Krooninen sairaus

tiivistelmä

interleukiini-17 (IL-17) on yleistä kasvainkudoksen ja estää tehokkaan anti-kasvain immuunivasteita. Kuitenkin lähde lisääntynyt kasvaimen infiltroituneen IL-17 ja sen osuus syövän etenemisen ihmisen mahasyövän yhä puutteellisia. Tässä tutkimuksessa olemme osallistui 112 mahasyöpäpotilaista, immunofluoresenssilla käytettiin arvioimaan rinnakkaispaikantumisen CD3, CD4, CD56, CD20, CD68, ja syöttösolujen tryptaasi- (MCT) IL-17. Immunohistokemiaa käytettiin arvioimaan jakelun mikroverisuonitiheys (CD34), CD66b

+, CD68

+, ja FoxP3

+ -soluja eri microanatomical alueilla. Ennusteen arvioinnissa määritettiin Kaplan-Meier-analyysi ja Coxin regressiomallin. Tulokset osoittivat, että syöttösolut, mutta ei T-solut tai makrofagit, oli vallitseva solutyyppi tuottaa IL-17 mahasyövän. Merkittäviä positiivisia korrelaatioita välillä havaittiin tiheydet syöttösolujen peräisin oleva IL-17 ja mikro- suonten, neutrofiilit, ja säätelijä-T-solujen (Tregs). Futhermore, olemme havainneet, että suurin osa verisuonten endoteelisolujen ilmentämään interleukiini-17-reseptorin (IL-17R). Kaplan-Meier-analyysi osoitti, että kasvava kasvaimensisäisellä soluttautuneet syöttösoluja ja IL-17

+ soluja, sekä MCT

+ IL-17

+ soluja, liittyivät merkittävästi huonompi kokonaiselossaolo. Nämä havainnot osoittivat, että syöttösolut olivat päälähde IL-17 mahasyövän ja kasvaimensisäisellä IL-17 tunkeutuminen saattanut edistää syövän etenemistä tehostamalla angiogeneesi kasvain mikroympäristössä akselin kautta IL-17 /IL-17R. IL-17-positiivisia syöttösoluista osoitti ennustetekijä mahasyövän, mikä osoittaa, että immunoterapia kohdistaminen syöttösolut voisi olla tehokas strategia ohjaamaan kasvaimensisäisellä IL-17 tunkeutuminen, ja siten kääntää immunosuppression kasvaimen mikroympäristössä, helpottaa syövän immunoterapiassa.

Citation: Liu X, Jin H, Zhang G, Lin X, Chen C, Sun J, et al. (2014) kasvaimensisäisellä IL-17-Positive syöttösolut päälähde IL-17 että ennustaa Survival in mahasyöpäpotilaista. PLoS ONE 9 (9): e106834. doi: 10,1371 /journal.pone.0106834

Editor: Xin-Yuan Guan, The University of Hong Kong, Kiina

vastaanotettu: toukokuu 12, 2014; Hyväksytty: 01 elokuu 2014; Julkaistu: 08 syyskuu 2014

Copyright: © 2014 Liu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: XSL tukivat myöntäminen National Science Foundation of China (81273254 /H1006), https://www.nsfc.gov. cn /. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

viime vuosikymmeninä yhä enemmän huomiota on kiinnitetty mekanismiin (t) karkaaminen immuunitutkimusohjelmasta kasvaimen mikroympäristössä ja erityisesti suhdetta tulehdusta ja immunosuppressio. Yksi tärkeimmistä osista immuunijärjestelmän tulehdukseen, joka liittyy syöpään on hiljattain tunnustettu interleukiini-17 (IL-17). IL-17 on pleiotrooppista toimintoja ja useita tavoitteita, jotka ovat enimmäkseen tutkitaan hiiri malleja, mutta yhä enemmän sidoksissa ihmisen sairauksia [1] – [5]. IL-17 on tunnistettu erilaisissa kasvaimissa, mukaan lukien rintasyövän [6], mahasyöpä [7], [8], peräsuolen syöpä [9], karsinogeeni aiheuttama ihosyöpä [10], intrahepaattinen kolangiokarsinooma [11], ja maksan kohdunkaulan [12]. IL-17-tuottavia soluja kasvaa asteittain numero kasvaimen mikroympäristössä aikana kasvaimen kehittymisen ja korreloivat huonon eloonjäämisen syöpään liittyvien potilailla.

