Krooninen sairaus

tiivistelmä

Rypäle proanthocyanidins (Gmailin sponsoroimia mainoksia), biologisesti aktiivinen komponentti rypäleenkivien, on raportoitu omaavan monenlaisia ​​farmakologisia ja biokemiallisia ominaisuuksia. Äskettäin estäviä vaikutuksia Gmailin sponsoroimia mainoksia eri syöpiin on raportoitu, mutta niiden vaikutukset kohdunkaulan syövän jää epäselväksi. Täällä tutkitaan vaikutus Gmailin sponsoroimia mainoksia kohdunkaulan syövän käyttäen in vitro ja in vivo malleissa. In vitro, hoidossa HeLa ja SiHa-soluja Gmailin sponsoroimia mainoksia johti merkittävään inhibitioon solujen elinkelpoisuuden. Lisäksi tutkimus osoitti, että Gmailin sponsoroimia mainoksia johti annoksesta riippuva induktio apoptoosin syöpäsoluissa. Taustalla olevaa mekanismia on liittynyt lisääntynyt ekspressio pro-apoptoottisen proteiinin Bak-1, vähentynyt ilmentyminen anti-apoptoottisen proteiinin Bcl-2 mitokondrion kalvon potentiaalia, ja kaspaasi-3, mikä viittaa siihen, että Gmailin sponsoroimia mainoksia indusoi kohdunkaulan syöpäsolu apoptoosin kautta mitokondrioiden kautta. Lisäksi, anto Gmailin sponsoroimia mainoksia (0,1%, 0,2% ja 0,4%, w /v), joka täydentää juomavedessä inhiboi merkittävästi kasvaimen kasvua HeLa- ja SiHa-soluja kateenkorvattomissa nude-hiirissä, ja määrä apoptoottisten solujen niiden kasvainten oli myös kasvanut merkittävästi. Yhdessä meidän tutkimukset osoittivat, että Gmailin sponsoroimia mainoksia voitaisiin estää kasvun kohdunkaulasyövän indusoimalla apoptoosin kautta mitokondrion reitin, joka tarjoaa näyttöä siitä, että Gmailin sponsoroimia mainoksia, voi olla mahdollinen chemopreventive ja /tai kemoterapeuttisen aineen kohdunkaulan syövän.

Citation : Chen Q, Liu XF, Zheng PS (2014) Grape Seed Proanthocyanidins (Gmailin sponsoroimia mainoksia) estävät niiden kasvun kohdunkaulasyövän indusoimalla apoptoosi välittyy mitokondrioiden Pathway. PLoS ONE 9 (9): e107045. doi: 10,1371 /journal.pone.0107045

Editor: Burton B. Yang, University of Toronto, Kanada

vastaanotettu 5 maaliskuuta 2014; Hyväksytty: 04 elokuu 2014; Julkaistu: 04 syyskuu 2014

Copyright: © 2014 Chen et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperin.

Rahoitus: Työtä tukivat avustusta National Natural Science Fund for Distinguished nuorten tutkijoiden (nro 30725043), yleinen avustus (nro 81270715) ja nuoret avustus (nro 31201118) National Natural Science Foundation of China. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Kohdunkaulan syöpä on kolmanneksi yleisin syöpä [1] ja neljänneksi yleisin syy syövän liittyvän kuoleman eri puolilla maailmaa naisten [2]. Noin 80% kaikista kohdunkaulan syövistä tapahtuu kehitysmaissa, joissa noin 529000 uusia tapauksia todetaan vuosittain lähes puolet näistä potilaista kuolee [3]. Kehitysmaissa puutteen seulonnan ja rajallinen pääsy asianmukaiset terapeuttisia tilat ja huumeiden ilmaantuvuus ja kuolleisuus kohdunkaulan syövän listalla toinen rintasyövän jälkeen [4]. Monissa tapauksissa on kehittynyt invasiivisen kohdunkaulan syöpiä aikaan diagnoosi, ja potilaat eivät enää ehdokkaita radikaali kirurginen hoito. Vaikka kemoterapiaa ja sädehoitoa ovat edelleen suuria hoitomuotoja invasiivisen kohdunkaulan syövän, viiden vuoden pysyvyys on rajoitettu, koska valmisteen tehosta ja korkea myrkyllisyys monien syöpälääkkeiden. Siksi tutkimisen ja kehittämisen tehokkaampaa ja vähemmän myrkyllisiä terapeuttisia aineita tarvitaan.

