Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tutkimme

MET

mRNA ilmentymistilanne käyttävät RNA in situ -hybridisaatio (ISH) tekniikka perus- ja etäpesäkeleesioita 535 kirurgisesti resektoitiin mahakarsinoo- (GC) tapauksissa. Vertasimme tulosten kanssa Immunohistokemian ja hopea in situ -hybridisaatio, ja tutki yhdessä ennusteeseen viittaavia ominaisuuksia ja ennustetta. Niistä 535 ensisijainen GC, 391 (73,1%) pisteytettiin 0, 87 (16,3%) pisteytettiin 1, 38 (7,1%) pisteytettiin 2, 12 (2,2%) pisteytettiin 3 ja 7 (1,3%) pisteytettiin 4 RNA ISH. Korkea

MET

mRNA: n ilmentymisen (pisteet ≥3) liittyi imusolmuke etäpesäke (

P

= 0,014), kaukainen etäpesäke (

P

= 0,001), ja korkeampi TNM (

P

0,001).

MET

mRNA ilmentyminen korreloi proteiinin ilmentymisen (r = 0,398;

P

0,001) ja geenin kopioluku (r = 0,345;

P

. 001). Potilaat osoittaa korkea-

MET

mRNA ensisijainen tai etäpesäkeleesioita oli lyhyempi kokonaiselossaoloaika kuin näytetään pieni-

MET

mRNA (ensisijainen kasvaimia,

P

= 0,002; metastaattinen imusolmukkeiden,

P

0,001). Potilaat myönteiseen muuntaminen

MET

mRNA tila metastaattisessa imusolmuke oli lyhyempi kokonaiselossaoloaikaa kuin muuntamattomina (

P

= 0,011). Monimuuttuja-analyysi osoitti, että korkea

MET

mRNA ilmaisun metastaattisessa imusolmuke oli itsenäinen ennustetekijä yleisen eloonjäämisen (

P

= 0,007). Siksi tämä tutkimus osoittaa, että

MET

mRNA ilmaisun arvioida RNA ISH voisi olla hyödyllinen mahdollisena merkki tunnistaa

MET

onkogeeni-koukkuun GC.

Citation: Choi J , Lee HE, Kim MA, Jang BG, Lee HS, Kim WH (2014) analyysi

MET

mRNA ilmentäminen mahasyövistä käyttäminen RNA in situ -hvbridisaatioanalvvsi: Sen kliininen ulottuvuudet ja vertailu immunohistokemia ja hopea in situ hybridisaatio. PLoS ONE 9 (11): e111658. doi: 10,1371 /journal.pone.0111658

Editor: Svetlana Pack, CCR, National Cancer Institute, NIH, Yhdysvallat

vastaanotettu: 11 maaliskuu 2014; Hyväksytty: 06 lokakuu 2014; Julkaistu: 03 marraskuu 2014

Copyright: © 2014 Choi et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat National Research Foundation of Korea (NRF) A3 Foresight-ohjelma (https://www.nrf.re.kr). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

viime vuosikymmenen aikana, reseptorityrosiinikinaasin (RTK) väyliä ovat osoittautuneet houkuttelevia huumeiden kohteita syöpähoidolla [1], ja MET reitti on yksi näistä lupaavia kohteita.

MET

on esikasvaintekijän sijaitsee 7q31 locus ja koodaa RTK varten hepatosyyttikasvutekijän (HGF) [2], [3]. Tiukka sääntely HGF /MET polku, joka havaitaan kehitystä ja uudistumista katoaa syöpää, ja sääntelyn purkaminen tapahtuu läpi useita mekanismeja [1]. Poikkeava MET aktivointi pelaa tärkeä rooli syöpäsolujen selviytymisen, kasvun, angiogeneesin ja metastaasin eri syöpiä, kuten keuhko-, rinta-, munuais-, ja ruoansulatuskanavan pahanlaatuisten kasvainten [4]. Vaikka potilas ositus mukaan MET ilmentymistä tai aktiivisuutta on tärkeää terapeuttista menestys, menetelmiä, joilla arvioidaan tason MET ilmentymistä tai aktiivisuutta ei ole selvitetty [4].

mahakarsinoo- (GC), poikkeava MET aktivointi on ajateltu liittyvän geenin annoksen vaikutus [5], ja

