Krooninen sairaus

tiivistelmä

MAGE syöpää kivesantigeenien (CTA) ovat houkuttelevia ehdokkaita immunoterapiaa. Tutkimuksen tavoitteena oli selvittää taajuuden ilmaisun, humoraalisen immuniteetin sekä varoituksia merkitys MAGE CTA ihmisen epiteelin munasarjasyöpä (EOC). mRNA tai proteiinin ilmentyminen taajuudet määritettiin MAGE-A1, -A3, -A4, -A10 ja -C1 (CT7) kudosnäytteistä saadaan 400 potilaalla on EOC. Läsnäolo autologisten vasta-aineita MAGE-antigeenit määritettiin 285 seeruminäytteistä. Väliset suhteet MAGE ilme, humoraalinen immuniteetti MAGE antigeenejä, ja kliinis-patologinen ominaisuudet tutkittiin. Yksittäiset taajuudet ilmaisun olivat seuraavat: A1: 15% (42/281), A3: 36% (131/390), A4: 47% (186/399), A10: 52% (204/395), C1 : 16% (42/267). Voimakas yhdenmukaisia ​​ilmentyminen pannut MAGE-A1: -A4, MAGE-A1: -C1 ja MAGE-A4: -A10 (

p

0,0005). Expression of MAGE-A1 tai -A10 antigeenejä johti huono etenemistä elinaika (PFS) (OR 1,44, CI 1,01-2,04,

p

= 0,044 ja OR 1,3, CI 1,03-1,64,

p

= 0,03, vastaavasti); katsoo, MAGE-C1 ilmentyminen liittyi parantunut PFS (OR 0,62, CI ,42-0,92,

p

= 0,016). Parannettu PFS havaittu MAGE-C1 ilmentyminen oli vähentynyt koekspressoimalla MAGE-A1 tai -A10. Spontaani humoraalinen immuniteetti MAGE- antigeenit oli läsnä 9% (27/285) potilaista, ja tämä ennustettu huono kokonaiselossaoloaika (log-rank-testi

p

= 0,0137). Nämä havainnot osoittavat, että MAGE-A1, MAGE-A4, MAGE-A3, ja MAGE-A10 ovat ensisijaisia ​​houkuttelevia kohteita moniarvoisia immunoterapiassa munasarjasyöpää sairastavilla potilailla.

Citation: Daudi S, Eng KH, Mhawech-Fauceglia P Morrison C, Miliotto A, Beck, et ai. (2014) Expression ja Immuunivasteet MAGE-antigeenit Veikkaa Survival in epiteelikasvaimet munasarjasyöpä. PLoS ONE 9 (8): e104099. doi: 10,1371 /journal.pone.0104099

Editor: Sophia N. Karagiannis, Kings College London, Iso-Britannia

vastaanotettu: 22 huhtikuu 2014; Hyväksytty: 07 heinäkuu 2014; Julkaistu: 07 elokuu 2014

Copyright: © 2014 Daudi et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tätä työtä tukivat osittain Cancer Research Institute munasarjasyöpä työryhmän Grant, syövän rokotteen Collaborative myöntämisestä Cancer Research Institute ja Ludwig Institute for Cancer Research, Anna-Maria Kellen kliininen tutkija Award of Cancer Research Institute (jotta Kunle Odunsi), National Institutes of Health 5T32 CA 108456, National Institutes of Health R01CA158318-01A1 ja Roswell Park Cancer Institute-yliopiston Pittsburg Cancer Institute munasarjasyöpä erikoistunut tutkimus- Excellence National Institutes of Health P50CA159981-01A1. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

epiteelikasvaimet munasarjasyöpä (EOC) edustaa kaikkein vaarallisin gynecologic maligniteetti naisilla. Huolimatta huomattavista ponnisteluista suunnattu varhaisen havaitsemisen ja parantaa hoitovaste, suurin osa naisista esiintyy laajalle levinneenä tautina alkudiagnoosin mukanaan kohtuuttomia relapsimäärä noin 85% ja 5 vuoden eloonjääneiden kokonaismäärästä 20-30% [1], [ ,,,0],2]. Näin ollen kohdennettu hoitostrategioiden, kuten immunoterapia vaaditaan parantamaan kliininen tulos munasarjasyöpä potilaille.

kehittäminen onnistunut immunoterapian edellytetään, että kuhunkin kasvaimeen liittyviä antigeenejä (TAA), jotka ovat yleisesti ilmaistu munasarjan kasvaimet, joissa on rajoitettu ilmentämiskuviota normaaleissa kudoksissa. Lisäksi ihanteellinen antigeeni liittyy suuri taajuus ilmaisun syövän ja todisteita immunogeenisyys. Ehdokas TAA mainitaan usein potilailla, joilla on vahva solu- ja /tai humoraalisia immuunivasteita, jotka osoittavat vahvaa luontainen immunogeenisyys näille antigeeneille [3] – [5].

