Krooninen sairaus

tiivistelmä

Vahvista kliinistä merkitystä NF-KB: n ja JNK-proteiinin ilmentyminen kokeellisesti tunnistettu ehdokkaita ennustaa ennuste potilaille, joilla on 5-FU hoidossa, arvioimme proteiinin ilmentymistä kirurgisesti poistettu yksilöitä. Kaikkiaan 79 yksilöitä saatiin 30 mahalaukun ja 49 peräsuolen syövän potilaille, joille tehtiin R0 resektio seurasi leikkauksen jälkeen 5-FU kemoterapiaa liitännäishoitona. Immunohistokemiallinen tutkimukset NF-KB: n ja JNK päälle kudossiruina (TMA) paljasti, että huomattavasti lyhyempi aika-uusiutumisen (TTR) sekä NF-KB (+) ja JNK (-) alaryhmiin sekä mahalaukun (NF-KB (+)

p

= 0,0002, HR11.7. 95% CI3 3,2-43,4, JNK (-),

p

= 0,0302, HR4.4, 95% CI 1,2-16,6) ja paksusuolen (NF-KB: n (+),

p

= 0,0038, HR36.9, 95% CI 3,2-426,0, JNK (-),

p

= 0,0098, HR3.2, 95% CI 1,3-7,7) syöpiä. Nämä proteiinin ilmentyminen mallit osoittavat myös vahvaa discriminately valtaa mahasyöpäpotilaista yleisestä eloonjäämisaste, mikä viittaa mahdolliseen käyttökelpoisuus ennustetekijöitä tai kemosensitiivisyys markkereita. Lähtötilanteen ilmentymistä näiden proteiinien avulla mahasyövän solulinjoja osoitti vastavuoroista kuviot välillä NF-KB ja JNK, kun taas 5-FU altistuminen näistä solulinjoista vain indusoi NF-KB, mikä viittaa siihen, että NF-KB on hallitseva rooli vastauksena 5 -FU. Myöhemmät siRNA vahvistivat, että geeni knockdovvn NF-KB kasvoi 5-FU-erityinen herkkyys, kun taas JNK ei vaikuttanut kemosensitiivisyys. Nämä tulokset viittaavat siihen, että näiden proteiinien ilmentymisen saattaa auttaa päätösten mukana lääkehoitona ruoansulatuskanavan syöpien.

Citation: Ishida K, Nishizuka SS, Chiba T, Ikeda M, Kume K, Endo F, et al. (2012) Molecular Marker henkilöllisyys Relapse Prediction in 5-FU-Based adjuvanttihoitoa maha- ja kolorektaalisyövissä. PLoS ONE 7 (8): e43236. doi: 10,1371 /journal.pone.0043236

Editor: Anthony WI. Lo, Kiinan University of Hong Kong, Hongkong

vastaanotettu: 22 maaliskuu 2012; Hyväksytty: 18 heinäkuu 2012; Julkaistu: 14 elokuu 2012

Copyright: © Ishida et ai. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat: Keiryokai Research Foundation (101) SSN; KAKENHI (+21.591.676); Grant-in-Aid tieteellisen tutkimuksen (C) S.S.N; ja MIAST (Medical Innovation Advanced Science and Technology) hanke Opetusministeriön kulttuuri-, urheilu-, tiede ja teknologia, Japanin S.S.N, K.K, N.U., C. M., T. S., ja G. W. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Vaikka useat standardin solunsalpaajahoitojen on perustettu, on vielä suuri tarve tunnistaa kemosensitiivisyys tai ennustetekijöitä markkereita, jotka mahdollistavat ennustamisessa syövän kemoterapian tehoa. Hakemus biomarkkereiden korkea erottelukyky avulla kliinikot välttämään vaikea kemoterapiahoitojen tarpeettomilla haittavaikutuksia sekä mahdollistaa aikaisemman päätöstä käyttää vaihtoehtoista hoito. Kuitenkin, vaikka käytetään useiden korkean suoritustehon seulonnan menetelmiä tässä yhteydessä, tunnistaminen biomarkkerit on ollut vaikeaa [1].