MET

geenimonistuman (GA) tai proteiini yliekspressio on liittynyt aggressiivinen kasvain ominaisuuksia ja /tai huonompi kliininen tulos [6] – [14]. Lisäksi

MET

-amplified tai -overexpressed GC osoitti hoitovasteen useita estäjiä HGF /MET-signalointireitin prekliinisissä tutkimuksissa [15] ja vaiheen I kliinisissä kokeissa [12], [16]. Siksi MET esto on potentiaalia kuin toinen onnistunut terapeuttinen strategia seuraavat ihmisen epidermaalisen kasvutekijän reseptori 2 (HER2) -targeted hoito pitkälle GC. Kuitenkin aiemmat tutkimukset ovat käyttäneet erilaisia ​​menetelmiä tunnistaa MET-positiivisia GC ja ovat osoittaneet ristiriita yleisyydessä MET yli-ilmentymisen tai vahvistus: MET yliekspressio vaihteli 18%: sta 73,7%: in tutkimukset käyttäen immunohistokemiallinen (IHC) [7] – [9], [13], [14], [17],

MET

geenikopiomäärä (GCN) voitto vaihteli 10%: sta 21,2%: in, joissa käytettiin kvantitatiivista reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (qPCR) [10], [ ,,,0],11], ja

MET

GA vaihteli 2%: sta 3,9%: in tutkimukset fluoresenssi in situ hybridisaatio (FISH) [12], [18] tai hopea in situ -hybridisaatio (SISH) [13]. Näistä menetelmistä, IHC käytetään laajalti kliinisessä käytännössä ja todennäköisin seulontamenetelmä havaitsemiseksi MET-positiivisten GC. Kuitenkin lisätutkimusta tarvitaan vielä löytää ennakoivaa biomarkkereiden tai määritys menetelmän MET eston hoidossa.

Tässä tutkimuksessa teimme RNA in situ -hybridisaatio (ISH) määritys käyttäen pariksi DNA oligonukleotidikoettimia ja etuvahvistin-vahvistin -etiketti koettimia visualisointiin [19]. Tässä menetelmässä käytetään formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut (FFPE) kudoksiin ja mahdollistaa yhden molekyylin visualisoinnin alla kirkkaan kentän mikroskoopilla. Aiemmissa tutkimuksessa osoitimme, että

HER2

mRNA ilmaisun arvioida RNA ISH oli hyvin korreloi proteiinin yli-ilmentymisen ja GA arvioidaan IHC ja kalastaa 211 GC tapauksissa [20]. Lisäksi osoitimme korrelaatio

MET

GCN ja proteiinin ilmentymistä aiemmassa tutkimuksessa [13]. Täällä arvioimme

MET

mRNA: n ilmentymisen RNA-ISH menetelmää, ja verrattiin tuloksia kuin IHC ja SISH suuressa sarjassa GC. Lisäksi ennusteeseen viittaavia parametreja ja kliinisiä tuloksia GC potilaiden mukaan

MET

mRNA ilmentymistilanne arvioitiin.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaille ja kudosnäytteiden

Keräsimme arkistointiin kudosnäytteistä GC potilaalla peräkkäin koki gastrectomy Seoul National University Hospital, Seoul, Korea, tammikuusta 2004 kautta joulukuuta 2005. Lisäksi 535 näytteitä ensisijaisen GC ja 199 näytteet synkroninen alueellisten metastaattisen imusolmuke (LN) peräisin 535 potilasta oli saatavilla tämän tutkimuksen. Ennusteeseen viittaavia potilaiden ominaisuuksiin tutkittiin tarkastelemalla lääketieteellisen kaavioita ja patologinen kirjaa (taulukko 1). TNM luokiteltiin mukaan järjestelmän amerikkalaisen sekakomitean Cancer Staging Manual, 7

painos. Kliiniset tulokset seurattiin alkaen leikkaus kuolemaan saakka tai 60 kuukautta.

Kaikki kudosnäytteet kiinnitettiin 10% puskuroituun formaliiniin 24-48 tuntia ja sitten upotettiin parafiiniin. Core kudokset (2 mm halkaisijaltaan) otettiin käyttäen trephine laitetta (Superbiochips Laboratories, Seoul, Korea). Ensisijaisen GC, hyökkäyksen edessä olevan primaarikasvaimen valittiin. Metastaattinen LNS tehtiin kudoksen array mutta tapauksissa mikrometastaasin suljettiin pois. Yhteensä 22 kudos microarray lohkoja, jotka sisälsivät jopa 60 ydintä rakennettiin.

