Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

aiemmin osoitettu, että ydin- ja sytoplasmisen kerääntymisen solunsisäisen domeenin (EP ICD) epiteelisolujen adheesiomolekyyli (EpCAM) mukana on vastavuoroisesti alentaminen sen ekstrasellulaarisen domeenin (EpEx), esiintyy aggressiivinen kilpirauhassyövän. Tutkimuksen tavoitteena oli selvittää samanlaisia ​​kertymistä Ep-ICD on yleinen tapahtuma muissa epiteelisyövissä.

Menetelmät ja tulokset

Ten epiteelisyövissä olivat immunohistokemiallisesti analysoitiin Ep-ICD ja EpEx domain erityisiä vasta-aineita. Sijainti solussa on EpEx ja Ep-ICD ihmisen paksusuolen adenokarsinoomasolulinjan CX-1 havaittiin käyttäen immunofluoresenssilla. Ydin- ja sytoplasminen Ep-ICD ekspressio lisääntyi rinta- (31 38 kudoksia, 82%), eturauhasen (40 49 kudoksia, 82%), pään ja kaulan (37 57 kudoksia, 65%) ja ruokatorven ( 17 46 kudosten, 37%) verrattuna niiden vastaaviin normaaleihin kudoksiin, jotka osoittivat membraanilokalisaatiota proteiinin. Tärkeää on, Ep-ICD ei havaittu ytimet epiteelisolujen useimmissa normaaleissa kudoksissa. Ydinvoiman ja sytoplasman Ep-ICD kertymistä tapahtui myös kuuden muun epiteelin syöpätyyppeihin analysoitu – keuhko-, paksusuoli-, maksa, virtsarakko, haima- ja munasarjasyövän. Kaventumiseen kalvo EpEx ilmentyminen havaittiin osa kaikista syöpätyyppeihin. Vastaanotin toimii ominaiskäyrä analyysi paljasti ydin- Ep-ICD erottaa rintasyöpiä 82% herkkyys ja 100% tarkkuus ja eturauhasen syöpiä 82% herkkyys ja 78% tarkkuus. Samanlaisia ​​havaintoja havaittiin sytoplasmisen kerääntymisen Ep-ICD näissä syövissä. Tarjoamme kliinistä näyttöä lisääntyneestä ydin- ja sytoplasman Ep-ICD keskittymisen ja vähentäminen kalvo EpEx näissä syövissä.

Johtopäätökset

Lisääntynyt ydin- ja sytoplasman Ep-ICD havaittiin kaikissa epiteelisyövissä analysoitu ja erottaa ne normaaleista kudoksista korkean herkkyys, spesifisyys, ja AUC. Kehittäminen vankka suurikapasiteettisten määritys Ep-ICD helpottaa määrittämistä sen diagnostisia, prognostisia ja terapeuttinen merkitystä epiteelisyövissä.

Citation: Ralhan R, hän HC-H, So AK-C, Tripathi SC , Kumar M, Hasan MR, et ai. (2010) Nuclear ja Sytoplasmiset Kertyminen Ep-ICD usein todetaan ihmisen epiteelisyövissä. PLoS ONE 5 (11): e14130. doi: 10,1371 /journal.pone.0014130

Editor: Marc Vooijs, University Medical Center Maastricht, Alankomaat

vastaanotettu: 20 kesäkuu 2010; Hyväksytty: 24 lokakuu 2010; Julkaistu: 30 marraskuu 2010

Copyright: © 2010 Ralhan et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ sai taloudellista tukea Mount Sinai Foundation of Toronto, Da Vinci Gala Fundraiser, Alex ja Simona Shnaider professuurin kilpirauhassyöpä, Mount Sinai Hospital Sisätautien Research Fund, Alex ja Simona Shnaider laboratoriossa Molecular Oncology, ja Temmy Latner Dynacare Family Foundation. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

