Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoite

Voit selvittää tiheyden FOXP3

+ lymfosyyttien ensisijainen kasvaimia ja imusolmukkeisiin haimasyövän korreloi läsnä imusolmukemetastaaseja.

Methods

FOXP3

+ lymfosyyttien tiheys ensisijainen haimasyövän kudosten ja tyhjennys imusolmukkeet mitattiin immunohistokemiallisesti. Analysoimme kliiniset ja patologiset näkökohdat liittyvät kertyminen FOXP3

+ lymfosyyttien haimasyöpä. Olemme myös analysoineet korrelaatio tiheyden FOXP3

+ lymfosyyttejä imusolmukkeisiin kanssa imusolmukestatuksesta ja etäisyys primaarikasvaimen.

Tulokset

FOXP3

+ lymfosyyttien tiheys haiman syöpä oli merkittävästi korkeampi kuin paratumoral haimakudoksessa. Tiheys FOXP3

+ lymfosyyttien paikallisissa kasvainkudoksessa korreloi merkitsevästi histologinen arvosana ja yleinen imusolmuke tila. Lisäksi FOXP3

+ lymfosyyttien tiheys oli merkitsevästi korkeampi positiivisia imusolmukkeita kuin negatiivisia, vaikka sillä ei ollut mitään korrelaatiota etäisyyden imusolmuke primaarikasvaimen.

Johtopäätös

FOXP3

+ lymfosyyttien tiheys ensisijainen kasvainkudoksessa potilaiden haimasyöpä korreloi imusolmuke etäpesäke. Imusolmukkeet, jotka sisältävät etäpesäkkeitä ottaa suurempi FOXP3

+ lymfosyyttien tiheydet kuin tehdä negatiivinen imusolmukkeet.

Citation: Jiang Y, Du Z, Yang F, Di Y, Li J, Zhou Z, et al. (2014) FOXP3

+ lymfosyyttien Density in Haimasyöpä korreloi imusolmukemääritysmenetelmä Etäpesäke. PLoS ONE 9 (9): e106741. doi: 10,1371 /journal.pone.0106741

Editor: Valli De Re, Centro di Riferimento Oncologico, IRCCS National Cancer Institute, Italia

vastaanotettu 25 marraskuuta 2013 Hyväksytty: 09 elokuu 2014; Julkaistu: 05 syyskuu 2014

Copyright: © 2014 Jiang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat avustuksia Shanghai Municipal Natural Science Foundation (11ZR1405500) ja avustukset Shanghai Municipal Science and Technology komission (13140902401). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

haiman adenokarsinooma, joka tunnetaan yleisesti nimellä haimasyöpä, on yksi kaikkein aggressiivista ihmisen syöpäsairauksia. Radical resektioleikkaukselle paikallinen tauti antaa pienen parantumisen mahdollisuuksia; kuitenkin, se on harvoin ilmoitettu koska suurten verisuonten invaasio ja /tai etäispesäkkeitä usein löydettiin diagnoosin. Jopa silloin, kun kirurginen resektio on mahdollista, etäpesäke ja toistuminen ovat erityisen näkyvästi haimasyövän [1].

Suuri osa perinteisesti keskitytty syövän tutkimus on mukana tutkimiseen genotyypin ja fenotyypin muutokset taustalla syövän kehitystä, eteneminen, ja etäpesäke. Vastakohtana näille solu-autonominen osa kiinteiden kasvainten, nykyiset tutkimukset valottavat muiden kriittisten osien kasvaimen microenvironment [2]. Perustuvat sellaisiin tutkimuksiin, on ilmeistä, että immuunijärjestelmän solut ja niihin liittyvät sytokiinit ovat tärkeä osa kasvaimen microenvironment haimasyövän [3]. Säätelijä-T-solut (Treg), jotka oli alun perin määritelty yhteydessä autoimmuunisairauksien ja tiedetään tukahduttaa T-soluvälitteinen immuunivaste, nyt uskotaan keskeinen osaltaan estää immuunivalvonnan syöpää vastaan ​​ja kehitystä vaikeuttavien tehokkaiden antitumor koskemattomuutta. On raportoitu, että Treg kasvoi perifeerisen veren, kasvaimen mikroympäristössä ja askiteksena erilaisia ​​maligniteettien ja näytä vaikuttavan useita ominaisuuksia kasvaimen vastaisen immuniteetin [4] – [7].

