Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Eloonjäämismediaani on 10 kuukautta ja 2 vuoden eloonjääminen on 20 % in metastaattinen ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) käsiteltiin platinapohjaiseen kemoterapiaan. Pieni osa ei-squamous cell keuhkosyövässä satama EGFR mutaatioita, joilla on parantunut tulos gefitinibille ja erlotinibi. Kokeellinen näyttö viittaa siihen, että BRCA1 yliekspressio parantaa herkkyyttä doketakselin ja kestävyys sisplatiinia. RAP80 ja Abraxas ovat vuorovaikutuksessa proteiineja, jotka muodostavat komplekseja BRCA1 ja pystyi mukauttamaan vaikutusta BRCA1. Jotta edelleen tutkia vaikutusta EGFR mutaatioiden ja BRCA1 mRNA-tasot lopputuloksesta kehittyneissä NSCLC, teimme mahdollisille ei-satunnaistettu faasin II kliinisessä tutkimuksessa, testauksessa olettamusta, että räätälöity hoito olisi antaa parannettu tulos yli kuin asiakaskohtaiset hoito. Eksploratiivisessa analyysi, tutkimme myös vaikutusta RAP80 ja Abraxas mRNA-tasoja.

Menetelmät /Principal Havainnot

Käsittelimme 123 metastaattinen ei-okasolusyöpä keuhkosyöpä potilaat käyttävät räätälöityjä lähestymistapaa. RNA ja DNA eristettiin mikropaloitelluista yksilöitä parafinoidut kasvainkudoksessa. Potilaat, joilla on EGFR mutaatioita saivat erlotinibin, ja ilman EGFR mutaatioita saaneet kemoterapiaa tai ilman sisplatiinin perustuu niiden BRCA1 mRNA: alhainen, sisplatiinin plus gemsitabiinin; väli, sisplatiini ja doketakselin; korkea, doketakseli yksinään. Tutkimusanalyysi tutkittu RAP80 ja Abraxas ilme. Eloonjäämismediaani ylitti 28 kuukautta 12 potilailla, joilla on EGFR mutaatioita, ja oli 11 kuukautta 38 potilailla, joilla on alhainen BRCA1 9 kuukautta 40 potilasta, joiden välissä on BRCA1, ja 11 kuukautta 33 potilasta, joilla on korkea BRCA1. Kahden vuoden pysyvyys oli 73,3%, 41,2%, 15,6% ja 0%, tässä järjestyksessä. Eloonjäämismediaani vaikuttivat RAP80 ilmentymistä kolmessa BRCA1 ryhmää. Esimerkiksi potilailla, joilla on sekä alhainen BRCA1 ja alhainen RAP80, eloonjäämismediaani yli 26 kuukautta. RAP80 oli merkittävä tekijä hengissä hoidetuilla potilailla mukaan BRCA1 tasoilla (riskisuhde 1,3 [95% CI, 1-1,7]; P = 0,05).

Johtopäätökset /merkitys

Kemoterapia räätälöidä BRCA1 ekspressiotasoja liittyy erinomainen mediaani ja 2-vuoden eloonjäämisen joitakin subsets NSCLC potilaiden ja RAP80 voisi olla ratkaiseva moduloiva vaikutus tämän mallin räätälöityjen kemoterapiaa.

Trial rekisteröinti

ClinicalTrials.gov NCT00883480

Citation: Rosell R, Perez-Roca L, Sanchez JJ, Cobo M, Moran T, Chaib I, et al. (2009) Räätälöidyt Hoito Non-Small-Cell Lung Cancer Perustuu EGFR mutaatioita ja BRCA1 mRNA Expression. PLoS ONE 4 (5): e5133. doi: 10,1371 /journal.pone.0005133

Editor: Mikhail V. Blagosklonny, Ordway Research Institute, Yhdysvallat

vastaanotettu: 01 joulukuu 2008; Hyväksytty: 03 maaliskuu 2009; Julkaistu: 05 toukokuu 2009

Copyright: © 2009 Rosell et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus sai osittaista tukea Redes de Cancer, Espanja (avustus RD06 /0020/0056). Rahoituslähde ei ollut mukana kerääminen, analysointi tai tietojen tulkinta, kirjoittaminen raportin, tai päätös jättää julkaistavaksi.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä olemassa.

Johdanto

mediaani eloonjääminen joilla on pitkälle edennyt tai metastaattinen ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) on vain 10-11 kuukausi joko vakio sisplatiini-kemoterapian [1], [ ,,,0],2] tai räätälöityjä sisplatiini-kemoterapian perustuu Leikkauskorjauksessa rajat täydentävät 1 (ERCC1) mRNA ilmaisun, [3] sekä kahden vuoden pysyvyys on vain 14-21%. [1], [2], [3]