epiteelisolujen adheesiomolekyyli (EpCAM) on 40 kDa läpäisevä glykoproteiini, joka palvelee tärkeä rooli soluadheesion, solujen lisääntymistä, erilaistumista, muuttoliike, solusyklin säätelyssä ja on sekaantunut syövän ja kantasolujen signalointi [1]. EpCAM on yksi laajimmin tutkittu proteiineja ihmisen syövissä, usein yli-ilmentynyt ihmisen maligniteettien, paikallinen solukalvon kasvainsolujen ja vaikkakin alemmilla tasoilla normaalissa epiteeli [2], [3], [4], [5 ], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17]. Kaikki nämä tutkimukset käytetään vasta-aineita, jotka kohdistuvat ekstrasellulaarisen domeenin EpCAM (EpEx) [13]. Nämä lukuisia raportteja solupinnalla ilmentymisen EpCAM ihmisen syövissä ovat ehdottaneet, että se voisi olla ihanteellinen ehdokas hakemuksen epiteelin syöpämarkkerina ja terapeuttisena kohteena [18], [19], [20], [21]. Paradoksaalisesti Useimmissa kliinisissä tutkimuksissa käyttäen hiiren monoklonaalisia vasta-aineita eli edrecolomab kolorektaalisyövässä tai humanisoitu vasta-aine, adecatumumab, rintasyövän ovat osoittaneet rajoitettu tehoa [14], [22]. Ymmärtäminen näistä rajoituksista on haaste onkologit ja on suuri merkitys tulevan kehityksen kannalta tehokkaampaa anti-EpCAM strategioita. Tässä yhteydessä Gires ja Baeuerle [23] keskusteltiin tarpeesta mitata EpCAM ekspressiotasot kasvainsoluissa ja niiden vaikutus tulokseen kliinisen tutkimuksen. Kuitenkin mikään edellisistä tutkimuksista ovat analysoineet EpCAM ilmentyminen kasvainkudoksessa takautuvasti tai jälkikäteen. Onko äskettäin raportoinut säännelty intramembrane proteolyysiä (RIP) rustokadon EpCAM kasvain solun pinnalla saattaa olla yksi syy rajoitettu tehoa EpCAM perustuvien syövän hoitomuotoja vielä selvitettävä [24]. Pilkkominen on EpCAM ektodomeenia, EpEx, jonka proteaasi tuumorinekroositekijä α konvertoivan entsyymin (TACE), ja sen leviämistä on osoitettu vapauttaa sen solunsisäisen domeenin (Ep-ICD), joka sitten siirtyy tumaan, jolloin aktivointi onkogeenisten signaloinnin [ ,,,0],24]. Yhdistys Ep-ICD FHL2 ja Wnt polku komponenttien β-kateniinin ja Lef-1 muodostaa ydinvoimalassa, joka sitoutuu DNA Lef-1 konsensus sivustoja ja indusoi geenin transkriptio, mikä johtaa lisääntyneeseen soluproliferaatioon [24]. Kliininen merkitys Ep-ICD ihmisen syövissä on määritettävä ottaen huomioon moninaiset roolit EpCAM kuin onkogeenisessä signaalinmuuntajana, adheesiomolekyyli ja syövän kantasolujen merkki [24], [25], [26], [27 ].

Nuclear lokalisoinnin Ep-ICD raportoitiin ensimmäisen kerran tutkimuksen 26 tapauksessa ihmisen paksusuolen syöpä, mutta ei normaalissa paksusuolen epiteeli [24]. Myöhemmin kerroimme ydin- ja sytoplasmisen kerääntymisen Ep-ICD eri alatyyppiä kilpirauhassyövän joka liittyi vastavuoroisesti väheneminen kalvomainen EpEx, ja myös havaittu korrelaatio ydin- Ep-ICD kertymistä kasvaimen aggressiivisuus ja huono sairauden ennusteeseen [28] . Laaja heterogeenisyys kiinteissä kasvaimissa optio tutkimuksen selvittääkseen ydin- ja sytoplasman Ep-ICD ilmentyminen voi esiintyä myös muissa ihmisen syövissä. Esillä olevassa tutkimuksessa, solunsisäisen compartmental kertymistä Ep-ICD on käsitelty erilaisia ​​epiteelisyöpien, eli rinta-, eturauhas-, pään ja kaulan, ruokatorven, munasarjan, haiman, paksusuolen ja peräsuolen, keuhko-, virtsarakko, maksa karsinoomat immunohistokemialla (IHC) (käyttäen spesifistä vasta-ainetta on suunnattu Ep-ICD domeenin EpCAM). Ydin- ja sytoplasminen Ep-ICD on myös kvantitatiivisesti CX-1 koolonsyöpäsoluihin käyttäen immunofluoresenssilla. Lukuun ottamatta aiemman raportin paksusuolen syövän ja tutkimuksemme kilpirauhassyövän hoitoon [24], [28], uutuutta Tämän raportin on osoitus levinneisyys kasvoi ydin- ja sytoplasmisen kerääntymisen Ep-ICD yhdessä muuttuja kalvo EpEx ilmentyminen laaja kirjo epiteelisyövissä.

Methods

Ethics lausunto

Tämä tutkimus suoritettiin periaatteiden mukaisesti ilmaistu Helsingin julistus. Tutkimuksen hyväksyi Mount Sinai Hospital Research Ethics Board, Toronto, Kanada. Arkistoitu parafiini kudos lohkojen pään ja kaulan alueen syöpä tutkimus hyväksymä Human eettisen komitean All India Institute of Medical Sciences, New Delhi, Intia, jossa etukäteen suostumuksensa potilaista, käytettiin tässä tutkimuksessa.