haimasyöpä potilailla, se on hyvin dokumentoitu, että esiintyvyys Treg sekä ääreisverenkierron ja kasvaimen mikroympäristöihin on kohonnut, ja että Treg tunkeutuminen korreloi suoraan kasvaimeen patologinen vaiheessa ja ennusteen [8] – [12]. Olemme hiljattain vahvistanut, että haimasyöpä on soluttautunut FOXP3

+ otaksuttu Treg, ja tämä toimi mahdollisena selityksenä köyhien potilaiden selviytymiseen huolimatta korkeasta esiintyvyydestä CD8

+ T-solujen [13]. Tässä tutkimuksessa olemme käytetään myös virtaussytometrialla vahvistaa, että FOXP3

+ solut olivat myös CD3

+ CD4

+ CD25

+ CD127

– ja siten vahvistaa ehdotus, että FOXP3 voi palvella hyödyllinen markkeri Treg haimasyövän.

läsnäolo tai puuttuminen imusolmukemetastaaseja on vahvin ennustaja tulosten kirurgisen resektion haimasyöpä; kuitenkin tiedetään vain vähän suhdetta Treg tunkeutuminen haimasyövän ja imusolmuke etäpesäke. Siksi testasimme hypoteesia, että kohonneita FOXP3 immunovärjääminen primaareja kasvaimia ja alueellisten imusolmukkeiden ennustaisi läsnä imusolmukemetastaaseja haimasyövän.

Potilaat ja menetelmät

Potilaat

tässä tutkimuksessa keräsimme kliiniset ja patologiset tietoja 50 potilasta, joille tehtiin radikaali resektio varten adenokarsinooma haiman pään huhti 2005 ja joulukuun 2008 Huashan sairaala, Fudanin yliopistossa. Potilaat, joilla on aiemmin ollut autoimmuunisairaus ja krooninen /akuutti infektio, ja ne, jotka olivat saaneet sädehoitoa tai kemoterapiaa ennen niiden toimintaa ulkopuolelle. Nimistö noudetun imusolmukkeiden ja patologisten lavastus perustui

Second Englanti Edition luokittelu haimakarsinooma-

ehdottama Japani Haiman Society (JPS) [14]. Tyhjennys imusolmukkeet ensimmäisen, toisen ja kolmannen ryhmän viitataan N1, N2 ja N3, vastaavasti. Tutkimus hyväksyttiin eettisen komitean Huashan sairaala, Fudanin yliopiston, Shanghai, Kiina (NO. 2012215). Potilastietoja olivat anonymisoituja ja tunnistamattomiksi ennen analyysiä.

immunohistokemia

tutustuneet hematoksyliini- eosiini leikkeitä haiman kasvain ja paratumoral (viereisen ei-neoplastisia haiman parenchyma) kudoksiin, ja otokseen imusolmukkeet, potilailta, joilla on histologisesti vahvistettu haiman adenokarsinooma. Vastaava formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut kudokset kerättiin, ja 5-um: n paksuisia leikkeitä valmistettiin. Immunohistokemiallinen värjäys FOXP3 suoritettiin käyttämällä avidiini-biotiini kompleksin piparjuuriperoksidaasi menetelmällä. Lyhyesti, parafiini leikkeet ensimmäisen parafiini ja sammutettua, ja sitten altistetaan lämmön aiheuttamaa antigeenin haku vaiheessa (EDTA, pH 7,8). Endogeeninen peroksidaasiaktiivisuus tukossa, ja dioja inkuboitiin 0,3% H

2O

2. Epäspesifinen sitoutuminen estettiin Protein Block (RE7102, Novocastra). Levyjä inkuboitiin sitten ensisijainen monoklonaalisia vasta-aineita vastaan ​​FOXP3-proteiinia (klooni ab10563, 01:50; Abcam). Sitoutuneet sekundaariset vasta-aineet visualisoitiin diaminobentsidiinillä (Dako) ja vasta- värjättiin Harris hematoksyliinillä. Negatiivinen kontrolli värjäys suoritettiin ensisijaisen vasta-aineen pois.

