Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tavoite

Ruokatorven levyepiteelisyöpä (ESCC) on yksi yleisimmistä kohtalokas malignances ruoansulatuskanavan. Ennuste on huono lähinnä ole luotettavia merkkiaineiden varhaista havaitsemista ja prognostiset ennustaminen. Täällä pyrimme tunnistamaan molekyylejä mukana ESCC syövän synnyn ja niitä mahdollisina markkereita ennustetta ja uusina molekyyli terapeuttisina kohteina.

Methods

suoritimme genominlaajuisten geeniekspressioprofiili analyysit 10 ensisijaisen ESCCs ja niiden viereisten normaaleissa kudoksissa cDNA mikrosiruja edustavat 47000 selostukset ja variantteja. Kandidaattigeenit sitten vahvistanut semi kvantitatiivisia käänteistranskriptio-PCR (RT-PCR), kudossiruina (TMA) ja immunohistokemia (IHC) värjäys.

Tulokset

Käyttämällä mielivaltainen sulku rivi signaali log suhde ≥1.5 tai ≤-1.5, havaitsimme 549 up-geenien ja 766 alas geenien in ESCCs verrattuna normaaliin ruokatorven kudoksia. Toiminnot 302 differentiaalisesti ilmentyvien geenien liittyi solujen aineenvaihduntaa, soluadheesiota ja immuunivastetta. Useat ehdokas vapautettu geenejä, mukaan lukien neljä yli-ilmentynyt (CTTN, DMRT2, MCM10 ja SCYA26) ja kaksi ali-ilmentynyt (HMGCS2 ja SORBS2) myöhemmin todentaa, jota voidaan toimi biomarkkereita ESCC. Lisäksi yli-ilmentyminen cortactin (CTTN) havaittiin 126/198 (63,6%) sekä ESCC tapauksissa ja merkitsevästi liittyvät imusolmuke etäpesäke (P = 0,000), patologinen vaiheessa (P = 0,000) ja huono selviytyminen (P 0,001) ja ESCC potilailla. Lisäksi merkittävä korrelaatio CTTN yli-ilmentymisen ja lyhyemmät tautikohtaista eloonjääntiprosentin löydettiin eri alaryhmien ESCC potilaan ositettu patologisen vaiheessa (P 0,05).

Johtopäätös

Tuloksemme antaa arvokasta tietoa perustamisesta molekyylejä ehdolle ennustetekijöiden ja /tai terapeuttisina kohteina.

Citation: Lu P, Qiao J, hän W, Wang J, Jia Y, Sun Y, et al. (2014) Genome-Wide geeniekspressioprofiili Analyysit Tunnista CTTN mahdollisena Prognostiset Marker sisään ruokatorven syöpään. PLoS ONE 9 (2): e88918. doi: 10,1371 /journal.pone.0088918

Editor: Ju-Seog Lee, University of Texas MD Anderson Cancer Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 22 elokuu 2013; Hyväksytty: 16 tammikuu 2014; Julkaistu: 14 helmikuu 2014

Copyright: © 2014 Lu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustuksia National Natural Science Foundation of China (81150010, 81272227 ja 81372583). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

ruokatorven levyepiteelisyöpä (ESCC) on vallitseva laji ruokatorven syöpä (EY) kansainvälisesti, osuus on yli 90% kaikista EY asioissa [1]. ESCC on yksi yleisimmistä syövän muotoja, ja on liitetty huonoon ennusteeseen [2]. Edistysaskelista huolimatta diagnoosimenetelmistä ja multimodaalinen hoitoja, ESCC edelleen tappava syöpä, jossa on 5-vuoden eloonjäämisluvut keskimäärin 15% monissa maissa [3]. Huono ennuste on seurausta aggressiivisen biologinen luonne kasvain, ei ole olemassa luotettavaa diagnostista tekniikoita alkuvaiheen havaitsemisen ja puuttumisen tehokas hoito on yksilöllisempää [4]. Vähentämällä kuolleisuus vaatisi varhainen diagnoosi ja hoito potilaille. Kuitenkin nykyinen biomarkkerit, joita käytetään tunnistamaan ESCC potilaiden varhaisessa vaiheessa ja valitse hoitomuotoja yksittäisille potilaille ei ole riittävää herkkyyttä ja spesifisyyttä [5]. Toistaiseksi molekyyli tekniikka on pidetty ihanteellinen tapa Varhaisdiagnoosiin sekä varoituksia ennustuksen ESCC. Näin ollen on erittäin kliinistä arvoa etsimään uusia diagnostisia, terapeuttisia indikaattorit sekä varoituksia ennustaminen perustuu molekyylimekanismin taustalla ruokatorven syövän syntymistä.