aikana luonnehdinta molekyyli- ja solutason ominaisuuksiin paneelin 12 ihmisen syöpäsolulinjoissa, kehitimme järjestelmän, jossa tavanomaisen

in vitro

kemosensitiivisyys määritys käyttäen kliinisesti hyväksyttyjä lääkkeitä yhdistetään määrällisiä proteiinin ilmentymisen profilointiin käyttäen ”reverse-phase” lysaatti array (RPA) käytettiin tunnistamaan proteiineja, jotka voivat olla merkityksellisiä aktiivisuus kemoterapeuttisten aineiden [2]. Molemmat tekniikat tuottavat kvantitatiivinen tuotos, joka mahdollistaa analysoinnin suuren määrän yhdistelmät lääkkeen teho ja proteiinin ilmentyminen [2], [3]. Lisäksi tämä järjestelmä hypothesizes, että ilmaisu profiilin proteiini voi olla ennustaja kemosensitiivisyys tietyn lääkkeen. Myöhemmät validointi on tällöin onko markkereita ovat kliinisesti merkityksellisiä osalta kemosensitiivisyys.

Tuore kokoelma yksittäisiä Potilastietojen paksusuolensyöpä tapauksista on paljastanut, että 5-FU-pohjainen adjuvanttihoitoa tarjoaa merkittävän taudista elinaika (DFS) hyötyä vähentämällä toistumisen määrä, joka johtaa pitkän aikavälin yleistä (OS) hyötyä [4]. Itä-Aasian maissa, se on hyvin hyväksytty, että resektoitavissa, paikallisesti edennyt mahasyöpä hyötyvät 5-FU-pohjainen adjuvanttihoitoa kuten S-1, joka on suun fluoropyrimidiiniä, pitkäaikaiseen OS ja uusiutumista vapaa elinaika (RFS ) [5], [6]. Kuitenkin noin 30-40%: lla potilaista kokevat uusiutumisen jopa saatuaan parantava toiminta ja ”tavallinen” adjuvanttihoitoa [7], [8]. Huolimatta runsas käyttö 5-FU ruoansulatuskanavan syöpien, ajankohtaista markkereita 5-FU ei ole saavutettu vakio-of-käytäntö hyödyllisyydestä [9].

Tässä tutkimuksessa, keräsimme 79 poistaa kirurgisesti syöpä näytteet mahalaukun ja paksusuolen syöpä potilailla, jotka eivät olleet saaneet mitään kemoterapiaa aikaan toimintaa ja myöhemmin sai 5-FU kemoterapiaa liitännäishoitona onko jokin markkereita liittyi TTR. Olemme tuottaneet kudos microarray (TMA), joka edustaa kaikkia 79 yksilöt lasilevyllä ja tutkittiin ne primaarisilla vasta-aineilla [2], että tunnustettu erityinen proteiini kartoitettu merkki uusiutumisen. Vahvista suoraan yhteyteen proteiinin ilmentymisen ja 5-FU antituumorivaikutus, me myös suorittaa geenin pudotus siRNA useissa ihmisen syövän solulinjoissa.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics Statement

tutkimus on hyväksynyt Institutional Review Board at Iwate Medical University noudattaen Helsingin julistuksen. Yksittäinen kirjallinen suostumus saatiin kaikista potilaista, ja ehdoton luottamuksellisuus säilyi senkin jälkeen, kun potilas on kuollut. Kaikki analyysit suoritettiin anonyymisti niin yksittäisille potilaille ei tunnistettu.

ennustaminen Proteiinit kuten Candidate merkkiaineet Prognoosi

Ensin suoritetaan tavanomainen kemosensitiivisyys määritys jolloin 144 yhdistelmät 12 syöpälääkkeiden ja 12 solulinjoja arvioitiin kemosensitiivisyys käyttäen 50%: kasvun esto (GI