Potilaat ja kudosnäytteitä

IHC analyysiä, arkistoidaan kudosblokeista pään ja kaulan okasolusyöpää (HNSCCs) ja normaaleissa kudoksissa sekä ruokatorven okasolusyöpää (ESCCs) haettiin kasvain pankki, tarkistaa patologi ja käyttää leikkaamiseen kudosleikkeitä immunovärjäys Ep-ICD ja EpEx vasta-aineiden, kuten alla on kuvattu. Kliiniset ja patologisten tallennetut tiedot sisältyvät kliininen kasvaimen vaiheessa sivusto vauriot, histopatologiset erilaistuminen, iän ja sukupuolen mukaan ennalta suunniteltu Performa kuten on kuvannut meitä aiemmin [29]. Tissue-mikrosirut (TMA) rintasyövän ja viereisen normaalin rintakudoksen (IMH-371), eturauhassyöpä ja viereisen normaalissa eturauhasessa (IMH-303), keuhkosyöpä (IMT-305), paksusuolen ja peräsuolen syöpä (IMH-306) yhteinen epiteelisyöpien, joka käsittää maksan, virtsarakon, munasarjat, haima, rinta ja eturauhanen (IMH-327) oli hankittu IMGENEX Corp (San Diego, CA). Kaksikymmentäyksi kudosblokeista hyvänlaatuisen eturauhasen liikakasvun (BPH) haettiin kudospankille Mount Sinai Hospital, tarkastelleet patologi ja käytetään leikkaamiseen kudosten osiot immunovärjäämällä Ep-ICD ja EpEx vasta-aineet.

Antibodies and Cell Line

Anti-ihmis-Ep-ICD kanin monoklonaalista vasta-ainetta saatiin Epitomics Inc. (Burlingame, CA). Anti-ihmis-EpEx hiiren monoklonaalinen vasta-aine (MOC-31) saatiin ABD Serotec (Raleigh, NC). Α-Ep-ICD-vasta 1144 tunnistaa sytoplasmadomeenissa ihmisen EpCAM ja sitä on käytetty myös äskettäisessä tutkimuksessa Ep-ICD kilpirauhassyövän hoitoon [28]. MOC-31 tunnistaa solunulkoisen domeenin EpCAM. Molemmat vasta-aineita on käytetty äskettäisessä tutkimuksessa kilpirauhassyöpä [28].

Ihmisen paksusuolen adenokarsinooman solulinjaa CX-1 viljeltiin RPMI-1640-väliaineessa, joka sisälsi 100 ug /ml streptomysiiniä ja 100 U /ml penisilliiniä , 10% naudan sikiön seerumia (FBS) ja 1% ei-välttämättömiä aminohappoja. STR-profiili solulinjan havaittiin olevan mukaisesti tunnetun profiilia CX-1 tietokantoihin Saksan kerääminen mikro-organismien ja Cell Cultures (DSMZ, Braunschweig, Saksa).

kliinis ominaisuudet potilaat

Viisikymmentäseitsemän HNSCC potilasta, joiden ikä 29-75 vuotta otettiin tässä tutkimuksessa. Heidän diagnoosit perustuivat kliiniseen tutkimukseen ja histopatologista analyysia kudosnäytteitä. Kasvaimet olivat histologisesti arvostellaan sekä eriytetty okasolusyöpä (WDSCC), kohtuullisesti erilaistunut levyepiteelisyöpä (MDSCC) tai huonosti eriytetty levyepiteelisyöpä (PDSCC). Kaksikymmentä kudokset otettu kaukainen sivustolla HNSCCs (histologisesti vahvistettu normaalin epiteelin kutsutaan tässä pään ja kaulan normaaleissa kudoksissa) arvioitiin myös Ep-ICD ja EpEx ilme.

Neljäkymmentäkuusi ESCC potilasta otettiin Tämä tutkimus. Heidän diagnoosit perustuivat kliiniseen tutkimukseen ja histopatologista analyysia kudosnäytteitä. Kasvaimet olivat histologisesti arvostellaan samoin, kohtalaisesti tai huonosti eriytetty SCC. Kaksikymmentä kudokset otettu kaukainen sivustolla ESCCs (histologisesti vahvistettu normaalin epiteelin kutsutaan tässä ruokatorven normaaleissa kudoksissa) arvioitiin myös Ep-ICD-proteiinin ilmentymisen. Samoin neljäkymmentä kudokset otettu kaukainen sivustolla ESCCs (histologisesti vahvistettu normaalin epiteelin kutsutaan tässä ruokatorven normaaleissa kudoksissa) arvioitiin EpEx ilme.

TMA rintasyövän ja viereisen normaalin rintakudoksen, eturauhassyöpä ja viereisen normaalin eturauhasen kudosta, keuhkosyöpä, paksusuolen ja peräsuolen syöpä, yhteinen epiteelisyöpien, joka käsittää maksan, virtsarakon, munasarjat, haima, rinta ja eturauhasen tutkittiin. EP-ICD määrä kudokset analysoitiin olivat 38 rintasyöpiä ja 25 vastaavat normaalit kudokset, 49 eturauhasen syöpien ja 9 vastaavat normaalit kudokset ja 21 hyvänlaatuinen eturauhasen hyperplasia, 57 HNSCCs ja 20 vastaavat normaalit kudokset, 46 ESCCs ja 20 vastaavat normaaleissa kudoksissa, 59 kukin keuhko- ja paksusuolen syövät, 10 kukin rakko, munasarja- ja haiman syöpiä, ja 9 maksasyöpien. Varten EpEx määrä kudosten, jotka olivat saatavilla immunohistokemiallista analyysia varten sisältyvät 40 rintasyöpiä ja 29 vastaavat normaalit kudokset, 49 eturauhasen syöpien ja 9 vastaavat normaalit kudokset ja 21 hyvänlaatuinen eturauhasen hyperplasia, 39 HNSCCs ja 20 vastaavat normaalit kudokset, 47 ESCCs ja 40 vastaavat normaaleissa kudoksissa, 59 tapauksessa jokainen keuhko- ja paksusuolen syöpiin, ja 10 tapausta kukin rakko, munasarja-, ja maksan syövät.