Epidemiologiset tutkimukset ovat osoittaneet, että kulutus vihannesten, hedelmistä ruokavalio vähentää merkittävästi syöpäriskiä [5], [ ,,,0],6], joka tarjoaa lupaavia uusia vaihtoehtoja kehitettäessä toimivia chemopreventive moterapeuttisista strategioita erilaisiin syöpiin. Viime aikoina monet fytokemikaalit erilaisia ​​kemiallisia luonnon eristetty hedelmät ja vihannekset on paljastunut olevan potentiaalia chemopreventive ja /tai kemoterapeuttista vaikutuksia syöpiä vastaan ​​[7], [8], kuten katekiinit, bioflavonoids, kasvien estrogeenit ja proanthocyanidins [9], [10]. Viinirypäleen siementen proanthocyanidins (Gmailin sponsoroimia mainoksia), joka on polyphenolic seosta, pääasiassa sisältävät 70% -95% proanthocyanidins, jotka muodostavat dimeerejä, trimeerejä, tetrameerejä, ja oligomeerit /polymeerit monomeeristen katekiinit ja /tai (-) – epikatekiinit [11] – [13] . Gmailin sponsoroimia mainoksia on osoitettu olevan vähäinen toksisuus in vivo ja tehokkaita syöpää ehkäisevistä vaikutuksista eri ihmisen syövissä, [14], kuten ihmisen eturauhassyövän [15], ihmisen paksusuolen ja peräsuolen syövän [16], [17], ihmisen ei-pienisoluinen keuhkosyöpä [ ,,,0],18], [19], haimasyöpä [20], sekä pään ja niskan levy- syöpä [21]. Kuitenkin tällä hetkellä, ei tutkimuksissa on tarkasteltu vaikutuksia Gmailin sponsoroimia mainoksia kohdunkaulan syöpää.

Tässä tutkimuksessa Gmailin sponsoroimia mainoksia havaittiin voitava estää kohdunkaulan syövän kasvua in vitro ja in vivo, joka tarjoaa vakuuttavaa näyttöä farmakologisesta aktiivisuus Gmailin sponsoroimia mainoksia vastaan ​​kohdunkaulan syöpää.

Materiaalit ja menetelmät

Vasta-aineet, reagenssit ja kemikaalit

spesifisiä vasta-aineita Bcl-2, Bak-1 ja β-aktiini ostettiin Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA). Toissijainen vasta-aineita konjugoituna piparjuuriperoksidaasiin hankittiin Thermo Fisher Scientific, Inc. (New York, NY). Anneksiini V-konjugoitu FITC apoptoosin detektioreagenssipakkaus saatiin BD Pharmaceuticals (Franklin Lakes, NJ). JC-1 mitokondrion kalvon potentiaalia havaitseminen pakki ja kaspaasi-3: n aktiivisuuden havaitseminen pakki ostettiin NanJing KeyGen Biotech Co., Ltd (Nanjing, Kiina), ja in situ solukuolema havaitseminen pakki ostettiin Roche Diagnostic Corporation (Indianapolis, SISÄÄN). MTT (3- (4,5-dimetyyli-2-yyli) -2,5-difenyylitetratsoliumbromidi), PI (Propidiumjodidia) ja DAPI (2- (4-amidinofenyyli) -6-indolecarbamidine dihydrokloridi) saatiin Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). Gmailin sponsoroimia mainoksia ostettiin Jianfeng Natural tuote R 86/609 /ETY). Eläin protokollaa käytetään tässä tutkimuksessa hyväksyi Animal Care ja käyttö komitea Medical College of Xi’an Jiaotong yliopisto.

tehokkuuden määrittämiseksi Gmailin sponsoroimia mainoksia vastaan ​​kohdunkaulan syövän kasvua in vivo, kaksi -tuumoriksenografti mallia käytettiin. Malli 1: Hiiret jaettiin satunnaisesti neljään ryhmään kuusi hiirtä ryhmässä, ryhmä 1, valvonta; Ryhmä 2, Gmailin sponsoroimia mainoksia (0,1%, w /v); Ryhmä 3, Gmailin sponsoroimia mainoksia (0,2%, w /v); Ryhmä 4, Gmailin sponsoroimia mainoksia (0,4%, w /v), ja hiiret saivat Gmailin sponsoroimia mainoksia vähintään 10 päivää ennen istutusta kasvainsolujen. Malli 2: Hiiret jaettiin satunnaisesti kahteen ryhmään, jossa on kuusi hiirtä ryhmää kohti, Ryhmä 1, ohjaus; Ryhmä 2, Gmailin sponsoroimia mainoksia (0,4%, w /v), ja hiiret alkoivat saada Gmailin sponsoroimia mainoksia 12. päivänä implantaation jälkeen tuumorisolujen. Eksponentiaalisesti kasvavat HeLa ja SiHa-solut (2 x 10