kaksi esikasvaintekijät nykyään tiedetään yleisesti mutatoitunut keuhkoadenokarsinooma ovat K-RAS ja EGFR [4]. Keuhkosyöpä aiheuttama aktivoimalla mutaatioista epidermaalisen kasvutekijän reseptori (EGFR) – pääasiassa joko deleetion eksonissa 19 tai L858R-mutaation eksonissa 21 – vastata pienimolekyylisiä tyrosiinikinaasin estäjät (gefitinibi ja erlotinibi), [5], [6], [7], jossa on äskettäin raportoitu eloonjäämismediaani gefitinibille on 17,5 kuukautta. [8] vastausprosentti oli 90% meidän retrospektiivinen tutkimus tutkii EGFR mutaatioita hoidetuilla potilailla gefitinibin, [9] ja yhdistetyt tiedot mahdollisten tutkimusten gefitinibin sairastavilla potilailla EGFR mutaatioita osoitti vastausprosentti oli 80%. [10] ei kuitenkaan EGFR mutaatioita havaittiin 454 potilaalla on levyepiteelisyövän keuhkoissa. [11]

Yhä useammat todisteet osoittavat, että rintasyöpä alttius geenin 1 (BRCA1) annetaan herkkyys indusoiman apoptoosin antimikrotubulusaine lääkkeiden (paklitakseli ja vinkristiini), mutta indusoi vastustuskyky DNA: ta vaurioittavien aineiden (sisplatiini ja etoposidi) ja sädehoidon. [12], [13], [14], [15] näitä pre-kliiniset havainnot tukevat erilaisia ​​kokeellisia malleja rinta- ja munasarjasyövän solujen: indusoituvan ilmentymisen BRCA1 tehostetun paklitakselin herkkyys; [16] lyhyen häiritseviä RNA-välitteinen inaktivaatio endogeenisen BRCA1 johti paklitakselin ja doketakselin vastarintaa; [17 ], [18], [19] ja käyttökuntoon BRCA1-vajaiden solujen villityypin BRCA1 suurempi herkkyys paklitakselia ja vinorelbiini. [17] Tämä ero moduloiva vaikutus BRCA1-mRNA havaittiin myös kasvainsolujen eristetty pahanlaatuista effusions NSCLC ja mahasyöpä potilaita, jossa BRCA1 mRNA-tasot korreloivat negatiivisesti sisplatiinin herkkyys ja positiivisesti doketakselin herkkyys. [20] Kaksi retrospektiivinen tutkimukset – NSCLC [21] ja munasarjasyöpä [19] potilaiden – todettiin, että alhainen tai keskitasoa BRCA1 mRNA korreloivat merkittävästi pidempi eloonjäämisen seuraavat platinapohjaisen kemoterapian, [19], [21], kun eloonjäämisen potilailla, joilla on korkeampi BRCA1 ilme kasvoi seuraavat taksaania kemoterapiaan. [19]

BRCA1 rekrytoimista sivustoja DNA taukoja, millä on keskeinen asema DNA: n korjaukseen ja solusyklin Checkpoint ohjaus. Sitovat Sovittelijan DNA-vaurion tarkistuspisteen 1 (MDC1) proteiinin fosforyloitua häntää histonien H2AX helpottaa muodostumista BRCA1 ydin- pesäkkeitä kaksinumeroisin säikeen katkoksia. [22] reseptoriin liittyvä proteiini 80 (RAP80) toimii ylävirtaan BRCA1 ja tarvitaan kertyminen BRCA1 paikkoihin DNA-katkosten. [23], [24], [25] Abraxas rekrytoi RAP80 muodostaa kompleksin BRCA1. Sekä Abraxas ja RAP80 tarvitaan DNA-vaurion korjaamiseen, ja solut köyhdytetty Abraxas tai RAP80 näytteille yliherkkyys säteilytys. [23]

Jotta tutkia räätälöintiä hoito voisi parantaa tulos kehittynyt pienisoluista keuhkosyöpää, olemme suorittaneet prospektiivinen ei-satunnaistettu faasin II tutkimuksessa räätälöityjä hoito perustuu EGFR-mutaatio asemasta ja BRCA1 mRNA ekspressiotasot. Olemme valinneet rajoittaa ilmoittautuminen ei-okasolusyöpä, jotta voidaan maksimoida mahdollisuus hallinnoida erlotinibi potilailla, joilla on EGFR mutaatioita. Potilaat, joilla on joko eksoni 19 poisto tai L858R mutaatio sai erlotinibin, kun taas villin tyypin EGFR saaneet kemoterapiaa perustuu BRCA1 tasoilla: heikoimman saivat sisplatiinia plus gemsitabiinin; joilla välitasoille saivat sisplatiinia ja doketakselin; ja ne, joilla on korkea saivat doketakselia yksinään. Eksploratiivisessa analyysi, tutkimme myös vaikutusta RAP80 ja Abraxas mRNA-tasot näillä potilailla.

