Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoite

Tässä tutkimuksessa analysoitiin kliinis korrelaatio munasarjasyöpä (OC) ja RECQL1 DNA helikaasia arvioida sen terapeuttista potentiaalia.

Methods

Kirurgisesti resektoitiin OC 118 takautuvan tapauksissa joille parafiiniblokit kaikki kliiniset tiedot olivat täydellisiä, käytettiin tässä tutkimuksessa. RECQL1 ja Ki-67 immunovärjäys suoritettiin osissa korreloivan RECQL1 värjäyksen alatyypin ja potilaan selviytymistä. Kymmenen OC ja kaksi normaalia solulinjat tutkittiin sitten RECQL1 ilmaisun ja hoidettiin siRNA vastaan ​​RECQL1 arvioida sen vaikutus soluproliferaatioon.

Tulokset

Niistä 118 tapauksessa adenokarsinooma (50, vakavien, 26, endomet-, 21, kirkas solu, 15, mucinous, 6, muut histologia), 104 (90%) osoitti eritasoisia RECQL1 ilmaisun ytimet OC soluja. Coxin riskien mallia vahvisti, että hajanainen ja vahva värjäytyminen RECQL1 korreloi histologinen tyyppi. Kuitenkin RECQL1 ilmaisu ei korreloinut yleistä elossaololuku tai FIGO vaiheessa.

In vitro

, RECQL1 ilme oli poikkeuksellisen korkea nopeasti kasvavilla OC solulinjoista, verrattuna normaaleihin soluihin. Käyttämällä ajan tietenkin analyysi RECQL1-siRNA transfektio, havaitsimme merkittävää inhibitiota soluproliferaatioon.

Päätelmät

RECQL1 DNA-helikaasi on merkki erittäin lisääntyvät solut. RECQL1-siRNA voi tarjota uusia terapeuttisia vastaisen strategian eri alatyyppien OC, kuten platina-resistenttejä syöpiä, tai toistuvia syöpiä, jotka saavat platinaa vastarintaa.

Citation: Sanada S, Futami K, Terada A, Yonemoto K, Ogasawara S, Akiba J, et al. (2013) RECQL1 DNA Repair helikaasin: potentiaaliseksi terapeuttiseksi Target ja Proliferative Marker vastaan ​​munasarjasyöpä. PLoS ONE 8 (8): e72820. doi: 10,1371 /journal.pone.0072820

Editor: Rolf Müller, Philipps University, Saksa

vastaanotettu: 28 lokakuu 2012; Hyväksytty: 09 heinäkuu 2013; Julkaistu: 09 elokuu 2013

Copyright: © 2013 Sanada et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat ei ole tukea tai rahoitusta raportoida.

Kilpailevat edut: Meillä on seuraavat edut. Kazunobu Futami ja Yasuhiro Furuichi työskentelee Gene Care Institute Co., Ltd. ei ole olemassa patentteja, tuotteiden kehittämiseen tai kaupan tuotteiden julistaa. Tämä ei muuta meidän noudattamista kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamiseen ja materiaaleja, yksityiskohtaisena online-oppaassa tekijöille.

Johdanto

Munasarjasyöpä (OC) edustaa noin 30% kaikki syövät naisen sukuelimiin. Keskimääräinen 5 vuoden elossaolo edennyt jo on niinkin alhainen kuin 31% (FIGO vaihe IIIC) ja 51% (FIGO vaihe IIIA) (International Federation of Gynecology and Obstetrics (FIGO)). Noin 75% potilaista, joilla on edennyt (vaihe III) OC edustavat uusiutui leikkauksen jälkeen, joka on kohtalokas [1]. Tämä on suurelta osin johtuvan puutteesta varoittavat oireet ja puute diagnostisia testejä, jotka mahdollistavat varhaisen havaitsemisen OC ja sen toistumisen [2]. Alkuperäinen hoito OC irto- resektio seuraa leikkauksen jälkeisen yhdistelmä kemoterapia potilaille, joiden vaihe IC tai korkeamman luokan kasvain. Siten ensimmäinen hoitovaihtoehto on suunnattu parantavaa hoitoa. Sen lisäksi vain lievittävä hoito annetaan syövän uusiutumisen tai potilaalle kehittyy kemoterapian resistenssin. Kehittyneissä OC vatsakalvon levittämistä, kun taas täydellinen regressio on saavutettu, jotkut jäljellä OC solut voivat edistää syntymistä lääkkeille vastustuskykyisten soluilla pitkäaikainen kemoterapiaa. Kaksi alaryhmiä pahamaineinen OC, histologisesti alaluokkiin selkeinä adenokarsinooman ja mucinous adenokarsinooma, tiedetään olevan resistenttejä eri syöpälääkkeet, kuten DNA-vuorovaikutuksessa platina johdannaisia. Nämä profiilit ehkäisytablettien aiheuttavat vakavia ongelmia joukossa gynekologinen onkologit.