Eettinen

Kaikki ihmisen näytteet saatiin aikana terapeuttinen leikkauksen. Osallistujat eivät antaneet kirjallisen suostumuksensa osallistumaan tähän tutkimukseen. Retrospektiivinen tutkimus tehtiin käyttämällä näytteitä yli hyllyt jälkeen patologisen diagnoosin, ja kaikki näytteet anonymisoidaan ennen tutkimusta. Meidän IRB (Seoul National University Hospital) hyväksyi retrospektiivinen tutkimus edellyttäen, että nimettömäksi (Viite: H-1006-035-320).

RNA ISH

in situ havaitsemiseksi

MET

mRNA, The RNAscope FFPE 2.0 iinianalyysikitissä (Advanced Cell Diagnostics, Hayward, CA, USA) käytettiin mukaan valmistajan ohjeiden. Lyhyesti, 2- ja 3-um FFPE kudosleikkeiden poistettiin parafiini, kuumennettiin, käsiteltiin proteaasilla, ja hybridisoitiin koettimen kanssa 40 ° C: ssa 2 tunnin ajan (viite-sekvenssi, NM_001127500, koetin alue, 1236-2257). Pesun ja vahvistus, 3, 3′-diaminobentsidiinitetrahydrokloraattia lisättiin havaitsemiseen kohde-RNA. Tumat vastavärjättiin hematoksyliinillä. Positiivinen värjäys merkitty ruskea pistemäinen pisteitä tumassa ja /tai sytoplasmaan.

MET

mRNA ilmentymistasot luokiteltu 5 laadut mukaan valmistajan pisteytys ohje: pisteet 0, mitään värjäytymistä tai 1 piste per solu; pisteet 1, 1-3 pistettä per solu (näkyvissä 20-40 x); pisteet 2, 4-10 pistettä per solu ja ei lainkaan tai hyvin vähän dot klustereita (näkyvissä 20-40 x); Pisteet: 3, 10 pistettä per solu ja 10% positiivisia soluja on piste klustereita (näkyvissä 20 x); pisteet 4, 10 pistettä per solu ja 10% positiivisia soluja on piste klustereita (näkyvissä 20 x) (kuvio 1). Koettimet

UBC

(ubikitiinipromoottori C) ja

dapB

(bakteeri-geeni) käytettiin positiivisen ja negatiivisen kontrollin, vastaavasti. Näytteet pidetään riittävänä, kun

UBC

mRNA signaalit olivat helposti nähtävissä 10x objektiivilinssin ja

dapB

signaali ei näkynyt.

(A-C) negatiivinen tapaus osoittaa

MET

RNA ISH pisteet 0: (A)

MET

mRNA, (B)

UBC

mRNA, ja (C)

dapB

mRNA . (D-F) positiivinen tapaus osoittaa MET RNA ISH pisteet 4: (D)

MET

mRNA, (E)

UBC

mRNA, ja (F)

dapB

mRNA (alkuperäinen suurennos: x 400).

IHC ja SISH

immunohistokemiallinen värjäys MET suoritettiin anti-yhteensä MET (SP44) kanin monoklonaalisia ensisijaisen vasta-aineita (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, USA). Automaattinen immunostainer (BenchMark XT, Ventana Medical Systems) käytettiin mukaan valmistajan ohjeiden. MET immunovärjäyksellä pisteytettiin kanssa HercepTest pisteytys suuntaviivat GC (DAKO, Glostrup, Tanska): pisteet 0, ei solukalvojen värjäytymistä tai solukalvojen värjäytymistä sisään 10% syöpäsoluja; pisteet 1, heikko /tuskin havaittava osittainen kalvon värjäytymistä 10% syöpäsoluja; pisteet 2, heikko tai kohtalainen värjäytyminen koko kalvon 10% syöpäsoluja; Pisteet: 3, voimakas värjäytyminen koko kalvon 10% tuumorisolujen (kuvio 2).