Syöpä kivesantigeenien (CTA) ovat alaluokka TAA koodattu noin 140 geenejä. Huolimatta huonosti tunnettu biologinen funktio, ilmentyminen näiden antigeenien tiedetään rajoittaa immuuni etuoikeutettu sivustot, kuten kiveksissä, istukan ja sikiön munasarja, mutta ei muissa normaaleissa kudoksissa. Epänormaali ilmentymistä näiden ituradan geeneistä pahanlaatuiset kasvaimet voivat heijastaa aktivointi vaiettu ”gametogenic ohjelma”, joka lopulta johtaa taudin etenemiseen ja laaja immunogeenisyys [6]. Immunogeenisyyden CTA on johtanut laajalle levinneeseen kehittyä syöpä rokotteiden kohdistaminen näitä antigeenejä monissa kiinteitä kasvaimia. Tässä suuren luokan TAA, melanooma-liittyviä antigeenejä (MAGE) ovat nousseet lupaavia ehdokkaita syövän immunoterapiassa [7] – [9].

Yli 30 syöpä kives (CT) geenejä, on raportoitu jäseniksi usean geenin perheitä, jotka ovat järjestäytyneet geeniryppäät X-kromosomissa (CT-X antigeenejä). CT geeniklusterien välissä sijaitsevat Xq24 ja Xq28 ja sisältävät geeniperheistä kuten MAGE ja NY-ESO-1 [10]. Tyypin I MAGE-geeni klustereita ovat laajimmin tunnettu ja sisältävät MAGE-A, MAGE-B ja MAGE-C perheitä. MAGE-A proteiineja koodaavat 12 eri MAGE-A-geenin perheenjäsenten (MAGE-A1 MAGE-A12) ja on määritelty konservoitunut 165-171 amino- happo-emäs, jota kutsutaan MAGE homologiadomeeni (MHD). MHD vastaa ainoa alue jaetun aminohappojen kaikki MAGE-A perheenjäseniä. MAGE-C1 /CT7 poikkeaa rakenteeltaan MAGE-perheen proteiinin kanssa tuotteen 1142 aminohapon (vs. 400 tähteitä MAGE-A proteiinit), joka sisältää tandem toistosekvenssistä joka puuttuu MAGE-A [ ,,,0],11].

Tässä tutkimuksessa olemme analysoineet ilmaisun ja immunogeenisyyttä paneelin viisi MAGE CTA suuressa kohortissa munasarjasyöpä potilaille. Lisäksi olemme tutkineet suhdetta napakoordinaattilausekkeet MAGE geenien ja kliinis-patologisten tuloksia.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat ja näytteet

Formaliinifiksoidusta parafinoidut (FFPE; immunohistokemiaan) ja pikajäädytettiin kudosnäytteiden (käänteistranskriptaasin-PCR) saatiin 400 potilaalla, joille sytoreduktiivisen leikkaus munasarjojen, ensisijainen vatsakalvon ja munanjohtimen syöpä on Roswell Park Cancer Institute (Buffalo, NY) vuosina 1992 ja 2008. Me tunnistaa, ja viittaavat nämä kolme syövät EOC johtuu niiden yhteinen alkuperä MUllerin epiteelin. Kaikki kudosnäytteet kerättiin osana hyväksyttyä protokollan Institutional Review Board (IRB) Roswell Park Cancer Institute. Potilaat allekirjoittivat IRB hyväksytty kirjallinen lupa, ja nämä jätettiin vuonna IRB toimistossa. Kaikki patologia näytteet tarkistettiin toimielimestämme, ja histopatologisia alatyyppi kasvainten luokiteltiin ohjeiden mukaan Maailman terveysjärjestön (WHO) [12], [13]. Näyttämö ja arvosana kasvainten arvioitiin mukaan International Federation of Gynecology and Obstetrics (FIGO) [14], [15]. Alaryhmässä potilaiden seeruminäytteet kerättiin diagnoosi. Potilaskertomus näistä potilaista takautuvasti tarkistettava osana hyväksyttyä Institutional Review Board protokollaa. Tarkastelu mukana avo- ja sairaalahoidon. Tutkimus tulokset sisältyvät kokonaisuudessaan (OS) ja elinaika ilman taudin etenemistä (PFS). Molemmat eloonjäämiskriteerit mitattiin diagnoosin ajankohtana. Toistuminen määriteltiin kautta objektiivisia perusteita kuin kaikki hoito annettiin liitännäishoitona. Keston OS oli väli diagnoosin ja kuoleman. PFS edusti väli diagnoosin taudin etenemiseen, uusiutumisen tai kuoleman. Havainto aika oli väli diagnoosin ja viimeinen kosketus (kuolema tai Viimeisimmässä seurannassa). Tiedot sensuroitiin viimeisessä seurannassa potilailla, joilla ei ole näyttöä toistuminen, etenemisen tai kuoleman.