Jo pitkään on sitä mieltä, että suuret solujen lähde IL-17 on CD4

+ T-lymfosyyttien (Th17 solut). Viime aikoina monet tutkimukset kohdistuvat IL-17 ovat osoittaneet, että IL-17 tuotanto ei rajoitu Th17 lymfosyyttien, mutta esiintyy myös erilaisia ​​adaptiivisen ja synnynnäisen immuunijärjestelmän solut, mukaan lukien γδT solut, NKT-solut, NK-solut, syöttösolut, ja granulosyytit [3], [13].

Mahalaukun syöpä on yksi yleisin syöpä tyypit ja johtava syöpään liittyvän kuoleman maailmanlaajuisesti [14]. Yli 1 miljoonaa uutta potilasta on diagnosoitu mahalaukun syöpään vuosittain maailmanlaajuisesti 42,5% heistä on Kiinassa. Perinteiset hoitostrategioita, kirurgia, kemoterapiaa ja sädehoitoa ovat tärkeimmät hoitomuotoja syöpään. Äskettäin immunoterapiassa pahanlaatuisia kasvaimia on saatettu painopiste [15] – [17]. Kuitenkin kasvaimeen liittyvät immunosuppressio on suuri haaste immunoterapiaa, koska se heikentää sytotoksisen aktiivisuuden tehokas T-solujen ja luonnollisten tappajasolujen. Aikana kasvainten kehittymiseen, kasvain immunosuppressio liittyy yleisesti liian suuri ja hallitsematon tulehdus kasvaimen mikroympäristössä [18]. On hyvin tunnettua, että useiden tulehdussolujen tunkeutumista varten kasvainten, mukaan lukien mast-solut, makrofagit alatyyppejä, neutrofiilien, sekä T- ja B-lymfosyyttien, tunnusmerkki syöpään liittyvän tulehduksen [19].

Nykyisessä tutkimuksessa tutkimme solulähteet IL-17, jakelu, toiminnallinen merkitys, ja ennustava arvo IL-17-tuottavia soluja 112 potilailla, joilla on mahalaukun syöpä. Tarjoamme uusia oivalluksia mahdollinen mekanismi (t) IL-17: kasvaimen mikroympäristössä potilailla, joilla on mahalaukun syövän arvioimalla suhde IL-17-tuottavia soluja ja tulehdusvälittäjäaineiden. Tavoitteenamme on tarjota enemmän tietoja, jotka voivat olla hyödyllisiä suunniteltaessa tehokkaampaa syövän immunoterapian, jotka kohdistuvat IL-17.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

Ennen tutkimusta , tietoinen suostumus saatiin kunkin potilaan. Asianmukaiset lupa myönsi eettinen komitea ensimmäisen Affiliated sairaala, Medical College, Zhejiangin yliopistossa.

Potilasnäytteet

Kaikkiaan 112 potilasta välillä helmikuussa 2009, ja maaliskuussa 2010 meidän sairaalassa otettiin . Potilaat, jotka täyttivät seuraavat kriteerit valittiin: a) diagnosoitu mahasyövän perustuu patologia; b) sai tehokas resektio. Poissulkukriteerit olivat potilaat, joilla oli näyttöä kaukainen etäpesäke, todisteita samanaikainen autoimmuunisairaus, HIV, tai syfilis ja potilailla, jotka saivat syöpähoidon ennen leikkausta. Kriteerit Tehokkaan resektio määriteltiin resektio ilman jäljellä kasvain (R0) tai mikroskooppisia jäljellä kasvain (R1) mukaan 7

painos Amerikan yhteisen komitean syövän. Sen jälkeen parantava resektio, potilaat saivat adjuvanttihoitoa perustuu 5-fluorourasiili ja platina mukaan patologisia TNM luokituksen. Potilaita seurattiin 3-6 kuukauden välein mukaan lukien analyysit niiden ääreisverenkierron varten kasvainmerkkiaineet ja ultraääni, ja parannettu CT 6 kuukauden välein, endoskoopin 12 kuukauden välein. Kliiniset ominaisuudet potilaista on esitetty taulukossa 1.