Tulokset

Potilaat

Maaliskuun 2005 heinäkuussa 2007 yhteensä 123 potilasta 25 keskuksista otettiin tutkimukseen (kuva 1). Kolmekymmentä viisi potilasta jätettiin pois: 3 potilaista ei ollut kasvainsolujen biopsia; 5 potilaalla oli alle 50 kasvainsolujen biopsia, joten on mahdotonta varmistaa oikeat tulokset; 19 potilasta oli villityypin EGFR mutta riittämätön kasvaimen näytteen EGFR arvioinnin BRCA1 ilmentymisanalyysiä; 2 potilasta kieltäytyi osallistumasta; ja 6 potilasta oli peruutettu lääkärinsä takia kliiniset tekijät eivät liity tutkimukseen. Kaikkien 123 potilasta, RNA: n eristys ja PCR-monistamisen onnistuivat. Keskimäärin tulokset geneettisiä analyysejä oli käytettävissä 8 päivää (vaihteluväli 6-11 päivää). Mediaani määrä solunsalpaajahoitojaksoa antaa BRCA1 ryhmissä oli 5 (vaihteluväli 1,8). Seuranta-ajan mediaani oli 8 kuukautta (vaihteluväli 1-28 kuukautta). Kaksitoista potilaalla oli EGFR mutaatioita ja jaettiin saamaan erlotinibi (EGFR ryhmä). Niistä 111 potilasta villin tyypin EGFR, 38 oli alimmassa tercile BRCA1- ilmaisun ja olivat saamaan sisplatiinia plus gemsitabiinia (matala BRCA1 ryhmä), 40 olivat väli- tercile ja olivat saamaan sisplatiinia ja doketakselin (väli BRCA1 ryhmä), ja 33 olivat korkeimmat tercile ja jaettiin saamaan dosetakselia yksinään (korkea BRCA1 ryhmä) (kuva 1).

Maaliskuun 2005 heinäkuussa 2007 kaikkiaan 123 potilasta 25 keskuksista otettiin tutkimuksessa. Syyt potilaalle peruuttamisesta: 3 potilaista ei ollut kasvain soluja koepalan; 5 potilaalla oli alle 50 kasvainsolujen biopsia, joten on mahdotonta varmistaa oikeat tulokset; 19 potilasta oli villityypin EGFR mutta riittämätön kasvaimen näytteen EGFR arvioinnin BRCA1 ilmentymisanalyysiä; 2 potilasta kieltäytyi osallistumasta; ja 6 potilasta oli peruutettu lääkärinsä takia kliiniset tekijät eivät liity tutkimukseen. Kaksi potilasta EGFR ryhmä, joka ei pystytä arvioimaan vastausta kuoli kuukauden kuluessa päästä tutkimuksen; 13 potilasta BRCA1, jotka eivät olleet arvioitavissa vasteen vastaanotettujen 3 hoitojaksoa.

kliininen ominaisuudet neljä ryhmää on esitetty taulukossa 1 ja taulukossa S1. Mediaani-ikä kaikilla potilailla oli 60 vuotta. Suhteellisesti enemmän naisilla kuin miehillä olivat alhaisimmat tercile BRCA1- ilmaisua. EGFR mutaatioita yleistyneet koskaan tupakoimattomilla (P = 0,03) ja naisilla (P = 0,0001). Viisikymmentä-viisi prosenttia potilaista oli tehokkuustilana 1, ja 83%: lla oli vaiheessa IV sairaus. Seitsemäntoista prosenttia potilaista oli aivometastaasien. Potilaat, joilla on EGFR mutaatioita oli mediaani kahden metastaasien, verrattuna yhdessä paikassa potilailla, joilla on villityypin EGFR (taulukko S2).

Kokonaisvasteprosentti oli 90%, että EGFR-ryhmän, 25 % heikosti BRCA1 ryhmässä, 45,7% välituotteiden BRCA1 ryhmä, ja 41,9% korkeasti brca1 ryhmässä (taulukko 2). Intent-to-treat-analyysi, vastausprosentti oli 75% EGFR ryhmässä, 21,1% heikosti BRCA1 ryhmässä, 40% väli BRCA1 ryhmä, ja 39,4% korkeasti brca1 ryhmässä (taulukko 2).

Eloonjäämismediaani ei saavutettu vaan ylity 28 kuukautta varten EGFR ryhmässä verrattuna 10 kuukautta (95% CI, 8,5 15-5) potilaille kaikissa kolmessa BRCA1 ryhmää. Kahden vuoden potilaiden elinaikaa että EGFR ryhmässä oli 73,3% ja kaikkien potilaiden BRCA1 ryhmissä oli 26,7%. Potilaille matalan BRCA1 ryhmä, mediaani elinaika oli 11 kuukautta (95% CI, 1,1-20,9) ja 2-vuoden pysyvyys oli 41,2%. Niille välituotteiden BRCA1 ryhmä, eloonjäämismediaani oli 9 kk (95% CI, 5,4-12,6) ja 2-vuoden pysyvyys oli 15,6%. Potilaille korkean BRCA1 ryhmä, mediaani elinaika oli 11 kuukautta (95% CI, 8,2-13,8) ja 2-vuoden pysyvyys oli 0% (taulukko 2, kuva 2).