immunohistokemiallinen analyysi Ep-ICD ilmentymisen epiteelisyövissä

Serial parafiini- upotetut leikkeet (5 um paksuus) HNSCCs, ESCCs ja niiden normaaleissa kudoksissa käytettiin Ep-ICD ja EpEx immunovärjäys kuten olemme kuvanneet äskettäin [28]. TMA dioja ja yksittäisten kudosleikkeet de-paraffinized paistamalla 62 ° C: ssa 1 tunnin ajan pystysuunnassa ja niihin lisätään ksyleeniä ja arvostellaan alkoholin sarjassa. Sen jälkeen, antigeeni haku optimoitiin ja suoritettiin 0,01 M sitraattipuskurissa, pH 6,0 3 minuutin ajan 115 ° C: ssa, käyttäen TTmega uunissa (Milestone Inc. Shelton, CT). Endogeeninen peroksidaasiaktiivisuus estettiin inkuboimalla kohdat metanolissa, joka sisältää 0,3% vetyperoksidia 20 minuuttia. Sen jälkeen, estää ei-spesifinen sitoutuminen, joilla on normaali hevosen tai vuohen seerumia, leikkeitä inkuboitiin kanssa α- Ep-ICD kanin monoklonaalista vasta-ainetta 1144 (laimennus 1:200) 30 minuuttia ja biotinyloitu vuohen anti-kaniini-vasta-ainetta 30 minuutin ajan tai inkuboidaan jossa MOC-31 (laimennus 1:200) 30 minuutin vastaavaan biotinyloidun sekundaarisen vasta-aineen (hevonen anti-hiiri- tai vuohen anti-kani) (Vector Laboratories, Burlington, Ontario, Kanada) 30 minuutin ajan. Leikkeet lopuksi inkuboitiin Vectastain Elite ABC-reagenssia (Vector Laboratories) ja diaminobenzedine käytettiin kromogeenina.

arviointi immunohistokemiallisella värjäyksellä

TMA kuvat hankittiin käyttämällä Visiopharm Integrator System (Visiopharm , Horsholm, Tanska). Ep-ICD ja EpEx immunopositiivista värjäytyminen arvioitiin viidellä hankitun kuvia kudosleikkeiden ja keskimääräinen näistä viidestä tulokset laskettiin. Osiot pisteytettiin positiivisiksi jos epiteelisolut osoittivat immunopositivity solukalvon, soluliman ja /tai tumassa, kun havaitaan kaksi arvioijaa, jotka oli sokkoutettu kliininen histopatologian ja diagnoosi. Jaksoissa pisteytettiin perusteella prosentuaalinen positiivisuus seuraavasti: 0, 10% soluista; 1, 10-30% solut; 2, 30-50% solut; 3, 50-70% solut; ja 4, 70% soluista osoitti immunologista kuten aiemmin on kuvattu [28]. Leikkeitä myös saivat puolittain määrällisesti perusteella intensiteetti seuraavasti: 0, ei mitään; 1, lievä; 2, kohtalainen; ja 3, voimakas. Lopuksi, yhteensä pisteet (välillä 0 7) saatiin lisäämällä tulokset prosenttiosuuden positiivisuus ja voimakkuus kunkin syövän ja normaalin kudoksen osassa. Immuunihistokemialliset tiedot tehtiin tilastollinen analyysi aikaisemmin kuvatulla [29].

Tilastollinen

IHC tiedot tehtiin tilastollinen analyysi SPSS 17.0 ohjelmistolla (SPSS, Chicago, IL) ja Graphpad Prism 5 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Sirontakaavioissa käytettiin määrittämään jakeluun koko pisteet kalvo, ydin- ja sytoplasman Ep-ICD ilmentyminen normaaleissa ja syöpäkudokset. Vastaanotin toimii (ROC) käyrä analyysit suoritettiin laskea herkkyys, spesifisyys ja käyrän alla oleva ala (AUC) arvot kussakin syöpätyypin ydin- ja sytoplasman Ep-ICD. Perustuen optimaalinen herkkyys ja tarkkuus, joka on IHC pisteet cut-off-arvo ≥4 määriteltiin immunopositiivista yhdenmukaisesti kaikkien syöpätyyppien analysoitiin tilastollisella tarkastelulla.