FOXP3

+ lymfosyyttien luettelointi

Jokaisessa osassa arvioitiin riippumattomasti kahdella patologit (Du ZG, Zhou ZW), jotka olivat sokaissut potilaiden kliiniset ja patologiset profiileja. Positiivisten solujen FOXP3 laskettiin viidellä satunnaisesti valituilla alueilla kovassa suurennus (× 400) (Olympus, Japani) ja ilmaistiin keskimäärin positiivisten solujen kohti suuritehoisia kentän (/HP). Erot kahden patologeista tarkistettiin yhdessä päästä yhteisymmärrykseen.

Tietojen analysointi

Jatkuva muuttujat ilmaistaan ​​keskiarvona ± keskihajonta (SD), ja kategorisen muuttujat ilmaistaan ​​taajuuksilla (% ). Pearson χ

2 ja useita logistista regressiota käytettiin yhden ja usean analyysi. Kokonaiselossaoloaika arvioitiin käyttämällä Kaplan-Meier-menetelmällä. Log-rank-testiä ja Coxin suhteellisten riskien mallia haettiin yhden ja usean analyysit riskitekijöiden hengissä, vastaavasti. Kaikki p-arvot ja 95%: n luottamusväli [CI] arvioitiin vuonna kaksisuuntaista tavalla. Erot katsottiin tilastollisesti merkittävä P 0,05. Aineisto analysoitiin SAS versiossa 9,3 (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA).

Tulokset

Yleiset tiedot

tunnistettu 50 potilasta (29 miestä ja 21 naaraita, mediaani-ikä 61 vuotta, alue: 20-79 v.) ja adenokarsinooma haiman pään joille tehtiin pankreatikoduodenektomia (n = 48) tai yhteensä haimanpoistoleikkausta (n = 2). Lisäksi ensisijainen kasvaimia, analysoimme yhteensä 157 imusolmukkeiden, 70 imusolmukkeet N1 (mukaan lukien 24 positiivista ja 46 negatiivista imusolmukkeet posterior ja anterior näkökohtia pään haima), 46 imusolmukkeet N2 ( mukaan lukien 11 positiivista ja 35 negatiivista imusolmukkeet lähialueiden ylempi suolilievevaltimo tai hepatoduodenal nivelside), ja 41 imusolmukkeet N3 (mukaan lukien 3 positiivista ja 38 negatiivista imusolmukkeet ympäröivällä alueella vatsa-aortan).

tiheys FOXP3

+ lymfosyyttien kasvaimen ja paratumoral haimakudoksesta

yhdenmukainen ennen raportteja, FOXP3

+ lymfosyyttien soluttautunut primäärikasvaimissa, ja havaittiin hajallaan interstitiaalinen alueiden kasvain ( Kuvio 1A B). Muutaman FOXP3

+ lymfosyytit havaittiin tunkeutuu paratumoral haimakudos (kuvio 1C 0,001, kuvio 1 E).

immunohistokemiallinen värjäys FOXP3

+ lymfosyyttien haimasyövän (A: pieni suurennus, × 100; B: korkea suurennus, × 400) ja paratumoral haimakudoksesta (C: pieni suurennus, × 100; D: korkea suurennus, × 400): Foxp3

+ lymfosyytit määriteltiin solujen ruskean värjäyksen ytimien mononukleaarisissa lymfosyyteissä. (E) Erot FOXP3

+ lymfosyyttien tiheys on haimasyöpä kudosten ja paratumoral haimakudoksesta. (P 0,01).