Immunohistokemia ja Immunofluoresenssi

Normaali hematoksyliinillä ja eosiinilla värjäys suoritettiin vahvistaa patologisen diagnoosin, kasvaimensisäisellä alue määriteltiin alle 2 cm raja marginaali mahan kasvain, kun taas normaali alue määriteltiin vähintään 5 cm raja marginaalin mahan kasvain.

immunohistokemia

Immunohistokemia suoritettiin kuten kuvattu edellisessä tutkimuksessa [20 ]. Ensisijainen vasta-aineet vuohen anti-IL-17 (R osuudet IL-17-proteiinia ekspressoivien solujen pinta-alaa kohti markkeri laskettiin. Kaikki analyysit suoritettiin kaksi riippumatonta, sokaisi tarkkailijat (GE Z ja XK L), ja keskimääräinen laskee kahden tarkkailijaa käytettiin seuraavassa analyysissa.

Tilastollinen

mediaaniarvot CD34

+, CD66b

+, CD68

+, FoxP3

+, ja syöttösolujen tryptaasi (MCT

+) ja IL-17

+ soluja käytettiin leikkaus- off määritellä alaryhmiin meidän tuloksia. Studentin t-testejä käytettiin verrattaessa tunkeutumista eri immuunijärjestelmän solujen osajoukkoja osaksi kasvainkudoksessa ja vastaavat normaalia kudosta. Khiin neliö testiä käytettiin välisen suhteen arvioimiseksi IL-17-tuottavia soluja ja kliinis. Korrelaatiot mikroverisuonitiheys (CD34), neutrofiilien (CD66b), makrofagit (CD68), säätelijä-T-solut (FoxP3), ja IL-17-tuottavia soluja arvioitiin käyttämällä Pearsonin tai Spearmanin korrelaatiokerrointa. Kokonaiselossaoloaika määriteltiin väli päivämäärän kirurgian ja kuolinpäivä tai viime seurannasta, kumpi tapahtui aikaisemmin. Survival toiminto arviot laskettiin käyttämällä Kaplan-Meier-menetelmällä. Coxin suhteellisen vaarat mallia käytettiin arvioimaan vaikutusta IL-17-tuottavien solujen eloonjäämiseen. Kaksipuolinen p-arvo 0,05 katsottiin osoittavan tilastollista merkittävyyttä. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen GraphPad Prism (ver. 5.00 Windowsille, GraphPad Software, San Diego, CA, USA) ja SPSS (versio. 16,0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA) ohjelmiston.

tulokset

Tutkimuskanta

Potilaiden ominaisuudet esitetään taulukossa 1. Kaikkiaan 78 urosta ja 34 naarasta otettiin. Ikä tutkimusväestöstä vaihteli 33-89 (mediaani 60) vuotta. 112 mahasyöpäpotilaista, helikobakteeri-infektion tila oli positiivinen 65 potilaalla, kun taas 47 oli negatiivinen. 110 potilasta sai R0 resektion ja 2 potilasta sai R1 resektio. Patologinen TNM luokitukset perustuivat 7

painos Amerikan yhteisen komitean Cancer: 33 potilaalla ei ollut imusolmuke etäpesäke, kun taas 21 oli N1, 22 oli N2, ja 36 olivat N3. 1 potilas kuului Tis, 23 potilasta kuului vaiheessa I, ja 25, 63 potilasta vaiheessa II, III, tässä järjestyksessä. 3 (2,7%) potilaista menetti seurata ja 39 (34,8%) potilaista kuoli havaintojakson aikana. Mediaani seuranta aika oli 51 kuukautta, jotka vaihtelevat 39-57 kuukautta ja kokonaiselinaika (OS) hinnat olivat 83,0% 1 vuoden 71,4%: iin 3 vuodessa ja 65,7% 4 vuotta, vastaavasti.