RECQL1 kuuluu perheeseen DNA helikaasit, jotka ovat läsnä entsyymejä, jotka rentoutua kaksijuosteisen DNA paljastaa yksijuosteisen DNA aikana olennaisia ​​prosesseja, kuten replikaatio, transkriptio tai korjausta. Biokemiallisten ja solu biologiset tiedot osoittavat RECQL1 helikaasin osallistuu ylläpitoon genomisen koskemattomuuden ja on erittäin säädellään ylöspäin nopeasti lisääntyviä soluja, mukaan lukien erilaisia ​​syöpiä, kuten keuhko-, maksa-, haima-, paksusuoli, aivot ja pää ja kaulan syöpien [3-9]. Aikaisemmin, kun ksenografti hiirimallissa maksasyövän, me osoitti RNAi hoito, joka spesifisesti vaimentaa ilmentymistä RECQL1 DNA helikaasin on tehokas syöpähoidon ja on mahdollista kehittää uusia terapeuttinen menetelmä [10]. Vaikka tehoa RECQL1-siRNA on osoittautunut oikein viljelty solu saatujen linjojen eri syövän alkuperää ja myös ksenograftissa hiiri malleja, OC solut eivät ole toistaiseksi ole tutkittu nimenomaisesti [11]. Tässä artikkelissa, me siten tutkinut kliinis korrelaatio munasarjasyöpä ja RECQL1 ilmaisun

in vivo

ja

in vitro

ja tehdä lisää viittaus terapeuttiseen potentiaalia RECQL1.

menetelmät

Tutkimuskanta ja näytteiden

retrospektiivinen etsintä potilaille diagnosoitu munasarjasyöpä vuosien 1998 ja 2005 suoritettiin käyttämällä tiedostot patologian osaston Kurume yliopistollisen sairaalan, Japani. Kirjallinen suostumus antoivat potilaiden tietonsa tallennetaan sairaalan tietokantaan ja käyttää tutkimustarkoituksiin. Tutkimuksen hyväksyi eettisen komitean Kurume University School of Medicine. Sata ja kahdeksantoista munasarjasyöpäpotilaiden yhteensopivat parafiiniblokit tunnistettiin. Kliiniset ja patologinen tiedot tarkistettiin, ja kliinisten tietojen mukana ikä, terapia, levinneisyysaste ja seuranta. Hematoksiliini-eosiini (H 1% positiivisia soluja), satunnainen (eristetty positiivisia soluja, mutta alle 5%), polttoväli (pieni soluklusterien, mutta 25% positiivisia soluja), diffuusi ( 25% värjäytyneiden solujen). Intensiteetti luokiteltiin kevyt, kohtalainen tai voimakas intensiteetti. Diffuusi ja vahva värjäytyminen pidettiin ++, satunnaista ja polttoväli värjäys, minkä tahansa intensiteetti pidettiin +, negatiivinen -. Tilastollinen analyysi suoritettiin kunkin kliinispatologiset ominaisuudet joukossa (-), (+) ja (++) ryhmät. Proliferatiivinen indeksi arvioitiin käyttäen Ki-67 positiivista solumäärä per 10 HPF (Ki-67 merkintöjä indeksi (LI)). Stained kudosleikkeet teki maalin ja tutkittiin tietämättä kliinis tietoja tai potilaiden hoitotuloksiin.

Tilastollinen

kategorisen datan ja RECQL1 ilmentymistä tutkittiin jonka Χ

2 testiä. Ki-67 LI ja RECQL1 ilmaisuja tutkittiin Wilcoxonin-sum test. Histologinen asteen ja RECQL1 ilmaisun arvioitiin tarkka Cochran-Armitage trendi testi. Coxin suhteellisen malli ehdollisessa logistinen regressio suoritettiin käyttäen FIGO vaiheessa ja RECQL1 ilme. Log-rank testi Kaplan-Meier mallia käytettiin vertaamaan selviytymisen populaatioiden välillä RECQL1 ilmaisuja. Kaikki testit olivat 2-puolinen, ja

P

arvo 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä. Tilastolliset analyysit tehtiin käyttäen Statistical Analysis Software (SAS) versio 9.2 (SAS Institute, Cary, NC).

