entsyymi assay
Kysymys
————————-
Followup To
Kysymys –
mitä menetelmiä määrittämällä ASAT, ALAT ja AFOS
vastaus –
mitä te tarkoitatte periaatteita kuin merkkinä, menetelmät, koostumus tai jotain muuta tarkennettava vastata oikein kysymykseen
kiitos
vastaus
on kaksi yleistä menetelmiä aktiivisuuden määrittämiseksi entsyymin. Stop ajan
määritys ja reaaliaikainen määritys. Stop aika määritys on vain, että reaktion käynnistämiseksi ja lopettaa tai lukea
tulokset tietyllä hetkellä. Tämä on helpoin tapa tehdä monia määrityksiä kerralla mutta kaksi
asioita, jotka on otettava huomioon ennen tätä muotoa määritystä. Ensimmäinen on määrityksen lineaarinen. Vuonna
Toisin sanoen, aika, että olen jo määritys, on valmistettavan tuotteen (tai alustaan StrawberryNET.com muunnettu) lineaarisesti nopeudella. Jos olosuhteet määritysputkessa ovat sellaiset, että reagoivat
(substraatti) vähenevät tai tuotteiden estämällä entsyymiä, niin et voi käyttää tätä määritystä.
Toiseksi on yhdiste mittaat riittävän vakaita odottaa lukea ja ovat olosuhteita käytetään
pysäyttää entsyymiä, eli hapon tai emäksen liian ankara säilyttää rakenteen lukeman? Tulemme
tekemässä reaaliajassa määrityksiä. Merkitys absorbanssin muutos (eli optisen tiheyden? OD) vs. aika.
Tästä kuvaaja (tehty spektrofotometrin) tulee valita alue, joka on kohtuullisen lineaarinen ja
määrittää DOD /min ja sitten muuntaa sen yksikköä entsyymiaktiivisuus millilitrassa.
alkaliinifosfataasit on ryhmä isoentsyymien jolla on yhteinen kyky hydrolysoida orgaanisen fosfataasin esterisidoksia emäksisessä, generoidaan orgaaninen radikaali ja epäorgaanisen fosfaatin. Niiden biologinen toiminta on tuntematon. AFOS seerumissa normaalisti peräisin maksasta ja luun ja raskauden aikana istukasta. Se toimii myös joissakin kasvaimissa (esim bronchogenic karsinooma). Luun kasvua lapsilla aiheuttaa ikäriippuvaista nousu normaaliarvojen, erityisesti pikkulapsilla 2 v. Sen jälkeen emäksinen fosfataasiaktiivisuus pienenee saavuttaen normaalin aikuisen tasolle jälkeen spurtti aikana nuoren kasvua. Se on hieman lisääntynyt vanhukset. Raskauden aikana seerumin nousevat kaksin- tai nelinkertaiseksi, jonka yhdeksäs mo ja sitten palata normaaliin 21 vuorokauden sisällä synnytyksestä.
AFOS lisääntyy merkittävästi sairauksiin, jotka heikentävät sappi muodostuminen (kolestaasi) ja vähemmässä määrin hepatosellulaarinen tauti. Arvot kolestaasi, olipa maksansisäisen syistä (ensisijainen maksakirroosi, lääkkeen aiheuttama maksasairaus, maksansiirron hylkääminen) tai siirre-vastaan-isäntä (GVH) sairaus, tulee samalla koholla ja vähemmän erotettavissa ekstrahepaattisen syistä (tukkeutumisesta maasta ahtaumien , kivi, tai kasvain), kaikki nousevat jonkin verran nelinkertaisesti. In hepatosellulaarinen tauti (esim erilaisia hepatiitti, maksakirroosi, infiltroiva häiriöt), tasot ovat yleensä pienempiä kanssa jonkin verran päällekkäisyyttä. Yksittäisiä nousseet (muiden maksan testit ovat normaalit) esiintyy granulomatoottinen tai paikallinen maksasairaus (esim paise, neoplastiset tunkeutumisen tai osittainen sappitiehyen tukkeumia). Joissakin ekstrahepaattisen syöpäsairauksia ilman maksan etäpesäke, syy on epäselvä: bronchogenic syöpä voi tuottaa omia AFOS; hypernephroma 15%: ssa tapauksista indusoi epäspesifistä hepatiitti kuin oletettu entsyymin korkeus. Hodgkinin lymfooma, syy eristetty alkalisen fosfataasin korkeus on tuntematon. Yleensä yksittäinen AFOS nousu löytyy muuten oireeton aikuinen, varsinkin jos vanhukset, ei ole syytä tutkia.