50) arvo (A matriisi, Fig. 1A) [2]. Perustaso ekspressiotaso 50 proteiinien solulinjasta paneelin analysoitiin kvantitatiivisesti käyttämällä ”reverse-phase” lysaatti mikrosiru (RPA) [10], [11], joka on western blot mikroskaalassa pistemuodossa, jota seuraa kvantitatiivinen immuno- ( P matriisi) [12], jossa jokainen matriisi visualisoidaan perustuu keskimäärin-sidoksen hierarkkinen klusterointi (Fig. 1 B) [2], [13]. Korrelaatio korrelaatiosta ja P matriisit (AP matriisi) jälkeen määritettiin käyttämällä algoritmia raportoimat Scherf et al. [14] (Fig. S1, S2). AP matriisi avulla voimme ennustaa yhdistyksen välillä proteiinin ilmentymisen ja kemosensitiivisyys. Käyttämällä tätä menetelmää, tunnistimme kahdeksan proteiinit perustuvat 5-FU kemosensitiivisyys (Fig. 1 C, taulukko S1) [2].

(A) Perustuu kemosensitiivisyys määritys syöpäsolun viiva paneeli, A ( aktiivisuus) x C (solut) = AC matriisi luotiin. (B) Quantitative proteiiniekspressiota tiedot kunkin solulinjan määritettiin ”reverse-phase” lysaatin mikrosirun generoi C × P (proteiini) = CP matriisi. (C) lämpökarttana hierarkkinen klusterointi esitys AP matriisi, joka on peräisin AC ja CP matriiseja. (D) immunohistokemiallinen värjäykset ehdokas merkkiaineita 5-FU hoidossa.

poistaa kirurgisesti näytteet

Seitsemänkymmentäyhdeksän kirurgisesti poistettu yksilöihin, mukaan lukien 30 maha- ja 49 peräsuolen tapauksissa kerättiin potilailla, jotka eivät olleet saaneet mitään syöpälääkkeiden mennessä leikkauksen. Kaikki kirurgiset tapauksissa tehtiin laitoksella kirurgian Iwate Medical University Hospital vuosien 1997 ja 2008. Leikkauksen jälkeen kaikissa tapauksissa vahvistettiin täytä 5-FU-pohjainen adjuvanttihoitoa yhdessä lopullisen kliinis diagnoosi (taulukko 1) .

TMA

kasvain-rikas alue kunkin kudosnäytteen oli merkittynä hematoksyliinillä ja eosiinilla (H Cell Signaling Technology). Sama suuntaus saatiin molemmille siRNA. Ohjaus näytteet vastaavat solulinjat siRNA transfektion ilman syöpälääkkeiden.

Tulokset

Potilaat

mediaani-ikä on 79 potilasta oli 68 vuotta (vaihteluväli, 37-83 vuotta ), jossa 30 mahasyövän ja 49 peräsuolen syövän potilaille. Kaikki 79 potilaalle tehtiin joko gastrectomy tai colorectomy kanssa imusolmukedissektiossa. Toiminnallinen kovettuvuuteen ollut jäljellä kasvain (R0) kaikissa tapauksissa. Patologiset löydökset paljasti, että kaikki kasvaimet vallannut yli mascularis proprian. Kaksikymmentäkuusi (33%) potilaista oli patologisesti negatiivisia alueellisia imusolmukemetastaaseja, vaikka ei potilailla havaittiin etäispesäkkeitä. Kaikki potilaat täyttivät seuraavat kriteerit 5-FU-pohjainen adjuvanttihoitoa: histologisesti vahvistettu mahalaukun ( vaihe II) tai peräsuolen ( T2) syöpä näennäinen R0 leikkausta; no maksan, vatsakalvon tai kaukainen etäpesäke; potilaan ikä välillä 20 ja 85; ole aiempaa kemoterapiaa; ja elinten toiminta oli riittävä. Kemoterapia katsottiin täytetään, jos potilas pystyi jatkamaan seuraavat 5-FU pohjaiset hoidot: (i) S-1 (60 mg /m

2 /body) 1 vuosi mahasyövän; ja (ii) joko doksifluridiini (800-1200 mg /vrk), 5-FU: ta (370 mg /m

2 /vrk) tai UFT-E rakeita (300 mg /m

2 /vrk) kuuden kk peräsuolen syövän. Kuusikymmentä (76%) potilaista päätökseen kemoterapiaa, 15 (19%) potilaista keskeyttää hoidon, ja 4 (5%) potilaista oli puuttuvat tiedot.