Solut ja viljelyolosuhteet

Tässä tutkimuksessa käytimme 10 ihmisen OC solulinjat ( Taulukko 1) OVCAR-3, OVCAR-5, SK-OV-3, TOV-21G, TOV-112D ja ARPE-19 saatiin ATCC (Manassas, VA, USA). TIG-3 ja MCAS saatiin Health Science Resource Bank (Osaka, Japani). KOC-2S, KOC-3S, KOC-5C ja -7C perustettiin Kurume University School of Medicine [12]. Soluja kasvatettiin Dulbeccon muokatussa Eaglen tai RPMI-1640-alustassa (Nacalai Tesque, Kioto, Japani), ja inkuboitiin 37 ° C: ssa kostutetussa kammiossa, johon oli lisätty 5% CO

2.

Cell line

solun tyyppi Sivuston sijoittautumisoikeus

OVCAR-3Serous adenocarcinomaATCC * OVCAR-5Serous adenocarcinomaATCCKOC-2SSerous adenocarcinomaKurume universityKOC-3SSerous adenocarcinomaKurume universityKOC-5CClear cell adenocarcinomaKurume universityKOC-7CClear cell adenocarcinomaKurume universitySK-OV-3Clear cell adenocarcinomaATCCTOV-21GClear cell adenocarcinomaATCCTOV-112DEndometrioid adenocarcinomaATCCMCASMucinous adenocarcinomaHealth Science Resource Bank ** apre-19Normal solujen valvontaa † ATCCTIG-3Normal solun ohjaus ‡ Health Science Resource BankTable 1. Tyypit solulinjojen ja Sites pystyttää.

CSV Lataa CSV

Immunoblottausmääritys

proteiini tasojen RECQL1 ja muiden proteiinien osallistuvat solun DNA-vaurioiden korjaus järjestelmä seurattiin käyttämällä immunoblottauksella. Solut pestiin jääkylmällä fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS), pelletoitiin sentrifugoimalla ja sitten lyysattiin natriumdodekyylisulfaatti (SDS), joka sisälsi 1% SDS: ää, 2% β-merkaptoetanolia, 20% glyserolia, 30 mM Tris-HCI (pH 6,8) ja 0,2 M ditiotreitolia. Solulysaatti keitettiin 10 min ja sitten tehtiin elektroforeesi 5-20% gradientti SDS-polyakryyliamidigeeleillä. Proteiinit fraktioitiin geelit siirrettiin elektroforeettisesti polyvinylideenidifluoridi kalvoja (Immobilon, Millipore, MA, USA) ja blokattiin yön yli 5% rasvatonta maitoa PBS: ssä. Membraanit inkuboitiin sitten joko anti-RECQL1 monoklonaalinen vasta-aine Q1N3 (Cell Signaling Technology, Tokio, Japani) tai anti-β-aktiini monoklonaalinen vasta-aine (ICN Biomedicals, Aurora, OH, USA) 60 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Membraanit pestiin 0,05% Tween-20 PBS: ssä, inkuboitiin anti-hiiri-IgG: llä konjugoituna piparjuuriperoksidaasiin (DakoCytomation, Carpinteria, CA, USA) ja pestiin. Kalvot kehitettiin sittemmin käytetään parannettua kemiluminesenssin reagenssia (ECL Plus, Amersham Biosciences, UK).

