisia National Institute for Health Research Cambridge Biomedical Research Centre Core Biokemian Pitoisuus Laboratory apua kanssa biokemiallisia määrityksiä.