IL-17 ilmennettiin pääasiassa MCT

+ syöttösoluista

Random näytteitä 20 potilasta koko kohortin käytettiin arvioimaan jakeluun ja fenotyypin IL-17-tuottavia soluja kasvaimeen ja vastaavan normaaleissa kudoksissa (kuvio 1). Olemme löytäneet sytoplasminen IL-17-värjäys soluissa, joiden munanmuotoinen fenotyyppi, kuten aiemmin on kuvattu [13], ja soluissa enemmän epäsäännöllinen muoto. Lisäksi olemme havainneet, että IL-17-ilmentäviä soluja useammin kasvaimensisäisellä kudoksissa kuin normaaleissa kudoksissa. Tunnistaa IL-17

+ solujen tuumorinsisäinen kudoksissa, suoritimme rinnakkaispaikantumisen kokeita ja laskettu osuus IL-17

+ solut kussakin osajoukossa. Ensinnäkin suoritetaan rinnakkais- c-kit, ylimääräinen syöttösoluja markkeri, masto solun tryptaasi (MCT), tulokset osoittivat, että kaikki MCT

+ soluja, jotka ilmentävät c-kit (Fig. S1), mikä osoittaa, että MCT voisi olla käytetään tunnistettu syöttösoluja edustavasti. Soluissa munanmuotoinen fenotyypin, valitsimme useita T-solujen, B-solujen ja NK-solujen markkereita: erityisesti, CD3, CD4, CD20, ja CD56, ja arvioitu niiden rinnakkaispaikantumisen IL-17. Kuitenkin CD20

+ IL-17

+ ja CD56

+ IL-17

+ -soluissa, vaikkakin harvoin ( 1%, kuvio 2, ylhäällä oikealla paneeli). Vaikka satunnaisia ​​CD3

+ IL-17

+ ja CD4

+ IL-17

+ soluja, havaittiin, keskimääräinen prosenttiosuus IL-17

+ soluja sekä osajoukot oli 12,4% ( 2,2-34,1%) ja 8,4% (0-26,7%, Kuvio 2, ylempi vasen paneeli, taulukko 2) Me tutkimme seuraavaksi fenotyypin IL-17

+ solut muodoltaan epäsäännöllisiä; makrofagien on ehdotettu mahdollisia IL-17 tuotantoa [22]. Tämän mukaisesti, jopa 18,5%: n IL-17-tuottavia soluja mahasyövän kudoksissa oli makrofageja (kuva 2, alempi vasen paneeli, taulukko 2). Kuitenkin suurin osa IL-17-tuottavia soluja jäi tunnistamatta. Sen määrittämiseksi, onko maston soluja lisälähteenä IL-17 tuotantoa mahasyövän, suoritimme rinnakkaispaikantumisen IL-17 ja syöttösolujen tryptaasi- (MCT). Huomasimme, että suurin osa IL-17

+ solujen colocalized MCT

+ soluja (40-60% IL-17

+ solujen Kuviossa 2 alempi oikea paneeli, taulukko 2).

neliöt osoittavat erilaisia ​​esimerkkejä (ruskea, esitetty 400-kertainen suurennus).

Osiot vasta- värjättiin DAPI. Merkkiaineet CD3 tai CD4 (vihreä) ja B-solujen markkeri CD20 (vihreä), luonto tappaja (NK) merkki CD56 (vihreä) ja makrofagimarkkeri CD68 (oranssi), sekä syöttösolujen tryptaasi- (MCT) (oranssi) näkyvät 400 × suurennoksilla.

Jakelu MCT

+ IL-17

+ solujen ja korrelaatio kliinis-

Varmista, että masto-soluista peräisin IL-17 on tärkeä solujen lähde IL-17 mahasyövän mikroympäristössä, suoritimme immunofluoresenssilla kaksinkertainen värjäys kasvaimensisäisellä ja normaalissa näytteessä kudoksia 112 potilaasta. Suurin osa IL-17

+ solujen kaksinkertainen värjätty voimakkaasti MCT (14-68,1% IL-17 ilmentävien solut) kasvaimensisäisellä kudoksissa (Fig. 3A). Huomasimme, että tiheydet MCT

+ syöttösoluja ja IL-17

+ solut kasvaimensisäisellä kudoksissa todettiin olevan merkittävästi korkeampi kuin normaaleissa kudoksissa (MCT

+

T vs. MCT

+

N, 10,02 ± 4,06 vs. 8,66 ± 3,29, p = 0,0023, IL-17

+

T vs. IL-17

+

N, 8,16 ± 3,89 vs. 7,18 ± 3,48, p = 0,0165; kuvio. 3B). Lisäksi tiheys MCT

+ IL-17

+ -solujen kasvaimensisäisellä kudoksissa oli merkittävästi korkeampi kuin normaaleissa kudoksissa (4,55 ± 2,48 vs. 3,93 ± 2,24, p = 0,0154; kuvio. 3B).