seuranta-ajan mediaani leikkauksen jälkeen oli 3,41 ja 5,04 vuotta vatsassa ja paksusuolen vastaavasti (vaihteluväli 1,41-7,00 vuotta mahassa, ja +0,99-10,24vuotta paksusuolen). Ei-uusiutunut tapauksissa pienin havainto aika oli 2,43 ja 2,36 vuotta vatsassa ja paksusuolen, vastaavasti. Mediaani TTR oli 1,56 ja 1,52 vuotta vatsassa ja paksusuolen, vastaavasti (alue, +0,72-3,33vuosi mahassa, ja 0,27-4,47 paksusuolen). Niistä 77 tapausta, joista selviämistila vahvistettiin, 3 vuoden yleinen pysyvyys on uusiutunut ja ei-uusiutunut ryhmiä oli 0,60 ja 0,65 vatsassa ja 0,97 ja 0,96 paksusuolen, vastaavasti. Kliinis parametrit perusteella uusiutumisen tila on esitetty taulukossa S3.

immunohistokemia

immuunivärjäystä tulokset kaikille ehdolla proteiinit olivat arvioitavissa (Fig. 1D ja Fig. S3). NF-KB osoitti selvästi tumavärjäystä joka hajallaan ytimet ja eivät muodosta klustereita. Jotkut solut osoittivat sytoplasmista värjäytymistä, mutta se ei ollut niin selvä kuin ne, joilla tumavärjäystä. Värjäytymistä JNK ei ollut niin vahva kuin NF-KB, mutta paikannettiin selvästi sytoplasmassa. Loput kuusi ehdokasta proteiinit ja kolme kiinnostavia proteiineja olivat heidän odotetaan subsellulaarisissa paikoissa (Fig. S3). Määrittämisen jälkeen solunosasijaintia proteiinien vahvuus värjäytyminen pisteytettiin binäärisessä tavalla.

korrelaatio Protein Expression ja kliinis Havainnot

ennakoimattomia parametri analyysi jokaisen proteiinin suhteen uusiutumisen paljasti, että proteiini tasot NF-KB: n ja JNK liittyi merkittävästi uusiutumisen vatsaan (

p

= 0,0004 ja 0,029 NF-KB ja JNK, vastaavasti; taulukko S4). Kun ilmaisua näiden kahden proteiinien yhdistettiin, valmiussuunnitelmien analyysi osoitti vahvempi erotteleva teho kuin yksittäisiä proteiini.

Perustuu Kaplan-Meier-analyysi, JNK ja NF-KB: n ilmentymisen tasot olivat yhteydessä merkittäviä eroja ei-taudin uusiutumista (Fig. 2). Log-rank testi Kaplan-Meier-analyysi osoitti merkittävää eroa ei-uusiutumisen välillä JNK (+) ja JNK (-) ryhmät molemmissa mahaan (

p

= 0,0302, HR4.4 , 95%: n luottamusväli 1,2-16,6) ja paksusuolen (

p

= 0,0098, HR3.2, 95% CI 1,3-7,7); välillä ja myös NF-KB-(+) ja NF-KB: n (-) ryhmät sekä mahassa (

p

= 0,0002, HR11.7, 95% CI 3,2-43,4) ja paksusuolen (

p

= 0,0038, HR36.9, 95% CI 3,2-426,0, Fig. 2). Mielenkiintoista on, että vatsassa, kaikki NF-KB: n (+) tapauksista oli JNK (-), kun taas 58% JNK (-) tapauksessa oli NF-KB: n (+). Todennäköisyys uusiutumisen kun nämä merkkiaineita yhdistettiin osoitti suurempaa eroa kuin käyttämällä yksittäisiä markkereita sekä mahan ja paksusuolen (Fig. 2).

Myös seulotaan p53, Tymidine -syntetaasi, ja MDR-1 ilmentymisen yhdistetyssä mahan ja paksusuolen näytteitä, koska on ehdotettu, että nämä proteiinit tai koodaavat geenit voidaan liittyy 5-FU lääkkeen teho [18], [19], [20], [21]. Kuitenkaan mitään merkittävää yhteyttä välillä havaittiin relapsimäärä ja ekspressiotaso näiden proteiinien (Fig. S4).