(A) IHC pisteet 1, (B) IHC pisteet 2, (C) IHC pisteet 3, ja (D) geenimonistuman (alkuperäinen suurennos: x 400).

Dual-color SISH määritys suoritettiin INFORM MET DNA koetin ja INFORM kromosomi 7 koetin (Ventana Medical Systems) Ventana BenchMark XT seuraavia valmistajan protokollia. Signaalit laskettiin 40 kasvaimen ytimet ydintä kohti, ja

MET

geenin asema luokiteltiin 6 ryhmää käyttäen Coloradon yliopiston Cancer Centerin kriteerit kasvutekijän reseptorin geeni [21] (kuva 2).

tilastollinen

χ

2 testiä tai Fisherin testiä käytettiin testaamaan yhdistyksen välillä markkinatalouskohtelusta ja ennusteeseen viittaavia tekijöitä. Opiskelijan

t

-testi käytettiin vertaamaan keinoja jatkuvia muuttujia. Spearman korrelaatio testillä välisen suhteen arvioimiseksi RNA ISH tulosten ja IHC tai SISH tuloksia. Kaplan-Meier-menetelmää käytettiin arvioitaessa yleistä (OS), ja käyttöjärjestelmä erot erilaisten ryhmien markkinatalouskohtelua verrattiin käyttäen log-rank-testi. Monimuuttuja eloonjääminen analyysi suoritettiin käyttäen Coxin suhteellisten riskien suhde malli. Tietojen analysointi suoritettiin SPSS versio 20,0 (SPSS, Chicago, IL, USA), ja tulokset pidettiin merkittävinä, kun

P

0,05.

Tulokset

1.

MET

mRNA tila arvioidaan RNA ISH

535 primaaristen kasvainten, 391 (73,1%), 87 (16,3%), 38 (7,1%), 12 (2,2%) ja 7 ( 1,3%) osoitti RNA ISH viereen 0, 1, 2, 3, ja 4, vastaavasti. Kun vertasimme tuloksia RNA ISH kanssa ennusteeseen viittaavia tietoja, kuten selviytymisen, ja analyysitulokset RNA ISH kanssa IHC ja SISH tietojen ryhmät pisteet 3 ja 4 osoittivat eri ominaisuuksia. Siksi meidän pitää pisteet 3 ja 4 korkean

MET

mRNA ryhmä, ja yhteensä 19 tapauksessa (3,5%) kuului korkea-

MET

mRNA.

Korkea –

MET

mRNA liittyi iällä (

P

= 0,002), suurempi kasvaimen koko (

P

= 0,006), LN etäpesäke (

P

= 0,014), lymfaattinen invaasio (

P

0,001), lisääntynyt määrä metastaattisen imusolmukkeiden (

P

0,001), kaukainen etäpesäke (

P

= 0,001), ja korkeampi TNM (

P

0,001) verrattuna laitteista matalissa

MET

mRNA (taulukko 2). Kuitenkin korkean

MET

mRNA ei havaittu liittyvän sukupuoleen, kasvaimen sijainti, Lauren luokittelu, ja invaasio syvyys (taulukko 2).

199 synkroninen metastaattinen LNS, 119 (59,8%), 45 (22,6%), 22 (11,1%), 4 (2,0%) ja 9 (4,5%), osoitti RNA ISH viereen 0, 1, 2, 3, ja 4, vastaavasti. Siksi 13 tapauksessa (6,5%) oli korkea-

MET

mRNA. Niistä 199 paria ensisijainen ja etäpesäkeleesioita, 186 (93,5%) osoitti yhtäpitävät

MET

mRNA tila ja 13 (6,5%) ei. Näistä 13 ristiriitainen tapauksissa negatiivinen konversio todettiin 50% (7/14) korkea-

MET

mRNA ensisijainen kasvaimia, ja positiivinen muuntaminen todettiin 3,2% (6/185) Matala-

MET

mRNA primaarikasvainten (taulukko 3).