Yhteensä Tissue RNA: n eristäminen

Yhteensä kudos-RNA eristettiin pakastetusta kasvain kudoksista käyttämällä TRI Reagent (Molecular Research Center Inc., Cincinnati, OH, USA) valmistajan protokollan. Mahdollisesti kontaminoivan DNA poistetaan käsittelemällä RNaasittomalla DNaasi I (Boehringer-Mannheim, Mannheim, Saksa), jota seurasi fenoli /chroloform uuttamalla. RNA liuotettiin RNaasittomissa H

2O. Saatu RNA-pitoisuus mitattiin spektrofotometrisesti (DU500-spektrofotometri, Beckman Coulter, Fulleron, CA, USA), ja laatu RNA: iden tarkistettiin elektroforeesilla 1,5% agaroosigeelillä.

käänteistransskriptaasi-PCR-analyysi MAGE -A1, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A10 ja MAGE-C1 Expression

Kaksi mikrogrammaa kutakin RNA-näytettä käytettiin tuottamaan cDNA kanssa Ready-To-Go käänteiskopioijaentsyymin-PCR (RT PCR) helmet (GE Healthcare, Buckinghamshire, UK). RNA normaalista kiveskudokseen (Clontech, Mountain View, CA) käytettiin positiivisena kontrollina. PCR jälkeen suoritettiin tutkimaan ilmentymisen MAGE-A1, -A3, -A4, -A10 ja -C1 305 potilaalla on EOC. Glyseraldehydi-3-fosfodehydrogenaasigeenin (GAPDH) alukkeita käytettiin koe RNA eheyden. Taulukko S1 listaa alukesekvensseissä kunkin geenin ja sen vastaavan amplikonin pituus. Monistusolosuhteet kaikki geenituotteet oli 5 minuuttia 95 ° C: ssa, jota seurasi 35 sykliä, joka koostui 1 minuutin ajan 95 ° C: ssa, 1 min 60 ° C: ssa, ja 1 min 72 ° C: ssa. Nämä syklit seurasi 6-min pidennysvaiheen 72 ° C: ssa (BioRad iCycler, BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA). PCR-tuotteet erotettiin yli 1,5% agaroosigeelillä ja visualisoitiin etidiumbromidilla on ultravioletti läpivalaisulaitteella (IS-4400 ChemiImager, Alpha Innotech, San Leandro, CA). Intensiteetit PCR tuotteet olivat heterogeenisiä, ja jotkut yksilöt saatiin vain heikko amplikonin bändejä. Nämä pisteytettiin positiivinen ainoastaan, jos tulos voitaisiin toistaa toistuva RNA ja erityiset rt-PCR samasta tuumorinäytesylinterin. Tapauksissa hyvin alhainen transkriptipitoisuuksissa jotka eivät olleet toistettavasti positiivisia ei pidetty positiivinen. PCR-tuote juovat leikattiin irti agaroosigeelistä ja siihen liittyvät DNA eristettiin QIAquick Gel Extraction Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA). DNA-näytteet jätettiin sekvensointi varmistaa PCR-tuotteen.

immunohistokemiallinen analyysi MAGE-A3, MAGE A4 ja MAGE-A10 Expression

immunohistokemiallinen (IHC) analyysi suoritettiin käyttäen FFPE kudoksia 304 potilaista kudossiruina (TMA). TMA konstruoitiin käyttäen 0,6 mm FFPE kudosta ytimiä meistetty kustakin luovutuslohkosta. Voittamiseksi kasvain heterogeenisyys, kolme edustava ydintä valittiin kustakin kasvain. 4 pm paksu kudos ytimet parafiini ja esikäsiteltiin spesifisen antigeenin haku liuosta (DakoCytomation, Carpenteria, CA) 20 minuutin aikana. Objektilasit jäähdytettiin 20 minuuttia ja sitten käsiteltiin 3% H

2O

2 sammuttamiseksi endogeenisen peroksidaasin. TMA Levyjä inkuboitiin sitten seerumittomalla proteiini lohkon (DakoCytomation, Carpenteria, CA) 30 minuutin ajan. Taulukko S2 luetellaan vasta ja IHC olosuhteissa. MAGE-A3 kanin anti-ihmis-polyklonaalista vasta-ainetta (LS-B4662, käyttöikä Biosciences, Inc.) kaupallisesti hankittu. Anti-MAGE-A4 mAb (klooni: 57b) ja anti-MAGE-A10 (klooni: A3) hybridoomasupernatantit tuotettiin yliopistollisessa sairaalassa Basel (Basel, Sveitsi) [16], [17]. Kani-lgG tai hiiren IgG1 (Sigma, St. Louis, MO) käytettiin negatiivisena isotyyppiä valvontaa. Leimatulla streptavidiinilla biotiini (LSAB +) reagenssit (DakoCytomation, Carpenteria, CA) käytettiin mukaisesti valmistajan ohjeiden seuraa 3,3′-diaminobentsidiini (DAB) + (DakoCytomation, Carpenteria, CA) inkubointi. Osiot vastavärjättiin hematoksyliinillä. Leikkaus-arvoa 5% positiivisia kasvainsoluja käytettiin määrittelemään positiivinen ilme.