6 100 ui PBS) injektoitiin ihonalaisesti oikeaan kylkeen kunkin hiiren, vastaavasti. Gmailin sponsoroimia mainoksia liuotettiin tislattuun veteen, ja hiiret saivat Gmailin sponsoroimia mainoksia juomaveden vapaasti. Kontrollihiiret saivat tislattua vettä. Kasvaimen kasvua seurattiin säännöllisesti käyttäen noniusmittaharppia koko kokeen ajan, ja volyymit kasvainten laskettiin käyttäen seuraavaa kaavaa: Volume = (pituus x leveys

2) /2. Päättyessä kokeen, hiiret lopetettiin katkaisemalla niiltä kaula alle 25% uretaanianestesian, ja kasvaimen massa otettiin talteen ja punnittiin. Osa tuumorikudos parafinoidut ja toinen osa jäädytettiin nestemäiseen typpeen edelleen analysointia.

Histopatologinen tutkimus

parafiinileikkeet tuumoriksenograftien poistettiin parafiini ksyleenillä ja rehydratoitiin kautta laskeva pitoisuuksia etanolia rutiinimenetelmien mukaisesti ja värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla (H 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

tulokset

Gmailin sponsoroimia mainoksia esti elinkelpoisuuden kohdunkaulan syövän solujen in vitro

vaikutus Gmailin sponsoroimia mainoksia elinkelpoisuudesta kohdunkaulan syövän solujen arvioitiin aluksi käyttäen MTT-määritystä. Kohdunkaulan syövän solulinjat, mukaan lukien HeLa ja SiHa-soluja, käsiteltiin eri annoksilla Gmailin sponsoroimia mainoksia (0, 20, 40, 60, 80 ja 100 ug /ml) 24, 48 tai 72 tuntia. Kuten on esitetty kuviossa. 1A, hoito HeLa-solujen kanssa Gmailin sponsoroimia mainoksia johti merkittävään vähenemiseen elinkelpoisuuden solujen annoksesta riippuvaisella tavalla (

p

0,05). Erityisesti merkittävä estävä vaikutus havaittiin 48 tunnin kuluttua GSP hoidon (5-85%: n vähennys,

p

0,05). Lisäksi vaikutus oli myös ajasta riippuva (60 ug /ml Gmailin sponsoroimia mainoksia, 25-90%: n vähennys,

p

0,05). Samanlaisia ​​estäviä vaikutuksia havaittiin SiHa käsiteltyjä soluja Gmailin sponsoroimia mainoksia (Fig. 1 B). Kaikki nämä tulokset osoittavat, että Gmailin sponsoroimia mainoksia voivat tehokkaasti estää elinkelpoisuutta kohdunkaulan syövän soluja.

(A) HeLa ja (B) SiHa-soluja käsiteltiin vaihtelevilla annoksilla Gmailin sponsoroimia mainoksia, ja suhteellinen solujen elinkykyä arvioitiin MTT-analyysi 24 h, 48 h ja 72 h. Tulokset ilmaistaan ​​prosentteina kontrolli solujen keskiarvo ± SD oli saatu 3 erotetaan kokeesta. (C) kasvun inhibointi sekä morfologisia muutoksia HeLa ja SiHa-soluja käsiteltiin Gmailin sponsoroimia mainoksia 48 tuntia verrattuna kontrollisolujen (ei Gmailin sponsoroimia mainoksia-käsitelty). Solut valokuvattiin käännetystä kontrasti mikroskopia (suurennus, 40 x).

Lisäksi solujen elinkelpoisuus SiHa ja HeLa-soluissa Gmailin sponsoroimia mainoksia hoidon havaittiin myös alla faasikontrastimikroskoopissa. Kuten on esitetty kuviossa. 1C sen jälkeen, kun 48 tunnin Gmailin sponsoroimia mainoksia hoidon tiheys molemmissa solulinjoissa oli merkitsevästi vähentynyt annoksesta riippuvalla tavalla. Gmailin sponsoroimia mainoksia hoito myös merkittävästi muuttanut morfologia kohdunkaulan syövän soluja. Jälkeen Gmailin sponsoroimia mainoksia hoito, HeLa ja SiHa-soluja koko pieneni, vedetään takaisin niiden naapureiden, menettivät tasainen ja monikulmainen muoto, ja lopulta irrotettiin viljelymaljasta, viittaa siihen, että Gmailin sponsoroimia mainoksia esti kohdunkaulan syövän solujen elävyys indusoimalla solukuolemaa.