2. MET proteiinia ja GCN tila arvioidaan IHC ja SISH

Käyttäen IHC, 236 (44,1%), 171 (32%), 113 (21,1%) ja 15 (2,8%) primaarikasvainten pisteytettiin 0, 1, 2 ja 3, vastaavasti. IHC pisteet 3 osoitti selvästi viittaavia tekijöitä, ja tämän MET yliekspressio ryhmä liittyi merkitsevästi ikä (

P

= 0,005), suurempi kasvaimen koko (

P

= 0,009), invaasio syvyys (

P

= 0,05), LN etäpesäke (

P

= 0,018), lymfaattinen invaasio (

P

= 0,026), lisääntynyt määrä metastaattisen imusolmukkeiden (

P

0,001), kaukainen etäpesäke (

P

= 0,007), ja korkeampi TNM (

P

= 0,001). Kuitenkin MET yliekspressio ei osoittanut mitään yhteyttä sukupuoli, kasvaimen sijainti, ja Lauren luokittelu (taulukko S1).

199 synkroninen metastaattinen LNS, 46 (23,1%), 92 (46,2%), 46 (23,1 %) ja 15 (7,5%), osoitti, IHC viereen 0, 1, 2 ja 3, vastaavasti. Niistä 199 paria ensisijainen ja etäpesäkeleesioita, 187 (94,0%) osoitti yhtäpitävät MET proteiinia tila ja 12 (6,0%) ei. Näistä 12 ristiriitainen tapauksissa negatiivinen konversio todettiin 36,4% (4/11) primaarikasvainten kanssa MET yliekspressio, ja positiivinen muuntaminen todettiin 4,3% (8/188) primaarikasvainten ilman MET yli-ilmentymisen.

SISH,

MET

GA havaittiin 2,6% (14/535) primaarikasvainten.

MET

GA osoittivat merkittävää yhteyttä suurempi kasvaimen kokoa (

P

= 0,038), lymfaattinen invaasio (

P

= 0,009), lisääntynyt määrä metastaattisen imusolmukkeiden (

P

0,001), kaukainen etäpesäke (

P

= 0,005), ja korkeampi TNM (

P

= 0,002). Kuitenkin

MET

GA ei havaittu liittyvän sukupuoleen, kasvaimen sijainti, Lauren luokittelu, invaasio syvyys ja LN etäpesäkkeiden (taulukko S2).

3. Korrelaatio markkinatalouskohtelua arvioidaan RNA ISH, IHC ja SISH

korrelaatio

MET

mRNA ja proteiini tila arvioidaan RNA ISH ja IHC on esitetty taulukossa 4. 535 primaarikasvaimia, siellä oli positiivinen korrelaatio

MET

mRNA ja proteiinin ilmentyminen (r = 0,398,

P

0,001). Kaikki 7 tapauksissa RNA ISH pisteet 4 osoitti MET-proteiinin yli-ilmentymisen. Niistä 12 tapauksissa RNA ISH pisteet 3, 5 tapauksessa (41,7%) osoitti IHC pisteet 3. tapauksissa RNA ISH pisteet 2 näytteillä muuttuja IHC tulokset. Tapaukset, joissa RNA ISH pisteet 0 tai 1 ei osoittanut MET proteiinin yli-ilmentymisen paitsi 1 tapaus. Niistä 10 tapauksessa osoittaa ero (eli positiivinen RNA ISH ja negatiivinen IHC tai päinvastoin), 8 osoitti IHC pisteet 2 tai RNA ISH pisteet 2. 199 metastaattinen LNS, oli hyvä positiivinen korrelaatio

MET

mRNA ja proteiinin ilmentyminen (r = 0,462,

P

0,001) (taulukko S3).

lisäksi oli positiivinen korrelaatio

MET

mRNA ilmaisun ja

MET

GCN (r = 0,345;

P

0,001) (taulukko 4). Niistä 7 tapauksissa RNA ISH pisteet 4, 6 (85,7%) osoitti

MET

GA ja vain yksi tapaus osoitti HP (14,3%). 12 tapauksissa RNA ISH pisteet 3 osoitti GA (50%) tai polysomy (50%) mukaan SISH. Tapaukset, joissa RNA ISH pisteet 2 osoittivat eri SISH kuvioita kuten GA (5,3%). Mikään tapauksista RNA ISH pisteet 0 tai 1 osoitti GA.