Immunofluoresenssianalyysi Ep-ICD ja EpEx lokalisointiin CX -1 koolonisyöpäsolulinja

CX-1 paksusuolen syövän soluja kasvatettiin lasilevyille jopa 60% konfluenssiin ja inkuboitiin sitten joko α-Ep-ICD kanin monoklonaalista vasta-ainetta 1144 (1:100 laimennus) tai hiiren monoklonaalinen vasta-aine MOC-31 (1:100). EP-ICD, sekundaarinen vasta-aine käytetään oli tetrametyyli rodamiini-isotiosyanaatti (TRITC) -leimattua vuohen anti-kani-vasta-ainetta (Sigma-Aldrich, 1:200 laimennus). Varten EpEx, sekundaarinen vasta-aine käytetään oli fluoreseiini-isotiosyanaatti (FITC) -leimattua vuohen anti-hiiri-vasta-ainetta (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, 1:200 laimennus). Dioja näytettiin käyttäen Olympus Upright fluoresenssimikroskooppia (BX61) ja kuvat analysoitiin käyttämällä Volocity ohjelmistoa (PerkinElmer, Waltham, MA).

Tulokset

immunohistokemiallinen analyysi Ep-ICD ilmentymistä ihmisen epiteelisolujen syövät

tunnetut kliinisten parametrien, histopatologia, ja Ep-ICD IHC tulokset kullekin syöpätyypin annetaan täydentävä taulukoissa S1, S2, S3, S4, S5, S6, S7, S8, S9, S10. Niistä syöpätyyppien että verrattiin normaalien kudosten (taulukko 1), rintasyöpiä osoitti 82% ydin- Ep-ICD positiivisuus (31 38 kudokset) ja 84%: sytoplasminen Ep-ICD positiivisuus (32 38 kudosten). Perustuu IHC cut-off pisteet 4, yksikään 25 normaalin rintakudosten analysoitava katsottiin positiivisiksi ydin- Ep-ICD; 56% (14 25 kudosten) ei näkynyt havaittavissa tumavärjäystä rintojen lobulaarinen soluissa tai ductal soluja, kun taas loput 11 tapausta oli pieni IHC tulokset. Eturauhassyövät osoitti 82% ydin- positiivisuus (40 49 kudokset) ja 82% sytoplasmisen positiivisuuden (40 49 kudosten). Nuclear Ep-ICD oli positiivinen 2 9 normaalin eturauhasen kudoksia, ja sytoplasminen positiivisuus havaittiin 1 9 kudoksiin. Niistä 21 BPH kudokset analysoidaan, sytoplasminen positiivisuus havaittiin 1 21 kudoksia; yksikään kudokset ydin- Ep-ICD positiivinen perustuu sulku pisteet 4. HNSCCs, Ep-ICD ydinaseiden positiivisuus oli 65% (37 57 kudokset) ja sytoplasminen positiivisuus oli 74% (42 57 kudosten). ESCC ydinaseiden positiivisuus oli 37% (17 46 kudokset) ja sytoplasminen positiivisuus oli 70% (32 37 kudosten). Ydin- ja sytoplasminen Ep-ICD oli kukin havaittiin olevan positiivinen vain 1 20 normaaleista kudoksista pään ja kaulan alueen syöpä. Sillä ESCC, ydin- positiivisuus havaittiin 2 20 normaaleista kudoksista ja sytoplasminen positiivisuus havaittiin 6 20 normaaleissa kudoksissa. Kaikki jäljellä olevat epiteelisyöpien näytetään ydin- ja sytoplasmisen kerääntymisen Ep-ICD (taulukko 1). Erityisesti vaikka käyttö sulku on ≥4 määrittää positiivisuutta vähentänyt ydin- ja sytoplasman positiivisuuden haimasyöpä, tarkastelu pisteytyksen osoitti, että sulku 3,5 olisi tunnistettu 7 10 tapausta ydinaseiden Ep-ICD kertymistä ja 5 10 tapausta sytoplasman Ep-ICD kertymistä (katso täydentävä taulukko S8).

edustaja mikrovalokuvat kuvassa 1 osoittavat Ep-ICD immunovärjääminen normaaleissa ja syövän kudoksissa. Paneeli A esittää hallitseva membraanilokalisaatiota Ep-ICD eikä tumavärjäystä normaalissa rintakudoksessa (I), kun taas syöpäkudoksessa osoittaa ydin- ja sytoplasminen Ep-ICD kertyminen (II). Paneeli B (Ia) kuvaa alhainen kalvon Ep-ICD epiteelisoluissa ja tyvisolujen vähäisiä tumavärjäystä normaalissa eturauhasessa ja eturauhasen hyvänlaatuisen liikakasvun (Ib). Eturauhasen syöpä kudos esittää vahvaa soluliman ja lisääntynyt tumavärjäystä (paneeli B, II). Endoteelisoluissa, vahva Ep-ICD värjäytyminen havaittiin yhdenmukaisesti. Adiposyyttien, värjäys vaihteli poissa lieväksi joissakin soluissa. Lymfosyytit värjätty voimakkaasti tuumorikudoksissa, kun taas yksikään havaittiin normaaleissa kudoksissa. Sileän lihaksen värjäytymistä ei ollut tai heikko kaikissa tapauksissa. Havaittavaa Ep-ICD värjäytyminen havaittiin normaalin ruokatorven kudosta (paneeli C, I), kun taas ESCC osoitti intensiivistä ydin- ja sytoplasmista immunovärjäystä (paneeli C, II). Pään ja kaulan normaali limakalvo osoitti hienoisia kalvo Ep-ICD (paneeli D, I), kun taas voimakas ydin- ja sytoplasman immunovärjäys havaittiin HNSCC (paneeli D, II).