Eloonjäämismediaani ei saavutettu 12 potilasta EGFR ryhmässä 11 kuukautta 38 potilasta alhainen BRCA1 ryhmä 9 kuukautta 40 potilasta väli- BRCA1 ryhmä, ja 11 kuukautta 33 potilasta korkean BRCA1 ryhmässä (P = 0,01) (katso taulukko 2) .

mediaani etenemiseen oli 13 kuukautta (95% CI, 7,7 ja 18,3) on EGFR ryhmässä, verrattuna 6 kuukauden (95% CI, 4,7-7,2) potilaille kaikissa kolmessa BRCA1 ryhmiä. Potilaille alhaisen ja keskitason BRCA1 ryhmiä, aika taudin etenemiseen oli 5 kuukautta (95% CI, 2,7-7,3). Potilaille korkean BRCA1 ryhmä, aika taudin etenemiseen oli 8 kuukautta (95% CI, 5,1 ja 10,9) (taulukko 2, kuva S1).

RAP80 ja Abraxas mRNA-transkriptien

Perustuen tulokset kokeellisissa malleissa [23], [24], [25], valmisteleva analyysi suhdetta BRCA1, RAP 80 ja Abraxas mRNA ilmaisun suoritettiin 86 111 potilasta ilman EGFR mutaatioita, joille riittää kasvainkudoksessa oli saatavilla. Potilaan ominaisuuksista nämä 86 potilasta olivat samankaltaisia ​​kuin kaikki 111 potilasta; huomattavasti enemmän naisilla kuin miehillä oli alhainen BRCA1 lauseke (P = 0,009). Vaste oli merkitsevästi suurempi potilailla, joilla keski- ja korkea BRCA1 tasolla (P = 0,004). (Taulukko S3). Läheinen korrelaatio löytyi BRCA1 ja RAP 80 tasoa (ρ = 0,27; p = 0,02) ja välillä RAP 80 ja Abraxas tasolla (ρ = 0,41; P 0,001), mutta ei välillä BRCA1 ja Abraxas tasolla (ρ = 0,10; p = 0,39).

Eloonjäämismediaani vaikutti RAP 80 tasoa. Potilailla, joilla on alhainen BRCA1 tasolla, eloonjäämismediaani ei saavutettu potilailla, joilla on alhainen RAP 80 tasoa, kun se oli 8 kuukautta potilailla, joilla on väli- RAP 80 ja 7 kuukautta niille, joilla on korkea RAP 80 (taulukko 3, kuva 3). Potilailla, joilla on keskitason BRCA1 tasoilla, eloonjäämismediaani oli 5 kuukautta potilailla, joilla on alhainen RAP 80 tasoa, kun se oli 13 kuukautta potilailla, joilla on keskitason RAP 80 tasoa ja 16 kuukautta niille, joilla on korkea RAP 80 tasoa. Potilailla, joilla on korkea BRCA1 tasolla, eloonjäämismediaani oli 6 kuukautta potilailla, joilla on alhainen RAP 80 tasoa, 12 kuukautta potilailla, joilla on keskitason RAP80 tasoilla, ja 11 kuukautta niille, joilla on korkea RAP 80 tasoa (taulukko 3).

eloonjäämismediaani ei saavutettu 11 potilailla, joilla on alhainen RAP 80 tasoa 8 kuukautta 9 potilaalla on keskitason RAP 80 tasoa, ja 7 kuukautta 5 potilasta, joilla on korkea RAP 80 tasoa (P = 0,006).

Jos potilaalla on matala BRCA1 tasolla, taudin etenemiseen oli 14 kuukautta potilailla, joilla on alhainen RAP 80 tasoa, kun se oli 4 kuukautta potilailla, joilla on keskitason RAP80 tasoilla ja 6 kk niille, joilla on korkea RAP 80 tasoa (taulukko 4, Kuva S2). Potilailla, joilla on keskitason BRCA1 tasoilla, aika taudin etenemiseen oli 4 kuukautta potilailla, joilla on alhainen RAP 80 tasoa, kun se oli 9 kuukautta potilailla, joilla on keskitason RAP 80 tasoa ja 6 kk niille, joilla on korkea RAP 80 tasoa. Potilailla, joilla on korkea BRCA1 tasolla etenemiseen oli 2 kuukautta potilailla, joilla on alhainen RAP 80 tasoa, 10 kuukautta potilailla, joilla on keskitason RAP 80 tasoa, ja 4 kuukautta niille, joilla on korkea RAP 80 tasoa (taulukko 4).

Samanlaisia ​​tuloksia saatiin, kun mediaanielinajassa ja aika taudin etenemiseen verrattiin mukaan Abraxas mRNA ekspressiotasot (taulukot S4 ja S5). Valmistelevan Monimuuttuja-analyysissä on 86 potilasta, käyttämällä Coxin suhteellisen vaarat malli, jonka tunnuksena ECOG-toimintakykyluokka ja RAP 80 merkittävinä muuttujat olemassaolostaan ​​(hazard ratio: suorituskykyluokka 1, 2,72; p = 0,005; RAP 80, 1.3 ; P = 0,05) (taulukko S6). Survival ei vaikuttanut muita kliinisiä ominaisuuksia, tyypit etäpesäkkeitä, toisen linjan kemoterapia (36 potilasta), tai Abraxas tasot. Coxin malli aika taudin etenemiseen osoitti myös, että vain suorituskyky ja joilla RAP 80 olivat muuttujat (taulukko S7).

