Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Sen lisäksi tulehdusta estäviä, sinnamaldehydi on raportoitu olevan anti-karsinogeeninen. Täällä, tutkimme sen vaikutus immuunijärjestelmän soluissa.

Methods

aktivoituminen Nukleaaritekijä-KB mukaan kinnamaldehydiä (0-10 ug /ml) yksinään tai yhdessä lipopolysakkaridin arvioitiin THP1XBlue ihmisen monosyyttistä solulinjaa ja ihmisen perifeerisen veren mononukleaarisissa soluissa (PBMC). Lisääntymistä ja sytokiinien (IL10 ja TNFa) määritettiin ensisijainen immuunisolujen ja ihmisen solulinjoissa (THP1, Jurkat E6-1 ja Raji solulinjoja) stimuloidaan cinnamaldehyde yksin tai yhdessä lipopolysakkaridi. Typpioksidi määritettiin hiiren RAW264.7 soluissa. Lisäksi eri käsitelty PBMC värjättiin CD3, CD20 ja anneksiiniV.

Tulokset

pieninä pitoisuuksina (alle 1 ug /ml) cinnamaldehyde johti pieneen kasvuun nuclar tekijä-kB aktivaation , kun taas korkeammat pitoisuudet johtivat annosriippuvainen väheneminen Nukleaaritekijä-kB aktivaation (jopa 50%) in lipopolysachharide stimuloiman THP1 solut ja PBMC. Näin ollen, typpioksidi, interleukiini 10 eritys sekä solujen proliferaatiota vähenivät lipopolysachharide-stimuloiduissa RAW264.7-solut PBMC-soluja ja THP1, Raji ja Jurkat-E6 immuunisolujen läsnä ollessa cinnamaldehyde konsentraatiosta riippuvaisella tavalla. Virtaussytometrianalyysin PBMC paljasti, että CD3 + olivat enemmän vaikutusta kuin CD20 + -solujen apopotosis jonka kanelialdehydi.

Johtopäätös

attribuutti anti-inflammatoriset ominaisuudet cinnamaldehyde sen kyky estää tumatekijä-KB aktivaatio immuunijärjestelmän soluissa. Hoito cinnamaldehyde johti esto solujen elinkelpoisuuteen, jakaantumiseen ja indusoi apoptoosia annoksesta riippuvalla tavalla ensisijainen ja ikuisti immuunisolujen. Tästä syystä, vaikka sen kuvataan anti-karsinogeeninen omaisuuden hoito sinnamaldehydi syöpäpotilailla saattaa olla vasta johtuen sen kyvystä estää immuunisolujen aktivoitumisen.

Citation: Roth-Walter F, Moskovskich A, Gomez-Casado C, Diaz-Perales A, Oida K, Singer J, et al. (2014) immunosuppressoivilla vaikutus Kanelialdehydi johtuen Kasvun inhibitio ja apoptoosin induktio immuunisolujen: Implications in Cancer. PLoS ONE 9 (10): e108402. doi: 10,1371 /journal.pone.0108402

Toimittaja: Stephen J. Polyak, University of Washington, Yhdysvallat

vastaanotettu: 21 maaliskuu 2014; Hyväksytty: 28 elokuu 2014; Julkaistu: 01 lokakuu 2014

Copyright: © 2014 Roth-Walter et ai. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki tiedot ovat saatavilla täällä Kuva 1: https://dx.doi.org/10.6084/m9.figshare.1159002, tästä Kuva 2: https://dx.doi.org/10.6084/m9.figshare.1162655 , täällä Kuva 3: https://dx.doi.org/10.6084/m9.figshare.1162660, ja täällä, ja Kuva 4: https://dx.doi.org/10.6084/m9.figshare.1162666.

Rahoitus: tutkimus jota Itävallan Science Fund (FWF) avustus P 23398-B11, ja myöntää W1205-B09 JS. CGC tukivat koulutusta avustusta Espanjan hallituksen (FPI ohjelma, MICINN-MINECO). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Cinnamon käytetään laajalti teollisuudessa mausteena ja makuaineen, mutta se on myös tärkeä yhdiste perinteisen rohdosvalmiste. Eteerinen öljy on kanelinkuoren muodostuu 80% cinnamaldehyde [1] ja vesipitoinen uute kaneli mauste on annettu kanssa antioksidanttisia ominaisuuksia [2], [3]. Sinnamaldehydiä (CA) on bioaktiivinen yhdiste, joka on tunnistettu olevan antibakteerinen [4], [5], anti-inflammatoriset [6], [7], hypoglykeeminen [8], anti-mutageeninen [9], [10 ] ja antituumorigeenistä aktiivisuutta. Lisäksi osoitettiin olevan antiproliferatiivisia ja proapoptoottisiin eri syöpäsolulinjoissa

in vitro

[11] – [15]. Anti-syöpää omaisuuden CA saavutetaan mitokondrioiden depolarisoitumisen [16], joka johtaa koholla reaktiivisia happiradikaaleja, aktivointi pro-apoptoottisten Bcl-2-perheen proteiinit, kaspaasi-3 ja mitogeeni-aktivoituja proteiini-kinaasien [16], [17] sekä NF-KB ja AP-1-aktiivisuutta [15], [18].