. Syöttösoluille erittäin express IL-17 mahasyövän (yhdistyivät keltainen, oikea paneeli). B. MCT

+ solujen ja IL-17

+ soluja, sekä MCT

+ IL-17

+ -solujen kasvaimensisäisellä kudoksissa oli merkittäviä korkeammat kuin vastaavien normaalien kudosten.

tunnistaa merkittäviä assosiaatioita kliinis ja MCT

+ IL-17

+ soluja, chi-neliön testi tai Fisherin testiä käytettiin (esitetty taulukossa 1). Kuitenkin MCT

+ IL-17

+ solujen kasvaimensisäisellä kudoksissa ei korreloinut kliinisiä ominaisuus arvioitiin myös helikobakteeri-infektion tila, kasvaimen koko, eriytyminen ja luokittelu TNM.

Lisääntynyt kasvaimensisäisellä MCT

+ cell, IL-17

+ solu, ja MCT

+ IL-17

+ solutihe- korreloivat huono eloonjäämiseen

yhden muuttujan analyysiin, (taulukko 3), tavanomaisen kliinis-ennustava huono kokonaiselinaika (OS) on huonosti eriytetty kasvaimet, ja kehittyneet TNM. Edelleen analyysiä, numerot MCT

+ soluja, IL-17

+ soluja, ja MCT

+ IL-17

+ solut jaettiin kahteen ryhmään: ylä- ja alapuolelle mediaaniarvot. Kaplan-Meier selviytymisen käyrät valmistettiin käyttäen log-rank-testi edelleen tutkia yhdessä OS. Potilaat, joilla on suuri määrä kasvaimensisäisellä soluttautua MCT

+ soluja ja IL-17

+ soluilla oli huonompi OS kuin vähemmän numerot MCT

+ soluja (p = 0,004) ja IL-17

+ solujen (p = 0,014, Fig. 4B). Lisäksi potilaat Useammat MCT

+ IL-17

+ soluilla oli lyhyempi eloonjäämisen kesto kuin vähemmän numerot MCT

+ IL-17

+ soluja (p = 0,018, Kuva. 4C).

(A) yleinen eloonjääminen kaikkia rekisteröityjä 112 potilasta (B) korkean kasvaimensisäisellä IL-17

+ solujen tunkeutuminen siirrettävä merkittävän suuren kuoleman riskiä. (C) Potilaat, joilla on korkea MCT

+ IL-17

+ cell kasvaimensisäisellä ollut merkittävä huonompi selviytyminen kuin potilailla, joilla on alhainen MCT

+ IL-17

+ solu.

muuttujat P 0,1 Yksiulotteisissa analyysejä sisältyivät monimuuttuja Coxin suhteellisen vaarat analyysi, huomasimme, että molemmat kasvaimensisäisellä MCT-positiivisia soluja (HR = 2.057; 95% CI: 1,048-4,037; p = 0,036) ja TNM vaiheessa (HR = 3,832; 95% CI: 1,679-8,745; p = 0,001) olivat riippumattomia ennustetekijöitä (taulukko 3). Mikä osoittaa, että potilaat Useammat kasvaimensisäisellä MCT-positiiviset solut olivat lähes 2,1 kertaa suurempi todennäköisyys kuolla kuin vähemmän numerot näiden solujen.

Immuunihistokemiallinen ominaisuudet ja yhdistyksen välistä MCT

+ IL-17

+ solutiheys ja immunokemiallinen muuttujien

IL-17 on tunnettu pro-inflammatorinen tekijä, joka saattaa edistää kasvaimen kasvua edistämällä angiogeneesiä ja rekrytointi neutrofiilien, sekä rekrytointia muiden tulehdus- ja immuunijärjestelmän solujen tyyppejä. Tutkia mahdollisuuksia mekanismi (t) IL-17 kertymistä kasvaimeen mikroympäristössä huonon ennusteen. Suoritimme immunohistokemiallisesti eri tulehduksen välittäjäaineita, varsinkin, mikroverisuonitiheys, neutrofiilit, makrofagit ja säätelijä-T-solujen koko tutkimuspopulaatiossa (

n

= 112). Edustavia aloilla CD34

+ mikro- suonten, CD66b

+ neutrofiilejä, CD68

+ makrofagien ja FoxP3

+ säätelijä-T-lymfosyyttien kasvaimensisäisellä ja normaali kudos on esitetty kuvassa. 5A. Tiheydet kasvaimensisäisellä CD34