Keskustelu

Mutaatiot EGFR tyrosiinikinaasialueeseen aiheuttaa keuhkojen adenokarsinooma hiirissä [ ,,,0],26] ja myönteistä vastausta ensimmäisen ja toisen linjan gefitinibi ja erlotinibi pitkälle NSCLC. [7], [8] Tässä tutkimuksessa, eloonjäämismediaani ylitti 28 kuukauden 12 potilaalla, joilla EGFR mutaatioita käsitelty erlotinibin, mediaani aika taudin etenemiseen 13 kuukauden ja kahden vuoden eloonjäämistä 73,3%; nämä tulokset ovat samanlaisia ​​havaintoja meta-analyysi mahdollisten tutkimusten gefitinibin potilailla, joilla EGFR mutaatioita. [10] Eloonjäämismediaani oli 11 kuukautta potilailla, joilla on alhaisin BRCA1 ilmaisua, sisplatiinia ja gemsitabiinin, ja kahden vuoden eloonjääminen oli 41,2%, mikä on hyvä verrattuna mediaani ja kahden vuoden pysyvyys saavutetaan gemsitabiinin ja sisplatiinin tai pemetreksediä ja sisplatiinin (10,3 kuukautta ja 22%) tuoreessa satunnaistetussa tutkimuksessa. [2] potilailla, joilla on korkein BRCA1 ilmaisua, käsiteltiin dosetakseli yksinään, mediaani elinaika oli 11 kuukautta, sama kuin saatu suuressa faasin III tutkimuksessa potilailla, joita hoidettiin dosetakselia ja sisplatiinin. [1] kuitenkin, meidän tutkimuksessa ei potilas oli elossa kaksi vuotta, kun taas vaiheen III tutkimuksessa , kahden vuoden eloonjääminen oli 21%. [1] Kiehtovaa, 11 potilaalla, jolla on pienin ilmaisua sekä BRCA1 ja RAP 80 oli lopputulos samanlainen saavutettavaa potilailla, joilla EGFR mutaatioita käsitelty erlotinibin: mediaanielossaolosta ei saavutettu ja aika etenemiseen oli 14 kuukautta (taulukko 3, kuvio 3) .Chemotherapy vaste on kiinteästi perustuu siihen, että DNA: n korjaukseen geenit vaativat sarjan molekyyli tunnustamista vaiheita, jotka mahdollistavat DNA-vaurion vasteena proteiinien lokalisoitumisen ja lähellä DNA vaurioita. Sitovat Sovittelijan DNA-vaurion tarkistuspisteen 1 (MDC1) proteiinin fosforyloitua häntää histonien H2AX (γH2AX) helpottaa muodostumista BRCA1 ydin- pesäkkeitä kaksinumeroisin säikeen katkoksia aiheuttama säteilytys tai kemoterapiaa. By dimeroivalla kanssa BRCA1 liittyvä RING domain (BARD1) proteiini renkaan läpi verkkotunnuksen, BRCA1 muodostaa E3 ubikitiinipromoottori ligaasilla. Viime aikoina on osoitettu, että RAP 80 tavoitteet BRCA1-BARD1 E3 ligaasia MDC1-γH2AX riippuva lysiiniä 63-sidottu ubikitiinistä proteiineja kaksinumeroisin säikeen katkoksia (tarkistetaan Wang Elledge [27]). Kolme tutkimukset osoittivat, että kumoamisen RAP 80 vähensi muodostumista BRCA1 aiheuttaman pesäkkeitä 28%, [23] 2% [24] ja 0%. [25] Lisäksi Abraxas ja RAP 80 pesäkkeet muodostuminen on BRCA1-riippumaton. [ ,,,0],23] siksi arveltu, että jos RAP 80 nostettiin, se voi aiheuttaa resistenssin sisplatiinia kemoterapiaan vaikka läsnä alhaisen BRCA1 tasoja. Valmistelevassa arviointi RAP 80 tässä tutkimuksessa vahvistaa moduloiva vaikutus BRCA1 mukautetun mallin. Esimerkiksi eloonjäämismediaani potilailla, joilla on alhaisin brca1 ilmaus laski RAP 80 ilmaus kasvoi 8 kuukauden väli RAP 80 tasoa ja 7 kuukauden korkea RAP 80 tasoa (taulukko 3). Yliekspressio BRCA1 antaa herkkyyttä doketakseli ja paklitakseli; [12], [17], [19], [20] potilailla, joilla on korkeimmat BRCA1, joita oli hoidettu dosetakselilla, oli keskimääräinen eloonjäämisaika 11-12 kuukausia, kun RAP80 ilme oli myös korkea, mutta vain 6 kuukausina, jolloin RAP 80 ilme oli alhainen (taulukko 3). Potilaat, joilla on keskitason BRCA1 tasoilla, sisplatiinia ja doketakselin, oli yleinen mediaanielossaolosta 9 kuukautta, joka nousi 13-16 kuukausi kun RAP 80 tasot olivat väli- tai korkea (taulukko 3). Nämä tulokset voidaan selittää pre-kliinisten löydösten että RAP 80 pystyy translokoida säteilytys aiheuttama pesäkkeitä HCC1937 soluja, jotka ilmentävät katkaistua BRCA1 joka ei kykene siirtymään ydin- pesäkkeitä. [28] Tämä osoittaa, että RAP 80 voisi korvata BRCA1 DNA korjaus toiminto soluissa, joista puuttuu BRCA1. Näin ollen vaikka eri platinaa dupleteiksi osoittavat samaa [29] – tai hieman erilainen [2] – selviytyminen kaiken eroja löytyisi muokattaessa kemoterapia perustuu malliin BRCA1 ja RAP 80.