FOXP3

+ lymfosyyttien tiheys ei korreloinut iän, sukupuolen tai T vaiheessa (mukaan lukien kasvaimen koon ja paikallinen tunkeutumista) haimasyövän (taulukko 1). Tiheys FOXP3

+ lymfosyytit oli korkeampi kasvaimissa korkeamman histologinen arvosana (hyvin eriytetty: 1,3 ± 1,0 /HP, vs. kohtuullisesti erilaistunut: 4,3 ± 4,5 /HP vs. huonosti /erilaistumaton: 7,9 ± 7,8 /HP, p = 0,014). Tiheys FOXP3

+ lymfosyytit oli huomattavasti korkeampi haimasyöpä, jossa imusolmuke etäpesäke verrattuna ilman imusolmuke etäpesäke (6,7 ± 5,9 /HP vs. 2,3 ± 2,6 /HP, p = 0,002). Samoin oli suuntaus suurempi tiheys FOXP3

+ lymfosyyttien myöhäisvaiheen haimasyövän kuin Taudin alkuvaiheessa. (I, II: 2,7 ± 3,1 vs. III, IV: 5,5 ± 5,6, p = 0,094).

tiheys FOXP3

+ lymfosyyttejä tyhjennys imusolmukkeet

FOXP3

+ lymfosyyttien kertynyt Positiivisten imusolmukkeiden, ensisijaisesti noin metastaasipesäkkeiden, tiheyteen merkittävästi suurempi kuin havaittiin negatiivinen imusolmukkeet (66,2 ± 36,9 /HP vs. 48,1 ± 29,9 /HP, p = 0,003, Kuvio 2A-E). Merkitsevää eroa tiheyden FOXP3

+ lymfosyytit havaittiin eri imusolmukkeiden ryhmien positiivista (N1 vs. N2 vs. N3: 63,0 ± 2,7 /HP vs. 69,9 ± 37,0 /HP vs. 78,3 ± 75,2 /HP , p = 0,747, kuvio 2F) tai negatiivinen imusolmukkeiden (N1 vs. N2 vs. N3: 50,4 ± 32,5 /HP vs. 50,0 ± 30,3 /HP vs. 43,4 ± 26,4 /HP, p = 0,516, Kuvio 2G).

immunohistokemiallinen värjäys FOXP3

+ lymfosyyttien positiivinen imusolmuke (A: pieni suurennus, × 40, B, korkea suurennus, × 400) ja negatiivinen imusolmukkeesta (C: pieni suurennus, × 40; D: korkea suurennus, × 400), ja vertailun FOXP3

+ lymfosyyttien tiheydet positiiviset ja negatiiviset imusolmukkeiden (E) (p = 0,03), eri ryhmien Positiivisten imusolmukkeiden (F) (p = 0,75 ), ja eri ryhmien negatiivinen imusolmukkeiden (G) (p = 0,52).

FOXP3

+ lymfosyyttien tunkeutumisen haimasyövän kasvain on itsenäinen riskitekijä imusolmuke etäpesäke

Imusolmuke etäpesäke on tärkein prognostisia indikaattoreita kokoisen haimasyöpä. Mediaani tiheys FOXP3

+ lymfosyyttien (4 /HP) kussakin Kasvaimen katsottiin olevan cutoff taso ja analysoitiin verrattuna potilaiden ikä, sukupuoli, histologisia laatu ja T vaiheessa kasvain tunnistaa riskin tekijät imusolmuke etäpesäke haimasyövän. Yhden ja usean analyysit vahvistivat, että korkeat kasvaimensisäisenä tiheys FOXP3

+ lymfosyyttien on itsenäinen riskitekijä solmukohtien etäpesäkkeitä (taulukko 2).