siRNA ja RNA-interferenssi

siRNA (21 emäsparia) kohdistaminen RECQL1 mRNA (RECQL1-siRNA) ja negatiivinen ohjaus siRNA (NS-siRNA) syntetisoitiin kemiallisesti (GeneDesign, Inc., Osaka, Japani). Kaikki siRNA sekvenssit oli riippuvan 3′-dTdT 3’loppuun [11]. Sekvenssispesifistä geenien vahvistettiin käyttäen cDNA mikrosiruanalyysi kanssa Affymetrix GeneChip- järjestelmä (Human Genome U133 Plus 2.0 Array). Transfektioon 24 h maljaamisen jälkeen soluja inkuboitiin 30 nM siRNA duplex 4h: n läsnä ollessa RNAiMAX (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), laimennettiin 2-kertaisesti seerumi, joka sisältää tuoretta elatusalustaa, ja viljeltiin 37 ° C: ssa ilmoitettu termejä. Kokonais-RNA uutettiin viljellyistä soluista eri ajankohtina käyttämällä RNeasy Mini Kit (Qiagen GmbH, Hilden, Saksa) mukaan valmistajan protokollaa kemiallisia yhdisteitä hoidon. Käänteistranskriptaasi-PCR-analyysit suoritettiin käyttäen ABI PRISM 7000 Sequence Detection System Taqman ja alukkeita (ABI, Foster, CA, USA). Β-aktiini-geenin, käytettiin sisäisenä standardina (TaqMan-koettimella on ID, 431088E, ABI). Solujen lisääntyminen mitattiin 24, 48, 72, 96 ja 120 tunnin fluoresenssimäärityksellä käyttämällä Cell Titer-Glo Luminescent (Promega, WI, USA) protokollan mukaisesti. Kuten solusyklin analyysi, solut transfektoitiin RECQL1-siRNA tai NS-siRNA samoissa olosuhteissa edellä kuvatulla tavalla, ja inkuboitiin 72 tuntia 37 ° C: ssa. Solut ja solujäte otettiin talteen, pestiin PBS: llä ja kiinnitettiin jääkylmässä metanoli: ssa 2 tuntia. Sitten soluja käsiteltiin haiman RNaasi A (Nippon Gene, Toyama, Japani), värjättiin propidiumjodidilla (Sigma, St Louis, MO, USA) 30 minites, ja analysoitiin virtaussytometrialla. Fluoresenssi mitattiin käyttäen EPICS XL (Beckman Colter, Tokio, Japani). Jokaisesta näytteestä, 7000 tapahtumia analysoitiin. Nämä analyysit toistettiin 3 kertaa kullekin solulinjoja. Vaiheessa solusyklin ja väestön solun näytetään keskiarvo ± SD arvoista kussakin virtaussytometrinen profiilin.

Tulokset

Kliininen ja mikroskooppiset löydökset

ikäryhmään munasarjasyöpä potilaille oli 20-82 (keskiarvo, 57,1) vuotta. Kaikki 118 potilaalle tehtiin yhteensä kohdunpoisto, kahdenväliset salpingo munasarjan poisto, omentectomy ja imusolmukedissektiossa tai näytteenottoa. Kirurgisesti resektoitiin yksilöitä kävi ilmi, että 50 potilasta oli vakavien adenokarsinooma, 26 oli endomet- adenokarsinooma, 21 olivat selkeitä adenokarsinooman, 15 oli mucinous adenokarsinooma (laajenemisvoi- invaasio ja invasiivisia mucinous adenokarsinooma), ja 6 olivat muiden histologia, mukaan lukien 3 okasolusyöpä, 2 sekoitettu karsinooma (okasolusyöpä ja vakavien adenokarsinooman tai levyepiteelisyöpä ja selkeä solu adenokarsinooma) ja 1 siirtymäkauden cell carcinoma.

immunohistokemiallinen tulokset

immunohistokemiallinen tulokset olivat käytettävissä 118 kirurgisesti resekoitu toimintaolosuhteet. RECQL1 ilmentyminen havaittiin ytimet OC solujen eri laajuudessa 104 (90%) ja 118 OC yksilöt (vakavien tyyppi, 94%, endomet- tyyppi, 89%; selvää solutyypin, 81%; mucinous tyyppi, 87%; ja muut, 100%). Perustuen määrä ja laajuus, 55 tapausta pidettiin (++), jolle 30 tapausta (54,5%) olivat vakavien tyyppi, 9 (16,3%) ja endomet- tyyppiä, 9 (16,3%) kirkasta solutyypin, 3 ( 5,4%) mucinous ja 4 (7,2%) ja muut (kuvio 1). Kuusikymmentä-tapauksia olisi pidetty (+) ja (-), jolle 20 (31,7%) olivat vakavien tyyppi, 17 (27,0%) ja endomet- tyyppiä, 12 (19,0%) kirkasta solutyypin, 12 (17,5%) ja mucinous ja 2 (1,6%) muita. RECQL1 – (++) ilmentyminen kirurgisesti resektoitiin kudoksissa on taipumusta noudateta vakavien tyyppi, ja harvemmin endomet-, selkeä ja mucinous tyypit (p 0,03) (taulukko 2). Ki-67 merkintöjä indeksi (LI) paljasti korkein proliferatiivinen potentiaali vakavien adenokarsinooma, ja keskimäärin 20,8% (endomet-, 15,8%, kirkas solu, 7,3%; ja mucinous, 9,4%). RECQL1 – (++) tapaukset liittyivät merkittävästi korkean Ki-67LI (p = 0,02) (kuvio 2A).