yhdisteet, joilla on sekä anti-syövän sekä anti-inflammatorisia ominaisuuksia, kuten CA voi siis tarjota houkutteleva terapeuttinen työkalu syövän hoidossa. On hyvin tunnettua, että krooninen tulehdus on laukaista syövän edistämiseen. Kuitenkin muodostuneen kasvaimen immuuni heikentävän ympäristö on jo olemassa ja edelleen immuuni-tukahduttaminen johtaa kasvaimen edistämisen [19] – [23]. Tässä suhteessa, kuolema tai kertymistä huonosti dendriittisolujen [24], [25], downregulation HLA-luokan I molekyylien [26], [27] ja lisääntyneisiin säätelijä-T-solujen [28] kasvaimiin ovat saaneet huomiota. Immunosuppressio kasvaimessa ympäristössä johtaa alentunut perifeerisen T-solujen

in vitro

, joka korreloi enemmän negatiivinen tulos syöpäpotilailla [29]. Näin ollen onnistunut stimulaatio immuunijärjestelmän seurauksena syövän hoidossa on osoitettu vähentävän taudin pahenemisvaiheita ja parantaa selviytymistä [30].

Näin ollen erilaisia ​​strategioita syövän immunoterapiassa on syntynyt viime vuosina torjumiseksi immunosuppressiivisten tekijät ja luomaan anti-kasvain ympäristössä. Approaches aktiivisessa syöpälääkkeen immunoterapiassa sisältyvät 1) käyttöönotto kasvaimeen liittyviä antigeenejä tai niiden johdannaisia ​​rokotteiden immunogeenisessa yhteydessä murtaa kasvain toleranssi; [31] 2) immuunisolujen eristämistä syöpäpotilaista, jonka jälkeen antigeeni sykkivä ja /tai stimulaation

ex vivo

ennen uudelleen infuusio potilaaseen [32] sekä 3) estää immunosuppressiiviset molekyylit, kuten sytotoksisen T- lymfosyytti-liittyvä antigeeni 4 (CTLA4), ja ohjelmoidun solukuoleman proteiini 1 (PD1), jossa monoklonaalisia vasta-aineita [33].

antituumorigeenisiä ominaisuuksia, jotka ovat tähän asti katsottu johtuvan kanelialdehydi, pääteltiin malleista keskittyvä syöpäsoluja. Ottaen kuitenkin huomioon, että on tärkeää kasvaimen infiltroituneen immuunisolujen, pyrimme tässä tutkimuksessa kriittisesti arvioida sen vaikutuksia ensisijaisen ja ikuisti immuunijärjestelmän soluja.

Materiaalit ja menetelmät

Ethic selvitys

tutkimus hyväksyi institutionaalisten eettinen komitea on Medical University of Vienna (EK-Nr. 949/2011) ja tietoisen kirjallisen suostumus saatiin kaikki aiheet ennen niiden osallistumista tutkimukseen. Terveillä vapaaehtoisilla, joilla ei ole raportoitu allergia kaneli lahjoitti 15 ml verta.

PBMC eristäminen ja solulinjoissa

Perifeerisen veren mononukleaarisia soluja (PBMC) 6 terveillä vapaaehtoisilla ei ole raportoitu allergia kaneli eristettiin kokoverestä käyttäen Ficoll-paque tiheysgradienttisentrifugoinnilla, kuten aikaisemmin on kuvattu [34], [35].