Ymmärtää molekyylitason ja valitse ehdokkaita kehittää uusia anti-kasvain huumeiden ja kasvaimen merkkiaineita, on tarpeen analysoida globaalien muutosten geenien ilmentymisen välillä ESCC kasvainkudoksissa ja ei-tuumorikudoksissa. Tätä tarkoitusta varten cDNA microarray tekniikka, joka on tehokas työkalu laajassa mittakaavassa geeniekspression tutkimuksia, jotka perustuvat hybridisaatioon, käytettiin analysoimaan muutoksia ilmaisun tuhansien geenien samanaikaisesti [6]. Useat microarray on tutkittu geeni-ilmentymisen profiilit ESCC kudoksissa ja solulinjoissa [7], [8]. Kuitenkin hyödyllistä tietoa johdettu näistä tutkimuksista oli rajallinen.

Kun pyritään tunnistamaan enemmän uusia ruokatorven syöpään liittyvien geenien, jotka saattavat olla mahdollisia molekyylikohteista diagnosointiin, hoitoon ja /tai ehkäisyyn ESCC vertasimme geeni ekspressioprofiileja välillä kasvain kudosten ja vastaaviin normaaleihin epithelia 10 ESCC yksilöitä käyttämällä Affymetrix ihmisen genomin U133 Plus 2.0 GeneChip- koostuu 47000 selostukset. Tässä tutkimuksessa havaittiin useita differentiaalisesti ilmentyvien geenien jotka voivat liittyä myös soluadheesion, solujen aineenvaihduntaa ja immuunivaste. Erityisesti, joka on aktiinifilamentin sitovan proteiinin ja kinaasi kohde, cortactin (CTTN tai EMS1), todettiin olevan yksi merkittävimmistä yliekspressoitu geenien ESCC. Täällä kertoi, että yli-ilmentyminen CTTN on itsenäinen ennusteen arvioinnissa, ja se voisi myös toimi terapeuttisena kohteena ESCC.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

ESCC kudosnäytteet tässä tutkimuksessa käytetyt hyväksyttiin komiteoiden Ethical Review of Research ihmiseen kohdistuvan Zhengzhou yliopistossa. Kirjallinen tietoon perustuva suostumus alkuperäisen ihmisen työ, joka tuotti otettiin kudosnäytteet.

ESCC kliiniset näytteet

Ensisijainen ESCC kudosten ja viereisen normaali ruokatorven epiteelikudoksissa (otettu 5 cm: n päässä kasvain reuna) kerättiin aikaan kirurgisen resektion at Linzhou kansan sairaalassa (Henan, Kiina). Kaikki kasvaimen kudokset histopatologisesti vahvistetaan ESCC. Potilaat olivat aiemmin hoitamaton (eli ei sädehoitoa tai kemoterapiaa). Tietoinen suostumus saatiin kaikilta potilailta. Yksilöt jälkeen kirurgisen resektion säilytettiin -80 ° C: ssa välittömästi asti RNA. Kymmenen kasvain valitut näytteet cDNA microarray analyysit olivat peräisin leikattiin kasvain kudoksia, jotka koostuvat yli 80% tuumorisolujen nekroosi. Parilliset vieressä normaali mucosas käytettiin viitteenä. Yhteensä 231 formaliinilla kiinnitetyt ja parafiiniin upotettuja ESCCs ja niiden vastaavia normaalin ruokatorven epiteeli- kudosnäytteet myös toimitti ystävällisesti Linzhou People sairaalassa. Kaikki kliiniset tiedot on saatu potilastietoja.