3 vuoden OS määrä mahasyöpä, NF-KB (-) ja (+ ) tapaukset oli 0,94 ja 0,77, vastaavasti, ja 0,82 ja 1,00 JNK (-) ja (+), tässä järjestyksessä. 3-vuoden OS määrä paksusuolensyöpä, NF-KB (-) ja (+) tapauksessa oli 0,79 ja 1,00, vastaavasti, ja 0,72 ja 0,90 JNK (-) ja (+), tässä järjestyksessä. Kuitenkin oli merkittävä ero OS korko Kaplan-Meier arvion mahasyövän (NF-KB (+), HR 7,9, 95% CI 2,1-30,3, JNK (-), HR 0,25, 95% CI 0.06- 1,09, Fig. S5).

Subset Analysis

löytää yleisiä suhteita markkereita ja kliinis havaintojen osajoukko analyysi suoritettiin vatsan ja peräsuolen yhdistetyistä näytteistä. Oli merkittävä assosiaatio NF-KB asema ja T-tekijä /Stage TTR (Fig. S6), mutta mitään merkittävää yhdistyksen välillä havaittiin JNK tila ja mahdolliset muuttujat TTR (Fig. S7). Mielenkiintoista kuitenkin oli merkittävä assosiaatio yhdistetty merkki tila: ja T-tekijä /Stage TTR, ja kemoterapiaa lopetuksen OS (Fig. S8, S9). Yhdistyksen välillä OS ja tilan kunkin tekijän analysoitiin myös mukaan sukupuolen, iän, vauriot, TNM luokituksia, ja tilan kemoterapian loppuun (Fig. S10, S11). Monimuuttuja-analyysissä ilmeni, että NF-KB ilmaisun ja T tekijä olivat riippumattomia tekijöitä sekä uusiutumisen ja eloonjäämisen.

Molecular Responses 5-FU

lähtötilanteessa proteiinin ilmentymistä NF-KB: n ja JNK oli mitattuna western blot. Mielenkiintoista on, että ekspressiomalli oli vastavuoroisesti; solulinjoja, joilla on korkea NF-KB ilme oli suhteellisen alhainen JNK lauseke (Fig. 3A). Vastavuoroiset ilme kuvio oli yhtäpitävä luotavan näiden proteiinien biomarkkereina. Testasimme myös proteiinin induktio 5-FU. NF-KB: n ilmentyminen indusoitiin ja lisääntynyt proteiinin kokonaismäärän murto-5-FU: n annoksesta riippuvalla tavalla (kuvio. 3B). Myöhemmät immunosytokemiallisessa analyysi paljasti, että ydin- NF-KB oli näkyvästi visualisoitiin jälkeen 5-FU altistumista, vaikka JNK ei esiintynyt havaittavaa muutosta lokalisointi (Fig. 3C).

(A) Lähtötilanne proteiinin ilmentymistä NF-KB ja JNK viidessä mahasyövässä solulinjoissa. Tublin käytettiin latauskontrollina. (B) induktio ehdokas biomarkkereiden vastauksena 5-FU hoidossa eri pitoisuuksina MKN45 ja KE39. (C) tutkiminen proteiinin lokalisaation loisteputki immunosytokemialla käyttäen MKN45. (D) Lisääntynyt estävää kasvua vaikutus syöpälääkkeiden mahasyövän solulinjoissa transfektion jälkeen siRNA NF-KB p65 ja JNK selostukset. Ohjaus näytteet ovat vastaavat solulinjat transfektoidaan ilmoitetuilla siRNA: t ilman syöpälääkkeiden. Lyhenteet ovat: CIS, sisplatiinia; DTX, doketakseli; ja PXL, paklitakseli; ja 5FU, 5-fluorourasiilin kanssa. *

p

0,05, Student

t

-testissä.