Techniques lämmön avulla inaktivoinnin tai elektroforeesia voidaan erottaa luun vs. maksan alkuperää alkalisen fosfataasin, mutta käyttäen toista seerumia entsyymiä tarjoaa yksinkertaisemman syrjintää: 5′-nukleotidaasi on ryhmä fosfataasien, jotka eroavat biokemiallisesti emäksinen fosfataasi; ne katalysoivat hydrolyysin nukleotidien (esimerkiksi adenosiini-5′-fosfaatti) vapauttamaan epäorgaanista fosfaattia 5′-asemassa ja on rajoitettu solukalvojen maksan solu. Tämä entsyymi kasvaa sappiteiden, mutta ei luuta, sairauksia. Käytännössä se on hyödyllistä arvioida anicteric potilaalle. Arvot ovat alhaiset lapsuudessa, nousevat vähitellen murrosiässä, ja tasanne ikävuoden jälkeen 50 v. 5′-nukleotidaasia yleensä koholla joillakin naisilla raskauden viimeisen kolmanneksen aikana. Koska sen spesifinen maksasairaus, 5′-nukleotidaasia tarjoaa joitakin etuja verrattuna AFOS, mutta kumpikaan ei voi erottaa obstruktiivista päässä hepatosellulaarinen tauti. Ne voidaan tai ei nousta ja laskea rinnakkain.
Gammaglutamyylitranspeptidaasi (tai gamma-glutamyylitransferaasi –GGT) on entsyymi (läsnä maksassa, haimassa, ja munuainen), joka siirtää gamma-glutamyyli ryhmä yksi peptidi toiseen peptidiin tai L-aminohappo. Tasot GGT ovat koholla hepatobiliaarinen ja haiman sairaudet, jotka estävät yhteinen kanava, mutta ovat normaaleja raskauden ja luuston sairaus. GGT tasoja rinnakkain kuin AFOS ja 5′-nukleotidaasia in kolestaattisen olosuhteissa. Koska se ei ole fysiologisesti koholla raskauden tai lapsuudessa, GGT on rooli tässä havaitsemisessa hepatobiliaarinen tauti. Huumeiden ja alkoholin nauttiminen, joka aiheuttaa mikrosomaalisia entsyymejä, myös nostavat GGT; yksin, se on huono merkkiaine alkoholin aiheuttama maksasairaus. Yhdessä transaminaasit, havaitsemiseen alkoholin väärinkäyttö tulee varmempi. Äärimmäinen herkkyys (yli alkalinen fosfataasi) tämän entsyymin rajoittaa sen käyttöä, mutta testi korvaa 5′-nukleotidaasin havaitsemiseksi hepatobiliaarinen sairauden syynä yksittäinen nousu AFOS.