(++) ilmentyminen munasarjojen syöpiä.

(A) Seroosi adenokarsinooma, (B) Tyhjennä solu adenokarsinooma (C) endomet- adenokarsinooma, (D) mucinous adenokarsinooma ja (E) ehjä munasarjojen strooman negatiivisena kontrollina (upotus: hematoksyliinillä ja eosiini värjäystä).

Jakouurteellinen RECQL1Expression

(-) ja (+) B (++)

ParametersHistological tyyppi

aserous type20 (31,7%) 30 (54,5%) endomet- type17 (27,0% ) 9 (16,3%) selkeä cell type12 (19,0%) 9 (16,3%) mucinous type12 (17,5%) 3 (5,4%) others2 (1,6%) 4 (7,2%) levinneisyysaste

puhallin vaiheessa (vaihe I ja II) 60 (50,8%) 45 (38,1%) pitkälle (vaihe III ja IV) 3 (2,5%) 10 (8,5%) Taulukko 2. Jakouurteellinen immunohistokemiallinen RECQL1 Expression ja Suhde histologisen tyypin ja FIGO Stage.

CSV Lataa CSV

(A) välinen korrelaatio Ki-67 merkintää indeksin ja RECQL1 (++) tapauksissa. Photomicrograph havainnollistaa korkean Ki-67 värjäytymisen vakavien adenokarsinooma. RECQL1 (++) tapaukset liittyivät merkittävästi korkean Ki-67LI (p = 0,02). (B) Kaplan-Meier selviytymisen arvion välillä RECQL1 (++) ja (+), (-) tapauksissa. Log-rank analyysi ei ollut merkitystä välillä RECQL1 ilmaisun ja eloonjäämiseen (p = 0,72).

sisällyttäminen kliinisten tekijöiden

Cox riskien mallia vahvisti, että hajanainen ja vahva värjäys RECQL1 (HR 2,3) korreloi histologinen tyyppi, korkea Ki-67 LI ja kehittyneet FIGO vaiheessa, vaikka levinneisyysaste menettänyt ennustearvo säädettynä histologinen tyyppi (taulukko 2). Log-rank analyysi, ei ollut merkittävää yhdistyksen välillä RECQL1 ilmaisun ja eloonjäämiseen (p = 0,72) (kuvio 2B).

RECQL1 ekspressiotasot OC solulinjoissa

Koska suurempi määrä of RECQL1 immunoreaktiivisuus havaittiin kirurgisesti resektoitiin OC yksilöitä, tutkimme RECQL1 ilmaisua käyttäen erilaisia ​​OC solulinjoja. Kuten valvonta, normaalit solut ARPE-19 ja TIG-3 valmistettiin samalla ominaista. Useimmat, elleivät kaikki, syöpäsolut tähän mennessä tutkituissa osoitti korkeampi ekspressiotaso RECQL1 helikaasin proteiinia verrattuna normaaleihin soluihin (kuvio 3A). RECQL1 ilmentyminen havaittiin olevan poikkeuksellisen suuri nopeasti kasvavilla solulinjat, kuten KOC-2S, KOC-3S, OVCAR-3, OVCAR-5, KOC-7C, SK-OV-3 ja TOV-112D solulinjoissa. Mielenkiintoista, TOV-21G ja MCAS oli samanlainen pieni ilmaus normaaliin TIG-3 solulinja.