THP1-XBlue ihmisen monosyyttinen solulinja, joka on saatu InvivoGen (San Diego, CA, USA) sekä THP1 Jurkat E6-1, Raji (kaikki ATCC: ltä, Rockville, MD, USA) solulinjat ja ääreisverenkierron ihmisen mononukleaarisissa soluissa (PBMC: t) pidettiin suspensiona RPMI-1640 (Gibco Invitrogen, Darmstadt, Saksa), joka sisältää lämmöllä inaktivoitua 10% vasikan sikiön seerumia (FCS), 1% penisilliini /streptomysiiniä ja 1% L-glutamiinia. Mukaan valmistajan protokollan, 200 ug /ml tseosiinia lisättiin, kun lisääminen on THP1-XBlue soluja. Hiiren RAW264.7 makrofagit, ostettu ATCC viljeltiin Dulbeccon modifioidussa Eaglen väliaineessa (DMEM; Gibco Invitrogen, Darmstadt, Saksa) täydennettynä 10% FCS lisättynä 1% penisilliini /streptomysiiniä.

Solustimulaatio

Kaikki soluja stimuloitiin CA (SAFC kemikaalien syöttö /Sigma Aldrich, Steinheim, Saksa), jonka pitoisuus alueella 0 10 ug /ml kanssa tai ilman sitä 5 ug /ml (15 000 EU /ml), LPS:

E. coli

055: B5 (Sigma, St. Louis, MO, USA).

Nuclear louhinta

PBMC (1 x 10

6 solua /kuoppa) ympättiin 48-kuoppaiselle levylle ja niitä stimuloitiin CA (0-10 ug /ml) yksinään tai yhdessä LPS: ää (5 ug /ml, 15 000 EU) 24 tuntia. Myöhemmin tumauutteet saatiin käyttämällä kaupallisesti saatavilla olevaa ydin- uuttoreagenssit ja mukaan valmistajan protokollan (Thermo Scientific, Pierce, Rockford, IL). Lyhyesti, solut pestiin PBS: ssä ja hajotettiin sytoplasman uuttoreagenssi I ja II. Poistamisen jälkeen solulimafraktio, ydin- proteiinit uutettiin käyttäen tumauutteesta reagenssia ja säilytettiin -80 ° C: ssa.

fosfo-NFKB p65 määritys

Phospho-NFKB p65 määritettiin ydin- jakeet käyttäen phospho -NFkB p65 ELISA, (InstantOne ELISA, eBioscience, San Diego, CA) noudattamalla valmistajan protokollan. Lyhyesti, ja tumauutteet, vasta-cocktail sekoitus lisättiin yhden tunnin ajan ennen pesua levy ja lisäämällä detektioreagenssi 30 minuuttia, reaktio pysäytetään ja mittaamalla optinen tiheys 450 nm: ssä.

NF-KB: n aktivaation määrityksessä

NF-KB: n aktivaation määritykset suoritettiin käyttäen THP1-XBlue reportteri-soluja, jotka ilmensivät stabiilisti NF-KB /AP-1-indusoituva erittyvä alkalinen fosfataasi toimittaja (SEAP), mukaan yhtiön protokollaa. Lyhyesti, 1 x 10

5 solua /kuoppa siirrostettiin 96-kuoppaiselle levylle ja niitä stimuloitiin CA (0-10 ug /ml) yksinään tai yhdessä LPS: ää (5 ug /ml, 15 000 EU /ml ) 24 tuntia. NF-KB: n aktiivisuus määritettiin lisäämällä QUANTI-Blue substraattina eritetyn alkalisen fosfataasin supernatanteissa ja inkuboidaan vielä 8 tunnin ajan 37 ° C: ssa ja 5% CO

2. Sen jälkeen, optinen tiheys (OD) mitattiin 625 nm: ssä käyttämällä spektrofotometriä Tecan InfiniteM200 PRO (Tecan Group Ltd, Männedorf, Sveitsi).

Typpioksidi määrittämiseksi

Typpioksidi (NO) pitoisuudet supernatantit määritettiin käyttäen Griess-reagenssia (Sigma Chemical Co. St. Louis, MO, USA). RAW264.7-solut (1 x 10

6 solua /ml) inkuboitiin CA (0-10 ug /ml) läsnä ollessa tai ilman LPS: ää (5 ug /ml) 24 tuntia. Tämän jälkeen, sama tilavuus Griessin reagenssia lisättiin supernatantteja. Kun 10 minuutin inkubointi, OD mitattiin 550 nm: ssä. Nollasta 100 uM natriumnitriittiä (NaNO

2; Sigma) käytettiin standardina laskemiseksi NO-tasoja.

