Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Lynch oireyhtymä (LS) on perinnöllinen ehdolla, että lisää riskiä kohdun limakalvon ja muiden syöpien. Tunnistaminen kohdun limakalvon syöpä (EY) potilailla, joilla on LS on mahdollisuus vaikuttaa elintärkeitä toimia. Tavoitteena oli tutkia esiintyvyys LS keskuudessa EY potilaiden väestömme.

Methods

Universal seulonta LS haettiin peräkkäinen EY. Kasvain testaus käyttäen mikrosatelliittien epävakaus (MSI), immunohistokemia (IHC) varten mismatch-korjaus (MMR) proteiinia ilmentyminen ja

MLH1

-methylation analyysi, tarvittaessa, käytettiin valita LS-epäilyttävät tapaukset. Sekvensointi vastaava MMR geenien suoritettiin.

Tulokset

Sata ja seitsemänkymmentäkolme EY (keski-ikä 63 vuotta) seulottiin. Kuusikymmentä potilasta (35%) oli epänormaali IHC tai MSI tuloksia. Sen jälkeen

MLH1

metylointianalyysi 27 tapausta pidettiin epäluuloinen LS. Näistä 22 otettiin yhteyttä ja ohjattiin perinnöllisyysneuvonta. Yhdeksäntoista nähden geneettinen testaus ja kahdeksan todettiin LS. Mutaatiot olivat yleisempiä nuoremmilla potilailla (alle 50 vuotta). Kolme tapausta oli joko ehjänä IHC tai MSS ja vahvistavat tarvetta toteuttaa EY seulonta molemmilla tekniikoilla.

Johtopäätös

esiintyvyys LS keskuudessa EY potilailla oli 4,6% (8/173); ennakoivan taajuudella 6,6% Espanjan väestöstä. Universal seulonta EY LS on suositeltavaa.

Citation: Egoavil C, Alenda C, Castillejo A, Paya A, Peiro G, Sánchez-Heras A-B, et ai. (2013) yleisyys Lynch oireyhtymä keskuudessa, joilla on vasta diagnosoitu Kohdun limakalvon syöpiä. PLoS ONE 8 (11): e79737. doi: 10,1371 /journal.pone.0079737

Editor: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japani

vastaanotettu: 09 heinäkuu 2013; Hyväksytty 23 syyskuuta 2013 Julkaistu: 07 marraskuu 2013

Copyright: © 2013 Egoavil et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Conselleria Sanidad Comunidad Valenciana, Espanja (AP /177/10) (https://www.san.gva.es/); Biomedical Research Foundations of Alicanten yliopistollisen sairaalan (PI14 /2006 ja Ni02: a /2011) (https://www.dep19.san.gva.es/); ja Elche yliopistollisen sairaalan, Espanja (FIBElx-CO11 /03) (https://www.dep20.san.gva.es/). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

tunnistaminen perinnöllisiä muotoja neoplasioihin keskuudessa syöpäpotilaiden on ratkaisevan tärkeää parempaan hallintaan ja ehkäisyyn muiden oireyhtymään liittyvien maligniteetit potilaille ja heidän perheilleen [1]. Arvioitu ilmaantuvuus ja kuolleisuus lasken kohdun limakalvon syöpä (EY) Euroopassa vuonna 2012 oli 58300 ja 24400, vastaavasti. EY osuus on noin 4% kaikista syövistä naisilla [2]. Ilmaantuvuus kasvaa ja noin 5% tapauksista ajatellaan johtuvan geneettinen taipumus [3].

Lynch oireyhtymä (LS) on autosomaalinen dominantti aiheuttaman tilan mutaatio yhteensopimattomuuden korjausjärjestelmä (MMR) geenien

MLH1

,

MSH2

,

MSH6

ja

PMS2

[4]. Mutaation kantajia ovat vaarassa iällä peräsuolen syöpä (CRC), ja EY kirjo muita kasvaimia, kuten munasarja-, maha-, ohutsuolen, haiman, maksan ja sapen, aivot ja urothelial kasvaimet [5]. Kumulatiivinen elinikäinen riski EY naisten harjoittajien MMR mutaatio on 50-60% ja ylittää riski CRC [6].

tunnistaminen potilailla, joilla on EY: n ja LS on mahdollisuus vaikuttaa eliniän säästö interventioiden avulla henkilökohtaista neuvontaa ja intensiivinen syövän valvonta varhainen havaitseminen, seulonta ja ehkäisy muiden LS-liittyviä syöpiä. Geneettinen testaus on nyt hyväksytty osa potilaiden hoitoon tällaisia ​​syöpiä. Mallorca ryhmä [7] suositellaan testata kaikki tapaukset CRC (tai yksilöitä, joiden CRC vuotiaita 70 vuotta) ja kaikissa tapauksissa, joissa EY (tai henkilöt, joiden EY-vuotiaiden 70 vuotta) immunohistokemiallisesti (IHC) MMR geenien tai kromosomi mikrosatelliitti epävakaus (MSI).

