Krooninen sairaus

tiivistelmä

Syöpä kasvua ja levittämiseen on tutkittu laajasti jo pitkään. Tästä huolimatta monet uudet havainnot anatomia ja histopatologia syövän tapahtumia raportoidaan edelleen kuten muodostumista vaskulogeeniseen kaltaisen verkon sisällä aggressiivisia kasvaimia. Tässä tutkimuksessa uudenlaisia ​​mikro-putket, nimeltään Primo-alukset, eli sen sisäpuolella vatsaonteloon NCI-H460 keuhkosyöpä hiiren ksenograftimalleissa. Nämä verisuonten kierteet suurelta osin jaettu pinnalle eri elinten ja usein liitetty vatsakalvon kasvain kyhmyt. Histologinen ja immuunifluoresenssivasta tutkimukset osoittivat, että Primo-alukset oli ominaispiirteitä, jotka olivat leimallisesti erilaisia ​​kuin vastaavien näköisiä imusuonten. Heillä oli useita kanavia ympäröi löysä collageneous matriiseja, joka on toisin kuin yhden kanavan rakenne muiden verisuonten järjestelmiä. Tangon muotoisen ytimet pituussuuntaisesti linjassa pitkin kanavia oletettiin olevan endoteelisolujen primo-alusten, mutta Lyve-1, spesifinen merkki lymphatics, ei ollut esitetty, mikä osoittaa selvästi ero imusuonten endoteelisoluissa. Yhdessä nämä havainnot ja luonnehdinta romaani threadlike verisuonirakenteisiin syövän malleissa voi olla merkittäviä vaikutuksia syövän ennustetta ja terapiaan.

Citation: Yoo JS, Ayati MH, Kim HB, Zhang Wb, soh KS ( 2010) karakterisointi Primo-Vascular System vatsaonteloon keuhkosyöpään Mouse Model ja sen erot imunestejärjestelmän. PLoS ONE 5 (4): e9940. doi: 10,1371 /journal.pone.0009940

Editor: Syed A. Aziz, Health Canada, Kanada

vastaanotettu: 27 tammikuu 2010; Hyväksytty 9 maaliskuuta 2010 Julkaistu: 01 huhtikuu 2010

Copyright: © 2010 Yoo et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Systems Biology Infrastructure perustaminen Avustusta Gwangju Institute of Science and Technology. Jung Sun Yoo tukivat Seoul Science Fellowship. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Primo-alukset (Bonghan kanavat) ovat uudenlaisia ​​mikro-putket ja oletetaan olevan mekanistinen perustana akupunktion meridiaanit perinteisen itämaisen lääketieteen. Vuonna 1960-luvun alussa, Bong-Han Kim Pohjois-Korean väitti ovat löytäneet nämä kanavat, nimetty hänen, jonka muodostivat uusi verenkiertoelimistön koko eläimen kehon [1]. Hän ei kuitenkaan paljasta hänen menetelmä tarkkailla järjestelmän yksityiskohtaisesti, niin viime aikoihin asti, ei tarkkaa vahvistusta hänen työnsä oli koskaan saavutettu huolimatta monista yrityksistä Kiinassa, Japanissa ja Venäjällä, paitsi, osittaista toisintaminen on japanilainen anatomi Fujiwara [2].

havaintoja primo-alusten kaneilla, rotilla ja hiirillä oli hiljattain tehty soveltamalla modernin bio-kuvantamismenetelmiä [3], joka ei ole ainoastaan ​​vahvistanut Kimin väitteet mutta myös uusia havaintoja ja tiedot, kuten

in vivo

värjäys primo-alukset trypaanisinisellä [4] ja olemassaolon primo-alusten sisällä rasvakudoksessa [5] ja pinnoilla ihonalainen kasvain kudosten [6]. Lisäksi jonkin verran näyttöä nestettä johtavaa funktio primo-verisuoniston on antanut mittaukset virtausnopeus [7] ja nesteen viskositeetti [8].