Measurement seerumin vasta-ELISA

serologiset analyysi humoraalisten immuunivasteiden suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [18]. 285 seeruminäytteistä osajoukko potilaista analysoitiin ELISA seroreactivity bakteereiden avulla tuotettuun täyspitkän rekombinanttiproteiinien MAGE-A1, -A3, -A4, -A10 tai -C1. Negatiivisena kontrollina antigeeni, rekombinantti dihydrofolaattireduktaasin proteiini valmistettiin ja käytettiin kussakin kokeessa. Seerumi laimennettiin jaksoittain 1:100 – 1:100,000 ja lisättiin pieninä määrinä 96-kuoppaisille levyille (Corning) päällystettiin yön yli 4 ° C: ssa 1 ug /ml antigeenia 25 pl ja blokattiin 2 tunnin ajan huoneenlämpötilassa PBS: llä joka sisälsi 5% rasvatonta maitoa. Yön yli inkuboinnin jälkeen levyt pestiin perusteellisesti PBS: llä, joka sisälsi 0,2% Tween 20 ja huuhdeltiin PBS: lla (BioTek ELx405 automatisoitu pesukone). Seerumin IgG sitoutuneena antigeenejä havaittiin vuohen anti-ihmis-IgG-vasta-aineita konjugoituna alkaliseen fosfataasiin (Southern Biotech). Lisäämisen jälkeen AttoPhos alustan (Fisher Scientific), fluoresoiva signaali mitattiin käyttäen Cytofluor Series 4000 fluoresenssin lukulaite (PerSeptive Biosystems). Vastavuoroisesti tiitteri laskettiin kullekin plasman näytteen maksimaalinen laimennus vielä huomattavasti reagoimaan tietyn antigeenin. Spesifisyys määritettiin vertaamalla seroreactivity kesken eri testattuja antigeenejä. Kussakin määrityksessä potilaiden seerumeista, joiden tiedetään reaktiivisuus käytettiin verrokkeina. Positiivinen tulos määriteltiin vastavuoroinen tiitterit 100.

Tilastollinen analyysi

Kaikki tilastolliset analyysit luotiin käyttäen SAS-ohjelmiston (SAS System Copyright 2002 SAS Institute Inc. V.9.2) ja R 2.15.3 tilastollinen tietojenkäsittely kieli. Nimellinen merkitsevyystasolla 0,05 käytettiin kaikissa testausta. Käyttämällä 2 x 2 kontingenssitaulukkomenetelmillä taso yhtäpitävyyttä keskuudessa eri MAGE geeniekspressioprofiilien määritettiin. Jakaumia MAGE-A1, -A3, -A4, -A10 ja -C1 ilmaisun ja kliinisten tulosten analysoitiin Wilcoxonin Rank Sum Test tai Pearson Chi Square Test. Monimuuttujamenetelmin itsenäiseen ennustajia selviytymisen testattiin käyttämällä Coxin suhteellista riskin malliin [19]. Arvioitu elossapysymisaikajakaumat laskettiin menetelmällä Kaplan ja Meier [20], ja testit merkitys suhteessa elossapysymisaikajakaumat perustuivat log-rank-testi. Suhteellinen ennuste tiivistettiin käyttämällä arvioita ja 95%: n luottamusväli rajat riskisuhde (HR). Ei ole tehty oikaisuja monimuuttujille. Fylogeneettinen puu rakennetaan Manhattan etäisyys, koodaus ilmaisu nolla (poissa) ja yksi (läsnä), ja tavallinen naapuri liittymällä algoritmi.

Tulokset

Tutkimus Väestö

yhteensä 400 kudoksissa Munasarjasyöpäpotilaiden, ensisijainen vatsakalvon ja munanjohtimen syöpiä tutkittiin rT-PCR ja IHC. Ominaisuudet tutkimuspotilaat on esitetty taulukossa 1. mediaani-ikä potilaan näyte oli 63 (vaihteluväli 21-93), joiden keston mediaani seuranta-35 kuukautta (vaihteluväli: 1-176 kuukautta) . Kuten odotettua, suurin osa potilaista oli pitkälle edennyt sairaus (82%), huonosti eriytetty kasvaimet (74%) ja vakavien histologia (64%). Platinum herkkä tauti osoitettiin 182 400 potilasta (46%), jossa on 116 potilasta, joilla on platinaa vastus (29%), ja 16 potilasta, joilla on platina tulenkestävä vastaus (4%). Mediaani OS kaikille potilaille oli 40 kuukautta (vaihteluväli: 0-173), kun taas mediaani PFS oli 12 kuukautta (vaihteluväli: 0-160).