Tässä tutkimuksessa ei korrelaatio löytyi BRCA1 ja Abraxas mRNA: n ilmentymisen. Oli kuitenkin viitteitä siitä, että ekspressiotasot Abraxas moduloida vaikutusta BRCA1. Esimerkiksi potilailla, joilla on alhaisin BRCA1 ilmaisua, sisplatiinia ja gemsitabiinin, saavutti eloonjäämismediaani 18 kuukautta ja aika taudin etenemiseen 11 kuukauden kun Abraxas tasot olivat alhaiset (taulukko S4).

Lisäksi potentiaali ennakoivaa roolia BRCA1, BRCA1 yliekspressio annetaan aggressiivista käyttäytymistä transgeenisissä malleja pienten solujen ja levyepiteelisyöpä keuhkokarsinoomia, sekä osajoukko keuhkojen adenokarsinoomat kätkeminen luontaisia ​​T /T-antigeenin syövän allekirjoitus. [30] Huono ennuste on myös liittynyt BRCA1 yliekspressio alussa NSCLC. [31] Tässä tutkimuksessa kahden vuoden pysyvyys oli 41% potilailla, joilla oli alhaisin BRCA1, 16% niillä, joilla välitasojen ja 0% niissä kanssa korkeimmalla tasolla.

mekanismit BRCA1- yli-ilmentymisen tai alisäätely NSCLC on selvennettävä. Kuitenkin äskettäin on osoitettu, että DNA taukoja nopeasti aktivoida heterochromatin proteiini 1-β (HP1-β), joka edistää histoni H2AX fosforylaatio, aloittaessaan BRCA1 merkkivalolaitteista DNA korjaukseen. [32] Kiehtovaa, kaseiinikinaasi 2 edistää mobilisointi HP1-β ja liittyy huonon ennusteen NSCLC. [33] Vaikka BRCA1 metylaatio havaitaan ductal rintasyöpä, se löytyy vain 4%: NSCLCs. [34] Low BRCA1 ilmentyminen kasvaimissa voi johtua menetys histoni metyylitransferaasit, mikä johtaa vähentyneeseen chromatin H3 metylaatio lysiiniä 9, minkä seurauksena downregulation HP1-β. [35]

tässä vaiheessa II, ei-satunnaistetussa tutkimuksessa, geneettinen tekijä ja hoito ero ovat täysin rinnakkaiselo, ja varovaisuutta tulee noudattaa, kun tuloksia tulkittaessa. Kuitenkin valmisteleva analyysi osoittaa, että on olemassa jonkin verran näyttöä räätälöintiin kemoterapia perustuu BRCA1 ja RAP 80 tasoa. Lisäksi tuoreessa tutkimuksessa 96 vaiheen IV ei potilailla, joita hoidettiin dosetakselia ja gemsitabiinin, havaitsimme, että BRCA1 mRNA nousivat, todennäköisyys vastaus lisääntynyt ja etenemisen riskiä väheni. Potilaille, joilla on korkein BRCA1 tasolla, vastausprosentti oli 58,6%, verrattuna 13,8% niille, joilla välitasojen ja 27,6% niille, joilla on alhaisin. [36] Näiden tulosten perusteella ja ne tämän tutkimuksen, Espanjan Keuhkosyöpä Group on nyt muuttamalla protokollaa varten suunniteltujen kansainvälisten faasi III tutkimuksessa pitkälle NSCLC sisällyttää räätälöinnin perustuvat RAP 80 sekä BRCA1 mRNA ilmaisun. Potilaat ohjausvarsi saavat sisplatiinia ja doketakselin ja ne kokeellisessa varsi saavat kemoterapiaa perustuvat RAP 80 ja BRCA1 mRNA: alhainen RAP 80 tasoa (riippumatta BRCA1 tasoilla), sisplatiinin plus gemsitabiinin; väli- tai korkea RAP 80 ja matalan tai keskitason BRCA1, sisplatiini ja doketakselin; väli- tai korkea RAP 80 ja korkea BRCA1, doketakseli yksinään.

Materiaalit ja menetelmät

Protokolla tälle kokeelle on saatavana tukevat tiedot; katso pöytäkirja S1 ja pöytäkirjan S2.

Ethics selvitys

Protokolla hyväksyttiin kunkin keskuksen institutionaalisten eettisten Review Board, ja kaikki potilaat jos kirjallinen lupa ennen tutkimukseen.