Solulinjat

Viisi Japani ESCC solulinjoissa (KYSE140, KYSE410, KYSE180, KYSE30 ja KYSE510) saatiin DSMZ (Braunschweig, Saksa) saksalainen Resource Centre for Biological Material [9]. Kiinan ESCC solulinja HKESC1, EC18 ja EC109 oli ystävällisesti professori Srivastava (Department of Pathology, University of Hong Kong, Hong Kong, Kiina) [10]. Kaikki nämä ESCC solulinjoja viljeltiin RPMI 1640 täydentää 10% naudan sikiön seerumia. Soluja inkuboitiin 37 ° C: ssa kostutetussa kammiossa, joka sisälsi 5% CO

2.

RNA uuttaminen, monistaminen ja Labeling

kudosnäytteitä jauhettiin jauheeksi nestemäisessä typessä, ja TRIzol reagenssia lisättiin heti typen höyrystämiseen päätökseen. Kokonais-RNA eristetään seuraavaksi mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. RNA-pitoisuus mitattiin käyttämällä NanoDrop spektrofotometriä (ND-1000; Labtech International, Ranska) ja puhtaus arvioitiin A260 /A280 ja A230 /A260-suhteet. Agilent bioanalysaattorin (malli 2100; Agilent Technologies, Santa Clara, CA) käytettiin arvioimaan RNA laatua eristämisen jälkeen ja sen jälkeen, kun biotiini merkintöjä ja pirstoutumista. Tätä varten 100 ng RNA: ta kustakin näytteestä monistettiin saamiseksi cRNA ja leimattiin käyttäen Affymetrix GeneChip eukaryoottisia 2 sykli merkintöjä määrityksissä ilmaisu analyysi (Affymetrix; 900494) mukaisesti valmistajan ohjeiden https://www.affymetrix.com/products /reagents/specific/cdna2.affx.

Microarray hybridisaatio

Affymetrix HG U133 Plus 2.0 oligonukleotidigeenisirumenetelmää esihybridisoitiin hybridisaatioliuoksessa, joka sisälsi 1 mol /l NaCl: a, 20 mmol /L EDTA, 100 mmol /L-2- (N-morfolino) etaanisulfonihappo, ja 0,01% Tween 20: tä 10 minuutin ajan 45 ° C: ssa ja 60 kierrosta minuutissa. Esihybridisaatioliuokseen poistettiin ja korvattiin 200 ml: lla hybridisaatio- liuosta, joka sisälsi 0,05 mg /ml hajanaista cRNA, ja taulukot hybridisoitiin 16 tuntia 45 ° C: ssa ja 60 kierrosta minuutissa. Arrays pestiin sen jälkeen (Affymetrix fluidistorijärjestelmä asema malli 400), ja skannattiin ja visualisoitiin käyttämällä Gene Array skanneri (Hewlett-Packard).

Microarray Analysis

laatu Yhdistettyjen normaali tai kasvain näytteet on tarkistanut heatmap kanssa klusterointi (kuva S1). Affymetrix Ihmisen genomin U133 Plus 2.0 GeneChip (Affymetrix), joka kattaa 47000 selostukset ja variantteja, käytettiin tunnistamaan ilmentyvät eri geenien välillä ESCC kasvain kudosten ja normaaleissa kudoksissa. Microarray reaktio tehtiin mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Probe asettaa intensiteetit laskettiin käyttäen Microarray Analysis Suite (MAS v5.0, Affymetrix) ohjelmistojen ja normalisoidaan 100 taloudenhoito geenejä on keskimääräinen intensiteetti 2,000 naamio tiedostojen U133 Plus 2.0 ennen seuraavaa tilastollista analyysiä. Normalisoitu ilme arvot verrattiin sitten välillä ESCC näytteiden ja niiden pariksi normaaleissa kudoksissa. Fold-muutos erot laskettiin tunnistaa säädelty ja alas geenien. Tekstitystiedostojen yli 1,5-kertainen ero ilmentymistason määriteltiin ilmentyvät eri. Erityisesti suunniteltu online-työkaluja, kuten FatiGO [11], Gene ontologia [12] antamat GO Consortium, ja NetAffx analyysi Center tietokantaan [13], käytettiin luokitella toiminnallisten roolien tunnistettujen differentiaalisesti ilmentyvien geenien. cDNA microarray tiedot on toimitettu Gene Expression Omnibus (GEO, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/) tulonumerolla GSE33810.