Vaikutus NF-KB: n p65 ja JNK Gene knockdown Cell Growth

Neljä viidestä solulinjojen (GSS, KATOIII, KE39, ja MKN45) osoittivat merkittävää kasvua vaimentava jälkeen NF-KB siRNA transfektio ja 5-FU hoidossa (

p

0,05, Student

t

-testin; Fig. 3d, Fig. S12). 5-FU-riippuvainen, tilastollisesti merkittävä kasvun hidastuminen havaittiin GSS, KATO-III, ja MKN45. JNK siRNA hoito odottaa aiheuttavan antiapoptoottisena vaikutus perustuu aiempiin tutkimuksiin [22], joka oli arveltu lisäävän kasvua läsnäollessa syöpälääkkeiden. Neljä viidestä solulinjojen käsitelty JNK siRNA osoitettiin 5-FU-välitteisen kasvun induktion tai ei muutosta. Nämä siRNA kokeet paljastivat, että NF-KB ja JNK näyttävät vastavuoroisia määriteltäisiin 5-FU-välitteisen kasvun hidastuminen.

Keskustelu

Vaikka valinta adjuvanttihoitoa jälkeen resektion mahasyövän on hieman erilaiset eri maissa, 5-FU: n on osoitettu olevan tehokkain hoitovaihtoehto. Validointi leikkauksen jälkeinen kemoterapia ja kirurgia yksin on osoittanut 3 vuoden OS hinnat 80,1% ja 70,1%, vastaavasti, Japanissa [23]. Leikkauksen jälkeinen kemosädehoito (CRT) on tehty Yhdysvalloissa kehittynyt mahasyövän ja OS jälkeen CRT on raportoitu olevan 50%, kun taas leikkaus yksinään oli 41% [24]. Euroopassa MAGIC tutkimus paljasti tehokkuutta leikkaussalin kemoterapiaa ja osoittivat, että 5 vuoden OS oli 36,3% ja 23,0% leikkaussalin kemoterapiaa ja kirurgian yksin ryhmiä, vastaavasti [25]. Toisaalta, adjuvanttihoitoa (5-FU /LV) pitkälle peräsuolen syövän oli osoitettu parantavan OS 1990-luvulla, ja viime aikoina edelleen parantaa DFS ja OS on havaittu lisäämällä oksaliplatiinin [26]. Yleensä adjuvanttihoitoa peräsuolen syövän vain ylläpitäjä kuusi kuukautta, mutta on osoitettu tarjota pitkän aikavälin hyötyjä, mukaan lukien pitkittynyt 5 vuoden DFS ja OS [4], [26].

Kanssa hoidon taso perustettu, edessämme kysymys, kuinka potilaiden hoitoon, jotka eivät näitä vakio hoitoja. Itse asiassa 30-40% potilaista hoidettiin standardin adjuvanttihoitoa kokemus uusiutuminen leikkauksen jälkeen viiden vuoden kuluessa kehittyneissä maha- ja paksusuolikarsinoomat [8], [27]. Siksi on ollut tärkeä tavoite on parantaa hoito-ohjelmat osajoukon väestölle kun tavanomaista hoitoa voi olla tehoton.

Tässä tutkimuksessa, vahvistaa hyödyllisyyttä tunnistettu markkereita, keräsimme arkistoidut kudoksia potilailta, joilla oli läpikäynyt parantava resektio mahalaukun ja peräsuolen syöpä. Kaikki potilaat olivat oikeutettuja saamaan adjuvanttihoitoa, mukaan lukien potilaat, joilla vaiheen I /II peräsuolen syövän. Aiempi raportti osoitti, että joukossa 769 mp tapausta retrospektiivinen kohortin Japani potilailla uusiutui vaiheen I (mp, N0) potilaista oli 7% [28]. Vaikka potilaiden määrä oli rajallinen, kvasaari tutkimus kertoo, että suurempi osuus vaiheen I potilaista (25%), jotka olivat saaneet pelkästään leikkauksen kuoli viiden vuoden kuluessa verrattuna potilaisiin, jotka saivat adjuvanttihoitoa [29]. Lisäksi on raportoitu, että verenkierrossa olevia kasvainsoluja löydettiin 6%: lla vaiheen I peräsuolen syövän potilaille, kun kovetin toimintaa [30]. Nämä kliiniset ja biologiset havainnot pitäisi kohtuullinen sisällyttäminen vaiheen I tässä tutkimuksessa.

