Krooninen sairaus

tiivistelmä

kasvutekijän reseptorin (EGFR) ja COX-2 (COX-2) on keskeinen rooli sairauden etenemisessä, uusiutumisen ja terapeuttisia vastus edenneen eturauhassyövän (PCA). Tässä artikkelissa, me arvioidaan ensimmäistä kertaa, terapeuttista hyötyä estää EGRF ja /tai COX-2 (käyttäen gefitinibin ja NS-398, vastaavasti) suhteen määrä tehostaa tavanomaisen kliinisen kemoterapeuttisen lääkkeen Doketakselin in vitro ja vivo. Osoitimme, että EGFR ja COX-2: n ilmentymisen oli suurempi metastaattisen kuin ei-metastasoituneen PCa kudoksia ja soluja. Doketakseli, yksin tai yhdessä gefitinibin tai NS-398, johti pieneen vähentää solujen elinkelpoisuutta. Kolme lääkeyhdistelmä laski solujen elinkelpoisuuden suuremmassa määrin kuin doketakseli yksinään tai yhdessä gefitinibin tai NS-398. Doketakseli johti vaatimaton kasvu apoptoottisten solujen in metastasoitunut ja ei-metastasoitunut solulinjoissa. NS-398 tehosti merkittävästi dosetakseli aiheuttamaa apoptoosia. Yhdistelmä kolmen lääkeaineen aiheuttamaa vieläkin selvempi apoptoosin ja aiheutti enemmän tukahduttaminen invasiivisia potentiaali kuin doketakseli yksinään tai yhdessä gefitinibin tai NS-398. Yhdistelmä kaikkien kolmen lääkeaineen myös johti selvempi lasku NF-KB, MMP-9: n ja VEGF tasot PC-3M soluissa. Nämä in vitro löydökset tukevat in vivo tutkimukset osoittavat, että doketakselia yhdistelmänä gefitinibin ja NS-398 oli merkitsevästi tehokkaampi kuin yksittäiset agentti. Aiempien prekliinisen tutkimuksen, voimme päätellä, että samanaikaisesti estämällä EGFR ja COX-2 gefitinibin ja NS-398 herkistää kehittyneitä Eturauhassyövän soluja dosetakselille aiheuttamaa sytotoksisuutta.

Citation: Lin J, Wu H, Shi H, Pan W Yu H, Zhu J (2013) yhdistettyyn estäminen epidermaalisen kasvutekijän reseptori ja COX-2 johtaa suurempaan antituumorivaikutuksen Docetaxel Advanced Eturauhassyöpä. PLoS ONE 8 (10): e76169. doi: 10,1371 /journal.pone.0076169

Toimittaja: Wendy J. Huss, Roswell Park Cancer Institute, Yhdysvallat

vastaanotettu: 27 maaliskuu 2013; Hyväksytty: 21 elokuu 2013; Julkaistu: 14 lokakuu 2013

Copyright: © 2013 lin et ai. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Työ on tuettu tieteen ja teknologian suunnittelu projekti Nanjing, Kiina (201201088). URL rahoittaja verkkosivuilla on https://202.127.12.44/XMSB/Show_JBXXB.jsp?XMBH=2012sc315043 DJXH=20121069. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Eturauhassyöpä (PCA) on yleisin maligniteetti, ja on yksi johtavista kuolinsyistä miehillä [1]. Vastausprosentti eturauhasen poistoleikkauksen ja hormoniablaatioterapia on korkea potilailla diagnosoitiin paikallinen ja androgeeniriippuvaisen syöpiä. Kuitenkin etenemisen hormonia tulenkestävä eturauhasen syöpiä (HRPC) ja /tai luumetastaaseja liittyy taudin pahenemiseen ja huono potilaan eloonjääminen [2-4]. Itse asiassa, etenemisen eturauhasen syövän androgeeniriippumattomuuteen edelleen ensisijainen este parantaa potilaan eloonjäämisen kuin se liittyy monimutkaisia ​​taustalla solun muutoksia.

Doketakseli pidetään vakiona kemoterapeuttinen aine potilaille, joilla on HRPC ja ne, joilla on kliinistä näyttöä etäpesäkkeitä. Se on raportoitu parantaa elämänlaatua ja tarjoaa kivunlievitystä, mutta se liittyy minimaalinen mediaani eloonjäämisaste vain 12-19 kuukausi alkaen hoidon aloittamisesta. Tämä korostaa tarvetta tehdyissä tutkimuksissa, miten optimoida tavanomaisten solunsalpaajahoitojen potilailla, joilla HRPC tai pitkälle PCa.