(A) RECQL1 ekspressiotasot kymmenessä OC solulinjoissa. RECQL1 ilmentyminen havaittiin olevan poikkeuksellisen korkea KOC-2S, KOC-3S, OVCAR-3, OVCAR-5, KOC-7C, SK-OV-3 ja Tov-112D munasarjasyövän solulinjoissa verrattuna kaksi normaalia solulinjat (ARPE-19 ja TIG-3). (B) vaikutus RECQL1 hiljentäminen kasvuun OC solulinjassa aika-kurssi analyysi. Yhteensä kymmenen OC solulinjat transfektoitiin joko RECQL1-siRNA (kiinteä ympyrä) tai NS-siRNA (kolmio) ajaksi 120 tuntia, kuten on kuvattu Materiaalit ja menetelmät. Solujen elinkelpoisuus väheni ajan kuluttua siRNA hoidon. RECQL1-siRNA merkittävästi inhiboivat monenlaisia ​​OC solulinjojen mukaisesti vähentäminen RECQL1 mRNA (esitetty histogrammien). Aikana-kurssi, RECQL1 mRNA ilmentyminen väheni eri tavalla, riippuen solulinjasta. Tiedot edustavat keskiarvoja ± SD, n = 3 (C) vaikutus RECQL1 hiljentäminen solun sykli OC solulinjan mitattiin virtaussytometrianalyysillä. Solulinjat transfektoitiin joko NS-siRNA (ylempi paneeli) tai RECQL1-siRNA (alempi paneelit) 72 tuntia. Prosenttiosuus solupopulaatioiden subG1, G1 /S ja G2 /M-vaiheessa on esitetty keskiarvona ± SD jokaisen virtaussytometrinen profiili.

inhibitio OC soluproliferaation RECQL1 hiljentäminen

immunoblottauksella, kaikki kymmenen OC solulinjojen havaittiin ilmentävän suurempi määrä RECQL1 helikaasin proteiinia kuin normaalit solut. Näiden tulosten perusteella, tutkimme vaikutus RECQL1 hiljentäminen kasvuun eri OC solulinjoissa aikaa kurssin analyysi. 10 OC solujen linjat ja 2 normaalien solujen linjat transfektoitiin joko RECQL1-siRNA tai NS-siRNA (kolmio) 120 tuntia. Kuten on esitetty kuviossa 3B, RECQL1-siRNA (kiinteä ympyrä) merkittävästi inhiboivat monenlaisia ​​OC solulinjojen mukaisesti vähentäminen RECQL1 mRNA (esitetty histogrammien), kun sillä ei ollut vaikutusta kasvuun kahden normaali solulinjat (tietoja ei ole esitetty tässä asiakirjassa) [10]. Solujen elinkykyä, on esitetty suhteellinen kasvu verrattuna, että ei-käsiteltyjen solujen, väheni ajan jälkeen, siRNA hoitoon. Aikana 24-120 tunnin ajan tietenkin RECQL1 mRNA ilmaisuja vähenivät differentiaalisesti riippuen solulinjasta. Mielenkiintoista on, että taso RECQL1 mRNA lisääntyi loppua kohti aika-kurssin muutamia solulinjoja, vaikka tämä lisäys ei koskaan ylittänyt 40%: iin alkuperäisestä ilmaisun.

huomioon taustalla oleva mekanismi vähensi solujen elinkelpoisuuden, tutkimme solun pyöräily piirre useiden RECQL1-siRNA käsiteltyjen OC soluja. SiRNA-käsiteltyjä soluja (transfektion jälkeen 72 h) eristettiin kulttuurin ja alistettiin solusyklin analyysi. Kuten kuviossa 3C on esitetty, solupopulaatioiden kaikkien RECQL1-siRNA-käsiteltyjen OC solut sisälsivät selvä subG1 solun osa kuolleita soluja, ja kertyminen solujen leviää G1 /S ja G2 /M-vaihetta, joka esittää ominaisuutta mitoosi solukuoleman aikana esiintyvä solusyklin (alempi paneeli). Joissakin RECQL1-siRNA-käsiteltyjen OC solujen populaatioiden kasvu G1 ja G2 /M-vaihetta, solujen osoitus solusyklin pysähtymisen vuoksi DNA-vaurioita tarkistuspisteen järjestelmän. Sitä vastoin tällaisia ​​epänormaaleja ominaisuuksia nähdään kanssa sukulais OC käsiteltyjen solujen ei-hiljentäminen siRNA valvonnassa käytetty kokeissa (ylempi paneeli). Näin ollen näennäinen kasvun estämistä syöpäsolujen (nähtävissä kuviossa 3B) ei ole, koska hidastuminen solujen kasvua, mutta johtuu tappaminen elinkelpoisten OC solujen ja vähentää solujen lukumäärän aiheuttamien mitoottisten solujen kuoleman.