Expression of MAGE-A1, MAGE-A3 , MAGE-A4, MAGE-A10 ja MAGE-C1 munasarjasyövässä

Expression MAGE-antigeenit arvioitiin sekä rT-PCR ja IHC että suurin osa potilaista, joilta asianmukaiset näytteet olivat saatavilla. Ilmaisu MAGE-A4 ja MAGE-A10 havaittiin yhtäpitävästi sekä menetelmillä (r = 0,31, OR = 3,88, p 0,001; r = 0,14, OR = 2,00, p 0,001 vastaavasti), mutta MAGE-A3 tulokset eivät olleet toistettavasti Lihavien (r = -0,06, OR = 0,86, p = 0,9198), mikä johtui alhaisesta havaitseminen (taulukko S3). Ellei toisin mainita, jatkoimme luokittelemalla kudoksiin antigeenin positiivinen, jos ne tunnistettiin RT-PCR: llä tai IHC (taulukko 2). Näin ollen, kun otetaan huomioon kaikki 400 kudosnäytteistä analysoitiin RT-PCR tai IHC tässä tutkimuksessa, taajuudet MAGE-A3, -A4 ja -A10 ilmentymistä joko menetelmällä oli 36% (131/390), 47% (186/399 ) ja 52% (204/395), kudosten, vastaavasti (taulukko 2). MAGE-A1 ja -C1 osoitti alin taajuus ilmaisun 15% (42/281) ja 16% (42/267), tässä järjestyksessä. Taulukko S3 on yhteenveto taajuuden MAGE-mRNA: n ja proteiinin ilmentyminen kasvaimen yksilöitä EOC potilaista.

MAGE-A3, -A4 ja -A10 näytteillä ei immunovärjäys normaaleissa kudoksissa (Figs.1A -C), mutta voimakas immunovärjääminen kives (Figs.1D-F). Värjäyssarjaan oli soluliman ja ydinvoiman MAGE-A3 ja A-4, ja hajanainen sytoplasman värjäytymistä MAGE-A10 (Figs.1G-I).

Näytteet värjättiin polyklonaalisella vasta-aineella MAGE-A3 (X20 ), kloonit 57b ja A3 hybridoomasupernatantit MAGE-A4 ja MAGE-A10, tässä järjestyksessä (x15). Näytteet normaalista munasarjasta ja kiveksissä käytettiin negatiivisina ja positiivisina kontrolleina vastaavasti. A-C: värjäys normaalista munasarjan näkyvissä mitään reaktiivisuutta. D-F: Värjäys kiveksissä osoittaa siementiehyiksi vahvojen intratubular värjäys, ja poissa ei-spesifinen reaktiivisuus. G-I: n värjäys munasarjakasvain osoittavat vahvaa soluliman ja /tai tuman värjäytymisen kuvioita.

Co-ilmentyminen MAGE-A ja MAGE-C1 munasarjasyövässä

taajuudet co-ilmentyminen MAGE-antigeenit on esitetty taulukossa 2. korkein taajuus co-ilmentyminen havaittiin -A4: -A10 (29%). Vaikka ne ovat molemmat suhteellisen harvinaisia, MAGE-C perhe antigeeni (-C1) oli taipumus koekspressoitu MAGE-A1 [OR 4.4, p = 0,00015, CI 3,6-5,2] sekä ilmaistaan ​​itsenäisesti muiden MAGE- perhe antigeenejä (kuvio 2a). MAGE-A perheen antigeenejä A 1: -A4 [OR 3,7, p = 0,0003, 3,0-4,4] ja -A1: -A3 [OR 2,8 p = 0,0022, CI 2,2-3,5] on vahvin ilmentäminen rinnakkain; Lähes jokainen pari liittyy paitsi-A1: -A10 (OR = 1,2, p = 0,7 CI 0,6-1,8), mikä viittaa siihen ne ilmentyvät itsenäisesti. Luonnehtia monimuuttuja mallia MAGE ilmaisun, fylogeneettiseen puu kuvassa 2b luotiin, jolloin jokaisen lehden päättyy ympyräkaavio symboloi henkilö tai joukko ihmisiä. On olemassa kaksi erillistä malleja ilmaisun, joita havaitaan. MAGE-A4 geeni ohjaa suuren kuvion ilmaisun (alempi oikeanpuoleinen clades), ja sitten myöhemmin kehittyy MAGE-A3 ja -A10 ilmaisun tässä potilasryhmässä. Toinen ainutlaatuinen ilme kuvio koostuu riippumattoman ilmaus MAGE-A3 ja -A10, joka sitten kehittyy -A4 (ylempi oikeanpuoleinen clades). Täydellisenä vastakohtana MAGE-C1 ilmaisu harvoin esiintyy yksin ja syntyy satunnaisesti koko fylogeneettisen puun. Samoin MAGE-A1 ilmestyy harvoin ja harvoin MAGE-A10 haaran. Nämä havainnot kääntää vahva kliininen seuraukset tämän suuren tutkimuskohortissa.