Tutkiminen molekyylitason mekanismeja, jotka taustalla PCa etenemistä, auttaa tunnistamaan otaksuttu terapeuttinen kohde geenien apoptoosin. Se auttaa myös selvittämään mekanismia vastuussa kasvun ja solujen signalointi [5-8]. EGFR ja COX-2 molemmille on osoitettu myötävaikuttavan Jatkuvaa kasvua pitkälle HRPC joko poissa tai läsnä ollessa pieniä pitoisuuksia androgeenireseptorin [9-11].

EGFR on usein yli-ilmentyy ihmisen syövissä. Prekliiniset tiedot viittaavat siihen, että EGFR signalointireittejä aktivoida androgeenireseptoreita olosuhteissa kliinistä androgeenideprivaatioterapian. Tämä liittyy siirtymistä androgeenisäädellyn reagoi hormonin tulenkestävä fenotyyppi, tuloksena on aggressiivinen kliininen tulos [10,11]. EGFR vuoksi, oletetaan olevan ensiarvoisen terapeuttinen merkitys, koska sen yli-ilmentymisen kehittyneissä PCa ja rooliaan huume tavoite. Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että aktivointi EGFR parantaa kykyä androgeenireseptoreita lisätä PCa leviämisen. Sen sijaan, EGFR osoitettiin tehostaa Doketakselin metastaattisen PCa [12,13].

syklo katalysoivat prostaglandiinit osallistuvat kasvaimen aloittamiseen ja /tai etenemistä. COX-2 on osoitettu edistää tulehdusta, joka voi suoraan edistää Eturauhassyövän [14]. On myös osoitettu, että COX-2-indusoidun PGE2 aktivoi solun signaloinnin mukana leviämisen ja siten suoraan edistää kasvainsolujen kasvua. Muut tutkimukset ovat osoittaneet, että COX-2 yliekspressoituu PCa ja että sen ilmentymistaso korreloi Gleason pisteet, syövän etenemisen ja uusiutumisen [15,16]. Viime vuosina COX-2-estäjät yhdessä kemoterapeuttisten lääkeaineiden on arvioitu hoidettaessa levinnyttä PCa. Nämä aineet lisäävät merkittävästi tehoa androgeenireseptorin peruuttamisesta ja edistää päätöslauselman luuston vaurioiden [17,18]. On yleisesti hyväksytty, että COX-2 vaikuttaa PCa ja on yhä enemmän näyttöä siitä, että COX-2-estäjät voivat olla hyödyllisiä hoidossa PCa.

Aikaisemmat tutkimukset ovat vahvistaneet, että korkea COX-2: n ilmentymisen PCA korreloi doketakselin vastarintaa, ja että COX-2 merkittävästi hidastaa kasvaimen kasvua ja parantaa dosetakselin tehoa [19,20]. Näiden havaintojen perusteella, että on mahdollista, että lisäys selektiivisiä EGFR: n ja COX-2 voi edustaa uusia terapeuttisia lähestymistapa parantaa metastaattisen PCa. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme arveltu, että samanaikainen salpaus EGFR ja COX-2 reittejä käyttäen gefitinibin ja NS-398 voisi parantaa sytotoksisia vaikutuksia Doketakselin kehittyneiden PCa in vitro ja in vivo. Antiproliferatiivistä, anti-invasiivisia, ja apoptoosin induktio vaikutukset kolmesta aineesta, yksin ja yhdessä, määritettiin in vitro ja in vivo ja taustalla molekyylitason mekanismeja selvitettiin.