Tässä työssä havaitsimme primo paineastiat pinnoilla vatsaontelon elinten ja ympärillä vatsakalvon kasvain kyhmyt keuhkosyövän hiiri malleja. Valaista leviäminen Primo-alusten yhteydessä syövän biologian, käytimme kaksi syövän mallien, eli ihonalainen (sc) ksenograftimallia ja vatsaonteloon (ip) kokeellinen etäpesäke mallia käyttäen anto NCI-H460 ihmisen keuhkojen syöpäsolut [9], [10]. Trypaanisinisellä värjäys alle

in vivo

ja

in situ

olosuhteissa [4], [11] sovellettiin paljastaa laajuus Primo-alusten on kasvain, joka mahdollisti väriaine on ensisijaisesti imeytyä löysä rakenne primo-aluksia verrata muihin vatsan kudoksiin.

esiintyi myös histologisia ja immuunifluoresenssivasta tutkimuksia erottaa primo-alukset samannäköisiä imusuonten. Erottelu Primo-alusten ja imusuonten on ollut uhkaava kysymys, koska yhtäläisyyksiä näiden morfologisia ominaisuuksia. Vaikka tämä ongelma on osittain ratkaistu käyttämällä tavanomaisia ​​histologia ja elektronimikroskopia [12], [13], joka on vakuuttava tutkimus, kuten immunohistokemia luotettava molekulaarinen merkkiaine imusuonten endoteelisoluissa, Lyve-1 [14], [15], [16], ei ollut kokeillut ennen kuin tämä tutkimus. Missä suoritimme immunovärjäämällä Lyve-1, lisäksi käyttää erilaisia ​​tavanomaisia ​​histologiset tutkimukset, näyttää eron Primo-alusten ja imusuonten.

Tulokset

Intraoperative visualisointi Primo-alusten sc -Ksenoqraftit

visualisoida Primo-alusten s.c. hiiri ksenografteja teimme huolellista vatsaonteloleikkaus kaksi-kahdeksanviikkoa ymppäyksen jälkeen 1 x 10

7 NCI-H460 ihmisen keuhkojen syöpäsoluja. Kuvassa 1 on esitetty anatomisia kuvia primo-verisuoni-järjestelmä, värjättiin trypaanisinisen (sininen väri), sisällä vatsat s.c. tuumoreita kantavaa hiirtä.

In situ

trypansininen leviää alla elävät olosuhteissa paljasti läpikuultava Primo-alukset (nuolet) rasvakudokseen (kuviot. 1A 1B) tai ympärillä gonadal elimiä (kuviot. 1C 1D) tai pinnoilla eri elimiin, kuten ohutsuolen, munuaiset, ja maksan (kuviot. 1E, 1F 1H), tai vatsan (Fig. 1G). Muita tunnettuja rakenteita, kuten imusuonten, rasvakudoksessa, verisuonia ja hermoja, ei

in vivo

värjättiin trypansininen meidän useista yrityksistä. Suora, ohut Primo-astiat olivat usein nähtävissä, mutta joskus monet haarainen oksat risteykseen (tähdellä) löydettiin myös. Voisimme nostaa pitkä ja elastinen Primo-alukset pihdeillä taas imusuonten yleisesti kiinnitetty sisäpuolelle kudoksissa (Fig. 1 B).

In situ

trypansininen leviää paljasti läpikuultava Primo-alukset (nuolet) jotka on jaettu pinnoille eri elinten johtui tunkeutumisen väriaine osaksi löysä solunulkoiseen rakenne primo-alusten verrata muihin kudoksiin. Suoraan Ohut primo-astiat olivat usein nähtävissä, mutta joskus monet haarainen oksat risteykseen (tähdellä) löydettiin myös. Huomaa, että primo-alus on nostettavissa pinseteillä toisin imusuonten (B). LI; paksusuolen, SI; ohutsuoli, O; oviduct, L; maksa, K; munuainen, AW; vatsan.

Intraoperative visualisointi Primo-alusten i.p. -Ksenoqraftit

Samanlainen intraoperative kuvantaminen suoritettiin i.p. hiiri ksenograftit. Kuvio 2 kuvaa Primo-verisuoniston kiinnitetty vatsaonteloon kasvain kyhmyt. Primo-alukset (nuolet), värjättiin trypaanisinisellä, pääasiassa sijaitsee noin kasvain kyhmyt (nuolenpäät), joka oli muodostunut 4 viikon kuluttua i.p. injektio 1 x 10

7 NCI-H460-soluissa. Erityisesti jotkut Primo-alusten osoitti leviäminen joko menee sisälle tai ympärille kasvain kyhmyt ja ovat todennäköisesti uusia kasvaimet primo-alusten tarpeista lähtevä kasvain.