Transaminaasit: aspartaattitransaminaasi- (ASAT –formerly SGOT) on läsnä sydämessä, luurankolihaksiin, aivot ja munuaisten osalta sekä maksassa. AST tasot myös lisätä MI, sydämen vajaatoiminta, lihas, keskushermoston sairaus, ja muut nonhepatic häiriöt. Huolimatta joistakin nonspecificity, korkeat tasot osoittavat maksan soluvaurioita. Arvot 500 IU /L ( 400 u./mL) ehdottaa akuutti virus- tai myrkyllisiä hepatiitti. Näin korkeilla pitoisuuksilla esiintyy myös merkittävä sydämen vajaatoiminta (iskeeminen hepatiitti) ja jopa yhteinen kanava kiviä. Suuruus korkeus ei ole ennusteen arvioinnissa ja ei korreloi asteen maksavaurioita. AST on luotettava ja osa seulontakäytäntö maksasairauden. Serial testaus antaa hyvän seuranta: lasku normaaliin osoittaa elpymisen ellei liittyy loppuun vaiheissa massiivinen maksan kuolion.
alaniinitransaminaasiarvo (ALT –formerly SGPT) on todettu pääasiassa maksassa solujen ja siksi on suurempi spesifisyys maksasairaus, mutta se tarjoaa vain vähän muuta hyötyä. Useimmissa maksasairaudet, AST nousu on pienempi kuin ALAT (ASAT /ALAT-suhde 1) lukuun ottamatta alkoholihaittojen maksavaurioita jossa suhde usein on 2. (Perustana on suurempi tarve pyridoksaali 5′-fosfaatti kofaktorina ALT tämä kofaktori on puutteellinen alkoholi-, rajoittamalla nousu ALT.) Monet poikkeukset rajoittavat käytännöllisyyttä suhteen. Kuitenkin suhde 3 kohtuuton lisääntyminen GGT ( 2 kertaa alkalinen fosfataasi) on hyvin vaikuttava.
Maitohappodehydrogenaasia: LDH, usein esiintyviä automatisoitu analyysi on herkkä indikaattorina hepatosellulaaristen vahinko mutta on parempi kuin markkeri hemolyysin tai MI. Se voi olla melko korkea maligniteetit, joihin liittyy maksan.
mittaus fosfataasiaktiivisuus perustuu työhön Brandenberger ja Hanson (1953) ja Hofstee (1954). Katalyyttinen vaikutus entsyymin alkuperäisestä hydrolyysinopeus o-karboksifenyyli fosfaatti määritetään. Salisyylihappoa, toisin fosfaattiesterivälituotteen, absorboi valoa maksimaalisesti noin 300 nm; täten hydrolyysinopeus voidaan määrittää absorbanssin kasvua. Yksi yksikkö hydrolysoi yhden mikromoolin o-karboksifenyyli fosfaattia minuutissa 25 癈 ja pH 8,8 määritellyissä olosuhteissa.
Reagenssit
0,1 M Tris⋅HCl, pH 8,5
0,2 M glysiini , pH 8,8
0,05 M magnesiumkloridia
3,65 mM o-karboksifenyyli fosfaatti (OCPP) B-entsyymi
Liuotetaan yksi mg /ml 0,1 M Tris-HCl, pH 8,5 (Kantaliuos ). Tämän jälkeen laimennetaan vielä jälkeen voidaan vaatia aktivoinnin.
Menettely
Aktivoi entsyymi inkuboimalla mg /ml 20-30 minuutin ajan 25 癈 vesihauteessa.
Säädä spektrofotometrillä 300 nm ja 25 癈.
Pipetoidaan kuhunkin kyvettiin seuraavasti:
0,2 M glysiini, pH 8,8 2,0 ml
3,65 mmol OCPP 1,0 ml
0,05 M MgCl2 0,5 ml
Inkuboidaan spektrofotometrissä 25 癈 3-4 minuutin päästä lämpötilan tasapainottumisen ja luoda tyhjä korko, jos sellaisia on. Lisätään 0,1 ml kantaliuosta ja tallentaa lisäys A300 /minuutti alkuperäisestä lineaarisen osan käyrän.
Laskeminen
Danil Hammoudi.MD
https://sinoemedicalassociation.com
lääketieteellistä tietoa kaikista
Tämä on opetustarkoituksiin vain. Sen ei ole tarkoitus korvata kuulemisen ja tutkii oman
lääkärin tai muun terveydenhuollon tarjoaja