Materiaalit ja menetelmät

etiikka selvitys

Kaikki kokeet, joissa käytetään eläimiä tehtiin suostumuksella Nanjing Medical University eettisen komitean. Kliinisen tutkimuksen hyväksyi eettisen komitean Nanjing Medical University. Kirjallinen suostumus saatiin kaikille kohteille ennen osallistumista tutkimukseen.

kasvain näytteet ja solulinjat

PCa näytteet 37 ensisijaisen adenokarsinooman tapausta olivat mukana tutkimuksessa. Kaikissa tapauksissa kahden itsenäisen patologia tarkastelivat yksilöitä sulkea muut patologinen tyyppejä. Kaikki näytteet saatiin höyläysleikkaus eturauhasen, eturauhasen tai neula-biopsia at Nanjing BenQ sairaalan ja Nanjing ensimmäinen sairaala, vuosina 2010 ja 2012. Kirurginen lavastus kasvainten suoritettiin Jewett-Whitmore kriteerit. Mediaani-ikä potilailla oli 69 vuotta (vaihteluväli 58-79 vuotta).

Ihmisen eturauhassyövän solulinjoissa LNCaP, PC-3M ja DU-145 käytettiin tutkimuksessa hankittiin American Type Culture Collection ja pidettiin RPMI-1640-viljelyalustaan, joka sisälsi 10% naudan sikiön seerumia, 26 mmol /L NaH

2CO

3 (pH 7,4), 1% L-glutamiinia ja antibiootteja (100 IU /ml penisilliiniä, 100 ug /ml streptomysiiniä) 37 ° C: ssa 5% CO

2. RPMI 1640 ja muut kulttuurin materiaalit toimitti Gibco.

reagenssit ja vasta

Gefitinibi, NS-398, doketakseli ja MTT hankittiin Sigmalta. Anneksiini V:-FITC toimitti Gibco. Vasta-aineet ihmisen VEGF: n ja MMP-9 saatiin R 1, 1 ja 1 vastaavasti edustaa synergiaa, additiivisuutta ja vihamielisyys [21].

In vitro ja in vivo tulokset analysoitiin käyttämällä Studentin t-testiä. EGFR ja COX-2: n ilmentymisen ei-metastasoitunut ja metastasoitunut PCa kudosten verrattiin käyttämällä Pearsonin khiin neliö -testi .. arvot p 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

EGFR ja COX-2-proteiinin tasot eturauhassyöpäkudoksille

EGFR oli positiivinen seitsemän ei-metastasoituneen PCa kudoksissa (43,8%) ja 18 (85,7%) kudosnäytteitä potilaasta metastasoitunutta PCa (

P

0,01). Intensiteetti värjäys COX-2 nähtiin 18 metastaattinen (85,7%) ja yhdeksän ei-metastasoituneen PCa kudoksissa (56,3%; p = 0,11). EGFR ja COX-2 positiivisia -parin löydettiin 16 metastaattisen kudoksissa (76,2%) ja neljäs (25,0%) ei-metastasoitunut PCa kudoksissa (P 0,01). Tulokset on esitetty kuviossa 1 ja taulukossa 1.

Osiot tutkittiin mikroskoopilla, ja immunoreaktiivisuus merkitty tumman ruskea värjäys. Edustavia eturauhassyövän kudosnäytteistä saadaan alkuperäinen suurennoksia × 200 ja × 400.

Stage

n

Number (%) potilaista

EGFR + COX 2+

EGFR + COX-2-

EGFR-COX-2 +

EGFR-COX-2-

A + B164 (25,0%) 3 (18,8%) 5 (31,2%) 4 (25,0%) C + D2116 (76,2%) 2 (9,5%) 2 (9,5%) 1 (4,8%) Taulukko 1. positiivinen ekspressio EGFR: n ja COX-2: n ei-metastaattinen ja metastaattinen eturauhassyöpä.

patologinen lavastus Eturauhassyövän määriteltiin mukaisesti Whitmore-Jewett lavastus järjestelmää followsA (muuten löydettiin PCA), B (rajoitettu PCA), C (invaasio viereisiin elimiin) D (etäispesäkkeitä tai imusolmuke osallistuminen) .Jewett vaiheessa A ja B määriteltiin ei-metastasoitunut ja vaiheen C tai D metastasoitunut. CSV Lataa CSV

Baseline ilmaisun ja aktivointi EGFR ja COX-2-proteiinin in PC-3M ja DU-145-solut

perustason koko EGFR, p-EGFR ja COX-2 mitattiin PC-3M ja DU-145-soluja. Sitten tutkittiin, onko EGR liittynyt lisääntyminen näillä tasoilla. Tulokset osoittivat, että aktivoitu /fosforyloidun EGFR (p-EGFR), EGFR: n ja COX-2-proteiinin ilmaistiin molemmissa solulinjoissa (kuvio 2A). p-EGFR ja COX-2: n ilmentymisen lisääntyivät merkitsevästi kahdessa solulinjassa lisäämällä EGF, mutta EGFR oli ennallaan. Muutos p-EGFR /EGFR-suhde oli annoksesta riippuvainen (kuvio 2B).