(A) MAGE-A1 koekspressoituu kanssa -A3 tai -A4 tai -C1. MAGE-A3 koekspressoituu kanssa -A10. MAGE-A4 koekspressoituu kanssa MAGE-A10. Tummempi väri intensiteetti edustaa vahvempi merkitys. Vahvin yhdistykset ovat välillä MAGE-A1 -A4, MAGE-A1 -C1 ja MAGE-A1 -A3. Kertoimet suhde (OR) on suurempi kuin 1 merkitse antigeenejä yleensä esiintyvät yhdessä. (B) Fylogeneettinen puu MAGE ilme. Jokainen lehti päättyy ympyräkaavio symboloi henkilö.

korrelaatio MAGE Antigen Expression kliinisten tutkimusten tulosten kanssa

Suhde MAGE ilmaisun ja klinikan-patologinen parametrejä tutkittiin. Huomasimme, että MAGE-A3 ja A4 eivät ole yksittäisiä ennustetekijöiden vaikutuksia. Niinpä keskityimme lisäanalyysit MAGE-A1, MAGE-A10, MAGE-C1 ja muiden tunnettujen kliinis-patologisten ennustettaessa munasarjasyöpä.

Alone, MAGE-A10 lauseke (204/395, 52%) liittyi huonompi kliiniseen tulokseen (mediaani PFS 8.8 [7,2-12,3] vs. 15,5 [13,6-18,4] kuukautta,

p

= 0,009; OS 37.8 [28,2-45,0] vs. 45,0 [39,8-52,2] kuukautta, p = 0,0781). Koeskspressio MAGE-C1 (25/204, 12%) päinvastainen suuntaus PFS muttei OS: A10 (+) /C1 (-) potilaista oli mediaani PFS 7,9 kk (7,0-12,1) vs. A10 (+) /C1 (+) 13,1 kuukautta (CI9.5-29.9). Ositettu neljään ryhmään perustuen A10 /C1 ekspressiokuviota, tämä malli pätee (log-rank-testi p = 0,0133) ja ehdottaa, että A10 (-) /C1 (+) ilmentyminen voi olla suojaava (mediaani PFS 20 [15,7-NA] kuukautta ) (Fig. 3).

Kaiken eloonjäämiskäyriä potilasryhmille perustuu MAGE-A10 ja -C1 ilme. MAGE-C1 ilmentymisen ennustaa parannettu ilman taudin etenemistä ja suuntauksen yleisesti parantunut selviytymistä. Expression of MAGE-A10 vaimentaa selviytymisen tulosten asteeseen potilaiden negatiivisia MAGE ilme.

Expression kuvioita ei yhdessä liittynyt iän (p = 0,900), vaihe (p = 0,1373), grade ( p = 0,4532), histologia (p = 0,737), ensisijaisesta (p = 0744) tai rajaa- tila (p = 0,112) (taulukko 3). MAGE-C1 ilmentyminen liittyi platina herkkä tauti (28/38, 74% vs. 70/142, 49%; p = 0,009) ja kliinisen vasteen (30/38, 79% vs. 92/164, 56%, p = 0,015).

Vaikka olemme keskittyneet MAGE-A10, sitä vähemmän vallalla MAGE-A1 (42/281, 15%) oli myös lievästi yhteydessä heikompaan eloonjäämisen tuloksiin (mediaani PFS 10,3 [6.2- 15.0] vs 12,8 [10,5-15,7] kuukautta

p

= 0,043, OS 38.7 [20,3-78,4] vs. 41,3 [36,5-46,6] kuukautta p = 0,607). PFS, MAGE-A1 koeskspressio A10 on tarpeeton (ositettu log-rank-testi p = 0,57), mutta A1 (+) /A10 (-) potilailla on hieman huonompi ennuste (mediaani PFS 12,7 [5,3-36,6] vs. 16,3 [14,1-19,4] kuukautta, p = 0,0187). Mallintaa kaikki kolme antigeenejä yhdessä, suosittelemme ottaen ilmaus joko A1 tai A10-antigeeni yhdessä ilmentyminen MAGE-C1; vaikutus ei ole merkittävästi erilainen kerrostuneisuus esitetty taulukossa 3.