Cytokine analyysi

RAW264.7-solut ja ihmisen PBMC: t (1 x 10

6 ja 2 x 10

5 solua /ml, vastaavasti) inkuboitiin CA (0-10 ug /ml) puuttuessa tai läsnä LPS: ää (5 ug /ml, 15 000 EU /ml) . Cell-free supernatantit otettiin talteen ja säilytettiin -80 ° C: ssa käyttöön asti. Pitoisuudet IL10: n ja TNF-α supernatanteissa määritettiin ELISA: lla valmistajan ohjeiden mukaisesti protokollan (eBioscience, San Diego, CA).

solunelinkykyisyysmääritys

Solujen elinkyky määritettiin EZ4U ( Biomedica, Itävalta) mukaan valmistajan protokollaa. Kaksi satoja mikrolitraa solususpensiota (THP1, 1 x 10

4 solua /kuoppa, Raji, 2 x 10

4 solua /kaivo, Jurkat E6-1, 3 x 10

4 solua /kuoppa; ja ihmisen PBMC: t, 1 x 10

5 solua /kuoppa) inkuboitiin 96-kuoppalevyillä CA (0-10 ug /ml) puuttuessa tai läsnä LPS: ää (5 ug /ml, 15 000 EU /ml ) 24 tuntia. Lyhyesti, 20 ui substraattiliuosta lisättiin kuhunkin kuoppaan ja inkuboitiin 3 tunnin ajan 37 ° C: ssa, 5% CO

2, ennen mittausta OD 465 nm: ssä viitaten aallonpituudella 620 nm.

virtaussytometria-analyysi

Solut värjättiin anneksiini V markkerina varhaisen apoptoosin ja analysoitiin FACS: llä. Lyhyesti, juuri eristettyjä ihmisen PBMC: (2 x 10

5 solua) inkuboitiin CA (0-10 ug /ml) puuttuessa tai läsnä LPS: ää (5 ug /ml, 15 000 EU /ml) 24 tuntia ennen värjäämällä anti-CD3-APC (klooni SK7) ja anti-CD20-PE: n (klooni 2H7) 30 minuutin ajan 4 ° C: ssa (sekä vasta-aineet olivat peräisin eBioScience ja käytettiin pitoisuutena 1 ui /50 ui värjäyspuskurilla). Sen jälkeen, anneksiiniV-FITC: tä (1 pl /näyte, eBioscience, San Diego, CA, USA) sitomispuskuriin (10 mM HEPES, 140 mM NaOH, 2,5 mM CaCl

2, pH 7,4), lisättiin soluihin 15 min huoneen lämpötilassa. Hankinta ja edelleen analyysi suoritettiin FACSCantoII (BD Biosciences).

Tilastollinen analyysi

Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttämällä GraphPad Prism Version 6 ohjelmistopaketti. Arvot analysoitiin yksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA), jota seurasi Duncanin alueella testi. P-arvot 0,05 pidettiin merkittävinä. Kaikki tulokset ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD.

Tulokset

Vaikutus cinnamaldehyde NF-KB /AP-1 aktivaatio on pitoisuudesta riippuvaista

Ensin arvioitiin panos ja kanelialdehydi on NF-KB: n aktivaation. CA on raportoitu vaimentavan NF-KB: n aktivoitumista, kun LPS-stimulaatio, joten toimii anti-inflammatoriset [36], [37]. Samoin myös havaittu NF-KB /AP-1 enintään 65%, kun LPS-stimulaation THP1-XBlue toimittaja soluissa, kun suurempina pitoisuuksina 1 ug /ml käytettiin. Kuitenkin, toisin kuin muut raportit [36], [38] – [40], me stimuloiduissa soluissa myös pienemmillä pitoisuuksilla cinnamaldehyde ja havaittiin merkittävä lisäys (40% käyttäen 0,1 ug /ml CA) NF-KB /AP-1 aktivaatio verrattuna pelkästään LPS: llä (Fig. 1A). Niinpä pieninä pitoisuuksina CA edelleen aktivoitua NF-KB /AP-1-reitin, kun taas suuremmat pitoisuudet estivät tämän reitin kautta.

. THP1-XBlue solujen tai B-PBMC: t käsiteltiin eri pitoisuuksilla CA yksinään (valkoiset pylväät) tai yhdessä LPS stimulaation (mustat pylväät) 24 tuntia. Pylväät edustavat dataa A. kolmen erillisen kokeen normalisoida LPS yksin ryhmä ja B kolme ihmisillä. Data esitetään keskiarvo ± SD, * p 0,05.

arvioitiin myös NF-KB: n aktivoitumista ihmisen immuunijärjestelmän soluihin käyttäen perifeerisen veren mononukleaarisia soluja (PBMC). Myös täällä hyvin alhainen pitoisuus CA johti edelleen NF-KB: n mitattuna havaitseminen fosfo-p65 ydinvoiman jakeet LPS-stimuloitujen PBMC terveen luovuttajan ja kasvuun CA-pitoisuus yli 1 ug /ml johtivat in vaikeuttaa NF-KB. Siksi, CA kykeni inhiboimaan NF-KB: n aktivaation käytettäessä kuolemattomaksi sekä ensisijaisena immuunisolujen ihmisperäisiä keskittynyt yli 1 ug /ml.