Gmailin sponsoroimia mainoksia aiheuttama solukierron pysähtymisen kohdunkaulan syöpäsolut

tyhjentäminen onko kohdunkaulan syövän solujen elävyyden esto Gmailin sponsoroimia mainoksia on mukana muutoksen solusyklin etenemisen, solusyklin analyysi. HeLa- ja SiHa-soluja käsiteltiin eri annoksella Gmailin sponsoroimia mainoksia 48 tuntia, solujen jakauma eri vaiheissa solusyklin analysoitiin virtaussytometrillä. Kuten on esitetty kuviossa. 2A ja B, hoitamiseksi HeLa-solujen kanssa Gmailin sponsoroimia mainoksia johti merkittävään kertymiseen soluja G2 /M-vaiheen korkeammilla konsentraatioilla (40 ug /ml ja 80 ug /ml,

p

0,01). Samanlaisia ​​HeLa solujen tuloksia, merkittävä pidätys solujen G2 /M-vaiheen solusyklin havaittiin myös SiHa-soluissa 40 ja 80 ug /ml: n konsentraation Gmailin sponsoroimia mainoksia (Fig. 2C ja D,

p

0,01). Yhdessä nämä havainnot ehdotti, että Gmailin sponsoroimia mainoksia voivat aiheuttaa pidätys solusyklin G

2 /M vaiheessa, mikä saattaa liittyä estävää vaikutusta muihin Gmailin sponsoroimia mainoksia kohdunkaulan syöpäsolujen.

HeLa- ja SiHa soluja käsiteltiin erilaisilla annos Gmailin sponsoroimia mainoksia 48 tuntia, ja kerättiin. Solusyklin jakautumisen analysoitiin virtaussytometrialla. (A, C) Edustava solusyklin histogrammit HeLa- ja SiHa. (B) hoito HeLa-solujen kanssa Gmailin sponsoroimia mainoksia johti kertymistä solujen G

2 /M vaiheessa. (D) hoito SiHa soluja Gmailin sponsoroimia mainoksia johti kertymistä solujen G

2 /M vaiheessa. Tulokset ilmaistiin keskiarvona ± SD, *

p

0,05

vs.

Valvonta; **

p

0,01

vs.

Ohjaus.

Gmailin sponsoroimia mainoksia indusoi apoptoosin kohdunkaulan syöpäsolujen

Voit selvittää Gmailin sponsoroimia mainoksia aiheuttamaa apoptoosin kohdunkaulan syöpäsolujen, havaitsimme elimellisen muutoksen solun tuman käyttää DAPI värjäystä (kuvio. 3A). Useita HeLa- ja SiHa-soluja käsiteltiin eri annoksilla Gmailin sponsoroimia mainoksia 48 h havaittiin näyttää klassinen apoptoottisia muutoksia, kuten kromatiinin kondensaatio, karyopyknosis ja apoptoottisten kehon muodostumista. Kuitenkin käsittelemätön kontrolli SiHa- ja HeLa-solut harvoin näytetään nämä ominaisuudet, mikä viittaa siihen, että GSP käsittely voi indusoida apoptoosin kohdunkaulan syövän soluja.

HeLa- ja SiHa-soluja käsiteltiin vaihtelevilla annoksilla Gmailin sponsoroimia mainoksia 48 tuntia ja sitten korjattu analyysiä varten apoptoosin. (A) Morfologiset muutokset ydinten tutkittiin fluoresenssimikroskopialla käyttämällä DAPI värjäystä. Nuoli osoittaa ydin- tiivistyminen ja apoptoottisen elin (suurennus, 40 x). Virtaussytometria-analyysi anneksiini V-FITC /PI double-värjätty HeLa (B) ja SiHa (C) solut. Alhainen oikealle (LR) neljänneksessä histogrammien osoittaa alussa apoptoottisia soluja, ja oikeassa yläkulmassa (UR) neljänneksessä osoittaa myöhään apoptoottisia soluja. Hoito HeLa (B) ja SiHa (C) solut Gmailin sponsoroimia mainoksia aiheuttaa merkittäviä lisäyksiä prosenttiosuudet apoptoottisten solujen (myös varhaisessa vaiheessa ja myöhäisessä vaiheessa). Arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD kolmesta kokeesta kahtena kappaleena, *

p

0,05

vs.