esiintyvyys LS keskuudessa valitsemattomat tapauksia CRC on tutkittu hyvin. Tulokset osoittavat, että 0,7%: sta 3,6% kaikista tällaisissa tapauksissa saattaa johtua ituradan mutaatioista MMR geenien [8-12]. Päinvastoin, tutkimus LS-liittyviin hankittua kehittyy edelleen ja vähän tiedetään geneettiset tekijät potilailla, joilla on EY. Tämänhetkiset tiedot yleisyydestä LS keskuudessa valitsemattomat tapausta EY Pohjois-Amerikassa välillä 1,8% ja 4,5% [13-15]. Merkittäviä eroja yleisyydessä perinnöllinen oireyhtymien havaitaan usein eri populaatioissa [12]. Kirjoittajat raportoivat yleisyyttä LS peräkkäinen sairastavien potilaiden EY Espanjan väestöstä.

Materiaalit ja menetelmät

Eettiset kysymykset

Tuumorikudos ja verinäytteet potilaille, joilla on EY saatiin Biopankkiverkosto Alicanten yliopistollisen sairaalan (HGUA) Espanjassa. Kirjallinen suostumus sisällytetään Biopankkiverkosto saatiin kunkin potilaan. Eettinen komitea HGUA hyväksyi tutkimuksen.

Oppiaineet

Sata seitsemänkymmentäkolme peräkkäisen joilla on vasta diagnosoitu hankittua olivat mukana tässä tutkimuksessa. Ne diagnosoitiin ja hoidettiin HGUA 2004-2009. Kullekin tapauksessa kaikki käytettävissä hematoksyliini- eosiinilla dioja tarkistettiin ja luokitellaan joko 2003 Maailman terveysjärjestön kriteerien [16]. Muita histopatologia tallennetusta olivat läsnä lymphovascular invaasion (LVI), kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä (TIL), myometrisia hyökkäyksen, ja laatu ja vaihe mukaan International Federation Naistenklinikka (FIGO). Adenokarsinomia luokiteltiin endomet- (tyyppi I) ja erityinen (tyyppi II) mukainen Peiró et ai 2013 [17]. Suvussa syöpä arvioitiin mukaisesti tarkistettujen Bethesda suuntaviivat (RBG) ja Amsterdam II kriteerit (Amii) [18].

immunohistokemia MMR proteiinien

IHC analyysin ilmaus MLH1, MSH2, MSH6 ja PMS2 proteiinit suoritettiin käyttäen kudosta mikrosirulla (TMA). Kudossylintereitä 1 mm halkaisijaltaan irrotettiin valituilta alueilta ja sisällytetty vastaanottajan parafiiniblokkiin käyttäen TMA väline (MTA-1, Beecher Instrument, Wisconsin USA). Neljän millimetrin paksuisia leikkeitä valmistettiin TMA näytteistä. Kalvot sijoitettiin Autostaineriin Link48 (Dako, Tanska) ja inkuboitiin 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, joilla on primaarinen vasta-aineita MLH1 (klooni G168-15, 01:30, BD Biosciences Pharmingen, Franklin Lakes, NJ, USA), MSH2 ( klooni 44, laimennos 1: 100, BD Transduction Laboratories, San Diego, CA, USA), MSH6 (klooni FE11, laimennus 1:30; Calbiochem, Merck Millipore, Billerica, MA, USA) ja PMS2 (klooni A16-4; laimennus 1: 100; BD Biosciences Pharmingen). Vasta-aineet havaittiin käyttämällä EnVision tekniikkaa (Dako-Biotech). Kasvaimen solut arvostellaan negatiivinen proteiinin ilmentymisen vain, jos niillä ei ollut IHC värjäytymistä näytteessä, joissa normaalit kohdun limakalvon solut ja strooman solut värjättiin samanaikaisesti. Tulokset pidettiin epäluotettavina niissä tapauksissa, joissa ei ole immunovärjäystä normaalin kudoksen voitiin osoittaa. Käsitelty IHC objektilasit sokaissut arvioitiin kaksi patologit (CE ja CA) [19].

DNA: n eristämiseksi

Perimän DNA eristettiin parafiinivahaa-upotetut tuumorikudoksia. Kaksi 1 mm kudossylintereitä lävistettiin pois kasvain alat aiemmin. DNA ääreisverivalkosolut tai parafiinivahaa-sulautettujen nontumorous kohdun limakalvon kudos oli myös poimittu niissä tapauksissa, joissa LS epäiltiin. Dneasy Veren Tissue Kit ja QiaCube (Qiagen, Valencia, CA, USA) automaattinen järjestelmä käytettiin eristämään DNA, mukaan valmistajan protokollaa.

microsatellite analyysi ja MMR tila

MSI tila analysoitiin käyttämällä Multipleksoituja polymeraasiketjureaktio (PCR) kuviot on monomorphic toistuvien markkereita: BAT26, BAT25, NR21, NR24 ja nR 27 [20]. Amplikonin havaitseminen ja analyysi suoritettiin käyttäen ABI Prism 3130 Genetic Analyzer, ja GENOTYPER ohjelmistot (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA), tässä järjestyksessä. Diagnoosi MSI pidettiin positiivisena, kun kaksi tai useampia markkereita osoitti muuttuneen kuvion. Kasvaimet, MSI ja /tai menetystä ilmentymisen tahansa MMR-proteiinien katsottiin MMR-puutteellinen. Kasvainten puuttuminen MSI ja säilöttyjen MMR-proteiinin ilmentymisen katsottiin MMR-positiivisia kasvaimia.