Kasvaimensisäinen tiheys FOXP3

+ lymfosyyttien pyrki korreloivat ennuste seuraavien radikaalien resektion

Näistä 50 potilasta tutkimuksessamme joille tehtiin radikaali resektio, saimme selviämistila ja elinaika oli 47 potilasta kautta poliklinikalla tai puhelimitse seurannan. Mediaani seuranta-aika oli 21 kuukautta (4-87 kuukautta). Alkuanalyysin perusteella, sekä imusolmuke asema ja tiheys FOXP3

+ lymfosyyttien kasvainten korreloi ennustetta haiman syöpäpotilailla radikaali resektio (kuten on esitetty kuviossa 3 ja taulukossa 3). Monimuuttuja-analyysissä sisältää kaksi tekijää ehdotti, että FOXP3

+ lymfosyyttien tiheys kasvaimen lupaava itsenäisenä ennustetekijä, mutta tämä ei ollut tilastollisesti merkitsevä (p = 0,06).

Imusolmuke tila ( p = 0,03) (A) ja tiheys FOXP3

+ lymfosyyttien haimasyövän kudoksessa (p = 0,01) (B) korreloi merkitsevästi ennustetta haiman pään syövän jälkeen radikaali resektio.

keskustelu

tässä tutkimuksessa arvioimme jakelu FOXP3

+ otaksuttu Treg haimasyövän ensisijainen kasvaimia ja tyhjennys imusolmukkeet, ja määritetään sen korrelaatio kriittinen kliinis. Koska FOXP3 on laajimmin hyväksytty yksittäinen immunohistokemiallinen merkkiaine Treg ja on osoitettu olevan joitakin ennusteen arvioinnissa, olemme vahvistaneet FOXP3 kertyneet ytimet pieni, pyöreä mononukleaariset lymfosyytit, jotka olivat selvästi erillisiä kasvainsoluista [10] – [13] . Tärkeää on, tutkimuksemme osoitti uuden yhdistyksen välillä tiheyden FOXP3

+ lymfosyyttien haimasyövän ja imusolmuke etäpesäke. Lisäksi olemme tehneet uuden havainnon, että FOXP3 ilmaisu on suurempi sisältäviä imusolmukkeita haimasyövän etäpesäkkeiden kuin ne, jotka ovat negatiivisia syöpä.

Yhdenmukainen aikaisempien tutkimusten [10] – [13], huomasimme, että tiheys FOXP3

+ lymfosyyttien haimasyövän korreloi merkittävästi kanssa histologinen kasvain, riippumatta potilaan ikä, sukupuoli, kasvaimen koko tai paikallinen invaasio. Erot solujen fenotyyppiin, kemokiini ilme, aineenvaihdunta, oksidatiivisen tilan ja pH kasvain microenvironment eri histologisia laadut haimasyövän voi vaikuttaa FOXP3

+ lymfosyyttien tiheys kasvainkudoksissa; kuitenkin hienomekanismin ajo Treg tunkeutumisen ihmisen haiman syöpä ei ole vielä selvitetty.

Imusolmuke etäpesäke on selvästi tärkeä tapahtuma kiinteiden kasvainten synnyssä, erityisesti haimasyövän [15] – [18]. Koska imusolmukkeet ovat antigeenin esittelyä ja immuunivasteen aloittamista, ne voivat toimia aikaisin esteitä, jotka estävät kasvainsolujen pääsyn verenkiertoon [19]. Paikallinen microenvironment imusolmukkeiden on elintärkeä asettamisessa aikana myöhempien immuunivasteita. Kuitenkin ennen tutkimukset eivät ole osoittaneet suhde FOXP3 soluttautuminen ja imusolmukestatuksesta. Hiraoka et ai. [10] oli aiemmin tutkittu sekä ensimmäisen haimasyövän kasvaimia ja imusolmukkeiden kuitenkin ristiriita meidän havainto ja heidän saattaa johtua meidän luetella koko FOXP3

+ solujen sijaan suhde FOXP3

+ CD4

+ soluja. Oletimme, että absoluuttinen määrä FOXP3

+ otaksuttu Treg voi itse asiassa olla merkitystä arvioitaessa vaikutuksia kehittyvän kasvaimen vastaisen immuunivasteen.