Soluja kasvatettiin 1% FBS altistettiin 0, 10 ja 100 ng /ml EGF: ää 24 tuntia, kuten on kuvattu Materiaalit ja menetelmät. Saatu solun proteiinien alistettiin SDS-PAGE ja Western blot analyysi määrittää proteiinin tasot p-EGFR, EGFR: n ja COX-2 (kuvio 2A). Western blot varten β-aktiini näkyy lastaus valvonta. Suhteellinen proteiinin taso p-EGFR /EGFR ja COX-2, on esitetty kuviossa 2B.

Anti-proliferatiivinen aiheutuvaa doketakselia yksinään tai yhdessä gefitinibin ja NS-398

MTT määrityksiä käytettiin arvioitaessa anti-proliferatiivista vaikutusta kolmen lääkeaineen yksinään tai yhdistelminä, PC-3M ja DU-145-soluja. Alustavissa kokeissa, loimme pitoisuus-vaste-käyrät kunkin lääkkeen pitoisuuden määrittämiseksi, joka on tuotettu alle 30% kasvun inhibitio PCA solulinjoja (tuloksia ei ole esitetty). Näiden kuvaajien perusteella, määritimme, että pitoisuudet dosetakselin (0,01 umol /l), gefitinibi (20 mikromol /l), tai NS-398 (100 mikromol /l) olivat sopivia käytettäväksi yhdistelmänä kokeissa. Co-inkubointi gefitinibin tai NS-398 on hieman paranneltu sytotoksista vaikutusta doketakselin. Kuitenkin kolmen lääkkeen yhdistelmän indusoi on suurempi kuin additiivinen vaikutus solun kasvun estymistä molemmissa solulinjoissa, jotka on paljon enemmän merkitty kuin mitä havaittiin yksi tai kaksi lääkettä yhdistelmä (kuva 3). Analyysi yhdistelmähoidon PC-3M ja DU-145-solut osoittivat, että yhdistelmä indeksi kolmesta aineesta yhdistelmä oli 1 viittaa synergistinen vaikutus (taulukko 2 ja 3).

pitoisuus-vaste vaste kunkin lääkkeen käytettiin pitoisuuden määrittämiseksi, joka indusoi sopiva anti-proliferatiivisen vaikutuksen käytettäväksi yhdistelmähoidossa (tuloksia ei ole esitetty). Solut altistettiin dosetakselia (0,01 umol /l), NS-398 (100 umol /l) ja gefitinibin (20 umol /l) yksinään tai yhdessä 24 tuntia. Arvot ovat keskiarvoja ± SD neljästä itsenäisestä kokeesta. * P 0,05, ** P 0,005 ***, P 0,001 verrattuna kontrolliarvoihin.

Solulinjat

G (uM) B D (nM) B Fa

CI

N (uM) B D (nM)

Fa

CI

PC-3M1050.2151.1535050.2110.98220100.2801.049100100.3080.72640200.3631.118200200.3881.023DU-1451050.1861.8395050.2640.96620100.2651.114100100.3830.92440200.3251.092200200.5850.956Table 2. Effect of gefitinibin (G) tai NS-398 (N) yhdistettynä doketakseliin (D) PC-3M ja DU-145-soluja.

CSV Lataa CSV Solulinjat

G (uM) B N (uM) B Dl (nM)

Fa

CI

PC-3M105050.3020.74520100100.4650.71240200200.6610.699DU-145105050.2640.96620100100.4230.78340200200.6210.872Table 3. Vaikutus gefitinibin (G), NS-398 (N) ja doketakselin (D) yhdistelmän PC-3M ja DU-145-soluja.