+ mikrosuonten (p = 0,0030), CD66b

+ neutrofiilejä (p 0,0001), CD68

+ makrofagien (p 0,0001) ja FoxP3

+ säätelijä-T-lymfosyyttien (p 0,0001). Kuitenkin korrelaatiot MCT

+ IL-17

+ solut ja neutrofiilit (r = 0,2578, p = 0,0061) ja Tregs (r = 0,2898, p = 0,0021) oli samanlainen kuin IL-17

+ soluja (kuviossa 6).

(A) CD34

+ mikroverisuonitiheys. (B) CD66b

+ neutrofiilejä. (C) CD68

+ makrofageja. (D) FoxP3

+ lymfosyyttien. P-arvot määritettiin Pearsonin korrelaatiokerroin CD34

+ mikrosuonten ja FoxP3

+ lymfosyytit, kun taas Spearmanin korrelaatiokerroin käytettiin CD66b

+ neutrofiilit ja CD68

+ makrofagien analyysi.

rinnakkaispaikantumisen välillä IL-17R ja erilaisia ​​tulehdus- ja immuunisolujen

jotta tutkia mekanismi (t) alla tiiviisti suhdetta IL-17 tuottavat solut ja MVD, sekä muut tulehdus- ja immuunijärjestelmän solut. Suoritimme rinnakkaispaikantumisen kokeiden arvioimiseksi IL-17R: n verisuonten endoteelisoluissa, neutrofiilien, makrofagien ja säätelijä-T-solujen (satunnaisesti valituista, n = 20). Tuloksemme osoittivat, että suurin osa verisuonten endoteelisolujen ilmentävät IL-17R (6-58% verisuonten endoteelisolujen; Kuva7) in kasvaimensisäisellä kudoksissa. Yhdenmukainen hypoteesia, tuskin neutrofiilien ja säätelijä-T-solujen havaittiin ilmentävät IL-17R. Mielenkiintoista on, löysimme IL-17R on tuumorisolujen pinnalla. (Fig. S2).

Keskustelu

Immuunijärjestelmä paeta avainasemassa synnyssä ja syövän kehittymisen. Sovittelijat ja solujen efektorien immuunijärjestelmän ovat tärkeä osa immunosuppressiivisen kasvain ympäristössä. Rooli interleukiini-17, kuten pro-inflammatorinen tekijä, on herättänyt huomiota viime aikoina syöpiin, autoimmuunisairauksien, ja immuunipuutossairaudet. CD4

+ Th17 soluja pitkään ajateltiin olevan ainoa solu lähde IL-17 ihmisen kasvaimen microenvironment [23]. Kuitenkin yhä enemmän todisteita on osoittanut, että eri solutyyppejä pystyy tuottamaan IL-17 [3], [24]. Syöttösolut, tärkeä solujen komponentti luonnollinen immuniteetti, on tunnustettu tärkeäksi solujen lähde IL-17. Itse asiassa ne voivat tuottaa ja /tai erittää erilaisia ​​sytokiineja ja kemokiinien, jotka edistävät immuunipuolustuksen ja tulehdusta, mukaan lukien leukosyyttien ja verisuonten solujen lisääntymistä. Viime aikoina on osoitettu, että syöttösolut tunkeutuu kasvaimen mikroympäris- kautta SCF /c-kit-signalointireitin, joka johtaa pahenemista tulehduksen ja immunosuppression [25]. Mast-soluista peräisin IL-17 on tutkittu useissa autoimmuunisairauksissa, mukaan lukien nivelreuma [13], psoriaasi [26], ja spondylarthritis [27], jossa syöttösolut ovat tärkeä solujen lähde IL-17, ja osoittivat vahva korrelaatio synnyssä ja taudin etenemiseen. Kuitenkin lähde lisääntynyt kasvaimeen infiltroivien IL-17 tasolla, ja osuus kasvaimen edistymistä, sekä taustalla olevan mekanismin (s), pysyi huonosti.