Valvonta; **

p

0,01

vs.

Ohjaus.

Lisätietoja kvantitatiivinen analyysi indusoiman apoptoosin Gmailin sponsoroimia mainoksia, solut käsiteltiin erilaisilla annoksilla Gmailin sponsoroimia mainoksia oli analysoitiin virtaussytometrillä käyttämällä anneksiini V-FITC /PI kaksinkertainen värjäystä. Apoptoottisia soluja voitaisiin kirjoitettiin alkuvaiheen apoptoosin (anneksiini V

+ ja PI

-) ja myöhäisen vaiheen apoptoosin (anneksiini V

+ ja PI

+), jotka on esitetty vastaavasti oikeassa alakulmassa (LR) ja ylhäällä oikealla (UR) neljänneksessä FACS histogrammien (Fig. 3B ja D, vasen paneeli). Apoptoosi (mukaan lukien alku- ja loppuvaiheen) molemmissa solulinjoissa edelleen yhteenvetona kuviossa 3 C ja E. prosenttiosuus koko apoptoottisten solujen HeLa-soluissa oli 1,5% kontrolli-soluissa (alkuvaiheen: 0,69% ja myöhäisvaiheen: 0,81%), 3,1% soluissa, joita käsiteltiin 20 ug /ml Gmailin sponsoroimia mainoksia (alkuvaiheen: 0,95% ja myöhäisvaiheen: 2,15%), 17,51% soluissa käsiteltiin 40 ug /ml (alkuvaiheen: 4,21% ja myöhäisvaiheen: 13.30%) ja 25,6% soluissa käsitelty 80 ug /ml (alkuvaiheen: 8,33% ja myöhäisvaiheen: 17.27%). Samoin kuin SiHa solut olivat 1,37% kontrollisoluissa (alkuvaiheen: 0,63% ja myöhäisvaiheen: 0,74%), 3,08% soluissa käsiteltiin 20 ug /ml Gmailin sponsoroimia mainoksia (alkuvaiheen: 1,43% ja loppuvaiheen : 1,65%), 3,56% soluissa käsiteltiin 40 ug /ml (alkuvaiheen: 1,62% ja myöhäisvaiheen: 1,94%) ja 9,56% soluissa käsitelty 80 ug /ml (alkuvaiheen: 3,25% ja myöhäinen -vaiheessa: 6,31%). Kaikki nämä tulokset osoittavat, että Gmailin sponsoroimia mainoksia merkittävästi indusoi apoptoosin (myös varhaisen ja myöhäisen vaiheen apoptoosin,

p

0,01) kohdunkaulan syöpäsoluja.

Gmailin sponsoroimia mainoksia indusoi apoptoosin kohdunkaulan syöpäsolujen kautta alas-säätely Bcl-2 ja säätely ylöspäin Bak-1

sekä Bcl-2 ja Bak-1 proteiinien pelata ratkaiseva rooli apoptoosin säätelyyn [25], [26]. Siten Bcl-2 ja Bak-1 tutkittiin western blot -tekniikalla, onko näiden kahden proteiinit ovat osallisena induktioon kohdunkaulan syövän solujen apoptoosin Gmailin sponsoroimia mainoksia. Edustaja blots varten HeLa ja SiHa solut on esitetty kuvassa. 4A ja C, vastaavasti, ja suhteellisen näiden proteiinien ilmentymisen edelleen laskettiin läpi normalisoinnin p-aktiinin ilmentymistä, ja on esitetty yhteenvetona kuviossa 4 B ja D, vastaavasti. Tulokset osoittivat, että Bcl-2: n HeLa-soluissa käsiteltiin Gmailin sponsoroimia mainoksia 48 tuntia väheni huomattavasti annoksesta riippuvalla tavalla (kuvio. 4B,

p

0,05). Toisaalta, ekspressio Bak-1 kasvoi merkittävästi (Fig. 4B,

p

0,05). Samanlaisia ​​tuloksia havaittiin myös SiHa-solut (Fig. 4D,

p

0,05). Näin ollen, Gmailin sponsoroimia mainoksia indusoi apoptoosin kohdunkaulan syövän solujen kautta alas-säätely Bcl-2 ja säätely ylöspäin Bak-1.