MLH1

promoottori hypermetylaation analyysi

Kotelot menetys MLH1 ilmaisun testattiin

MLH1

metylaation kasvaimen DNA. Tapauksista, joissa tällainen metylaatio analysoitiin sitten

MLH1

metylaatio DNA verisolujen tunnistamaan epäillyt perustuslaillisen

MLH1

epimutations (kuvio 1). Käytimme metylaatiospesifistä multiplex ligaatio riippuva koetin-amplifiointitekniikka (MS-MLPA Kit ME011, MRC-Holland, Amsterdam, Alankomaat) tutkia metylaatiostatuksen

MLH1

mukaan valmistajan protokollia. Kohdealueilla varten

MLH1

geenien mukaan hypermetylaation sijaitsevat C ja D alueilla

MLH1

promoottori (mistä nukleotidikohdissa -248–178 ja -109-+15) [ ,,,0],21], jotka testattiin käyttämällä koettimia

MLH1

-3 ja -4, vastaavasti. Tulosten keskiarvot näiden kahden koettimen laskettiin saamiseksi metylaation suhteen. Kynnys metyloituja vs. metyloimattomien tila asetettiin 15%, perustuu aikaisemmin tutkimus

MLH1

geenien [22]. MS-MPLA fragmentit analysoitiin käyttämällä ABI Prism 3130 Genetic Analyzer, ja GENOTYPER ohjelmistot (Life Technologies).

ituradan mutaatioita

Potilaat, joilla epäilimme LS ja olivat ehdolla geneettisen testaus saatettiin Perinnöllisyysneuvonta jako meidän yksikössä. Epäily LS perustui MMR asemasta (IHC ja MSI tulokset) ja

MLH1

metyloitu tila, mukaan päätöksemme puu algoritmi (kuvio 1).

MLH1

geenin testaus suoritettiin silloin, kun kasvaimet osoittivat menetyksen proteiinin ilmentymisen ja metyloitumattomat

MLH1

.

MSH2

mutaatioanalyysiin suoritettiin näissä tapauksissa

MSH2-

negatiivisesti värjätty kasvaimia.

MSH6

ituradan analyysi tehtiin potilailla, joilla puute MSH6 proteiinin ilmentymistä vaan normaali ilmaus MSH2. Kasvaimet, joiden yhteenlaskettu puute MSH2 ja MSH6 proteiinien havaitsematon mutaatio

MSH2

testattiin myös

MSH6

geneettisiä muutoksia. Kotelot testattiin

MSH2

ja

MSH6

ilman mutaatiota havaita analysoitiin myös suuria uudelleenjärjestelyjä klo

EPCAM

lokuksessa. Geneettinen testaus

PMS2

suoritettiin vain niillä potilailla, joilla kasvainten osoittavat menetyksen ilmaisun PMS2 ja normaali ilmaus MLH1.

ituradan mutaatio tutkimukset suoritettiin genominen DNA oli eristetty ääreisveren leukosyytit tai alkaen nontumorous endometriumin kudosta. Detection pistemutaatioiden suoritettiin käyttäen PCR: ää ja suora sekvensointi koko koodaavan sekvenssin ja introni-eksoni-rajat kullekin geenille [12]. Suuret uudelleenjärjestelyt (poistot ja /tai insertioita) MMR geenien seulottiin MLPA mukaan valmistajan protokollien (Salsa MLPA sarjat P003, P072 ja P008, MRC-Holland). Vahvistus testaus suoritettiin myös käyttämällä MLPA eri yhdistelmällä antureista (Salsa MLPA kit P248, MRC-Holland). Analyysi deleetioita

EPCAM

lokuksessa tehtiin myös käyttämällä MLPA (Salsa MLPA kit P072-B1, MRC-Holland). Tulkinta Geneettisen analyysin tulosten perustui American College of Medical Genetics (ACMG) Suositukset standardit tulkinta Sequence Variations [23], Insight tietokanta [24], ja sen viitteet tarkistettiin luokituksessa geneettisiä variantteja.