semikvantitatiivinen käänteistranskriptio-PCR (RT PCR) B

tarkastella luotettavuuden microarray data, RT-PCR-analyysiä käytettiin vahvistamaan mikrosiruanalyysi tiedot valitsi neljä up-geenien (CTTN, DMRT2, MCM10 ja SCYA26) ja kaksi alaspäin säännelty geenejä (HMGCS2 ja SORBS2) kuten aiemmin on kuvattu [14]. Yhteensä 2 ug mRNA: n erä kustakin näytteestä tehtiin käänteistranskriptio yksijuosteinen cDNA käyttämällä Advantage RT-PCR -pakkausta (Clontech) ja cDNA altistettiin PCR-30 monistus- sykliä. RT-PCR-kokeet suoritettiin seuraavilla sarjaa syntetisoitiin spesifisten alukkeiden valitun kuudesta geenistä tai GAPDH-spesifisillä alukkeilla sisäisenä kontrollina: cortactin (CTTN tai EMS1) -FR: 5′-TGAGTGTGT GTTCTTCCCCAAG-3 ’, cortactin (CTTN tai EMS1) -RR: 5’-CACGTGACCTTCTGGA AAGACA-3′;DMRT-Fr:5′-GCGTGGTGTCCTGCCTGAAG-3′,DMRT-Rr:5′-GCCCCTTCTTGTCCTCGGTG-3′;MCM10-Fr:5′-GCAAAAATCCCCTGTAGAGA-3′, MCM10-Rr:5′-CCCCACAATTTGACCTCTAG-3′;SCYA26-Fr:5′-CACCTTGGAACTGCCACACG-3′,SCYA26-Rr:5′-TGGGTACAGACTTTCTTGCC-3′;HMGCS2-Fr:5′-CTGGGATGGTCGTTATGCCA-3′,HMGCS2-Rr:5′-TCGTCAAGGGTGAAGGGTCG-3′;SORBS2-Fr:5′-ACGTAGAGAAACTCACACCT-3′,SORBS2-Rr:5′-TCCTATCACTAGAATAGCTG-3′;GAPDH-Fr:5′-CATGAGAAGTATGACAACAGCCT-3′,GAPDH-Rr:5′-AGTCCTTCCACGATACCAAAGT-3′.

Tissue Mikrosiruja (TMA) ja immunohistokemia (IHC) B

kudossiruina (TMA) on rakennettu 231 paria ensisijainen ESCC kasvain näytteet ja vastaaviin normaaleihin ruokatorven epiteeli kuten aiemmin on kuvattu [15], [16]. ESCC näytteet vaihtelivat patologinen vaiheessa grade Ι palkkaluokkaan III potilailta ikäryhmässä 40-80 vuotta. Standard streptavidiini-biotiini-peroksidaasi-kompleksi menetelmää käytettiin IHC värjäystä. Lyhyesti, TMA osat poistettiin parafiini, vedettömät ja esti 10% normaalia vuohen seerumia huoneenlämmössä 30 minuuttia. Leikkeitä inkuboitiin sitten anti-cortactin (CTTN) vasta-aine (Abcam, Cambridge, UK) laimennoksena 1:300 yön yli 4 ° C: ssa. Sen jälkeen pestiin TBS, kalvot inkuboitiin sitten biotinyloidulla vuohen anti-kani-immunoglobuliinin pitoisuutena 1:100 30 minuutin ajan 37 ° C: ssa. Kolme riippumatonta tutkijat semikvantitatiivisesti arvioi CTTN positiivisuus ilman aiempaa kokemusta ennusteeseen viittaavia tietoja. Positiivinen ilmaus CTTN normaaleissa ja pahanlaatuisten ESCC kudokset oli pääasiassa solulimassa kuvio. Koska intensiteetti CTTN värjäyksen kussakin kudoksessa ydin oli pääosin homogeeninen, intensiteetti CTTN värjäytyminen semikvantitatiivisesti arvioitiin seuraavien kriteerien mukaisesti: vahva positiivinen (pisteytettiin 2+), tummanruskea värjäytymistä 50% normaalista tai pahanlaatuinen ruokatorven okasolusyöpä solut kokonaan peittää sytoplasmaan; heikko positiivinen (1+), mitä tahansa vähäisen ruskean värjäyksen tuntuva sytoplasmassa; poissa (pisteytettiin 0), mitään merkittävää värjäytymistä normaalissa tai pahanlaatuisten ruokatorven okasolujen. Olemme luokiteltu vahva positiivinen ilmaisu kuin CTTN yliekspressio (+), heikko positiivinen ja poissa lauseketta CTTN ei yli-ilmentymisen (-). Tapauksia katsotaan olevan voimakkaasti positiivinen vain, jos arvioijat määritellään itsenäisesti niitä sellaisenaan.