Taulukko 5 esittää yhteenvetona tulokset RNA ISH, IHC ja SISH ensisijaisen GC. Niistä 535 tapauksessa 513 tapausta (95,9%) olivat negatiivisia sekä RNA ISH ja IHC, ja vain 22 tapausta (4,1%) osoitti positiivisia tuloksia joko RNA ISH tai IHC. Nämä 22 tapausta ilmeni

MET

GA (54,5%) tai polysomy (45,5%) vuoteen SISH, ja disomia tai trisomia ei koskaan havaittu. Mitä SISH, joukossa 14 tapausta osoittavat GA, 11 tapausta (78,6%) oli korkea ilmentyminen sekä mRNA ja proteiini. Niistä 58 tapauksissa osoittaa HP, kuitenkin vain 7 tapauksessa (12,1%) oli korkea ekspressio joko mRNA: n tai proteiinin. Niistä 111 tapaukset osoittavat LP, vain 3 tapausta (2,7%) oli korkea mRNA ilmaisun. Kaikki 352 tapaukset osoittavat disomia tai trisomia näytteille negatiiviset tulokset sekä RNA ISH ja IHC.

4. Prognostiset vaikutukset markkinatalouskohtelua perus- ja etäpesäkeleesioita

High

MET

mRNA ensisijainen kasvaimia tai metastaattinen LNS merkitsevästi yhteydessä huonoon OS (ensisijainen kasvaimia,

P

= 0,002, kuvio 3A, metastaattinen LNS,

P

0,001, kuvio 3D). Primäärikasvaimissa matalataajuuksisilla

MET

mRNA, potilaiden positiivinen muuntaminen näytti huonompi OS kuin muuntamattomina (

P

= 0,011, kuvio 3F). Primäärikasvaimissa korkeapaine

MET

mRNA, potilaiden negatiivinen muuntaminen osoittivat paremmin OS kuin ilman muuntamista, mutta ei ollut tilastollista merkitystä (

P

= 0,137, Kuvio 3F ).

535 ensisijainen GC, (A) korkean

MET

mRNA yhteydessä huonoon OS verrattuna laitteista matalissa

MET

mRNA (

P

= 0,002), (B) MET yliekspressio liittyi huono OS verrattuna ei yli-ilmentymisen (

P

= 0,001), ja (C)

MET

geenin monistaminen yhteydessä huonoon OS verrattuna ei vahvistusta (

P

= 0,005). Vuonna 199 metastaattinen imusolmukkeiden (D) korkea-

MET

mRNA yhteydessä huonoon OS verrattuna laitteista matalissa

MET

mRNA (

P

0,001), ja (E) MET yliekspressio liittyi huono OS verrattuna ei yli-ilmentymisen (

P

= 0,024). (F) In 199 Hyväksytty ensisijainen kasvaimia ja metastaattinen LNS, yhtäpitävästi positiivinen ja positiivinen muuntaminen ryhmät yhteydessä huonoon OS verrattuna yhtäpitävästi negatiivisten ryhmään (yhtäpitävästi negatiivinen vs. negatiivinen muuntaminen,

P

= 0,640; yhtäpitävästi negatiivinen vs . positiivinen muuntaminen,

P

= 0,011; yhtäpitävästi negatiivinen vs. yhtäpitävästi positiivinen,

P

0,001; yhtäpitävästi positiiviset vs. negatiivinen muuntaminen,

P

=. 137; yhtäpitävästi positiivinen vs. positiivinen muuntaminen,

P

= 0,382; negatiivinen muuntaminen vs. positiivinen muuntaminen,

P

= 0,260).

MET yliekspressio primaarisissa kasvaimia tai metastaattinen LNS merkitsevästi yhteydessä huonoon OS (ensisijainen kasvaimia,

P

= 0,001, kuvio 3B, metastaattinen LNS,

P

= 0,024, kuvio 3E). Primäärikasvaimissa ilman MET yliekspressio, positiivinen muuntaminen tiettyjä kehityssuuntia kohti ennustaminen huono OS, mutta ei ollut tilastollista merkitystä (

P

= 0,393). Primäärikasvaimissa kanssa MET yliekspressio, negatiivinen muuntaminen osoitti suuntaus paremmin OS kuin mitään muuntamista, mutta se ei ollut tilastollisesti merkitsevä (

P

= 0,132). Lisäksi

MET

GA primaarikasvaimista myös merkitsevästi yhteydessä huonoon OS (

P

= 0,005, Kuvio 3C).