keskustelu

sekä serous ja endomet- adenokarsinooma, yhdistelmähoito karboplatiinin ja paklitakselin on tehokas strategia ja aiheuttaa erinomaisen terapeuttisen tuloksen, vaikka syöpä on todettu edennyt pitkälle. Sen sijaan ei ole parantavaa hoito vastaan ​​platina-resistenttejä toimintaolosuhteita, kuten selkeitä adenokarsinooman ja mucinous adenokarsinooma, tai toistuvat OC tulenkestävän tyyppiä. Tyhjennä solu adenokarsinooma ja mucinous adenokarsinooma osoittavat veltto käyttäytymistä, kun ne rajoittuvat munasarja ja usein diagnosoitu varhaisessa vaiheessa, joka antaa paremman ennusteen potilaalle. Kuitenkin, kun tauti ulottuu extra-munasarjojen tilaa, niiden hoito hinnat ovat huomattavasti alhaisemmat kuin vakavien adenokarsinooma ja endomet- adenokarsinooma [13,14]. Platina aineita kuin tavallinen hoito-ohjelman sisältävät karboplatiinia, joka kohdistuu DNA-synteesiä S-vaiheessa ja indusoi apoptoosia. Paklitakseli, verrattuna, häiritsee synteesiä tubuliinin edistää solusyklin pysähtymisen. Tästä syystä nämä kemoterapeuttiset aineet toimivat tehokkaimmin aktiivinen proliferatiivinen kasvaimia, kun taas hitaasti kasvavia, low-Ki-67 LI kasvaimia, kuten selkeitä adenokarsinooman ja mucinous adenokarsinooma, eivät reagoi hyvin, ja hoito näiden hoitojen seurauksena voi olla in hyposensitivity.

Tähän mennessä useita kokeita löytää vaihtoehtoisia kemoterapeuttisten tai molekyylin kohdistettuja aineita ole nostettu platina-resistenttejä toimintaolosuhteita; kuitenkin yleinen yksimielisyys optimaalisin ensilinjan hoitoon ei ole päästy [15-20]. Lisäksi tutkimukset osoittavat, että huomattava määrä potilaita, joilla uusiutumisen varten karsinoomien, jotka olivat alun perin platina-herkkä, kuten serous adenokarsinooma ja endomet- adenokarsinooma, päätyä platina kestävät karsinoomia.

On raportoitu, että RECQL1 ilmaisu havaitaan maksan, peräsuolen, keuhkosyöpä, glioblastooma ja pään ja kaulan syöpien [7,21]. Tässä tutkimuksessa käytetään kirurgisesti resektoitiin OC yksilöitä, havaitsimme ydinvoiman RECQL1 ilmentyminen 90% 4 suurta alatyyppiä OC (vakavien, endomet-, selkeä solu- ja mucinous tyyppi), korkea (++) lauseke nähdään 54,5% tapauksista . Vertailu RECQL1 ilmaisun ja Ki-67 LI osoitti, että RECQL1 (++) ryhmä liittyy korkea Ki-67LI (p = 0,02); Näin, RECQL1 voi olla hyödyllinen proliferatiivisen molekulaarinen merkkiaine. Raportoimme aikaisemmin, että RECQL1 positiivisuuden Maksasolukarsinoomaa korreloi histologisia luokan ja Ki-67 LI [10]. Siten RECQL1 ilmentyminen voi ehdottaa korreloivan voimakkaasti syövän etenemiseen ja erilaistumista. Mitä syövän etenemisen, RECQL1 ilmentyminen merkitsevästi yhteydessä FIGO vaiheeseen jakelun (p = 0,01), vaikka se menetti arvonsa kun oikaistu histologinen tyyppi. Näin ollen, vaikka RECQL1 ilmaisu voi toimia proliferatiivinen parametri, emme onnistuneet osoittamaan assosiaatioita RECQL1 ja FIGO vaiheessa ja kokonaiselossaolo. Me spekuloida, että tämä saattaa olla, miksi koko jäljellä taudin korreloi selvimmin pelastautumiskoulutukseen potilailla, joilla on edennyt pitkälle kasvain [22].