Soluja käsiteltiin vaihtelevilla annoksilla Gmailin sponsoroimia mainoksia 48 tuntia ja sitten korjattu . Solulysaatit valmistettiin ja alistettiin western blot -analyysi. (A) Hoito HeLa-solujen kanssa Gmailin sponsoroimia mainoksia johti annoksesta riippuvainen väheneminen Bcl-2: n ilmentymisen ja nostaa Bak-1 ilmentymisen. (B) suhteellisen Bcl-2 ja Bak-1-proteiinien HeLa-solut laskettu β-aktiinin ilmentymistä, jota käytettiin loading ohjaus. (C) Gmailin sponsoroimia mainoksia merkittävästi vähentynyt ilmentyminen Bcl-2 ja lisääntynyt ilmentyminen Bak-1 SiHa- soluissa. (D) suhteellinen ekspressiotasojen Bcl-2 ja Bak-1 SiHa- soluissa on koottu. Edustaja blotit on esitetty kolmesta itsenäisestä kokeesta, ja arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD. *

p

0,05

vs.

Valvonta; **

p

0,01

vs.

Ohjaus.

Gmailin sponsoroimia mainoksia indusoi mitokondrion kalvon potentiaalia kohdunkaulan syövän solujen ja aktivoitu kaspaasi-3-proteiinin

on hyvin tunnettua, että solunsisäinen translokaatio Bcl-2 ja Bak-1 voi aiheuttaa menetystä mitokondrion kalvon potentiaalia, joka liittyy aloittamisen ja aktivoinnin apoptoottisten prosessin soluihin [27], [28 ]. Tutkia vaikutus Gmailin sponsoroimia mainoksia mitokondrion kalvon potentiaalia, eheyden mitokondrion kalvon solujen määritettiin värjäämällä JC-1, kationinen lipofiilinen väriaine. Kuten on esitetty kuviossa. 5A ja C, HeLa- ja SiHa soluja käsiteltiin Gmailin sponsoroimia mainoksia 48 tuntia analysoitiin FACS. Keskimääräinen prosenttiosuus vihreän fluoresenssin-positiivisia HeLa-soluissa oli 3,10% 0,00 ug /ml, 5,27% 20 ug /ml, 6,90% 40 ug /ml ja 10,83%: 80 ug /ml (kuvio. 5B), kun taas ja SiHa-soluissa oli 0,45% 0,00 ug /ml, 1,55% 20 ug /ml, 8,35% 40 ug /ml ja 35,47%: 80 ug /ml (kuvio. 5D). Nämä tulokset osoittivat merkittävän kasvun vihreän fluoresenssin-positiivisten solujen kasvavia annoksia Gmailin sponsoroimia mainoksia (

p

0,01), mikä viittaa siihen, että Gmailin sponsoroimia mainoksia voivat aiheuttaa kohdunkaulan syöpäsolut menettävät mitokondrion kalvon potentiaalia. Näin ollen, Gmailin sponsoroimia mainoksia indusoi apoptoosin kohdunkaulan syövän solujen kautta Mitokondrioiden kalvojännite.

HeLa (A) ja SiHa (C) Soluja käsiteltiin osoitetulla annoksella Gmailin sponsoroimia mainoksia 48 tuntia ja sitten korjataan, värjättiin JC-1 väriaine, ja lopuksi analysoitiin virtaussytometrialla. Gmailin sponsoroimia mainoksia johti merkittävään mitokondrion kalvon potentiaalia HeLa (B) ja SiHa soluja (D). Kaspaasi-3-aktiivisuus HeLa- ja SiHa-soluissa mitattiin käyttämällä kolorimetristä proteiinimääritys, ja hoito HeLa (E) ja SiHa (F-solut) Gmailin sponsoroimia mainoksia johti annoksesta riippuva nousu kaspaasi-3. GFP: Green fluoresenssi positiivinen. Tiedot esitetään keskiarvona ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta, *

p

0,05

vs.

Valvonta; **

p

0,01

vs.

Ohjaus.