Monimuuttuja-analyysissä korkea

MET

mRNA metastaattisessa LNS oli itsenäinen negatiivinen ennustetekijä OS säätämisen jälkeen ikä ( 60 y vs. ≥60 y), Lauren luokittelu (suolen tyyppiä vs. levinnyttä tai sekamuotoinen), ja TNM vaiheen (I-II vs. III-IV). Riskisuhde oli 2,27 (

P

= 0,007) (taulukko 6). Kuitenkin MET yli-ilmentymisen metastaattisessa LNS ei ollut tilastollisesti merkitsevä ennustetekijä by Monimuuttuja-analyysissä, vaikka riskisuhde oli 1,76 (

P

= 0,067). Lisäksi,

MET

GA, korkean

MET

mRNA: n tai proteiinin yli-ilmentymisen primaarikasvaimen ei ollut tilastollisesti merkittävä prognostinen tekijä, monimuuttuja-analyysi (tietoja ei esitetty).

keskustelu

Tässä tutkimuksessa olemme osoittaneet, että korkeat

MET

mRNA ilmentyminen oli merkitsevästi olevan haitallisia viittaavia tekijöitä ja huonon ennusteen suuren joukon GC käyttävistä potilaista RNA ISH menetelmällä. Lisäksi RNA ISH tulokset korreloivat hyvin niiden kanssa SISH ja IHC. Aiemmissa tutkimuksissa arvioidaan

MET

mRNA-tasot GC käytetty Northern blot-määritys [8], [22], tai käänteiskopiointi-polymeraasiketjureaktio (RT-PCR) [8], [14], [23] – [25]. Kuitenkin suurin osa tutkimuksista oli pienestä otoksesta, ja vain harvat niistä tutkittiin sen kliinistä merkitystä [22], [24] tai suorittaa verrattuna DNA: n tai proteiinin asema [14], [25]: Kuniyasu et al. Ensinnäkin tutkittu MET mRNA ilmaisun käyttäen Northern-blot analyysiä, ja he ilmoittivat, että ilmentyminen 6,0 kb transkripti läheisesti korreloivat kasvaimen vaiheen ja LN etäpesäke [22]. Amemiya et ai. kertoi, että vaihe IV GC maksan etäpesäke osoittivat korkeampia MET ilmentymistä sekä mRNA ja proteiini tasoilla kuin vaihe IV GC potilailla, joilla ei maksa etäpesäke käyttäen RT-PCR ja IHC [24].

Viime aikoina olemme raportoitu, että korkea on

HER2

mRNA hyvin korreloi proteiinin yli-ilmentymisen ja GA vertaamalla tuloksia 4 eri in situ perustuvia menetelmiä (RNA ISH, IHC, FISH, ja SISH) 211 GC tapauksissa [20]. Samoin tässä tutkimuksessa markkinatalouskohtelua, tulokset RNA ISH näytti melko hyvä korrelaatio niiden kanssa IHC ja SISH. Nämä tulokset tukevat tätä RNA ISH voi olla luotettava määritys FFPE kudosnäytteitä, vaikka lisävalidointia tutkimuksia tarvitaan.

osoitti, että

MET

GA, korkea

MET

mRNA ja proteiinin yli-ilmentymisen arvioitiin SISH, RNA ISH ja IHC olivat erittäin yhdenmukaisia, ja korkea MET asema DNA, mRNA, ja proteiinia merkitsevästi yhteydessä huonoon ennusteeseen. Nämä havainnot tukevat että MET yliekspressio johtuu pääasiassa lisääntyneestä

MET

GCN ja tämä mekanismi edistää aggressiivista käyttäytymistä

MET

onkogeeni-koukkuun GC. Kuitenkin oli joitakin tapauksia, jotka osoittavat välisen epäjohdonmukaisuuden

MET

GCN, mRNA ja proteiini tasoilla. Me spekuloida, että tekniset ongelmat (esim herkkyys ja koetin tai vasta, ja huono mRNA laatu FFPE kudokset) ja kasvaimensisäisenä heterogeenisuus markkinatalouskohtelua voi olla pääasialliset syyt tätä eroa. Kuitenkin jotkut biologiset mekanismit voivat liittyä myös tätä eroa. Esimerkiksi MET yliekspressio ilman GA voi tapahtua transkription aktivaation kautta HGF-riippuvaisen autokriininen /parakriininen silmukoita tai muita signaalinvälitysreittien [23], [26]. Päinvastoin,

MET

GA ei saa lisätä geenituotteen. Asaoka et ai. raportoitu, että muutaman GC solulinjoja kätkeminen

MET

GA ilmaistuna proteiinin samalla tasolla kuin muut solulinjat ilman GA, mutta niiden tyrosiinitähteiden on kinaasidomeeni olivat fosforyloitiin [27]. Mekanismit MET aktivointi ja rooli HGF GC vielä selvittämättä.