Kanelialdehydi vaikuttaa sytokiinien eritystä ja typpioksidin LPS-stimuloiduissa immuunisolujen

Seuraavaksi analysoidaan aktivaation LPS-stimuloitujen immuunisolujen by CA. Kun LPS-stimuloiduissa PBMC: itä inkuboitiin CA sytokiinin vapautumisen mittaukset, suurempina pitoisuuksina 1 ug /ml inhiboi sytokiinien erittymistä immunosuppressiivisten sytokiinien, kuten IL 10 (Fig. 2A) sekä tulehduksellisten sytokiinien, kuten TNF-α (Fig. 2B). Pitoisuudet alle 1 ug /ml ei muuttanut IL10 tasot supernatanteissa (tuloksia ei ole esitetty). Myöskään sytokiineja lainkaan havaittiin, kun soluja inkuboitiin CA yksin.

Ihmisen PBMC inkuboitiin lisääntyvä keskittyminen CA läsnäollessa (mustat ympyrät) tai poissa (avoimet kolmio) LPS 24 tuntia ja supernatantit analysoitiin A. IL10 ja B. TNF-α tasolle. Tiedot esitetään keskiarvona ± SD peräisin PBMC kolmesta aiheista. C. typpioksidin eritystä määritettiin RAW264.7, stimuloidaan konsentraation kasvaessa CA: n läsnä ollessa tai ilman LPS: 24 tunnin kuluttua. Edustavat tiedot yhdestä kolmen erillisen kokeen, suoritettiin kolmena rinnakkaisena. Tiedot esitetään keskiarvona ± SD; * P 0,05, suhteessa kontrollinäytteistä kunkin ryhmän.

Samanlainen kuin sytokiinieri- oli oberserved, kun analysoidaan NO ulosvirtaus LPS-stimuloiduissa hiiren makrofagin kaltaisten solujen (RAW264. 7). Myös tässä NO eritys oli heikentynyt (jopa 35%), kun soluja inkuboitiin suurempia pitoisuuksia CA ( 1 ug /ml). Ei kuitenkaan lisätä NO-tasojen havaittiin käyttäen pienempiä pitoisuuksia. NO eritys ei havaittu soluissa ilman LPS-stimulaation (Fig. 2C).

kanelialdehydi vaikuttaa kielteisesti elinkelpoisuutta ja immuunisolujen lisääntymistä

data niin pitkälle osoittivat, että riippumatta siitä, sytokiinien (pro -tai tulehdusta, TNF-α tai IL10), signalointimolekyylien (NO) sekä väyliä (NF-KB /AP-1) tutkittiin, lasku aktivointi ja tuotannossa havaittiin käytettäessä suurempaa CA kuin 1 ug /ml (= 8 uM). Siksi me seuraavaksi testataan, onko havaitut tulokset jossa alentuneen elinkelpoisuuden CA-käsiteltyjen immuunisolujen.

Kuten kuviossa. 3, alhainen pitoisuus CA ( 1 ug /ml) johti merkittävään kasvuun leviämisen primaaristen ihmisen PBMC: iden, samanlainen pitoisuudesta riippuvainen NF-KB-profiilia CA (Fig. 1). Samanlainen suuntaus havaittiin myös käytettäessä kuolemattomien solujen kuten ihmisen monosyytti kaltaisia ​​soluja THP1, B Raji ja T-solulinjaa Jurkat E6-1, vaikka tämä ei ollut tilastollisesti merkitsevä. Kuitenkin kaikki immuunijärjestelmän solut testattiin (THP1, Raji B-solut, Jurkat E6-1 ja ihmisen PBMC: t) oli yhteistä, että korkeampi konsentraatio CA ( 1 ug /ml) vähentää merkittävästi solujen elinkykyä ja proliferaatiota. Näin ollen tietomme huomauttaa, että immunosuppressiivisen kapasiteetti on kuvattu CA johtuu sen kyky vähentää viabiltiy immuunisolujen korkeammilla konsentraatioilla kuin 1 ug /ml.