Esillä olevassa tutkimuksessa havaittiin että IL-17-ilmentäviä soluja ihmisen mahasyövän näytteet omasivat kaksi fenotyyppiä. Jotkut olivat melko säännöllinen fenotyyppi, ovoid /plasmasolumaisiin muotoja, mutta jotkut olivat enemmän epäsäännöllisiä muotoja. Lisäksi olemme havainneet, että IL-17

+ lymfosyyttien käsitti vain -10%: n IL-17-proteiinia ekspressoivien solujen, toisin kuin aiemmissa tutkimuksissa ihmisen kasvainten mikroympäristöihin [7], [23]. Äskettäin Bo Wang et ai. [28] todettiin, että syöttösolut, mutta ei T-soluihin tai makrofageja, olivat hallitseva tyyppi ilmentävät IL-17 ruokatorven okasolusyöpä kudoksiin. Kiinnostavaa kyllä, Huomasimme myös, että suurin osa IL-17

+ solujen colocalized MCT

+ soluja (14-68,1% IL-17

+ solut), mikä osoittaa, että masto solut olivat vallitseva solulähdettä IL-17 ihmisen syöpien. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että IL-17 heikentää immuunijärjestelmän valvonnan ja edistää angiogeneesiä ja syövän syntymistä kasvaimissa [1], [29], mikä viittaa siihen, että tulehduksen ympäristön ohjaavat tasot endogeenisen IL-17 voi myötävaikuttaa kasvaimen etenemistä. Havaintomme ehdotti, että taso IL-17-ilmentäviä soluja oli suurempi kasvainkudoksessa näytteissä kuin vastaavat normaalin kudoksen näytteissä ja että masto-soluista peräisin IL-17 oli runsaasti ihmisen syöpien. Kaplan-Meier-analyysi paljasti, että kasvaimensisäisenä IL-17

+ solujen ja kasvaimensisäisenä MCT

+ IL-17

+ solut korreloivat elinajan ihmisen mahalaukun syöpäpotilailla.

tarkkaa mekanismia (t) taustalla yhdistyksen välillä lisääntyvää IL-17 kasvaimen mikroympäristössä ja syövän etenemistä pysyvät (t) epäselvä. Tutkimus kertoi, että IL-17 edistää kasvainten kehittymistä rekrytoimalla myelooisen johdettujen suppressorigeenien soluja (MDSCs), kuten CD11

+ Gr1

+ soluja, kasvain ympäristölle [30]. Samaan aikaan, useat tutkimukset ovat osoittaneet, että IL-17 voi parantaa kasvua verisuonten endoteelisolujen ja vaikuttaa angiogeenisten kehitystä lisäämällä sytokiinien, kuten TNF-α, IL-8, ja VEGF: n [29], [31], mukaan lukien tutkimus, joka on raportoitu IL-17-välitteisen paracrine verkko edistää kasvainten vastustuskyvyn antiangiogeenisestä hoito [32]. Tämän mukaisesti meidän tulokset osoittivat merkittävän korrelaation MVD ja IL-17

+ soluja. On hyvin tunnettua, että syöttösolut voivat stimuloida verisuonten lisääntymistä [33], tutkimuksessamme löysimme enemmän merkittävä korrelaatio MVD ja MCT

+ IL-17

+ soluja, jotka osoittavat, että nämä IL-17 tuottavat syöttösoluista on voimakkaampi vaikutus edistämiseen angiogeneesiin. Lisäksi olemme havainneet, että suurin osa verisuonten endoteelisolujen ilmentämään IL-17R, enemmän kiinnostavaa, olemme huomanneet, että mahalaukun syövän solut olivat positiivisia IL-17R. Aiemmat tutkimukset ovat raportoineet, että IL-17R ilmentyminen liittyi kasvaimen pahanlaatuisuuteen [34], [35]. Yhdistämällä nämä tulokset, IL-17 tunkeutumisen voi ovat edistäneet syövän etenemisen edistämällä angiogeneesiä kasvaimen mikroympäristössä akselin kautta IL-17 /IL-17R, toiminto verisuonten endoteelisolujen ja kasvainsoluissa. Toinen mahdollinen mekanismi piilee tulehdussolujen solujen IL-17, kuten neutrofiilit ja makrofagit. On osoitettu, että IL-17 edistää syövän etenemisen suoraan vaikutuksia rekrytointi neutrofiilien [36], [37]. Tutkimuksessamme kasvaimeen IL-17