Tiedonhallinta ja tilastollinen analyysi

analyysi suoritettiin käyttämällä

R

ohjelmisto, versio 2.15.2 (R Project tilastollinen Computing. Saatavilla: http: //www.r -project.org. Accessed 2013 21 lokakuu) ja Epicalc epidemiologinen analyysi paketti [25]. Asiaa koskevien toimenpiteiden Kehityssuunnan (keinot, mediaanit ja kvartiiliväliä varten vinossa tiedot) käytettiin tutkimaan tietoja. Chi-neliön testiä käytettiin vertaamaan laadullisia muuttujia. Opiskelijan

t

testiä käytettiin vertaamaan normaalisti jakautuneiden jatkuvien muuttujien. Merkitys asetettiin

p

0,05 ja tulokset on esitetty kertoimet suhde (OR) ja 95%: n luottamusväli (CI).

Tulokset

Kaikkiaan 173 valitsemattomat potilailla, joilla hankittua oli mukana. Keskimääräinen ikä diagnoosin oli 63,3 vuotta (vaihteluväli 29-90). Kaikki potilaat kävivät biopsia tai kohdun ja parafiinivahaa upotetut kudokset olivat käytettävissä IHC ja molekyylitestauksella. Kliininen ja histopatologia ominaisuuksia kasvaimia on esitetty taulukossa 1. Useimmat kasvaimet olivat endomet- histologia (79,2%) ja FIGO luokka 1 (54,9%). Ei myometrisia invaasio havaittiin 10,3%: lla potilaista (15/146). Noin 63,7% tapauksista oli myometrisia invaasiota ≤50% (96/146) ja 26% (38/146) oli myometrisia invaasio 50%. TIL oli läsnä 29,4% kasvainten (47/160) ja 17,9% kasvaimista oli LVI (24/134). Kaksikymmentäkuusi potilasta (17,1%) oli synkronoitu kohdun limakalvon ja munasarjasyövän syöpiä.

Variable

N

[]

Potilaiden lukumäärä 173Mean ikä (SD) ja vaihteluväli years63.27 (+/- 12,37 ) 29-90N% Stage alkudiagnoosin 158I 11975.3II63.8III3119.6IV21.3Histology 173Endometroid13779.2Poorly Diferenciated84.6Papilary Serous137.5Clear Cell116.4Mülerian Mixet Tumor42.3Grade (FIGO) 17319554.922916.834928.3Myometrial invaasio 146None 1510.3≤50% 9363,7 50% 3826.0Tumor tunkeutuvia lymfosyyttejä 160No11370.6Yes 4729.4Lymphovascular invasion134No11082.1Yes 2417.9Low Uterin Segment173No15790.8Yes 169.2Synchronous munasarjasyöpä 152No 12682.9Yes2617.1Table 1. kliininen ja patologisten ominaisuuksien.

CSV Lataa CSV

familiaalinen historia syövän, histopatologia ja molekyylitason ominaisuuksia koskevat LS on esitetty taulukossa 2. Kahdeksan potilasta (4,6%) oli ollut peräsuolileesiot ja 10 (5,8%) oli ollut rintasyöpä ja muut neoplasioihin. Edesauttamalla historia syöpä oli käytettävissä 87 tapauksessa: 42 (48,3%) täytti RBG kriteerit ja neljä (4,6%) täytti Amii kriteerit. Suvussa syöpää jäljellä 86 tapauksissa oli käytettävissä, koska vahvistamaton suvussa, menetettiin seuranta tai kuolleen.

Variable

N

%

Lynch oireyhtymä criteria87Reviewed Bethesda criteria3843.68Amsterdam II kriteerit 44.60No Fullfill4551.72Personal historia peräsuolen Lesions8Colon cancer63.47

* Polyps21.16

* Henkilöhistoria Muut Tumors15Breast cancer105.78

* Lung cancer21.16

* Pleura10.58

* Thyrod syöpä (Medular) 10,58

* urothelial Cancer10.58

* IHC proteiiniekspressiota: menettäminen MLH1 /MSH2 /MSH6 /PMS2 173No 11566.47Yes5833.53MSI Status173MSS12672.83MSI4727.17Mismatch korjaus tila 173Proficient11264.74Deficient6135.26Table 2.Ominaisuudet liittyviä Lynch oireyhtymä.

* Laskettu koko sarja (n = 173). CSV Lataa CSV

Löysimme muuttunut MMR kuva (tappio MMR-proteiinin ilmentymisen ja /tai MSI) 61 potilaalla (35,3%). Menetys MLH1 ekspressio havaittiin 44 potilaalla (25,4%). Näistä 34 (77,3%) osoitti

MLH1

hypermetylaation kasvain. Sen jälkeen

MLH1

hypermetylaation analyysi tehtiin yhdeksässä näistä tapauksista, joissa DNA verisolut oli saatavilla, mutta tulokset olivat negatiivisia niissä kaikissa. Näin ollen kaikki kasvaimet, joissa

MLH1

hypermetylaation pidettiin satunnaista hankittua.