Tilastollinen analyysi

Tilastollinen analyysi tehtiin SPSS standardin versio 13.0 (SPSS Inc.). Yhdistyksen välillä CTTN ilmentymistä kasvain kudosten ja ennusteeseen viittaavia ominaisuuksia, kuten ikä, sukupuoli, kasvaimen solujen erilaistumista, imusolmukkeiden etäpesäke ja patologinen vaiheessa analysoitiin käyttäen chi-neliö testi. Tautikohtaiset eloonjäämisen (DSS) käyrät laskettiin alkaen diagnoosi kuolinpäivä liittyvien ESCC tai viimeinen seurannan. Survival käyrät arvioitiin Kaplan-Meier menetelmä ja erot eloonjäämisajasta vertailtiin log-rank-testi. Suhteelliset riskit syöpään liittyvän kuoleman liittyy CTTN ilmentymisen tila ja ennusteeseen viittaavia muuttujista, mukaan lukien ikä, sukupuoli, kasvaimen solujen erilaistumista ja imusolmukkeiden etäpesäkkeiden arvioitiin yksiulotteista analyysejä. Coxin monimuuttuja-analyysi suoritettiin kaikki muuttujia, havaittiin olevan merkittäviä yhden muuttujan tasolla. Eroja pidettiin merkittävinä, jos P-arvo oli alle 0,05.

Tulokset

tunnistaminen ilmentyvät eri geenien välillä ESCC Kudokset ja vieressä Normaali Ruokatorven epithelia

geeniekspressioprofiilien yhdistettyjen kasvainten (10 ESCCs) ja niiden yhdistetty normaali kollegansa saatiin mikrosiruanalyysillä käyttämällä Affymetrix ihmisen genomin U133 plus 2.0 paneelit kattavat 47000 selostukset ja variantteja. Kaikkiaan 25206 koetinsarjojen (selostukset) oli läsnä ESCC kudoksissa verrattuna niiden normaaleihin kontrolleihin. Huomasimme, että 1315-geeneillä, differentiaalisesti ekspressiotasoja. Näistä geeneistä, 549 up-geenien (41,7%, taulukko S1) ja 766 alas geenien (58,3%, taulukko S2) havaittiin kasvaimen kudoksissa verrattuna ilmaisun profiilia normaali ruokatorven epiteeli käyttäen mielivaltainen sulku linja signaali log suhde ≥1.5 tai ≤-1.5. Toiminnallinen roolit 715 näiden geenien (340 säädelty ja 375 alassäädetty) tunnetaan. Toiminto 302 differentiaalisesti ilmentyvien geenien (715, 42,24%) kasvainkudoksissa liittyi solujen aineenvaihduntaa (148 geenit, taulukko S3), soluadheesiota (90 geenit, taulukko S4), ja immuunivastetta (64 geenit, Taulukko S5 ).

validointi Selected Genes käyttäen puoli- kvantitatiivista PCR (RT-PCR) B

Voit tarkistaa microarray tiedot, ekspressiotasot 6 satunnaisesti valitun geenit (4 up-geenien ja 2 alas- säännelty geenejä) tutkittiin RT-PCR: llä käyttäen samaa RNA-näytteet, joita käytettiin mikrosiruanalyysillä. Ilmentymiskuviot 6 satunnaisesti valitun geenin kasvainkudoksissa havaita RT-PCR: llä, lukuun ottamatta SORBS2, olivat täysin yhdenmukaiset cDNA microarray tulokset (kuvio 1A).