Koska mitokondrion kalvon potentiaalia, sytokromi c vapautuu sytosoliin, mikä aktivoi prokaspaasi 9. apoptosome ja johtaa pilkkominen kaspaasi-3 [29]. Sen jälkeen, aktiivinen pilkottiin kaspaasi-3 voi pilkkoa laajan kirjon kohdeproteiinien ja lopulta johtaa apoptoottisen solukuoleman. Tutkia, onko indusoiman apoptoosin Gmailin sponsoroimia mainoksia on mukana Cascade aktivointi, toiminta kaspaasi-3 määritettiin kolorimetrisellä määrityksellä. Tulokset osoittivat, että käsittely sekä HeLa- ja SiHa-soluja Gmailin sponsoroimia mainoksia 48 tuntia johti merkittävään kasvuun kaspaasi-3-aktiivisuus on annoksesta riippuvalla tavalla (kuvio. 5E ja F), mikä viittaa siihen, että apoptoosin kohdunkaulan syövän indusoiman Gmailin sponsoroimia mainoksia tapahtui kautta aktivointi kaspaasi-3-reitin.

Gmailin sponsoroimia mainoksia esti taudin alkamisen ja etenemisen kohdunkaulan syövän in vivo

Koska Gmailin sponsoroimia mainoksia voisi indusoida apoptoosia kohdunkaulan syövän solujen in vitro, se oli tarpeen testata Gmailin sponsoroimia mainoksia voi estää aloittamista ja kasvaimen kasvua kohdunkaulan syöpäsolujen in vivo. Testata vaikutukset Gmailin sponsoroimia mainoksia aloittamisesta ja etenemisessä ihmisen kohdunkaulan syövän solujen, nude-hiiriä syötettiin Gmailin sponsoroimia mainoksia varten 10 päivää ennen inokulointia kohdunkaulan syövän soluja. Kasvainten kasvua seurattiin kannalta kasvaimen tilavuuden kolmen päivän välein. Päättyessä kokeen, tuumorit irrotettiin sen jälkeen, kun hiiret tapettiin, ja märkäpaino kasvainten määritettiin.

Ensin havaitsimme, että kasvaimen muodostumista HeLa-solujen kontrolliryhmässä tapahtui 12 päivää inokulaation jälkeen; kuitenkin, kasvainten muodostumista Gmailin sponsoroimia mainoksia hoitoryhmässä (Gmailin sponsoroimia mainoksia, 0,2% ja 0,4%), esiintyi suunnilleen 15 päivää inokulaation jälkeen. Samanlaisia ​​tuloksia havaittiin SiHa-soluissa, mikä viittaa siihen, että Gmailin sponsoroimia mainoksia esti aloittamisesta kohdunkaulan syövän. Toiseksi kasvuvauhti HeLa- ja SiHa kasvain hiirissä hoidettu Gmailin sponsoroimia mainoksia oli huomattavasti hitaampaa kuin valvonta (Fig. 6A ja B), joka ehdotti, että Gmailin sponsoroimia mainoksia esti kasvua kohdunkaulasyövän nude-hiirissä. Lopulta, keskimääräinen märkäpaino tuumoriksenograftien muodostuu HeLa-soluissa Gmailin sponsoroimia mainoksia hoito oli merkittävästi pienempi kuin kontrolli (

p

0,01, Fig. 6C ja E). Samoin antaminen Gmailin sponsoroimia mainoksia johti myös vähentää merkittävästi märkäpaino SiHa tuumoriksenograftien (

p

0,01, Fig. 6D ja F). Lisäksi histopatologinen tutkimus tuumoriksenograftien tehtiin alla valomikroskoopilla. Kuten on esitetty kuviossa. 6G ja H, selvää morfologisia muutoksia havaittiin Gmailin sponsoroimia mainoksia käsitellyissä ryhmissä. Verrattuna kontrolliryhmään, kasvaimen kudokset Gmailin sponsoroimia mainoksia käsiteltyjen ryhmien, erityisesti 0,4% Gmailin sponsoroimia mainoksia ryhmä, esitetään laaja karyopyknosis, apoptoottisten kehon muodostumista ja solujen häiriöitä, mikä viittaa siihen, että Gmailin sponsoroimia mainoksia johti apoptoottisten ja nekroottisen kuoleman kohdunkaulan syövän soluja. Yhdessä nämä tulokset viittaavat siihen, että Gmailin sponsoroimia mainoksia voi estää aloittamista ja kasvua kohdunkaulan syövän ksenograftien, osoittaen chemopreventive vaikutus kohdunkaulan syöpää.