. Ihmisen PBMC, B. THP-1, C. Jurkat E6-1 ja D. Raji-soluja inkuboitiin lisääntyvä keskittyminen CA läsnäollessa (mustat palkit) tai ilman (valkoiset pylväät) LPS. Elävät solut havaittiin käyttäen tetratsolium-pohjaisessa määrityksessä. Pylväät edustavat dataa yhdestä kolmen erillisen kokeen suoritettiin kolmena rinnakkaisena. Tiedot esitetään keskiarvona ± SD, * p 0,05, suhteessa hallita näytteitä.

Kanelialdehydi pikemminkin vaikuttaa T-soluja kuin B-solut

Seuraavassa vaiheessa, tutkimme alttius B- ja T-solujen PBMC-valmisteissa CA kautta virtaussytometrialla. PBMC: t värjättiin CD3 (T-solureseptorin) markkerina T-solujen, CD20 (B-lymfosyyttiantigeenin) markkerina B-solujen ja varhaisen apoptoosin markkeri anneksiini V Kuten kuviossa. 4, pitoisuus on yli 1 ug /ml CA johtanut apoptoosia sekä T-solujen (Fig. 4A) ja B-solut (Fig. 4B) annoksesta riippuvalla tavalla, kun taas lastausta pienemmillä pitoisuuksilla ole muuttanut solujen määrä. Käsittely suuria pitoisuuksia CA (5 ja 10 ug /ml) lisäsi apoptoottisten T-solujen jopa 8-kertaiseksi kun taas kasvu apoptoottisten B-solujen oli 3,5-kertainen verrattuna käsittelemättömiin kontrolleihin.

Ihmisen PBMC: itä inkuboitiin CA ja värjättiin CD3, CD20 ja anneksiiniV ja analysoitiin virtaussytometrialla. Data kolmen riippumattoman kokeen esitetään keskiarvona ± SD anneksiiniV positiivisen A. CD3 + solut ja B-CD20 + solut.

Keskustelu

CA on annettu monia farmakologisia ominaisuuksia, kuten on anti-inflammatorisia, anti-haavaumia, kuumetta alentava, mikrobilääkkeiden, diabeteslääkkeet, mutta myös, jolla on antitumoraalinen aktiivisuus [39]. Meidän tarkoituksena on tutkia näitä julistettiin prodigious hyödyllisiä ominaisuuksia tarkemmin, erityisesti painopiste ymmärtää sen vaikutus immuunijärjestelmän soluissa ja siten arvioida sen mahdollinen epäsuora vaikutus syövän etenemiseen. Syöpä määritellään säätelemätön pahanlaatuisten solujen kasvuun, joka on aiheuttanut 90-95% vuoteen ympäristötekijät, kuten saasteet, ruokavalio, auringossa, infektiot, liikunnan puute ja liikalihavuus, ja vain 5-10% voidaan yhdistää geneettisen viat [41]. Todennäköisyys syövän kehittymiseen lisääntyy iän myötä, ja on liittynyt vähentynyt immuunitutkimusohjelmasta vanhuksilla [42]. Todellakin, syöpä microenvironment on hyvin immunosuppressiivinen ja siten uudelleenaktivointi ja modulaatio immuunijärjestelmä on ensisijainen tavoite syövän rokotteiden [43]. Immuuni-modu hoito tarjoavat houkuttelevan lähestymistavan joilla on usein vähemmän sivuvaikutuksia kuin olemassa kemoterapeuttisten. Tässä suhteessa tukkeutumisen estävä CTLA4-antigeenin T-soluissa anti-CTLA4-vasta-aineita johtaa T-solujen aktivaation [44], [45] ja se on osoittautunut johtavan merkittäviin selviytymisen etuja kahdessa satunnaistetussa faasin III tutkimuksissa potilailla, joilla kehittynyt melanooma, korostetaan immuuniaktivaatiota syövässä [46], [47].

Siksi tutkimme immuuni-moduloivia kapasiteetti CA ikuistettu ja ensisijaisen immuunisolujen. Meidän Ensimmäisessä lähestymistavassa, tutkimme sen vaikutusta NF-KB: n aktivaation, koska NF-KB: n konstitutiivisesti aktivoitu useita hematologisia ja kiinteitä kasvaimia, ja se on yksi tärkeimmistä transkriptiotekijöiden liittyy syövän etenemiseen [48], apoptoosin inhibitio, kudosinvaasio ja etäpesäkkeiden [49]. Siten NF-KB: pahanlaatuisten solujen pidetään hyödyllistä. Pystyimme toistamaan dataa kirjallisuudesta, että NF-KB: n aktivaatio LPS-stimuloitujen kuolemattomiksi monosyyttien estetään lisäämällä CA pitoisuus on yli 8 uM [36] – [40], mutta kiinnostavaa havaitsimme merkittävää kasvua NF KB: n aktivoitumista, kun pienempiä pitoisuuksia CA käytettiin. Meillä on siis hypoteesina, että immunosuppressiivista kasvain mikro-ympäristö voivat muovata kun CA voitaisiin soveltaa riittävän korkea pitoisuuksina. Toisaalta alhainen pitoisuus CA, joka saavutetaan kohtuullisesti kaneli, edelleen aktivoi immuunijärjestelmän, vaikka ei riittävä torjumiseksi nopeasti kasvava kasvain. Siksi kohtalainen kulutus CA sisältävien ruoka näyttää pikemminkin olevan ennalta ehkäisevää, pikemmin kuin terapeuttinen keskiarvo. Tärkeää on, meidän tiedot osoittavat, että suuret annokset saattavat jopa olla vasta.