(A) semikvantitatiivinen käänteistranskriptio-PCR: llä ( RT-PCR) käytettiin vertaamaan ilmentymisen aseman CTTN, DMRT2, MCM10, SCYA26, HMGCS2 ja SORBS2 välillä 8 paria ensisijaisen ESCC tuumorinäytteistä ja vastaaviin normaaleihin ruokatorven epiteeliä. GAPDH käytettiin sisäisenä kontrollina. (B) edustaja CTNN ilmentymisen pari ESCC (oikealla) ja viereisen normaalin kudoksen (vasemmalla) havaitaan immunovärjäämällä anti-CTNN-vasta-aine (ruskea). Objektilasi vasta- värjättiin hematoksyliinillä (Original suurennus: ylempi × 100, pohja x 200).

arviointi CTTN kuin Prognostiset Marker for ESCC

arvioimaan mahdollisuutta ehdokas yliekspressoitu geenejä biomarkkereita ESCC, suoritimme IHC värjäystä vasta-aineella CTTN on kudossiruina sisältävä 231 paria ESCC kasvain kudosten ja niiden vieressä normaalin ruokatorven epiteeliä. Informatiivinen IHC tuloksia saatiin 198 ESCC tapauksissa. Non-informatiivinen näytteet ovat kadonneet näytteet, epäasianmukaisesti värjätään näytteet ja näytteet on liian vähän soluja; tällaisia ​​ei käytetty kelvollisia tietoja. Havaitsimme ero sytoplasmaan ilmentymisen CTTN ensiö- ESCC kasvaimia ja niiden vastaaviin normaaleihin kudoksiin (kuvio 1 B). Prosenttiosuus CTTN yli-ilmentymisen informatiivinen ESCC kasvaimen kudokset oli jopa 63,6% (126/198), joka oli merkittävästi suurempi kuin normaalin ruokatorven epiteeli (26,8%, 53/198,

P

0,001, Wilcoxonin testi, kuvio 1 B ja taulukko 1). Niistä 198 informatiivinen tutkituista tapauksista korrelaatio CTTN ilmentymistilanne ja viittaavia tekijöitä on ESCCs havaittiin. Tulokset osoittivat, että CTTN yliekspressio oli merkitsevästi yhteydessä imusolmuke etäpesäke (P = 0,000) ja patologinen vaiheessa (P = 0,000). Mitään merkittävää eroa ei havaittu ikään (P = 1,000), sukupuoli (P = 0,883) ja kasvaimen solujen erilaistumiseen (P = 0,619, taulukko 2). Kaplan-Meier selviytymisen analyysi osoitti, että potilailla, joilla on CTTN (+) kasvain (n = 126) on merkittävästi huonompi eloonjäämisaste kuin ne, joilla CTTN (-) kasvain (n = 72) (P 0,001, log-rank: 19,517, kuva 2A ). Samaan aikaan, Kaplan-Meier selviytymisen analyysi osoitti myös, että potilaat, joilla on edennyt pathologic vaiheessa (II B + III; n = 85) on merkittävästi huonompi eloonjäämisaste kuin varhaisen pathologic vaiheessa (I + II A; n = 113) (P = 0,000, log -rank: 19,390, kuvio 2B). Lisäksi tutkimme ennustetekijöiden arvon CTTN ilmaisun ESCC potilailla, joilla on eri pathologic vaiheissa. Potilaat, joilla CTTN yliekspressio oli huomattavasti lyhyempi tautikohtaisia ​​eloonjäämisaste kuin ilman CTTN yliekspressio sekä I + II A alaryhmä (n = 113, p = 0,001, kuvio 3A) ja II B + III alaryhmä (n = 85, p = 0,027, Kuvio 3B), mikä osoittaa, että CTTN voisi olla arvokas prognostinen merkkiaine ESCC. Lisäksi yhden muuttujan analyysiä käytettiin arvioimaan assosiaatioita ennustetta ja useat tekijät, kuten ikä, sukupuoli, kasvaimen solujen erilaistumista, imusolmukkeiden etäpesäkkeiden ja CTTN tilan ESCC kasvaimia. Tulos osoitti, että imusolmukkeiden etäpesäke (P = 0,000), kasvain solujen erilaistumiseen (P = 0,001) ja yliekspressio CTTN kasvaimissa (P = 0,000) olivat merkittäviä negatiivisia ennustavat tekijät ESCC potilailla (taulukko 3). Niistä parametrit monimuuttujatestaus analysoi Coxin suhteellista riskin malliin paljasti, että yli-ilmentyminen CTTN vuonna ESCC kasvaimet (P = 0,001), LN etäpesäke (P = 0,003) ja kasvaimen solujen erilaistumiseen (P = 0,000) olivat riippumattomia ennustavat tekijät ESCC, vastaavasti (Taulukko 3). Yhdessä meidän tulokset osoittavat, että yliekspressio CTTN vuonna ESCC kasvaimissa itsenäisesti ennustaa huono ennuste potilaille, joilla ESCC.