On raportoitu, että noin 25% potilaista vaiheen II kasvaimia katsotaan olevan suurentunut riski toistumisen takia : (a) tunkeutuminen kalvojenpoiston (T4); (B) ulkopuolinen laskimoiden invaasio; (C) huonosti eriytetty histologia; (D) esittämistä tukkeuma; tai (e), jonka saanto oli pienempi kuin 10-12 imusolmukkeissa [31]. Esillä olevassa tutkimuksessa, suurin osa vaiheen II peräsuolen tapauksissa hallussaan jokin näistä riskien arviointiperusteet, paitsi yhdessä tapauksessa, jossa potilas oli nuori (37-vuotias), jota varten QUASAR tutkimuksen perusteltua kelpoisuuden. Vaikka käyttö kemoterapian I vaiheessa ei ole suositeltavaa ja vaiheen II tapauksista on ollut kiistanalainen, teimme validointi, koska sen tarkoituksena oli valita henkilö, joka ei voi saada ”standardi” kemoterapiaa tai on potentiaalinen riski alempaan tasoon, joka on toisin kuin lähestymistapa epidemiologisten tutkimusten.

Aiemmat raportit ovat osoittaneet merkitystä NF-KB: ennuste, angiogeneesi, ja chemoresistance vatsassa ja paksusuolikarsinoomat [32], [33], [34], [ ,,,0],35], [36]. Nykyinen tiedot osoittivat, että ydinvoiman lokalisointi NF-KB voi ennustaa potilaiden aikaan toiminta, joka myöhemmin saavat adjuvanttihoitoa. Mielenkiintoista, NF-KB (+) kasvainsolut havaittiin hajallaan jaksoissa, joissa oli selvä ero positiivisten ja negatiivisten solujen. Molecular kokeet osoittivat, että vastavuoroinen suhde NF-KB ja JNK ilmaisua, jossa ehdotettiin mahdollisia yhdessä 5-FU-hoidon ja patologisia löydöksiä. Selventää rooli NF-KB ja JNK kasvaimen vaste 5-FU, teimme geeni pudotus kokeiluja. Pudotus NF-KB (p65), geeni, paljasti, että suurin osa syövän testatuista solulinjoista osoitti selvää, 5-FU-spesifisiä kasvun hidastuminen, kun taas muiden lääkeaineiden, vaikka indusoi solujen kasvua. Tämä tulos viittaa välillä suoraa yhteyttä 5-FU herkkyys ja NF-KB: n ilmentymisen ja tukee diagnostinen soveltamisen analyysin 5-FU-pohjainen adjuvanttihoitoa. On myös huomattava, että taxans ja topoisomeraasi-inhibiittorit aktivoivat NF-KB-reitin, joka johtaa solujen lisääntymisen kautta MYC ja IKK aktivointi, vastaavasti [33]. Kliininen merkitys näiden mekanismien edelleen selvittämättä.

NF-KB: n on osallisena lääkeresistenssin kehittymisen monenlaisia ​​syöpäsoluja. NF-KB: n aktivaation vähensi chemoresistance mahalaukun ja peräsuolen syövän solulinjoissa, mikä on sopusoinnussa nykyisen tuloksiin [6], [32], [37], [38]. Konstitutiivisen NF-KB: n on ehdotettu olevan mahdollinen ennustetekijä mahasyövän [39], [40], [41] ja korreloi etenemisen ja kemoterapian resistenssin peräsuolen karsinoomien [42], [43].