Edustaja mikrovalokuvat kuvaavat Ep-ICD immunovärjäyksellä normaaleissa ja syövän kudoksissa. Paneeli A esittää hallitseva membraanilokalisaatiota Ep-ICD eikä tumavärjäystä normaalissa rintakudoksessa (I), kun taas syöpäkudoksessa osoittaa ydin- ja sytoplasminen Ep-ICD kertyminen (II). Paneeli B esittää alhainen kalvon Ep-ICD epiteelisoluissa ja tyvisolujen osoittavat joitakin tumavärjäystä normaalissa eturauhaskudoksessa (Ia) ja eturauhasen hyvänlaatuisen liikakasvun (B, Ib), kun taas syöpäkudoksessa osoittaa voimakas soluliman ja ydin- värjäytymistä (II). Paneeli C osoittaa havaittavaa Ep-ICD värjäytyminen normaalissa ruokatorven kudosta (I), kun taas ESCC esittää vahvaa ydin- ja sytoplasmista immunovärjäystä (II). Paneeli D kuvaa pään ja kaulan normaali limakalvo osoittavat heikkoja kalvo Ep-ICD (I), kun taas HNSCC esittää vahvaa ydin- ja sytoplasman immunovärjäys (II). Alkuperäinen suurennos x 400.

Lisääntynyt ydin- ja sytoplasman immunoreaktiivisuus ja vähentää tai puuttuminen kalvon värjäytymistä Ep-ICD havaittiin syövät virtsarakon (kuvio 2, paneeli A), keuhkojen (B), maksassa (C), munasarjojen (D), paksusuolen (E), ja haiman (F). Varsinkin kalvo Ep-ICD värjäytyminen havaittiin joissakin tapauksissa kunkin epiteelin syövän analysoitu. Edustaja mikrovalokuvia eturauhassyövän ja paksusuolen syövän kuvaa heterogeeninen Ep-ICD värjäytyminen on esitetty kuviossa 3 A, B. Jotkut alueet kudosleikkeestä osoitti hallitseva kalvo ja heikko sytoplasminen mutta ei tumaanohjaussignaali Ep-ICD (kuvio 3A, B – vasen neliö), kun taas muilla saman kudoksen osassa osoitti ydin- ja sytoplasmisen kerääntymisen Ep-ICD kanssa ilman kalvo Ep-ICD ilmaisu (kuvio 3A, B – oikea neliö). Negatiivinen ja positiivinen kontrolli mikrovalokuvia on esitetty kuviossa 4.

Lisääntynyt ydin- ja sytoplasman immunoreaktiivisuus ja vähentää tai puuttuminen kalvon värjäytymistä Ep-ICD havaittiin syövät virtsarakon (paneeli A), keuhkojen (paneeli B ), maksa (paneeli C), munasarjojen (paneeli D), paksusuoli (paneeli E), ja haiman (paneeli F). Alkuperäinen suurennus × 400.

Kalvo, soluliman ja ydinvoiman Ep-ICD ilmentyminen eturauhassyövässä (A) ja paksusuolen syöpä (B). Jotkut alueet kudoksen osassa näyttää hallitseva kalvo ja heikko sytoplasminen mutta ei ydinvoiman lokalisoinnin Ep-ICD (A, B – vasen neliö), kun taas muilla saman kudoksen osassa näyttää ydin- ja sytoplasmisen kerääntymisen Ep-ICD kanssa ilman membranous Ep-ICD lauseke (A, B – oikea neliö). Alkuperäinen suurennus × 400.

Negatiiviset ja positiiviset kontrolli mikrovalokuvia on esitetty. Ep-ICD negatiivisten kontrollien HNSCC (A), eturauhasen syöpä (B), paksusuolen syöpä (C), rintasyöpä (D), ESCC (E), ja normaalin ruokatorven (F); paneelit G ja H ovat positiivisia kontrolleja varten Ep-ICD värjäystä. Alkuperäinen suurennus × 400.

pistekaavion Analysis

sirontakuvaajiin Kuviossa 5A ja 5B jakelua ydin- ja sytoplasman Ep-ICD immunovärjäys tulokset kaikissa epiteelin syövän tyypit analysoitu . Nuclear Ep-ICD havaittiin 39 57 HNSCC kudosten ja 18 46 ESCC kudoksiin. Kolmekymmentä seitsemän näistä 39 HNSCC tutkituissa kudoksissa ja 17 18 ESCC kudosten osoitti IHC pisteet ≥4. Sytoplasmisen Ep-ICD värjäytymistä havaittiin 42 57 (74%) HNSCC tutkituissa kudoksissa ja 32 46 (70%) ESCC kudoksiin. Rintasyöpä, eturauhassyöpä, ja positiivisesti-värjäys HNSCCs ja ESCCs kaikki näytteillä merkittävä nousu sekä ydin- ja sytoplasman Ep-ICD verrattuna normaaleihin kudoksiin ja eturauhasen hyvänlaatuinen hyperplastisten kudoksia analysoitiin. Lung, paksusuoli, maksa, virtsarakko, munasarja-, ja haimasyöpä tyypit jokaisella osoitti näkyvästi ilmaus ydin- ja sytoplasman Ep-ICD. Hajonta tontteja Kuvassa 5C jakautuminen kalvon Ep-ICD tulokset kaikissa epiteelin syöpätyyppeihin analysoitu.