Yhdistelmä hoitoja gefitinibin (10, 20, ja 40 uM), NS 398 (50, 100, ja 200 uM), ja doketakseli (5, 10, ja 20 nM) PC-3M ja DU-145. Solulinjoja arvioitiin MTT-määrityksellä. Fa: Fraktio kasvu vaikuttaa huumausaineiden altistuneet solut kuin verrokeilla. CI, yhdistelmä indeksi. Fa ja CI laskettiin CalcuSyn- ohjelmistoa. CSV Lataa CSV

Sytotoksiset aiheutuvaa dosetakseli, gefitinibi, ja NS-398

Virtaussytometriset analyysejä käytettiin määrittämään solujen indusoiman apoptoosin mitä tahansa lääkettä yksinään tai yhdistelmänä. Määrä apoptoottisten solujen kvantitoitiin (kuvio 4A ja C). Sekä doketakseli ja gefitinibi, mutta ei NS-398, hieman lisäsi apoptoottisten solujen verrattuna nähdään käsittelemättömiä PCa soluissa (kuvio 4B ja D). Doketakselia yhdistelmänä gefitinibin tai NS-398, kanssa yhdistettiin määrä kasvaa apoptoottisten solujen verrattuna pelkkään dosetakseliin (kuva 4B ja D). Kolme lääkeyhdistelmä johti huomattavasti suurempi määrä apoptoottisten solujen kuin yksittäinen lääkettä tai kahden lääkkeen yhdistelmä (kuvio 4B ja D).

inkuboinnin jälkeen eri lääkkeitä, solut valmistettiin, kuten on kuvattu Materiaalit ja menetelmät ja apoptoottisten nopeus arvioitiin FACS-analyysit. A ja C: Havainnollinen pistekuvioita kuvaavat tiedot lähellä keskiarvoa ryhmien B ja D. B ja D. apoptoosi laskettiin UR (elinkelvottomat apoptoottisia tai kuolion solujen rate) ja LR (varhainen apoptoottinen solu rate) -alueella. Edustavat tulokset kolmesta eri kokeesta. * P 0,05, ** P 0,005 ***, P 0,001 sitä verrataan kontrolliarvoihin.

Menetys invasiivisen kyvyn aiheuttama dosetakseli, gefitinibi, ja NS-398

in vitro invaasiomääritys käytettiin arvioimaan invasiivisia kyky PC-3M ja DU145 soluja. Invasiivisen potentiaali määritettiin laskemalla solujen määrä, joka tunkeutui Matrigel hyökkäystä kammioon. Kuten on esitetty kuviossa 5A ja C, altistamalla solut 0,005 umol /l doketakseli, 10 umol /l, gefitinibi, tai 50 umol /L NS-398 inhiboi merkittävästi niiden invasiivisen kyvyn (kuvio 5B ja D).

solut olivat käsittelemättömiä (kontrolli) tai altistettiin 24 h 0,005 umol /L doketakseli (D), 10 umol /l gefitinibin (G) tai 50 umol /LNS-398 (N), yksinään tai yhdistelmänä in vitro invaasion määrityksissä, suoritettiin käyttäen transwell kaksikamaristen kammioita, kuten on kuvattu Materiaalit ja menetelmät. Lopussa 24 h määrityksen, tunkeutuvat solut värjättiin ja laskettiin faasikontrastimikroskoopilla (x 200). Edustavia tulokset osoittavat solujen keskimääräinen lukumäärä valtaavat läpi matrigeelin aseta kalvo viidellä satunnaisesti mikroskooppikenttää. * P 0,05, ** P 0,005, ***, P 0,001 sitä verrataan kontrolliarvoihin.

Altistuminen dosetakselia yhdistelmänä gefitinibin tai NS-398 merkittävästi vähentänyt DU-145-solut tunkeutuvat Matrigel verrattuna pelkkään dosetakseliin (kuvio 5D), mutta eroa ei ollut PC-3M soluissa (kuvio 5B). Kolmen lääkeaineen yhdistelmällä oli supra-additiivinen estävä vaikutus solujen invaasio kyky, joka oli vahvempi kuin minkä tahansa kahden lääkkeen yhdistelmä (kuvio 5B ja D).