Loss of MSH2 /MSH6 havaittiin viidellä potilaalla (2,9%), kun taas häviö ainoastaan ​​MSH6 tai vain PMS2 proteiinin ilmentymisen, havaittiin kahdeksassa (4,6%). Yksi tapaus, jossa molemmat tappiot MSH6 ja PMS2, havaittiin (taulukko S1 File S1). Kaikissa näissä tapauksissa yhdessä toisen 10 tapausta menettäminen MLH1 ilmaisun ja puuttuminen

MLH1

metylaatio katsottiin epäluuloinen LS ja soveltuvat geneettisen testauksen.

Merkittävä assosioitunut IHC ja MSI tulokset (

p

0,0001) osoittaa yhteneväinen 90,2%: ssa tapauksista (156/173). Diskordansseja välillä IHC ja MSI havaittiin 17 tapauksessa (9,8%). Ilmaisun puuttumista MMR proteiinien ja MSS todettiin 14 tapauksessa. Normaali ilmaus MMR proteiinien ja MSI havaittiin kolmessa tapauksessa.

Meillä ei ollut näyttöä satunnaista alkuperän näistä kasvaimista niin niitä myös pidetään epäillään LS. Lopuksi, yhteensä 27 (15,6%) tapauksista oli mukana geneettistä analyysiä varten ituradan mutaation seulontaan.

Vertaileva joukossa epäiltyjen LS ja tapaukset, joissa MMR hallitsee hankittua osoitti, että epäilty perinnöllinen ehto oli usein löytyy naisilla alle 50 vuotta (OR 2,84; 95% CI 1,04-7,77). Merkittävää eroa ei löydy mistään muusta kliinisiä tai patologisia muuttujat (taulukko 3). Samanlaisia ​​tuloksia saatiin, kun vertasimme potilaiden epänormaalin MMR näiden kanssa säilytti MMR-toiminto (taulukko S2 File S1), lukuun ottamatta TIL ja LIV, joka oli voimakkaasti yhteydessä poikkeava MMR kasvaimia (OR 5,88; 95% CI 2.80- 12.31 ja OR 3,03; 95% CI 1,22-7,56, vastaavasti).

Epäilty LS

MMR taitavia

p

potilaiden lukumäärä

27

146

keski-ikä (SD) 57,70 (12,45) 64,31 (12,12) 0,01% N% OR (IC 95%) Page 50 yrs725.931610.96 2,84 (1,04-7,77) 0.04≥50 yrs2074.0713089.04Histology Endometroid (tyyppi I) 2281.4812384.250.82 (+0,28-+2,39) 0.72Special (tyyppi II) 518.522315.75Grade (FIGO) High933.334027.401.32 (0,5-3,19) 0.53Low1866.6710672.60Myometrial invaasiota (n = 146) 50% 625.003226.230.93 (0,34-2,57) 0.90≤50% 1875.009073.77Tumor tunkeutuvia lymfosyyttejä (n = 160) Kyllä 933.333828.571.25 (0,52-3,03) 0.62No 1866.679571.43Lymphovascular invaasiota (n = 134) Kyllä 730.431715.322.42 (0,87-6,76) 0.09No 1669.579484.68Low Uterin SegmentYes414.81128.221.94 (,57-+6,54) 0.28No 2385.1913491.78Synchronous munasarjasyöpä (n = 152) Yes518.522217.601.06 (0,36-3,11) 0.91No 2281,4810382. 40Reviewed Bethesda kriteerit (n = 86) Fullfill1460.872844.441.94 (0,73-5,14) 0.18No Fullfill939.133555.56Amsterdam II kriteerit (n = 17) Fullfill333.33112.503.50 (0,28-43,16) 0.31No Fullfill666.67787.50Table 3. Vertaileva analyysi potilaille, joilla epäillään Lynch oireyhtymä ja MMR taitavia kohdun limakalvon syöpiä.

CSV Lataa CSV

ituradan mutaatio analyysit tehtiin 19 potilaalla epäillyn LS ryhmä (19/27, 70,4%). Geneettiset testitulokset loput kahdeksan potilasta oli käytettävissä, koska he hylkäsivät testaus (3/27, 11,1%), menetettiin seuranta (3/27, 11,1%) tai kuollut (2/27, 7,4%).

Olemme löytäneet kahdeksan potilasta taudinaiheuttajien mutaatioita (8/19, 42,1%), joka edustaa 4,6% koko sarja; yksi

MLH1

, kolme

MSH2

, kolme

MSH6

ja toinen

PMS2

geenejä (taulukko 4). Keski-ikä näistä potilaista oli 49 vuotta huomattavasti pienempi kuin ei-LS EY ryhmässä (taulukko S3 File S1). Kaksikymmentäviisi prosenttia niistä ei täyttänyt rBth kriteerit ja toinen 25% osoittivat negatiivista MSI (yksittäisiä menetys proteiinin ilmentymistä MSH6 ja PMS2) (taulukko S4 File S1). Kahdella potilaalla oli synkroninen munasarjojen syöpien ja yksi oli synkroninen paksusuolen syöpä (taulukko 5). Läsnäolo synkronisen munasarjasyövän ja kasvaimen tunkeutuvia lymfosyyttejä liittyi vahvistettuihin LS tapauksissa verrattuna ei-LS EY (taulukko S3 File S1).