(A) Kaplan-Meier -käyrät olevan taudin eloonjäämisen (DSS) nopeudella ESCC sairastavilla potilailla ( n = 126, vihreä viiva) tai ilman (n = 72, sininen viiva) CTNN yli-ilmentymisen. (B) Kaplan-Meier -käyrät DSS määrä ESCC potilailla, joilla on patologinen vaiheessa I + II A (n = 113, sininen viiva) tai IIB + III (n = 85, vihreä viiva).

keskustelu

Ruokatorven levyepiteelisyöpä (ESCC) on erittäin aggressiivinen syöpä, joka neljänneksi yleisin kuolinsyy syöpään Kiinassa [17]. Puutteen vuoksi luotettavia diagnostisia menetelmiä ja erityisiä oireita alkuvaiheessa havaita, useimmat potilaat ovat paikallisesti edennyt laajalle levinneestä syövän diagnoosi, kun he nielemään vaikeaa tai tuntuu epämukavalta. Useita kasvainmerkkiaineet, kuten syöpä -antigeeni (CEA), okasolusyöpä antigeeni (SCC) ja sytokeratiinia 19-fragmentti (CYFRA 21-1), käytetään kliininen diagnoosi sekä potilaan seurantaan. EGFR ilmentyy 33,3% ruokatorven okasolusyöpää (ESCCs), Lapatinibin voi olla merkittävä terapeuttinen vaikutus vastaan ​​EGFR: ää ilmentävä ESCC estämällä kasvun ESCC solujen ja lisäten Herceptin- ja Setuksimabia-välitteisen ADCC [18]. Itse asiassa emme ole havainneet mitään hyödyllistä tuumorimarkkeri havaitsemiseksi ESCC varhaisessa vaiheessa ja tehokkaasti molekyylitason kohdennettuja hoitoja. Parempi ymmärrys molekyylitason mekanismi, joka osallistuu ilmenemisestä ja kehittymisestä ESCC saattaa johtaa entistä tehokasta hoitoa ESCC potilaiden ja löytää tehokkaita markkereita varhaiseen havaitsemiseen ja parempi valikoima adjuvanttia hoitomuotoja asianmukaisista ESCC potilaille. Määräytymisperusteista eroja geeni-ilmentymisen välillä ESCC kasvaimen ja normaaleissa kudoksissa on tärkeää ymmärtää paremmin tämän molekyylisulan mekanismia.