NF-KB: n, MMP-9: n ja VEGF ilmaisun aiheuttamien muutosten dosetakseli, gefitinibi, ja NS-398

proteiini ja mRNA ja kvantitoitiin tutkia NF-KB, MMP-9 ja VEGF, olivat mukana soluvasteita doketakselille, gefitinibi tai NS-398. Tulokset kuviossa 6A ja 6B osoittavat, että dosetakseli, gefitinibi ja NS-398 kukin erikseen vaimentua NF-KB, MMP-9: n ja VEGF mRNA: n ilmentymisen sekä PCa solulinjoissa. NF-KB: n mRNA: n ilmentyminen oli selvästi alaspäin säätää, kun solut altistettiin lääkkeen yhdistelmiä. Kolmen lääkeaineen yhdistelmät osoittivat voimakkaampaa inhiboivaa vaikutusta kuin kahden lääkkeen yhdistelmiä (kuva 6A ja B).

Soluja kasvatettiin 1% FBS altistettiin 0,01 umol /L doketakseli (D), 20 umol /l gefitinibin (G) or100 umol /LNS-398 (N), yksin tai yhdessä, tai DMSO: kontrollina 24 tuntia. NF-KB: n, MMP-9: n ja VEGF-mRNA: n (A ja B) ja proteiini tasoilla (C ja D) mitattiin, kuten on kuvattu Materiaalit ja menetelmät. Arvot raportoidaan keskiarvona ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta.

Ei gefitinibin tai NS-398 ollut additiivista vaikutusta dosetakselin aiheuttamaa downregulation MMP-9: n ja VEGF-mRNA: n ilmentymistä (kuvio 6A ja B ). Kuitenkin koinkubaation kaikkien kolmen aineilla johti enemmän huomattavan estymisen MMP-9: n ja VEGF tasot verrattuna yhden tai kaksi lääkettä yhdistelmänä PC-3M-soluja (kuva 6A), mutta ei DU-145-soluja (kuvio 6B),

Western blotting tehtiin arvioimaan proteiinin tasot NF-KB: n MMP-9: n ja VEGF altistuksen jälkeen kunkin huumeita. Kuten kuviossa 6C ja 6D, lisäämällä doketakselin gefitinibille ja /tai NS-398 kahden ja kolmen yhdistelmä muuttunut NF-KB, MMP-9 ja VEGF-proteiinin tasot molemmissa solulinjoissa. Nämä tulokset ovat yleisesti ottaen mRNA muutoksia lukuun ottamatta muutoksia NF-KB-proteiinin altistumisen jälkeen yhdistelmä doketakselin ja NS-398, (kuvio 6C ja D). Yhdessä nämä tulokset viittaavat siihen, että edullinen vaste PC-3M solujen altistumisesta doketakseli, gefitinibi ja NS-398 yhdistelmää, vaikuttaa väheneminen NF-KB, MMP-9: n ja VEGF (kuvio 6C).

Effects gefitinibin, NS-398 ja dosetakselilla eturauhasen kasvaimen kasvua in vivo

dosetakseli yhdistelmänä gefitinibin tai NS-398 inhiboi kasvaimen kasvua ja huomattavasti enemmän kuin käsittelemättömien kontrollien tai käsitellyistä eläimistä yhden lääkkeen (kuvio 7). Näissä dual yhdistelmä ryhmiä vain lievää kasvua kasvaimen koon kirjattiin lopussa kokeen 6 viikon ajan tuumorisoluinjektion ja 2 viikon kuluttua hoidon lopettamisesta. Yhdistetty hoito tahansa kahden lääkkeitä tai kaikkien kolmen lääkeaineen oli hyvin siedetty; ei laihtuminen tai muita merkkejä akuutin tai viivästyneen myrkyllisyyden havaittiin.

Hiiret injektoitiin selän kylkeen PC3M soluja. 7 päivän jälkeen (kasvaimen keskimääräinen koko: 0,2 cm

3), hiiriä käsiteltiin, kuten on kuvattu Materiaalit ja menetelmät osassa. Muutos kasvaimen arvioitiin altistumisen jälkeen Doc, gefitinibi ja NS-398 yksin tai yhdistelmänä. Tiedot esitetään keskiarvoina ± SD.

Keskustelu

Doketakseli on tärkeä rooli hoidossa kehittyneitä Eturauhassyövän. Kuitenkin pitkäaikainen hoito johtaa usein sivuvaikutuksia ja kemoterapian resistenssin, jolloin tauti uusiutuu ja huono selviytymistä. Yrittäessään voittaa lääkeresistenssi, viimeaikaiset tutkimukset ovat keskittyneet alhaisen annoksen doketakseli yhdessä muiden lääkkeiden tai äänenvaimennusjärjestelmien joitakin geenejä [22-25].