IHC kuvio

Epäillään Lynch

ituradan mutaation /Tutkitut tapaukset

menettäminen MLH1 ei Methylated101 /6Loss on MSH2 /MSH653 /4Loss of MSH672 /5Loss of PMS211 /1Loss of MSH6 /PMS210 /1MSI + normaali IHC31 /2TOTAL278 /19Table 4. IHC malleja epäiltyjen Lynch oireyhtymä.

CSV Lataa CSV Case

RBG

Ikä

MSI tila

IHC menetys

Gene

nukleotidi- nimikkeistön

proteiini nimikkeistön

Synchronous tumor/lesions

End131Yes41MSIMLH1/PMS2

MLH1

c.2154_2157insAACA

#p.His718Glnfs*5Colonic PolypEnd111Yes45MSIMSH2 /MSH6

MSH2

C.1 -? _ 645+? Del poistaminen eksonin 1-3 p? Colon cancerEnd091Yes40MSIMSH2 /MSH6

MSH2

c.1226_1227delAGp.Gln409Argfs * 7Ovarian cancerEnd003Yes60MSIMSH2 /MSH6

MSH2

c.1387 -? _ 1661del poistaminen eksonin 9-10 p?NoneEnd014No61MSIMSH6

MSH6

c.2731CTp.Arg911*NoneEnd088Yes45MSSMSH6

MSH6

c.1367GA

#p.Trp456*Ovarian cancerEnd137No56MSINo menetys

MSH6

c.1367GA

# p.Trp456 * NoneEnd034Yes44MSSPMS2

PMS2

c.538 -? _ 705+? del Poistettu eksonin 6

# p? NoneTable 5. Ominaisuudet potilaalla on ituradan mutaatio.

#Not kuvattu Insight tietokantaan. CSV Lataa CSV

kolme mutaatioista (37,5%) oli suuria deleetioita (kaksi

MSH2

ja toinen

PMS2

), kolme (37,5%) oli nonsensemutaatiota (kaikki

MSH6

geeni) ja kaksi (25%) oli lukukehysmutaatioita (yksi insertio

MLH1

ja yksi deleetio kohdassa

MSH2

). Toiset kaksi potilasta osoitti geneettistä missensemutaatio variantteja tuntemattomia kliinistä merkitystä sekä

MSH6

(c.116GA, p.Gly39Glu ja c.1109TC, p.Leu370Ser). Prediction käyttäen Polyphen-2 (https://genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) luokitellaan molemmat versiot kuin todennäköisesti patogeeninen. Lisäksi molemmat kasvaimia osoitti menetyksen ilmaisun MSH6 kanssa konservoituneiden ilmaus MSH2, ja puuttuminen MSI.

Yhdistyksen tutkimuksessa verrataan mutatoitiin mutatoitunut tapauksissa vain ikä havaittiin olevan merkittäviä. Mutaatioita useammin todettu potilailla, joilla EY diagnosoitu ennen 50 vuoden ikää (OR 16,67; 95% CI 1,01-588,03;

p

= 0,048). Mitään merkittävää yhdistysten havaittu koskien RBG kriteerejä, IHC, MSI tila, histopatologia tai läsnäolo synkroninen kasvaimia.

Keskustelu

Pieni osa hankittua voisi johtua geneettinen riski kunnossa [ ,,,0],3]. LS on tärkein oireyhtymä, että tällaisissa tapauksissa [5,6], vaikka olemassaolo familiaalinen paikkasidonnainen EY geneettisen kokonaisuuden erillään LS on sugested [26]. Nykyinen tietoja yleisyydestä LS potilailla, joilla EY on rajallinen ja rajoittuu väestön Yhdysvalloista [13-15]. Erot esiintyvyys geneettisten sairauksien havaitaan usein eri populaatioiden erityisesti oireyhtymät jossa penetrance on epätäydellinen ja muut geneettiset ja ympäristötekijät saattavat toimia penetrance määritteet.

haluttiin selvittää esiintyvyys LS potilaiden keskuudessa ECS meidän Espanjan väestöstä, luomaan seulontaa strategioita yksilöiden tunnistamiseksi, joilla on geneettinen taipumukseen muita kasvaimia; näin ollen tunnistaa perheenjäsenten vaarassa ja luoda yksilöllisiä seurantaa suosituksia.

Käytimme esiintyvyyttä jossa käytettiin laatineet suosituksia ja konsensus algoritmeja seulontaan ja mutaation analyysi [7]. Maksimoimaan mutaation havaitseminen herkkyys, mitään rajaa ikä diagnoosin pidettiin. IHC ja MSI analyysi tehtiin kaikista kasvaimista.

MLH1

metylaatio testattiin kasvaimia ja myös veren tarvittaessa ja mutaatioanalyysiin tehtiin neljä yhteistä MMR ja

EPCAM

geenejä.