Potilaille

Rekrytoimme potilaita tämän vaiheen II mahdollisille monikeskustutkimus perustuu seulontaan EGFR mutaatioita seurasi BRCA1 mRNA ilmaisun analyysi parafinoidut kasvainkudoksessa. Kliiniset kelpoisuus mukana IIIB pleuraeffuusion tai vaiheessa IV ei-mitattavissa oleva tauti mukaan Response arviointiperusteet kiinteitä kasvaimia (RECIST), suorituskykyluokan 0-2 Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) perusteet, riittävä hematologisia, munuaisten ja maksan toiminta. Aivometastaasien sallittiin. Potilaat, joilla levyepiteelikasvain ennen systeemisen hoidon pitkälle NSCLC, tai muita kliinisesti merkittäviä syöpien viiden vuoden kuluessa eivät olleet oikeutettuja.

Potilaat, joilla on EGFR mutaatioita – joko eksoni 19 poisto tai L858R mutaatio – saivat 150 mg päivittäin suun erlotinibin jatkuvasti etenemiseen saakka tai sietämättömiä haittavaikutuksia. Kukin sykli oli 28 päivää. Potilaat, joilla on villin tyypin EGFR sai räätälöityjä kemoterapia perustuu BRCA1 mRNA-tasoja. Potilaat alimmassa tercile BRCA1- ilmaisun saivat sisplatiinia 75 mg /m

2 päivänä 1 plus gemsitabiinin 1250 mg /m

2 päivinä 1 ja 8. potilasta väli- tercile saivat sisplatiinia 75 mg /m

2 päivänä 1 ja doketakselin 75 mg /m

2 päivänä 1. Potilaat korkein tercile saivat dosetakselia 75 mg /m

2 päivänä 1. Kaikki kemoterapiaa toistettiin kolmen viikon välein enintään kuusi syklit ellei ollut aikaisemmin näyttöä taudin etenemisestä tai sietämättömiä haittavaikutuksia.

Perustaso arviointiin sisältyi sairaushistoria, fysikaalinen tutkimus ja kasvainten mittaukset ilmeni selvänä vaurioiden sekä vauriot arvioitiin tietokonetomografia skannaa. Perustaso arviointimenetelmä toistettiin joka toinen sykli, ja sen jälkeen kuuden viikon välein sairauden etenemiseen asti.

Molecular analysoi

Tuumorikudos keräys ja laser kaapata mikrodissektion.

BRCA1, RAP80 ja Abraxas geenien ilmentyminen ja EGFR mutaatioita analysoitiin RNA ja DNA eristettiin parafinoidut tuumorikudoksia. Kunkin kasvaimen näytteestä hematoksyliinillä /eosiinilla värjättyä viipale analysoitiin meidän patologi valita kasvaimen alueelle. Kaksi 5-mikronin viipaleet kiinnitettiin erityistä dioja (Pem-Membrane dioja, Palm, Oberlensheim, Saksa) laser kaapata mikrodissektion (CAPmover Microdissector, Carl Zeiss Microimaging, Barcelona, ​​Espanja) varmistaa vähintään 90% syöpäsoluja. Yksi dia käytettiin RNA: n eristys ja toinen on käytetty DNA-eristystä varten.

Geenien ilmentyminen analyysi.

Geenien ilmentyminen analyysi suoritettiin RNA eristettiin kasvain kudosnäytteitä. cDNA syntetisoitiin käyttämällä M-MLV retrotranscriptase entsyymiä. Templaatti-cDNA lisättiin Taqman Universal Master Mix (AB; Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) spesifisiä alukkeita ja koetinta kunkin geenin (taulukko S8). Aluke ja koetin sarjaa suunniteltiin käyttäen Primer Express 2.0 Ohjelmisto (AB) ja RefSeq sekvenssit (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=gene). Kvantifiointi geenin ilmentyminen suoritettiin käyttäen ABI Prism 7900HT Sequence Detection System (AB).

EGFR-mutaatio-analyysi.

eristämiseksi DNA mikropaloitelluista kudoksesta, materiaali inkuboitiin proteinaasi K: ja DNA uutettiin fenoli-kloroformilla ja saostetaan etanolilla. Alukkeet PCR-monistukseen sisäkkäin reaktioita eksonit 19 ja 21 EGFR näkyvät tietoja. Mutaatiot analysoitiin kahdella tavalla: DNA: n sekvensointi ja pituus analyysi fluoresoivasti leimattuja PCR-tuotteita EGFR deleetioita eksonissa 19, ja sekvensointi ja 5′-nukleaasiaktiivisuus määritys (TaqMan) EGFR eksonissa 21 (L858R).

(lisätietoja molekyylitasolla analyyseihin, katso teksti S1).

tilastollinen

Potilaat jaettiin ryhmiin perustuen terciles BRCA1- ilmaisun koska tämä jako on vähemmän altis bias useina vertailuja. Cut-off pistettä BRCA1 terciles saatiin Espanjan Lung Cancer Group tietokanta, joka sisältää kliiniset ja geneettisiä ominaisuuksia yli 600 Espanjan keuhkosyöpäpotilaita. Vastaukset kirjattiin mukaisesti RECIST kriteerit. Mediaani aika taudin etenemiseen ja eloonjäämiseen laskettiin hoidon aloittamisesta ensimmäiseen dokumentoitu taudin etenemiseen tai kuolemaan, vastaavasti.