EGFR ja COX-2 yli-ilmentynyt useissa maligniteetteja mukaan lukien Eturauhassyövän. Yhä useammat todisteet osoittavat, että EGFR ja COX-2 signalointi toiminta on ratkaiseva rooli kehityksessä pahanlaatuisia sairauksia. Molemmat reitit sen vuoksi edellytettävä houkuttelevia kohteita syöpähoitoa ja kemopreventiossa [5-8,26,27]. Näin ollen EGFR ja COX-2-estäjät on tutkittu kemoterapiaa ja syövän ehkäisyyn [28-31].

yli-ilmentyminen EGFR: n ja COX-2 ja vuorovaikutusta EGFR signalointi ja COX-2-aktiivisuuden on osoitettu olevan aiheuttavat tekijät syövän [32,33]. Meidän in vitro ja in vivo tutkimuksissa osoitimme merkittävästi lisäävä säätely EGFR: n ja COX-2: n ilmentymisen pitkälle PCa kudoksen (taulukko 1) ja vastaavan solulinjoissa (kuvio 2). Aikaisemmin on raportoitu, että aktivointi tai yliekspressio EGFR [12,13] ja COX-2 [20] korreloi doketakselin vastus. Tämä sai meidät spekuloida, että samanaikaisesti kohdistaminen EGFR ja COX-2 voi olla tehokkaampi terapeuttinen strategia voittamiseksi dosetakselin vastus kuin kumman tahansa signalointireitin erikseen.

Tuloksemme osoittavat, että samanaikaisesti estämällä EGFR gefitinibin kanssa ja COX-2 NS-398 PCA olleista soluista pieniannoksisen doketakselia johti suotuisa vaikutus solujen kasvun esto (kuva 3). Mediaani vaikutus analyysi käyttäen CI menetelmää Chou ja Talalay vahvisti kohtalaisen synergistinen vuorovaikutus näiden kolmen lääkkeet molemmissa PCa solulinjoissa (taulukko 2 ja 3). Vuonna apoptoosia ja invaasiota määrityksissä yhdistetty vaikutus kolmen lääkeaineen oli hieman suurempi kuin lisäaineen kahdessa solulinjassa. Nämä tulokset ovat sopusoinnussa havaintojen MTT leviämisen testi, mikä viittaa siihen, että tämä uusi lääkeaineiden yhdistelmä voi olla tehokas estämään kasvaimen kasvua ja etäispesäkkeitä.

myös osoitettu, että kolmen lääkeaineen yhdistelmällä liittyi merkittävä apoptoosia (kuvio 4) ja menetys invasiivisen kyvyn (kuvio 5). Aiemmassa tutkimuksessa gefitinibi ei ollut yhden aineen aktiivisuutta, mutta sen yhdistettynä doketakseliin liittyi samalla vasteasteen kehittyneitä Eturauhassyövän kuin pelkästään doketakselia [7]. On myös osoitettu, että COX-2-inhibitio täydentää dosetakseli-indusoidun apoptoosin [17], joka on yhdenmukainen tulosten kanssa tutkimuksessamme. Kuitenkin pitkäaikainen, korkea-annos hoito tämän yhdistelmän liittyy myrkyllisyyden ja sivuvaikutuksia, joka estää sen käytön kliinisessä käytössä. Korkea annos dosetakselia liittyy hermoston vammoja, hematopoieettiset tukahduttamisen ja chemoresistance mikä tekee siitä un soveltuu monille potilaille, joilla on edennyt sairaus

Mikä tärkeintä, osoitimme, että lisäämällä EGFR estäjä ja COX-2-spesifistä estäjää pieniannoksisen doketakseli hoito voi tarjota vähentämisstrategian annokseen liittyviä sivuvaikutuksia. Samalla kohdistaminen EGFR ja COX-2 näytti herkistää PCa solujen vaikutuksia dosetakselin in vitro. Tuloksemme in vivo vastasivat Nämä in vitro löydökset, mikä osoittaa, että yhdistelmähoito on ylivoimainen yksi- tai double-agentti hoitoa. Yhdistelmä minkä tahansa kahden lääkkeen, tai kaikki kolme lääkettä, oli hyvin siedetty. Ei akuutti tai viivästyneet myrkyllisyyttä ei havaittu missään eläimistä.