IHC ja MSI seulonta havaittujen 35,3% (61/173) kasvaimia vajaisiin MMR, joka on korkeampi kuin 22,8% (124/543) ja 25,3% (62/245) saapuvat Hampel et al

,

2006 ja Moline et al 2013, vastaavasti. Löysimme normaali IHC ilmaus MMR proteiinien kanssa MSI 3/61 tapauksissa (4,9%). Samanlaisia ​​tuloksia saatiin Hampel et al. 2006 (6,3%, 6/96) [13]. Lisäksi olemme havainneet, että noin 23% (14/61) kasvainten aiemmin menettänyt ekspression MMR-proteiinin ja MSI. Odotettu prosenttiosuus menetyksen ilmaisun ja MSI vuonna Hampel (2006) tutkimus [13] olisi noin 15%. Kiinnostavaa kyllä, huomasimme, että kaksi asiaan potilailla, joilla näitä ilmeisiä diskordansseja oli sama mutaatio

MSH6

(c.1367GA; p.Trp456 *), mikä viittaa siihen, että tietyissä olosuhteissa luonne toisen osuman voisi olla ratkaiseva tekijä kasvaimen IHC ja MSI ominaisuuksia (taulukko 5). Tuloksemme osoittavat, että potilailla, joilla on EY jopa 27,9%: ssa tapauksista, joissa MMR puutos saattaa olla joko normaali IHC tuloksia tai MSI ja vahvistaa tarvetta toteuttamiseksi seulonnan molemmilla tekniikoilla.

Vertaileva meidän MMR puutteellisia versus positiivisia tapauksia ei käynyt ilmi merkittävää yhteyttä LVI ja TIL, kuten kuvattu muualla [27,28]. Ei kuitenkaan assosioitunut ikä diagnoosin ja RBG tai Amii kriteerit (taulukko S2 File S1). Nämä tulokset voidaan selittää esiintyy usein somaattisia MMR puute hankittua [13].

MLH1

metylaatio ja

BRAF

mutaatio analysoi sallia yhden tunnistaa satunnaista muotoihin CRC joukossa MMR-puutosta kasvaimia. Emme löytäneet tapauksessa mutatoitunut

BRAF

(tuloksia ei ole esitetty). Näin ollen tämä geeni ei ole merkittävä rooli EY eikä niitä pitäisi sisällyttää seulonnassa algoritmi [15]. Sen sijaan,

MLH1

promoottorin metylaation oli läsnä useimmissa kasvainten yhdessä menetys ilmentymisen MLH1 (77,3%, 34/44). Tämä osuus oli huomattavasti pienempi kuin 94% (79/84) saapuvat Hampel et al, 2006 [13]. Erot kahden kohorttien ja erilaisia ​​menetelmiä varten metylointianalyysi (MS-MLPA vs MS-PCR) on saattanut osaltaan tätä eroa.

perustuslakituomioistuin epimutations että

MLH1

geeni tapauksissa EY ovat hyvin harvinaisia ​​[29]. Mikään yhdeksästä tapauksesta analysoitiin kasvain metylaatio oli

MLH1

metylaatio veressä DNA. Näin ollen kasvaimen

MLH1

metylaatio on epätodennäköistä, että LS-liittyvä. Sen sijaan, kasvain, joka on vähentynyt MLH1 ja PMS2 IHC, ei ollut näyttöä metylaatio, todennäköisesti liittyä LS [1].

Kun ensimmäinen seulonta, valitsimme 27 potilasta (15,61%) epäillään LS. Keski-ikä oli tässä ryhmässä 57,7 vuotta ja potilaat alle 50 olivat yleisempiä (taulukko 3). Mikään muu patologisia tai kliinisten ominaisuus havaittiin liittyvän epäillyn LS tapauksissa. Tällä hetkellä on yritetty tunnistaa patologiset tekijät LS-liittyvä EY. Jotkut kirjoittajat ovat tunnistaneet kasvainpaikantumisen raportointi huomattavasti korkeampi esiintyvyys alemman kohdun segmentin kasvaimia sairastavilla potilailla LS [30,31]. Westin et ai. päätteli, että seulonta LS olisi harkittava tapauksissa hankittua peräisin alemman kohdun segmentti [30]. Tämä sijainti voi olla lähde diagnostinen tyrmistystä, koska se voidaan järjestää sekä kohdun limakalvon ja endoservikaalisia karsinoomat, jolloin kasvaimen Luokitteluvirheillä [32].

Mutaatiot todettiin kahdeksalla potilaalla (42,1%), joiden keski-ikä oli 49 vuotta .