sirontakaavioissa osoittaa jakautuminen koko Immunovärjäyksen tulokset määräytyy IHC kudosleikkeiden sekä rinta- (n = 38), eturauhasen (n = 49), keuhko (n = 59), munasarja (n = 10), paksusuolen (n = 59), virtsarakon (n = 10), maksassa (n = 9), positiivisesti värjäys HNSCCs (n = 39) ja ESCCs (n = 19), ja normaalin rintakudoksen (n = 25), eturauhasen (n = 9) ja BPH (n = 21), normaali ruokatorven (n = 20), ja pään ja kaulan (n = 20) kudoksiin. Pystyakseli saadaan vain IHC pisteet kuvatulla tavalla Methods. Sulku on ≥4 määrittämiseen käytettiin positiivisuutta. N, normaali; Ca, syöpä. A. Lisääntynyt tumakertymään Ep-ICD havaittiin useimmissa epiteelisyöpien analysoitiin. B. Lisääntynyt sytoplasminen kertymistä Ep-ICD havaittiin lähes kaikissa epiteelisyövissä analysoitiin. C. Kalvon lokalisaatio Ep-ICD vaihteli eri syövän ja normaalin kudoksen tyyppejä tutkittiin.

immunohistokemiallinen analyysi EpEx ilmentymisen ihmisen epiteelisyövissä

Samankaltaisia ​​IHC analyysi EpEx ilmaisun näiden ihmisen epiteelisyöpien suoritettiin myös käyttäen MOC31, spesifistä vasta-ainetta vastaan, ekstrasellulaarisen domeenin EpCAM (EpEx) kaikissa kymmenessä epiteelin syövät (kuvio 6 ja 7). Edustavia mikrovalokuvia kuviossa 6, paneeli näytän alhainen kalvon EpEx ilmentymisen normaalissa rinta- (A) ja eturauhasen (B, Ia), BPH (B, Ib), ja normaali ruokatorvi (C) sekä pään ja kaulan (D) kudoksiin . Vastaava syöpä kudoksiin kuvaa tehostettuun EpEx kalvoon on esitetty kuvassa 6, paneeli II (A rinta, B-eturauhasen, C- ruokatorven sekä D- pään ja kaulan). Sen sijaan monet syövän kudosten kunkin syövän tyypistä osoitti Koska kalvo EpEx; edustava mikrovalokuvia on esitetty paneelissa III (A-D). Kuvio 7, paneeli I esitetään voimakas kalvo EpEx paksusuolen syöpä (A), maksa- (B), virtsarakon (C), keuhkojen (D), munasarjojen (E) ja haiman (F) syöpä. Kuvio 7 paneeli II (A-F) osoittaa pienennetään tai puuttuminen kalvon EpEx alaryhmässä kutakin näistä epiteelisyöpien. Positiiviset ja negatiiviset kontrollit on esitetty Täydennyskuvio S1.

mikrovalokuvat kuvaavat MOC31 värjätty kalvo EpEx sisään epiteelisyövissä. Paneeli I esitetään vähäinen kalvon EpEx ilmentymisen normaalissa rinta- (A) ja eturauhasen (B, Ia), BPH (B, Ib), ja normaali ruokatorvi (C) sekä pään ja kaulan (D) kudoksiin. Vastaava syöpä kudoksia kuvaa tehostettuun EpEx kalvoon on esitetty paneelissa II (A-D). Sen sijaan monet syövän kudosten kunkin syövän tyypistä osoitti ilman kalvon EpEx (paneeli III, A-D). Alkuperäinen suurennus × 400.

Kalvo EpEx ilmentymistä havaittiin kaikissa epiteelisyövissä. Paneelissa I esitetään voimakas kalvo EpEx paksusuolen syöpä (A), maksa- (B), virtsarakon (C), keuhkojen (D), munasarjojen (E) ja haiman (F) syöpä. Paneelit II A-F esittävät vähentää tai puuttuminen kalvon EpEx alaryhmässä kutakin näistä epiteelisyöpien. Alkuperäinen suurennus × 400.

Analyysi Ep-ICD ja EpEx immunofluoresenssilla CX-1 koolonisyöpäsolulinja

CX-1, aggressiivinen koolonisyöpäsolulinja, EpEx ja ep-ICD havaittiin molemmat solukalvon (kuvio 8). Voimakas kalvo ilmentyminen havaittiin solu-solu-liittymissä sekä EpEx ja Ep-ICD domeenin spesifisten vasta-aineiden (kuvio 8 – A, D, F ja G). Lisäksi, kertyminen Ep-ICD havaittiin sytoplasmassa ja ytimet syöpäsolujen, mutta ei EpEx kertymistä havaittiin ytimet (kuvio 8 – C, E, G). Määrälliset fluoresenssisignaali skannauksen EpEx ja Ep-ICD selvästi tukee näitä havaintoja (kuvio 8H).