Mitä hyötyosuutta cinnamaldehyde ja alkoholin sekä happo-johdannaisen imeytyvät nopeasti suolistosta, metaboloituu ja erittyy pääasiassa virtsaan, joka näyttää olevan annoksesta riippumaton (jopa 250 mg /kg), lajia ja sukupuolta. Pitoisuus veressä cinnamaldehyde laskimonsisäisen annon 5,15 tai 25 mg /kg uros ja naaras F344 rotilla laski kaksivaiheisesti tavalla [50], [51]. Alkuvaiheessa korreloi nopean ulkonäkö kanelihapon veressä, jossa arviolta 37-60%: n cinnamaldehyde hapettuu kanelihapon 30 min. Toinen vaihe, jossa puoliintumisaika 1,7 h on oletettu, koska vapautuminen cinnamaldehyde proteiinia additiotuotteiden muodostuu alkuvaiheessa [52]. Tuoreessa tutkimuksessa suun kautta CA johti hyötyosuus 20% [53]. Lisäksi samalla raportin jälkeen suun kautta, CA veressä havaittiin olevan 1 ug /ml [52] ja 10 ug /ml kanelihapon [54] ja pidettiin 24 tuntia huolimatta suhteellisen lyhyt biologinen puoliintumisaika 1,7 h.

siis korkea paikallinen pitoisuus cinnamaldehyde ja sen johdannaiset ovat saavutettavissa

in vivo

nielemisen ja voi kohdistaa jatkuvaa immuuni-estävää vaikutusta.

esitämme seuraava lähestymistapa, olemme edelleen keskittynyt immuunijärjestelmän esti ominaisuuksia cinnamaldehyde tutkimalla sen vaikutusta sytokiinien eritystä ensisijainen PBMC aktivoitu LPS:. Mukaisesti tukahduttaminen NF-KB-reitin, havaitsimme pitoisuudesta riippuvaa downregulation tulehduksellisten ja sääntelyn välittäjien TNF-α, IL10 ja NO on osallisena kehittymistä ja etenemistä eri syöpiä [55], [56]. Kuitenkin merkittävä väheneminen välittäjänä eritystä ensisijainen immuunisolujen inkuboitaessa CA ehdotti, että tämä saattaa johtua muutoksista aineenvaihduntaa. Todellakin, meidän tiedot osoittavat selvästi, että CA johtaa lausutaan väheneminen solujen elinkelpoisuudesta kuolemattomaksi sekä ensisijaisena immuunisolujen. Edelleen analyysi immuunisolujen populaation ihmisillä paljastivat, että erityisesti T-solut olivat näkyvästi alttiita CA: n indusoiman apoptoosin yli-B-solujen. Saadut tulokset ovat erittäin tärkeitä, koska sytotoksisia T-lymfosyyttejä edelleen voimakas välittäjiä kasvaimen vastaisen immuniteetin ja kasvaimen infiltraatiota T-solujen on osoitettu olevan hyvä prognostinen tekijä munasarja-, paksusuoli-, rinta-, munuais-, eturauhas- ja kohdunkaulasyövän [43] . Lisäksi on olemassa kaksi

in vivo

tutkimukset, käyttäen kaneliuutetta syövän terapeuttista ainetta. He raportoivat alentunut kasvaimen kasvua hiiren melanoomaa, kun ruokinta kaneliuutetta suurina annoksina (400 ug /g kehon paino) yli 20-30 päivää [37], [57] hiirille. Ne kuitenkin myös osoitti huomattavaa laskua johdetun immuuni elinten kuten perna ja imusolmukkeet [28]. Näissä tutkimuksissa erittäin suuria annoksia CA käytetään, kun otetaan huomioon, että CA on tunnetusti alhainen myrkyllisyys tappavalla annoksella alhainen (LDlow) vanhempien soveltamalla 200 ug /g kehon paino [58]. Havaittu väheneminen nopeasti kasvavissa soluissa, kuten immuunijärjestelmän ja syöpäsolujen saattaa siten olla yleinen ominaisuus kuvatun alhainen myrkyllisyys CA.