JNK proteiineilla on erilaisia ​​toimintoja soluproliferaatioon ja apoptoosin induktion avulla stressin aktivoituvan proteiinikinaasi reittejä, ja usein säädellä vähentävästi syövissä [44], [45]. Esillä olevassa tutkimuksessa, rooli JNK yhteydessä 5-FU vaste näyttää olevan passiivinen suhteen kemosensitiivisyys, mukaan meidän siRNA kokeessa. Immuunihistokemialliset analyysi Tässä tutkimuksessa osoitettiin, että NF-KB ja JNK olivat vastavuoroisesti indikaattorit ennustetta. Kuitenkin knockdown NF-KB herkistyneet 5-FU, vaikka JNK ei tehdä solujen resistenttejä 5-FU. NF-KB: n aktivaatio TNF-α on tiukasti säännelty JNK yhteydessä on proinflammatoristen vasteen, joka tapahtuu välittömästi stimuloinnin jälkeen [46], [47], [48], [49]. Toisaalta, NF-KB: maligniteetti tai chemoresistance näyttää olevan konstitutiivinen osa ruoansulatuskanavan taudin etenemiseen [47], [50]. Esillä olevassa tutkimuksessa, vaikka NF-KB: n tuman värjäytymisen havaittiin ainoastaan ​​pieni osa kasvainsolujen, JNK värjättiin suhteellisen mukana kaikkialla kudosta. Siksi nykyinen tulokset voivat osoittaa, että JNK: n värjäytyminen kuvastaa määrin taustalla krooninen tulehduksellinen tai stressistä aiheutuvat mahan limakalvon [51], kun taas NF-KB: n konstitutiivisen aktivaation liittyy pahanlaatuistumisriskin kasvainsolujen [39], [40] , [41], [52]. Lisäksi luontainen pahanlaatuistumisriskin, tuloksemme osoittivat myös, että NF-KB: lla on erityinen asema 5-FU vasteen. Yhdessä, vaikka suurempi kliininen tutkimus on tarpeen, NF-KB: n ydin- ekspressio voi olla hyvä ehdokas kuin 5-FU kemosensitiivisyys ennustuksen markkeri, kun taas JNK voi olla tukeva merkki, joka kuvastaa taustalla limakalvon tiedot.

Vaikka esillä oleva tulos on vielä alustava käytännölliseltä kannalta, nämä tulokset voivat tarjota mahdollisuuden vaihtoehto hoito voidaan harkita tapauksissa, jotka osoittavat pieni todennäköisyys 5-FU-pohjainen kemoterapeuttisten vasteen. Suurempi immunohistokemiallinen tutkimus, joka sisältää NF-KB /JNK analyysit on tarpeen todistaa hyödyllisyys mahalaukun ja peräsuolen syöpiä.

tukeminen Information

Kuva S1.

Flow Kemosensitiivisyys Marker Identification. (A) Perustuu kemosensitiivisyys määritys syöpäsolun viiva paneeli, A (aktiivisuus) x C (solut) = AC matriisi luotiin. Vasemmalle kahden paneelit esittävät solujen kasvua käyrät perusteella lääkepitoisuus. Keskimmäinen paneeli esittää 50%: kasvun esto (GI

50) arvot pylväskaavio. Kaikki tiedot on keskitetty huippupitoisuus plasmassa (PPC) arvoja, jotka ovat ainutlaatuisia kullekin lääkkeelle. Oikeassa paneelissa edustaa GI

50-arvot ja solujen lämpökarttana hierarkkinen klusterointi muodossa. (B) ”Reverse-vaihe” proteiini lysaattia mikrosiru (vasemmalla) ja C (solut) x P (proteiini) = CP matriisin lämpökarttana hierarkkinen klusterointi muodossa (oikealla). (C) lämpökarttana hierarkkinen klusterointi esitys AP matriisi, joka on peräisin AC ja CP matriiseja. Dendrogrammi kertoo etäisyyden perusteella korrelaatiokerroin datajoukon vierekkäin. Näin ollen AP matriisi näkyy korrelaatio proteiinin ilmentymisen ja lääkeaineiden tehoon kaikissa solulinjoissa. Mainittu luvalla viitaten # 2.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0043236.s001

(TIF) B Kuva S2.

korrelaatio ehdokas proteiinien ja huumeiden herkkyys. Vasen: hajontakuva perustuva 5-FU herkkyys ja NF-KB: n ilmentymisen. Korrelaatiokerroin on positiivinen, mutta negatiivinen (

r

= -0,304), kun maha solulinjoja (CW2, HCT116, GSS, KATOIII, MKN45, HuG1-PI, ja KE39) analysoitiin, joka on yhdenmukainen validointiohjeiden johtuvat TMA. Oikea: hajontakuva perustuva 5-FU herkkyys ja JNK ilme. On hyvin hyväksytty, että seulonta työkaluja, kuten microarray-tekniikat, voivat löytää hyödyllistä biomarkkereita, mutta voi myös eristää vääriä positiivisia.