Toissijainen vasta-aineet ovat FITC-anti-hiiri (vihreä) ja TRITC-anti-kani (punainen). A) EpEx; B) Ep-ICD; C) DAPI; D) EpEx ja DAPI (A C yhdistyivät); E) Ep-ICD ja DAPI (B F) EpEx ja Ep-ICD (A B yhdistettiin); G) EpEx, Ep-ICD, ja DAPI (A, B, C yhdistetään); I) tiheyden mittaaminen kolme väriä linjan soluissa H.

ROC Curve Analysis

ROC dikäyrät ydin- ja sytoplasman Ep-ICD in HNSCC, ESCC, eturauhas- ja rintasyöpien (kuvio 9), ja niiden tulokset on esitetty taulukossa 2. tämän analyysin perusteella, rajataajuus on ≥4 määrittämiseen käytettiin ydin- ja sytoplasmisen positiivisuuden. Analyysi paljasti, että ydin- Ep-ICD kertymistä erottaa eturauhasen syöpiä ja rintasyöpiä normaaleista kudoksista 82% herkkyys ja spesifisyys 100% rintasyövän ja 78% eturauhasen. Vuonna HNSCCs, ydin- Ep-ICD pystyi erottamaan syövät normaaleista kudoksista 65% herkkyys ja 95% tarkkuus, kun taas ESCCs, ydin- Ep-ICD osoitti 37% herkkyys ja 90% tarkkuus. AUC-arvot havaittiin olevan 0,905 rintasyövän, 0,867 eturauhasen syöpä, 0,822 varten HNSCC, ja 0,630 varten ESCC. Sytoplasmisen Ep-ICD ilmentymisen rinta- ja eturauhassyöpää herkkyys oli 82% ja 84%: lla, spesifisyys 100% rintasyövän ja 89% eturauhasen. Vuonna HNSCC, sytoplasminen Ep-ICD ilmaisun herkkyys oli 74% ja spesifisyys 95%, kun taas sytoplasminen Ep-ICD oli herkkyys ja spesifisyys 70% kukin ESCCs. AUC-arvot sytoplasman Ep-ICD olivat 0,928 rintasyövässä, 0,880 eturauhassyövässä, 0,864 vuonna HNSCC, ja 0,758 vuonna ESCC.

ROC käyrät kuvaavat suhdetta herkkyydet ja 1-erityispiirteet ydin- ja sytoplasman Ep -ICD ilmentymistä näissä epiteelisyöpien. Pystyakseli kunkin käyrä herkkyyttä ja vaaka-akseli osoittaa 1-spesifisyys. Herkkyys, spesifisyys, ja AUC-arvot syövistä on koottu taulukkoon 2.

Keskustelu

Nykyinen tutkimus korostetaan esiintyy usein ydin- ja sytoplasman kertymistä Ep -ICD kymmenessä epiteelin syövän tyyppejä. Normaali epiteeli on rinta-, eturauhas- ja ruokatorven kudoksia analysoitiin osoitti selvästi kalvo Ep-ICD lokalisointi. Tärkeää on, vähentää tai puuttuminen kalvo Ep-ICD havaittiin syövissä rinta-, eturauhas-, pään ja kaulan ja ruokatorven, rinnastettiin selvästi Ep-ICD kertyminen tumaan ja sytoplasmaan vastaavien syöpäsoluja. Kuitenkin osajoukko kasvainten kunkin näistä kymmenestä syöpätyyppien osoittivat korkeaa Ep-ICD kalvo lauseke, joka korreloi korkean EpEx ilme kalvon havaita käyttäen Ep-CAM ulkoinen domeeni (EpEx) spesifistä vasta-ainetta (MOC31), mikä viittaa siihen, lisääntyneen ekspression täyspitkää proteiinia havaita Ep-ICD ja EpEx spesifisiä vasta-aineita. Erityisesti, immunohistokemiallinen analyysi epiteelisyöpien käyttäen MOC31 osoittivat lisääntynyttä EpEx kalvo ilmentyminen verrattuna normaaleihin kudoksiin joidenkin kasvainten, kun taas toiset oli vähentynyt tai puuttuessa kalvon EpEx, tukee havaintomme kanssa Ep-ICD domeenin spesifisten vasta-aineiden. On syytä huomauttaa, että syövät, joissa on näkyvissä vähentää tai puuttuminen kalvon EpEx tai Ep-ICD oli merkittävästi lisääntynyt Ep-ICD sytoplasmassa ja ytimet tällaisten syöpäsoluja. Erityisesti, EpEx ei havaittu mitään ytimet kasvainsolujen tahansa syöpien analysoitiin. Yhdessä nämä havainnot puoltavat lisääntynyt ilmentyminen ja lisääntynyt vuodattamisesta EpEx kasvaimen solut osa kaikista epiteelikasvaimet tutkittu.