Jotta vertailla määrällisiä muuttujia potilailla kussakin hoitoryhmässä, tutkia assosiaatioita muuttujat kussakin ryhmässä, ja tutkia, miten voitaisiin yhdistyksen välillä lähtötilanteen ominaisuuksien ja vastaus, käytimme parametriset testit (opiskelijan t-testissä tai ANOVA) tai vastaavat ei-parametriset testit (U Mann-Whitney, Kruskall Wallis), kun normaalius ei pitänyt . Normaalisuus jatkuvien muuttujien tarkastettiin kanssa Kolmogorov-Smirnov testi. Jotta vertailla kategorinen muuttujia ja vastausprosentit niiden 95% CI keskuudessa hoitoryhmien käytimme joko kaksipuolinen Fisherin testiä tai Chi-square test.

Yhdistyksen riskitekijöiden kanssa time-to -tapahtuma päätepisteet analysoitiin kaksipuolinen logrank testi, ja Kaplan-Meier menetelmää käytettiin piirtää vastaavan aika-to-etenemistä ja eloonjäämistä käyriä. Univariate Coxin regressioanalyysi, jossa riskisuhteita ja niiden 95% CI käytettiin arvioitaessa yhdistyksen välillä jokainen mahdollinen ennustetekijä ja selviytymistä sekä aika taudin etenemiseen. Nämä tekijät sisällytettiin monimuuttuja Coxin suhteellisen vaarat regressiomallin arvioida itsenäistä merkitystä kunkin muuttujan eloonjäämiseen ja aika taudin etenemiseen. Uskottavuussuhde testillä arvioida sovituksen hyvyys, ja Wald testi käytettiin arvioitaessa kertoimen merkitystä. Mahdollisissa monivertailuja, p-arvot korjataan Bonferronin korjauksen.

Kahdeksankymmentä-kuusi 111 potilasta ilman EGFR mutaatioita, joille riittää Kasvainkudos saatavilla sisällytettiin valmistelevan Saharan analyysi suhteessa välillä BRCA1, RAP80 ja Abraxas ilme. Spearmanin rank testillä arvioida korrelaatio BRCA1, RAP80 ja ABRAXAS mRNA: n ilmentymisen.

Kaikki tilastolliset laskelmat suoritettiin SPSS ohjelmiston tilastopaketista, versio 15,0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA) ja S-PLUS 6.1. Kaksipuolinen p-arvot alle 0,05 pidettiin merkittävinä.

tukeminen Information

teksti S1.

Supplemental teksti

doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s001

(0,04 MB DOC) B Taulukko S1.

kliinis ominaisuudet, geeniekspressiotasot, EGFR-mutaatio asema, ja tuloksia kaikille potilaille

doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s002

(0,07 MB XLS) B Taulukko S2.

Tyypit etäpesäkkeiden

doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s003

(0,05 MB DOC) B Taulukko S3.

Ominaisuudet 86 potilasta, joille RAP 80 ja Abraxas analysoitiin

doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s004

(0,07 MB DOC) B Taulukko S4.

Eloonjäämismediaani mukaan tasoilla BRCA1 ja Abraxas

doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s005

(0,03 MB DOC) B Taulukko S5.

aika taudin etenemiseen mukaan tasoilla BRCA1 ja Abraxas

doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s006

(0,03 MB DOC) B Taulukko S6.

Monimuuttujalähettimet COX malli selviytymisen BRCA1 ja RAP 80 jatkuvina muuttujat

doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s007

(0,03 MB DOC) B Taulukko S7.

Monimuuttujalähettimet COX mallin aika taudin etenemiseen kanssa BRCA1 ja RAP 80 jatkuvina muuttujat

doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s008

(0,03 MB DOC) B Taulukko S8.

alukkeiden ja koettimien käytetään geenien ilmentyminen analysoidaan

doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s009

(0,04 MB DOC) B Kuva S1.

aika taudin etenemiseen mukaan hoitoryhmässä. Aika taudin etenemiseen oli 13 kuukautta EGFR ryhmässä 5 kuukautta matalan ja keskitason BRCA1 ryhmiä, ja 8 kk korkean BRCA1 ryhmä (katso taulukko 2).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s010

(8,92 MB TIF) B Kuva S2.

Aika taudin etenemiseen potilailla matalan BRCA1 mukaisessa ryhmässä RAP 80 ekspressiotasoja. Aika taudin etenemiseen oli 14 kuukautta potilailla, joilla on alhainen RAP 80 tasoa, 4 kuukautta niille, joilla on keskitason RAP 80 tasoa, ja 6 kk niille, joilla on korkea RAP 80 tasoa (katso taulukko 4).

Doi: 10,1371 /journal.pone .0005133.s011

(10,31 MB TIF) -iin Protocol S1. Trial Protocol

doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s012

(1,12 MB PDF)

Protocol S2.