analyysi ilmentymisen profiilien avulla cDNA microarray on nyt laajalti eri syöpäsoluissa [19] – [21] . A novel Esillä olevan tutkimuksen on se, että käytetään microarray, joka sisältää hyvin suuren määrän koettimia määrittää ero geenin ilmentymisen välillä ESCC kudosten ja vastaaviin normaaleihin ruokatorven epiteeli ilmentämällä array. Tulos osoitti, että 1315-geenit ilmentyvät differentiaalisesti ESCC. Näistä geeneistä, 549 oli säädelty ja 766 olivat alassäädetty. 715 differentiaalisesti ilmentyvien geenien, joilla on tunnettu funktio, 42,24% liittyi solujen aineenvaihduntaa, soluadheesiota ja immuunivastetta. Yhdenmukaiset aikaisempien tutkimusten kanssa, tunnistimme geenejä, kuten FASCIN (SNL), EGFR ja ECRG4, tiedettiin olevan ero ilmentymisen ESCC kudoksissa ja vastaaviin normaaleihin ruokatorven epiteeli [18], [22] – [24]. Lisäksi olemme myös havainneet useita ESCC liittyviä geenejä, joita ei ole aikaisemmin raportoitu. Jotkut differentiaalisesti ilmentyvien geenien voivat olla käyttökelpoisia diagnostisina markkereina, prognostisia markkereita tai uusia terapeuttisia kohteita. Tässä tutkimuksessa olemme valinnut säädelty geeni CTTN ja tutkitaan sen koodauksen proteiinia (cortactin) ilmentymistilanne kudoksen mikrosiruanalyysillä. Cortactin on kuvattu kuin aktiini liittyvä rakennustelineet proteiini, joka sitoo ja aktivoi aktiini liittyvä proteiini 2/3 monimutkainen, ja on tullut keskeinen tekijä yhdistää signalointipolkujen kanssa solun tukirangan uudistamisesta [25], [26]. Remontin aktiinisytoskeletonin on vaikutuksia solujen vaeltamiseen, liikkuvuuteen ja tarttuvuus sekä kasvaimen invaasio ja etäpesäkkeiden [27]. Yliekspressio cortactin liittyy lisääntynyt invasiivisuus Maksasolusyövän solujen [28].

Cortactin yliekspressoituu monenlaisia ​​ihmisen syövissä, kuten pään ja niskan levy- karsinoomat ja peräsuolen, mahan, hepatosellulaarinen, rinta- ja munasarjasyöpiin [ ,,,0],26], [29]. Aiemmat raportit osoittivat, että merkittävä korrelaatio CTTN yli-ilmentymisen ja huonon ennusteen osteosarcoma [30]. Tässä tutkimuksessa arvioimme ilmaus tila cortactin käyttäen suuren läpimenon TMA-analyysi. Tutkimuksemme on näytteillä mahdollinen arvo CTTN ennustamisessa potilaiden eloonjäämiseen osaryhmään aikaisin tai pitkälle patologinen vaiheessa, mikä viittaa siihen, että yliekspressio CTTN voidaan käyttää itsenäisenä tekijänä ennustetekijöiden ennustamiseen ESCC. Kuitenkin enemmän työtä tarvitse suorittaa arvioitava edelleen CTTN geenin kliinisiä sovelluksia ESCC potilaille.

Yhteenvetona meidän cDNA mikrosiruanalyysi havaittu ero geeniekspressioprofiilien välillä ESCC kudosten ja normaali ruokatorven epiteelin ja siten arvokasta tietoa lisätutkimuksia molekyylitason perustan taustalla tumorigeneesin ruokatorven syöpään. Parempi ymmärrys geeniekspressioprofiilien of ESCC voi johtaa hallinnan tehostaminen ESCC täsmällisillä prognoosi- indikaattoreita ja tehokas henkilökohtainen terapia.

tukeminen Information

Kuva S1.

doi: 10,1371 /journal.pone.0088918.s001

(TIF) B Taulukko S1.

Up-regualted geeneistä (≥1.5-kertainen) kymmenessä tapauksessa ruokatorven okasolusyöpä.

doi: 10,1371 /journal.pone.0088918.s002

(DOC) B Taulukko S2.

Down-geenien (≥1.5-kertainen) kymmenessä tapauksessa ruokatorven okasolusyöpä.

doi: 10,1371 /journal.pone.0088918.s003

(DOC) B Taulukko S3.

Luettelo 148 liittyvien geenien solujen aineenvaihduntaa.

doi: 10,1371 /journal.pone.0088918.s004

(DOC) B Taulukko S4.

Luettelo 90 liittyvien geenien soluadheesiota.

doi: 10,1371 /journal.pone.0088918.s005

(DOC) B Taulukko S5.

Luettelo 64 geenejä, jotka liittyvät immuunivasteeseen.

doi: 10,1371 /journal.pone.0088918.s006

(DOC) B