Tässä tutkimuksessa kartoitettiin 157 imusolmukkeet 50 potilasta, ja sen on todettu merkittävästi suurempi tiheys FOXP3

+ lymfosyyttejä Positiivisten imusolmukkeiden verrattuna kielteisiä. Vaikka tasot FOXP3

+ lymfosyyttien imusolmukkeissa korreloi läsnäolon tai puuttumisen etäpesäkkeitä, tämä ei itsenäisesti vaikuttavat ajettu imusolmukkeiden ensisijaisesta haimasyöpä. Deng et ai. [20] löydetty samanlaisia ​​tuloksia kolorektaalisyövässä, mutta tämä ei ole aiemmin esitetty haimasyöpä. On lähinnä kaksi tapaa selittää havaintomme. Ensimmäinen immuunisieto välittämä FOXP3

+ lymfosyytit voidaan edistää eloonjäämistä ja kasvainsolujen proliferaation, joka tyhjentää imusolmukkeisiin ja lopulta muodostavat pesäkkeitä, jotka ovat nähtävissä valomikroskoopilla. Vaihtoehtoisesti läsnäolo kasvainsolujen imusolmukkeiden voi aiheuttaa FOXP3

+ lymfosyyttien kertyminen maahanmuuton avulla, laajennus tai perifeerinen konversio. Kuten kuvioissa 2A ja 2B, FOXP3

+ lymfosyyttien kertyy pääasiallisesti kehän metastaasipesäkkeiden. FOXP3

+ lymfosyyttien kertyminen imusolmukkeisiin voi edistää tuumorisolun tunkeutumisen verenkiertoon ja nopeuttaa etenemistä haimasyövän estämällä efektori T-solujen toimintaa.

ennusteen arvioinnissa mitata FOXP3

+ T-solujen eri ruoansulatuskanavan syöpien edelleen kiistanalainen. Hiljattain julkaistu meta-analyysi, on osoitettu, että kasvainta infiltroivien FOXP3

+ T-solut korreloivat huonon ennusteen maksasolusyövän ja mahasyöpä, mutta hyvään ennusteeseen kolorektaalisyövässä [21]. Asettamisessa haimasyövän, osoitettiin, että kasvain infiltroituneen FOXP3

+ solu toimii negatiivisena ennustetekijä [10], [12], [22]. Tutkimuksessamme yhden muuttujan analyysi osoitti, että imusolmuke tila ja paikallinen kasvain FOXP3

+ lymfosyyttien tiheys oli ennustetekijöiksi haimasyövän potilaille jälkeen radikaali resektio. Mitään eroa ennusteeseen ositettu patologinen vaiheessa nähtiin 50 haimasyövän potilaille. Sen jälkeen factoring imusolmuke tila ja paikallinen kasvain tiheys FOXP3

+ lymfosyyttien, monimuuttuja-analyysi osoitti jälkimmäisen olevan ainoastaan ​​rajatapaus tilastollista merkittävyyttä. Tässä potilas asettaa, paikallinen kasvain FOXP3

+ lymfosyytit tiheys näytti olevan suurempi ennusteen arvioinnissa kuin edes imusolmukestatuksesta.

Yhteenvetona olemme vahvistaneet, että kertyminen FOXP3

+ lymfosyyttien ensisijainen kasvainkudoksen korreloi imusolmuke etäpesäke haimasyövän. Mikä tärkeintä, olemme myös osoittaneet, että läsnäolo FOXP3

+ lymfosyyttejä imusolmukkeisiin liittyy solmukohtien etäpesäkkeitä ja että metastaattinen imusolmukkeiden sisältää huomattavasti enemmän FOXP3

+ soluja kuin tehdä negatiivinen imusolmukkeet.