MSH6

ja

MSH2

mutatoitiin kuudessa tapauksessa (taulukko 5). Kaksi tapausta mutaatioita

MSH6

(ikä 56 ja 61 vuotta) ei täyttänyt RBG kriteerit eikä muita synkronisen kasvain oli läsnä diagnoosi. Siten noin 25% potilaista, joilla EY liittyvät LS saattaa näyttää olevan satunnaista kasvaimia ja mennä diagnosoimatta kun RBG kriteerit testataan epäily LS. LS-liittyviin hankittua yleisesti johtua mutaatioista

MSH6

ja ilmetä myöhemmällä iällä kuin tehdä mutaatioita

MLH1

ja

MSH2

[33,34]. Potilaille, joilla on LS-liittyviin hankittua, riskiä sairastua toisen syövän alkamista seuraavien EY diagnoosi on arviolta 25% vuonna 10 vuotta ja 50% 15 vuoden ajan [35,36]. 20-vuoden kumulatiivinen riski syövän jälkeen kohdun limakalvon syöpä on hiljattain raportoitu 48% riski CRC; 11% syövän munuaisten, munuaisaltaan tai virtsanjohtimen; 9% for virtsarakon syöpään; ja 11% rintasyövän [37]. Potilailla, joilla LS, 50% hankittua läsnä ennen diagnoosi CRC, jos diagnoosit eivät ole synkronoitu. Siksi EY voi toimia ”Sentinel” syövän potilaille ja mahdollisesti heidän perheenjäsentensä [38].

Tutkimuksessamme mutaatiot todettiin useammin potilailla, joilla hankittua diagnosoitu ennen 50 vuoden ikää eikä yhdistys todettiin koskien RBG kriteerit, IHC tai MSI tila, histopatologia ja läsnäolo synkroninen kasvaimia. On kuitenkin mahdollista, että rajallinen otoksen koko voisi olla piilossa muita -alueella.

On olemassa useita mahdollisuuksia selittää niitä tapauksia, joissa havaitsematta ituradan mutaatioita. Ensimmäinen, läsnäolo mutaatioiden testaamattomasta säätelyalueita analysoidaan geenien; Toinen, MMR puutos aiheuttama somaattisten kaksialleelisten inaktivaation Kolmas, geneettinen mosaicism; Neljäs, ituradan mutaatioita muiden geenien suoraan tai epäsuorasti mukana MMR-toiminto, kuten

SETD2

[39],

POLE

ja

POLD1

[40], ja lopuksi muut tuntematon geneettisiä tai epigeneettiset mekanismit (kuva 1).

Monet laitokset ja toimintalohkoryhmissä harkitsevat toteuttaa seulonta potilaille, joilla LS potilailla, joilla hankittua. Eri seulonta strategioita naisten EY on osoitettu olisi kustannustehokasta [41,42]. IHC triage kaikista tapauksista EY voi tunnistaa useimmat mutaation kantajia mutta huomattavin kustannuksin. Sisällyttäminen ainakin yhden ensimmäisen asteen sukulainen, jossa LS-liittyvän syövän iässä tahansa saattaa osoittautua kustannustehokasta [42]. On kuitenkin tärkeää painottaa, että useiden paikallisten tekijät saattavat puuttua tehokkuuden muussa toiminnassa. Uusia lähestymistapoja tehdä yleismaailmallinen seulonta potilaille, joilla on EY IHC kustannustehokkaampaa ovat käynnissä. Viimeaikaiset tiedot viittaavat siihen, että kahden vasta-paneeli testaus PMS2 ja MSH6 on yhtä tehokas kuin neljän vasta-paneeli havaitsemiseksi MMR poikkeavuuksien [43,44]. Havaitsimme, että lisätä herkkyyttä LS diagnoosi analyysin MSI yhdistettynä IHC tulee harkita, koska noin 5% (3/61) potilaista, joilla epäillään LS ja yksi kahdeksasosa vahvisti LS tapausten tutkimuksessamme oli MSI ehjillä IHC.

esiintyvyys LS löysimme potilailla, joilla on EY oli 4,6% (8/173); ennakoivan taajuudella 6,6% Espanjan väestöstä. Tämä ennustus tehtiin ekstrapoloimalla havaittu taajuus mutatoitunut tapauksissa ja ottaen huomioon mahdollinen puuttuminen menetetty tapauksista. On tärkeää huomata, että nykyinen työ on esiintyvyyttä tutkimus yhdessä sairaalassa Espanjasta, siis ekstrapolointi datan koko Espanjan väestöstä voidaan taivuttaa.

Aikaisemmat tutkimukset Pohjois-Amerikan populaatiot osoittivat levinneisyys vaihtelevat 1,8%: sta 4,5% [13-15]. Meidän väestö, huomasimme, että esiintyvyys LS potilailla, joilla on EY kuusinkertainen suurempi kuin esiintyvyys LS potilailla, joilla on CRC (4,6% vs. 0,7%) [12].

Yhteenvetona löysimme korkea esiintyvyys LS potilailla, joilla hankittua (4,6-6,6%). Toisin kuin CRC vain potilaan ikä diagnoosin havaittiin liittyvän LS. Yhdenmukaisesti näiden tulosten katsomme, että yleinen seulonta kaikilla potilailla, joilla hankittua IHC, MSI ja

MLH1

metylointianalyysi tulisi suositella.

tukeminen Information

Tiedosto S1.

tietoja.