korrelaatio vasta-ainevasteen MAGE- antigeeni kliinistä hyötyä

ELISA seerumin MAGE antigeenispesifisen vasta suoritettiin seeruminäytteistä saatu diagnoosi 285 400 EOC potilaille (taulukko 2). Spontaanisti indusoi humoraalisen vasteen ainakin yhtä MAGE-A-antigeenin havaittiin 9% (27/285) potilaista, joista 85% (23/27) ilmaisivat myös MAGE-A-antigeeniä. Serologiset vastaus johonkin MAGE-antigeeni jakautunut tasaisesti kaikkien kliinis-patologisten parametrit (taulukko 4). Läsnäolo humoraalisen immuunivasteen Jonkin MAGE-antigeenit ennustettu huonompi eloonjäämiseen (PFS: n mediaani 12,3 [6,4-19,7] vs. 13,5 [10,9-16,5] kuukautta, p = 0,231; mediaani 27,8 [17,3-52,2] vs 45,4 [40,2-51,9] kuukautta, p = 0,002) (kuvio 4).

Kaiken eloonjäämiskäyriä potilaiden ryhmään perustuen läsnä anti-MAGE autovasta. Humoraalivaste tahansa MAGE-antigeeni ennustaa huono kokonaiselinaika, eikä merkittäviä yhdessä ilman taudin etenemistä.

Keskustelu

immunoterapia on lupaava lähestymistapa parantaa eloonjäämislukua ja kliinisen tulosten munasarjasyöpää sairastavilla potilailla [21] – [23]. Niistä on mahdollista kasvaimen antigeeni tavoitteet, CTA pidetään parhaiden ehdokkaiden kehittämiseen syövän rokotteita. Arvioimaan hyödyllisyyttä MAGE-perheen CTA kohteina siedätyshoidon vuonna EOC esillä kattava analyysi tehtiin suuri paneeli munasarjojen kasvaimia. Tuloksemme osoittavat poikkeava ilmentyminen MAGE-A1, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A10 ja MAGE-C1 15%, 36%, 47%, 52% ja 16% sekä EOC yksilöitä, vastaavasti. Lisäksi olemme havainneet, että kun otetaan huomioon mitään näistä MAGE-antigeenit, noin 78%, ilmensivät ainakin yksi näistä viidestä CT antigeenejä. Lisäksi MAGE-A1 ja MAGE-A10 ilmentyminen oli yhteydessä huonoon kliiniseen tulokseen, kun taas MAGE-C1 /CT7 liittyi parantunut selviytymistä.

taajuus MAGE ilmaisun EOC että me raportoimme on yleisesti samanlainen raportoitu, että suurin osa muista kasvaimista, paitsi melanooman ja ei-pienisoluinen keuhkosyöpä [16], [24]. Expression of MAGE-A3-mRNA: n on todettu 10-40%: useita kasvaimen tyypit, mukaan lukien virtsarakon [25], rintojen [26] ja multippeli myelooma [27]. Mitä EOC, taajuus MAGE-A1 ja -A3 ilmaisun että me raportoimme on samankaltainen kuin aikaisemmissa tutkimuksissa, lukuun ottamatta Zhang

et al

joka löysi 54% ja 37% ilmaisun munasarjasyöpä kudoksiin, vastaavasti [28] – [30]. Tämä saattaa heijastaa eroja tutkimuspopulaatiossa koska siellä oli paljon enemmän varhaisessa vaiheessa kasvaimia kuin tutkimuksessamme ryhmä. Aiemmassa tutkimuksessa, ilmaus MAGE-A4 haitallisesti korreloi selviytymisen tai välillisesti perustettu ennustettaessa munasarjasyöpä [31]. Yhdenmukainen Näiden tutkimusten meidän havainnot osoittavat selvästi yhdistys MAGE ilmaisun ja ennustetta. Tässä suhteessa, kun taas MAGE-A1 ja MAGE-A10-ilmeneminen liittyy huono kliinisistä tuloksista, MAGE-C1 liittyi parantunut eloonjääminen. Nämä erottuva selviytymisen havainnot kesken eri MAGE-antigeeni perheitä esiin monia keskeisiä kysymyksiä roolia MAGE geenien kasvainten synnyssä, invaasiota ja etäpesäkkeiden EOC.

Yleensä MAGE antigeenejä useammin ilmaistaan ​​potilailla, joiden sairaus ja huono tulos, mikä osoittaa, että niiden ilmentyminen saattaa myötävaikuttaa kasvaimien syntyyn [26], [32] – [37]. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että MAGE-proteiinit ovat kriittisiä solun eloonjääntiin, lisäämällä kasvaimia ominaisuudet soluja ja voi näin ollen aktiivisesti edistää pahanlaatuisten kasvainten [38] – [40]. Lisäksi, koska CT-antigeenin ekspression on liittynyt tuumorigeenisen transformaatio syövän kantasoluja [41], on mahdollista, että MAGE-A1 ja MAGE-A10 ilmentävien munasarjasyöpäsoluja edustavat väestön uudistuva kantasolujen ominaisuuksia, ja näin ollen vastustuskykyisempiä immuunijärjestelmän poistaminen tai kemoterapiaa.