+ solut ja MCT

+ IL-17

+ solujen molemmat osoittivat heikkoa, mutta merkittävä, korrelaatiot määrä tuumorinsisäinen neutrofiilien, kun kasvaimeen makrofagit osoittivat ei ole merkitystä. Vaikka tuskin neutrofiilit havaittiin ilmentävien IL-17R. Mast-johdettu IL-17 voi olla keskeinen rooli rekrytoinnissa neutrofiilien mukaan CXC-kemokiinien, kuten CCL2, kuten aiemmin on kuvattu [38]. Todisteet eri syöpiä osoittaa, että osuus Regulatory T-solujen (Tregs) on korkeampi kasvainkudoksessa potilailla, joilla on useita pahanlaatuisia kasvaimia [39], [40]. On raportoitu, että Tregs rekrytointi oli keskeinen rooli luoda VEGF-rikas kasvain microenvironment ja lisäämällä tuumoriangiogeneesissa [41]. Edellinen tutkimus on raportoitu säätelevän roolin syöttösolut, että ne ovat vuorovaikutuksessa tavanomaisten CD4

+ T-solut tuottamaan IL-10 tuottavat säätelijä-T-solujen akselin kautta ICOSL /ICOS [42]. Ganeshan et ai. [43] kertoi, että Tregs todella parantaa, pikemmin kuin estävät, syöttösolukasvainten IL-6, pleiotrooppinen sytokiini, joka on osoitettu keskeinen rooli säätelyssä tasapaino IL-17-tuottavia soluja ja FoxP3

+ T sääntelyn soluja. Näin ollen voimakas korrelaatio välillä voi olla Tregs ja IL-17-tuottamiseen syöttösoluja. Tutkimuksessamme korrelaatio IL-17

+ solut ja Tregs oli heikko, mutta merkittävä, sekä MCT

+ IL-17

+ solut. Nämä tulokset osoittivat, että IL-17 tuottavat syöttösolut saattaa aiheuttaa erilaistumista ja kertymistä Tregs erittämällä eri sytokiinien ja kemokiinien, joita on vielä selvittämättä.

Tietääksemme tämä on ensimmäinen raportti fenotyypin ja jakelu kasvaimensisäisellä IL-17-tuottavia soluja ja niiden kliinistä merkitystä, ja erityisesti prognostinen arvo kasvaimensisäisellä mast-soluista peräisin IL-17 mahasyövän. Tuloksemme osoittavat, että suurin osa IL-17-tuottavien solujen olivat syöttösoluja, kun taas IL-17

+ lymfosyytit olivat harvinaisia. Lisäksi olemme havainneet, että kasvaimensisäisenä IL-17

+ solujen ja kasvaimensisäisenä MCT

+ IL-17

+ solut korreloivat elinajan. Kuitenkin mekanismi (t) syöttösolujen infiltraatio kasvain mikroympäristön ja erityinen mekanismi välillä yli-ilmentävät IL-17 ja tulehdus- ja immuunisolujen edelleen suureksi osaksi tuntemattomia. Lisäksi erottava tallennettujen ja erittävien IL-17 oli vielä havainnollistaa. Niinpä prospektiiviset tutkimukset keskittyvät syöttösolujen rekrytointi ja IL-17 tuotantoa mahassa kasvain mikroympäristön ovat tarpeen arvioida ennustearvo kasvaimensisäisellä masto-soluista peräisin IL-17 edelleen.

tukeminen Information

Kuva S1.

rinnakkaispaikantumisen välillä c-kit ja syöttösolujen tryptaasi- (MCT).

doi: 10,1371 /journal.pone.0106834.s001

(TIF) B Kuva S2.

rinnakkaispaikantumisen välillä IL-17R (vihreä) ja neutrofiilien, makrofagien, säätelijä-T-solujen (oranssi).

doi: 10,1371 /journal.pone.0106834.s002

(TIF) B

Kiitokset

Kiitämme Lin Zhou, Haiyang Xie ja Xiaowen Feng Key Lab yhdistettyjen Multi-Organ Transplantation, Ministry of Public Health, ensimmäinen Affiliated sairaala, School of Medicine, Zhejiangin yliopistossa teknistä tukea immunohistokemia ja Immunofluoresenssi.