Primo-alukset (nuolet) värjätään trypan sininen sijaitsevat pääosin ympärillä kasvaimen kyhmyjä (nuolenpäät), jotka näkyivät 4 viikon ip injektion NCI-H460-soluissa. Varsinkin jotkut primo-alusten osoitti leviäminen joko menee sisälle tai ympäröivään kasvain kyhmyt. SI; ohutsuoli, AW; vatsan.

histologinen karakterisointi Primo-aluksia, H Japan SLC, Inc., Hamamatsu, Japani) käytettiin vakiintuneiden ohjeiden mukaisesti hyväksyttyjen protokollia. Kahdet syövän mallien käytettiin. Ensimmäinen malli on standardi ihonalainen (s.c.) -ksenografti hiirimallissa [9]. Kymmenen hiirtä inokuloitiin s.c. in dorsum 1 x 10

7 NCI-H460 ihmisen keuhkojen syöpäsoluja (suhteessa 1 ml RPMI-1640-väliaine) kasvainten muodostumisen ihon alle. Toinen kasvain malli on i.p. kokeellinen etäpesäke malli. NCI-H460 ihmisen keuhkosyövän soluja injektoitiin i.p. solususpensiona nude-hiiriin (1 x 10

7 solua eläimiä, n = 10), kuten aikaisemmin on kuvattu [9], [10]. Kaikki tutkimukset, joissa eläimet on hyväksynyt Instisute laboratorion Animal Resources Seoul National University.

Intraoperative Imaging

tunnistamiseksi Primo-verisuoniston sisällä vatsaonteloon s.c. ja i.p. keuhkosyöpä malleja, suoritimme hiiri leikkauksen kaksi-kahdeksanviikkoa ymppäyksen jälkeen NCI-H460-soluissa alla yleisten anethesis kanssa i.p. injektio zoletil /rompunin. Ensinnäkin keskiviivan hiiren vatsan tehtiin viilto ja vatsaontelon sisäisen elimiä olivat altistuneet huolellisesti. Sitten 0,1% trypaanisinisellä liuosta, joka oli suodatettu aikaisemmin 0,22 um huokoskoko kokoinen suodatinpaperi, levitettiin tipoittain alttiina elimet [4]. Huuhtelun jälkeen pois väriaine lämpimällä suolaliuoksella, Primo-solmut ja Primo-alukset tunnistettiin suoran visualisoinnin kirurginen anatomia kirurgisella mikroskoopilla (SZX12, Olympus, Japani). Lopuksi kuvat otettiin kiinni CCD-kameraan (DP 70, Olympus, Japani).

Histologinen Analyysit

Kun intraoperatiivisesti kuvantaminen Primo-verisuoni-järjestelmä,

ex vivo

tutkimus suoritettiin histologinen värjäys näytteiden. Tätä tarkoitusta varten, Primo-solmut ja alukset kiinnitettiin 10%: Neutral puskuroituun formaliiniin (NBF) 12 tunnin ajan 4 ° C: ssa, huuhdottiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS), dehydratoidaan porrastettu etanolia sarja, selvensi ksyleenissä, ja sulautettujen in Paraplast (Sigma, USA). Paraplast poikittaisleikkeet, 6 nm paksuus, on leikattu mikrotomilla oli seuraava värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla (H & E) yleisen morfologisia havainnointia, ja Massonin trikromilla (MT) visualisoida kollageenin kuituja. Sitten leikkeet kiinnitettiin kanssa Neomount, ja tutkitaan valo- mikroskoopilla (BX51, Olympus, Japani). Kuvat otettiin CCD-kameraan (Axiophot, Zeiss, Saksa).

immunohistokemia

Luonnehtia Primo-aluksia vastaan ​​imusuonten suoritimme immunohistokemiallinen tutkimuksen IgG anti-Lyve-1 polyklonaalinen vasta-ainetta (pAb), spesifinen merkki lymphatics. Primo-alukset ja imusuonten pinnalla vatsaontelon elimen kasvain kantavia hiiriä korjattu, upotettiin OCT, ja snap-jäädytettiin nestetypessä. Poikkileikkaus (10 um) kiinnitettiin jääkylmässä asetonissa 5 min, pestiin PBS: ssä, ja blokattiin CAS-Block ratkaisu (Invitrogen, USA) 2 tuntia 37 ° C: ssa. Laseja inkuboitiin kanin anti-hiiri-Lyve-1 (2,5 ug /ml, Abcam, UK) yön yli 4 ° C: ssa, mitä seurasivat pesut ja tunnistus vuohen anti kani IgG konjugoituna Alexa Fluor 488 (1:500, Molecular Probes , USA). Objektilasit hoidettiin DAPI ydin- vastavärinä, peitettiin vuonna mikroskooppipreparaatin haalistumista estävää reagenssia (Molecular Probes, USA). Osa samasta näytteestä käsiteltiin vain DAPI ja pitkittäin koko-asennettu mikroskooppipreparaatin haalistumista estävää reagenssiin. Näytteet visualisoitiin konfokaalimikroskopiaa (LSM500, Zeiss, Saksa).

Kiitokset

Kiitämme Byung-Cheon Lee ja Saeyoung Ahn varten hyödyllisiä keskusteluja.