toisin kuin MAGE-A1 ja MAGE-A10, mahdolliset mekanismi (t), johon ilmentyminen MAGE-C1 /CT7 koituu selviytymisen etu on vähemmän selvä. Verrattaessa proteiinin rakenne MAGE-perheen jäseniä, kun taas ensimmäinen ja toinen domeeni ovat erittäin konservoituneita MAGE-A: n ja -C perheenjäsenten, MAGE-C1-proteiini kantaa ainutlaatuinen ominaisuus. Lisäksi 275-aminohapon MAGE-homologinen segmentti on sen C-päähän, MAGE-C1 /CT-7 on 867-aminohapon alue koostuu kolmesta eri tandem-toistojen sen N-päässä [11]. Tämä alue voi olla suuri merkitys kuin toistuvan proteiinin sekvenssi voi muotoilla epitooppeja esitetään immuunijärjestelmän tunnustamista MAGEC1 /CT-7 ja mahdollisesti siten laadun määrittämiseksi tuloksena immuunivasteita.

Lisäksi tuloksemme osoittavat, että potilaalla on anti-MAGE humoraalisen immuniteetin oli huonompi ennuste. Nämä löydökset eivät välttämättä merkitse sitä, että anti-MAGE immuunivasteen suoraan heikentää hoitotuloksia munasarjasyöpää sairastavilla potilailla. Koska antigeeni tiheys esittämä antigeenejä esitteleviä soluja

in vivo

differentiaalisesti vaikuttaa sukupolven anti-kasvain humoraalisen ja T-soluvasteiden [42], ehdotamme, että potilailla, joille kehittyi spontaani immuunivasteiden ovat ne, joilla on korkea-antigeenin tiheys, koska kehittyneitä sairauksien, ja näin ollen huonompi ennuste. Nämä potilaat ovat edelleen hyötyvät todennäköisesti MAGE-suunnattu immunoterapia koska niiden käynnissä anti-MAGE-A immuunivasteiden eivät ole tehokkaita. Aikaisemmassa tutkimuksessa spontaani humoraalisten immuunivasteiden vastaan ​​NY-ESO-1-CT-antigeenin, vaikutus humoraalisen immuniteetin oli neutraali potilaan ennusteeseen [43].

Koska ilmentyminen MAGE-antigeenit säädellään epigeneettisten mekanismeja kuten metylaatio, ja histoni asetylaatio, päättelimme, että MAGE-antigeenin ilmentyminen kasvaimissa voi olla seurausta aktivointi koordinoidun geenin ilmentyminen ohjelman sijaan useita riippumattomia tapahtumia [6]. Käyttäen analyysimenetelmät, tässä tutkimuksessa havaittu merkittävää yhteistyötä ilmentymisen keskuudessa MAGE antigeenejä. Nämä tulokset tukevat käsitystä, että munasarjasyöpä hankkii gametogenic transkriptio profiilin, jossa tyypillisesti vaiennetaan geenit nyt aktivoitu johtavat syövän etenemiseen. Tuloksemme osoittavat, että MAGE-A4 on keskeinen geeni, joka ohjaa ekspressiokuvion muiden geenien, joissa MAGE-C1 vain syntymässä satunnaisesti fylogeneettiseen puuhun. Yhdessä tulokset viittaavat siihen, että MAGE-A1, -A10 ja -C1 ovat mahdollisia ennustettaessa munasarjasyöpä ja MAGE-A1 ja A-10 yhteydessä huonoon ennusteeseen; ja MAGE-C1 /CT7 paranemiseen liittyvistä ennusteen. Ehdotamme MAGE-A1 ja MAGE-A10 ensisijaisiksi tavoitteita immuunihoidolle munasarjasyövän. Koska MAGE-A4 ilmentää suhteellisen tiheä ilmaisun, ja näyttää suoraan suuren kuvion koekspressoimalla muut MAGE-antigeenit (Fig. 2b), ehdotamme myös MAGE-A4 ensisijaisena kohteena munasarjasyövän immunoterapiassa.

tukeminen Information

Taulukko S1.

Alukkeet MAGE geenit rt-PCR.

doi: 10,1371 /journal.pone.0104099.s001

(DOCX) B Taulukko S2.

MAGE vasta-aineet ja olosuhteet IHC.

doi: 10,1371 /journal.pone.0104099.s002

(DOCX) B Taulukko S3.

MAGE-antigeeni tilaansa munasarjasyöpä.

doi: 10,1371 /journal.pone.0104099.s003

(DOCX) B

Kiitokset

Kirjoittajat kiittää Erika Ritter ja Christina Sedrak, mistä LICR NY haara, erinomaisesta teknisestä avusta.