On tunnettua, että

MET

on merkitystä metastasointiin syövän. Useat tutkimukset osoittivat, että

MET

GA tai yli-ilmentyminen oli yhteydessä LN etäpesäkkeitä [7], [13], [22] tai kaukana etäpesäke [13], GC potilailla. Lisäksi osoitettiin, että anto MET-estäjän vähensi vatsakalvon levittämistä GC ksenograftimallia [23]. Lisäksi Di Renzo et ai. havaitsivat, että syöpäsolut kuljettavat

MET

aktivoivia mutaatioita valittiin aikana metastaattisen leviämisen pään ja kaulan okasolusyöpää vertaamalla geenisekvenssin väliin primaarikasvaimen ja metastaattinen imusolmukkeesta [28]. Kuitenkin suora vertailu markkinatalouskohtelua välillä primaarikasvaimen ja etäpesäkkeitä ei ole suoritettu suuressa sarjassa GC. Kun vertasimme MET ilmentymistilanne välillä 199 Hyväksytty ensisijaisen kasvaimia ja metastaattinen LNS, ja yleinen konkordanssin oli 93,5% ja 94% RNA ISH ja IHC, vastaavasti. Nämä tulokset viittaavat siihen, että MET ilmentymistilanne GC on suhteellisen vakio etäpesäke alueelliseen LNS. Kuitenkin positiivinen muuntaminen

MET

mRNA tila oli merkitsevästi yhteydessä huonoon ennusteeseen mukaan yhden ja usean analyysi. Siksi nämä tulokset viittaavat siihen, että arviointi MET tilaansa etäpesäkeleesioita voi olla tärkeää ennakoida ennustetta ja tunnistamaan muita ehdokkaita MET-täsmähoitoihin.

In situ-pohjainen RNA-analyysi on useita etuja verrattuna ”jauhaa ja sitoa analyysi kuten RT-PCR [19] ja sitä voidaan soveltaa sekä kliinisen käytännön ja retrospektiivinen tutkimus. Lisäksi RNA ISH on edullisempi kuin IHC, kun ei ole sopivaa vasta-ainetta tai kun kohdemolekyyli on erittyvä proteiini. Osalta

MET

, tämä etu voi olla hyödyllinen, koska HGF-tuottavia soluja voidaan visualisoida kudosleike käyttäen HGF koetinta. Kuitenkin haavoittuva mRNA vakautta kudoksen käsittelyn ja kalliimpaa kuin IHC ovat haitat RNA ISH menetelmän. Toivomme, että uusia teknisiä parannuksia ratkaisee nämä rajoitukset.

Tässä retrospektiivisessä tutkimuksessa,

MET

mRNA tila arvioitiin RNA ISH on hyvin korreloi proteiinin ja GCN arvioidaan IHC ja SISH vastaavasti ja

MET

GA on erittäin yhdenmukaisia ​​korkea ilmentyminen joko mRNA tai proteiini. Vuonna eloonjääminen analyysi, korkea ilmentyminen

MET

mRNA ensisijainen tai etäpesäkeleesioita, ja positiivinen muuntaminen

MET

mRNA tila liittyvät merkittävästi huonoon ennusteeseen. Lisäksi

MET

mRNA tila metastaattisessa LNS on itsenäinen ennustetekijä mukaan monimuuttujamenetelmin. Tuloksemme osoittavat, että

MET

mRNA voi olla vaihtoehto merkki tunnistaa

MET

onkogeeni-koukkuun GC.

tukeminen Information

Taulukko S1.

doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s001

(DOCX) B Taulukko S2.

doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s002

(DOCX) B Taulukko S3.

doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s003

(DOCX) B

Kiitokset

Olemme erittäin kiitollisia Ms Hyun Ju Park hänen teknistä tukea.