Hiiret olivat

sc

istutettiin oikeaan kylkeen 2 x 10

6 syöpäsoluja. (A ja B) Keskimääräinen kasvainten kussakin ryhmässä mitattiin säännöllisesti. Päättyessä kokeen, kasvaimen massa otettiin talteen (C ja D), ja märkä tuumorin paino kirjattiin (E ja F). (G ja H) histopatologista tutkimusta tuumoriksenograftien suoritettiin valomikroskoopin alla, (suurennus, 40 x). Arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD, ja tilastollinen merkitsevyys erot analysoitiin yksisuuntaisella ANOVA, jonka jälkeen Tukeyn testi. *

p

0,05

vs.

Valvonta; **

p

0,01

vs.

Ohjaus.

kemoterapeuttisen vaikutuksen Gmailin sponsoroimia mainoksia kohdunkaulan syövän ksenograftien

arvioimiseksi terapeuttista vaikutusta ja Gmailin sponsoroimia mainoksia on perustettu kasvaimia, hiiriä käsiteltiin Gmailin sponsoroimia mainoksia (0,4%, w /v) on 12

päivänä istutuksen jälkeen, kun kasvaimet olivat jo muodostunut. Kasvainten kasvua seurattiin säännöllisesti, ja havaitsimme, että hoito Gmailin sponsoroimia mainoksia johtaa merkittävään vähenemiseen kasvaimen kasvu. Kuten on esitetty kuviossa. 7A ja B, kasvaimen tilavuuteen Gmailin sponsoroimia mainoksia-käsitellyistä hiiristä olivat merkittävästi pienentyneet verrattuna kontrollihiirillä, mikä viittaa siihen, että Gmailin sponsoroimia mainoksia voi estää kasvua HeLa- ja SiHa tuumoriksenograftien. Lisäksi päättyessä kokeilun, mittaus kasvaimen märkäpaino paljasti, että märkäpaino kasvaimia Gmailin sponsoroimia mainoksia hoidetussa ryhmässä oli merkittävästi vähentynyt verrattuna kontrolliryhmään (Fig. 7C ja D,

p

0,01), ja histopatologinen tutkimus havaitsi myös, että elimellisen muutoksen tuumoriksenograftien että Gmailin sponsoroimia mainoksia hoidetussa ryhmässä oli myös merkittävä verrattuna kontrolliryhmään (Fig. 7E ja F). Näin ollen, nämä tulokset osoittivat lisäksi inhiboiva vaikutus Gmailin sponsoroimia mainoksia kohdunkaulan syövän etenemisessä.

GSP-hoidetussa ryhmässä hiirille annettiin Gmailin sponsoroimia mainoksia (0,4%) on 12

päivänä implantaation jälkeen on kasvainsoluja. (A ja B) Kasvaintilavuudet kirjattiin 3 päivän välein, ja hallinnon Gmailin sponsoroimia mainoksia esti kasvua HeLa (A) ja SiHa (B) tuumoriksenograftien. (C ja D) Kasvaimen massa kerättiin lopussa kokeen, ja märkä tuumorin paino mitattiin. Anto Gmailin sponsoroimia mainoksia johti huomattavaan vähenemiseen märän kasvaimen painoa. (E ja F) Ilmeinen elimellisen muutoksen apoptoottisen solukuoleman havaittiin kasvaimen kudoksessa Gmailin sponsoroimia mainoksia-käsitellyssä ryhmässä, mutta ei verrokkiryhmässä, (suurennus, 40 x). Arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD, **

p

0,01

vs.

Ohjaus.

Gmailin sponsoroimia mainoksia indusoi apoptoosin kohdunkaulan syövän ksenograftien in vivo

Resistance apoptoosiin on yksi tärkeimmistä ominaispiirteistä pahanlaatuisia kasvaimia. Sen määrittämiseksi, onko Gmailin sponsoroimia mainoksia estää kohdunkaulan syövän etenemisen indusoimalla apoptoottisen solukuoleman kasvainsolujen, arvioimme apoptoosin TUNEL-määrityksessä tuumorikudoksissa muodostettu SiHa- ja HeLa-solujen kanssa tai ilman Gmailin sponsoroimia mainoksia hoitoa malli 1. Analyysitulokset on esitetty kuviossa . 8A ja kvantitatiivisesti koottu kuvioon. 8B. Prosenttiosuus TUNEL-positiivisten solujen kasvainkudoksissa HeLa-solut, joita käsiteltiin 0,4% Gmailin sponsoroimia mainoksia oli noin kolminkertainen korkeampi kuin valvonta, ja että SiHa-soluja käsiteltiin 0,4% Gmailin sponsoroimia mainoksia on nelinkertainen korkeampi kuin kontrollilla. Kuten on esitetty kuviossa.