Sen sijaan, syöpää huolenaiheet otettiin noussut Mereto et al [59], joka ehdotti sinnamaldehydi heikkona promoottori maksan syövän synnyn johtuen sen potentiaalia olla klastogeenisuutta ja sen kyky aiheuttaa mikrotumia rotan maksassa

in vivo

. On olemassa myös yksi ihmisen tapausselostus, joka niihin liittyvien suullinen syöpä muodostumista käytön jälkeen enintään viisi pakkausta kanelia purukumin päivässä 24-vuotias tupakoi [60].

Still, vuonna 2 vuoden NTP tutkimuksessa hiirillä ja rotilla, jossa jopa 200 mg /kg kehon painoa CA, syötettiin, ja jotka vastaavat maksimaalista pitoisuutta ei-havaittu haitallinen tason, NOAEL pitkä- aikavälin vaikutuksia ei ole havaittu merkkejä kasvainten havaittiin [61]. Tutkimuksessa korostetaan sitä, että kulutus CA ei voi olla syöpää kun määrä nautittuina on kohtalainen.

molekyylitasolla sertifikaatinmyöntäjä aldehydiä jolla α, β-tyydyttymättömiä olefiinisen substituenttien tiedetään muodostavan addukteja cellular tioli-ryhmien varsinkin kanssa nonprotein sulfhydryylien kuten kysteiinin ja glutationin välityksellä nukleofiilisen lisäksi β-hiili [62]. Näin ollen estämällä solujen antioksidantti glutationi, solut rajoittavat niiden kykyä neutraloida vapaita radikaaleja ja reaktiivisia hapen yhdisteitä. Vielä tärkeämpää on, heikentävien solujen glutationi-tasot on myös vakavia vaikutuksia niiden rauta-aineenvaihduntaa, mikä lopulta johtaa solujen kuolemaan [63]. Lisäksi tiedetään toimivan plasman kalvoproteiinien kuten ohimenevä reseptorin potentiaali kationi kanava subfamily jäsen 1 (TRPA1) [64], anturin ympäristön haittavaikutuksilta, kylmä ja venyttää ja TLR4 estämällä niiden TLR4 oligomerisaatioon upon LPS-stimulaation , mutta ei kohdentamalla loppupään molekyylejä [40]. Seuraukset estämään TLR4-oligomerointi täten ovat heikentyvän NF-KB: n aktivaation ja myöhemmin sytokiinien. Mukaisesti tietomme, me osoitamme tässä, että ei vain syöpäsolut, mutta tietyissä immuuni- solut ovat erittäin herkkiä CA johtaa NF-KB: n stabiloimalla solukalvon ja estää TLR4 oligomerointi sekä inhiboi edelleen aktivointi immuunijärjestelmän solut ja sytokiinien. Lisäksi CA aiheuttama apoptotosis lymfosyyteissä, todennäköisesti estämällä solujen glutationi.

Koska tavoitteena syövän immuuni hoito ei ole tukahduttaa immuunijärjestelmää, mutta Aktivoi kone leposoluissa mukauttamisesta, joka on tällä hetkellä menestyksellisesti käytettäessä anti-CTLA4-vasta-aineita, erilaiset lähestymistavat käyttöön CA on kannattanut anti-syövän hoitoon, erityisesti koska sillä on voimakas immunosuppressoivilla vaikutusta T-soluihin, mukaan lukien efektori-T-solupopulaatio.

tulokset osoittavat, että maltillinen kulutus CA hyödyttää immuunijärjestelmää terveen organismeihin, mutta että CA-hoito suurina annoksina voi olla hyötyä vain silloin, kun käsitellään syövän hematopoieettisten solujen kuten lymfooma ja leukemia, jossa immuunivaste järjestelmä on jo tukahdutettu ja jotka muodostavat yleisimpiä lasten syöpiä. Kuitenkin hoidettaessa muita solutyyppejä CA, jonka uudelleen aktivointi immuunijärjestelmän on erittäin haluttu, esim. karsinoomat, sarkoomat tai sukusolujen kasvaimet (munasarjojen tai kivessyöpä) ei saa olla ristiriidassa sen soveltamista.

Kiitokset

Haluamme kiittää Ms Anna Willensdorfer erinomaista teknistä tukea.