Meidän

in vitro

analyysi, tutkimme potentiaali syövänvastainen vaikutus RECQL1-hiljentäminen solulinjoissa, jotka edustavat vakavien, endomet-, kirkas solu, ja mucinous adenokarsinoomat. Useimmat, elleivät kaikki, syöpäsolut tähän mennessä tutkituissa osoittivat korkeampia ekspressiotasoja RECQL1 helikaasin proteiinia verrattuna normaaleihin soluihin. Ottaen huomioon, että RECQL1 on erittäin säädellään ylöspäin nopeasti lisääntyviä soluja, kuten erilaisia ​​syöpiä ja transformoituja soluja [4-6,8], kirkas solu ja mucinous adenokarsinooma joiden tiedetään suhteellisen hitaasti kasvavia OC, osoitti vähemmän RECQL1 ilmentyminen voi olla järkevää. Tällaisissa hitaasti kasvava syöpäsolujen määrä DNA korjaukseen entsyymien kuten RECQL1 helikaasin voidaan säästyä, ehkä siksi runsaasti aikaa, jonka hidas kasvu sen sijaan auttaa täyttämään tarvittavat tehtävistä DNA: n korjaukseen.

Aiemmin osoittivat antiproliferatiivinen vaikutus RECQL1-siRNA erilaisissa syöpäsolulinjoissa [10,21]. Tämä on seurausta lisääntynyt kertyminen DNA-vaurioita syöpäsoluissa aiheuttama RECQL1 hiljentäminen johti M vaiheen pysähtymisen ja solukuolemaa epätäydellisen Checkpoint Systems, joka osoittaa mitoosi katastrofin [10,21]. Toisaalta, normaali solulinjat, kuten TIG-3 ja apre-19, osoitti toleranssi mitoottisiin katastrofin RECQL1 hiljentäminen [10,21]. Tärkein ero normaalien solujen ja syöpäsolujen olisi selittää kyky solusyklin kontrolli. Useimmat syöpäsolut ovat puutteellisia G1 ja G2 tarkastuspiste toiminta ja siten epäonnistuu pidättämään solukierrossa G1 ja G2 vaiheisiin, jotta solu harjoittaa DNA: n korjaukseen. Sen sijaan, solut edetä solusyklin M vaiheeseen, jossa DNA: n korjaukseen ei ole sallittua. Niinpä solut lopulta tehdään solukuolemaa astuessaan mitoosia [23-25]. Sen sijaan Checkpoint Systems normaaleissa soluissa säilyy ennallaan, mikä johtaa tilapäiseen solusyklin pidätyksen kunnes DNA ongelma on ratkaistu palkkaamalla sopiva korjaus järjestelmä [21]. Toisin sanoen, se voidaan pitää normaalit solut ovat resistenttejä RECQL1 hiljentämisen, kun taas tarkistuspiste viallisen syövän solut eivät ole.

Tässä tutkimuksessa olemme myös osoitti RECQL1-siRNA hiljentäminen solukuolema ja esti solujen lisääntymistä in OC solulinjoissa. Aikaisemmat tiedot tukisi että vähentynyt OC Solujen elinkelpoisuus johtui myös mitoosi katastrofista RECQL1-siRNA hiljentäminen. Enemmän tai vähemmän, RECQL1 ekspressio havaittiin kaikissa histologinen alatyyppi OC, joka saattaa viitata tehoa RECQL1-siRNA on platina-resistenttien syöpien, kuten kirkas adenokarsinooma, mucinous adenokarsinooma ja joitakin toistuvia syöpien platina kestävät tyyppiä.

synergistinen syövän vaikutusta havaittiin, kun RECQL1-siRNA oli paikallisesti annettiin hiiriin pään ja kaulan kasvaimet sekä suonensisäisen injektion cis-platina johdannainen [14]. Tulokset viittasivat siihen, mahdollinen osallistuminen RECQL1 DNA helikaasin vähentämisessä cis-platina-indusoidun DNA-vaurioita. Mitä tulee terapeuttiseen sovellukseen siRNA vastaan ​​pahanlaatuisia kasvaimia, useat tutkijat ovat raportoineet tehoa yhdistelmänä muiden kemoterapia-aineiden, kuten gemsitabiini [26], kamptotesiini [27] ja adriamysiini [28]. Tulokset näistä tutkimukset osoittivat, että tällainen kombinatoorista hoito voisi vähentää haittavaikutuksia kemoterapeuttisten aineiden lisäten samalla herkkyyttä syöpäsoluja. Verraten, monet muut kemoterapeuttiset aineet ovat yleensä vahingoittaa ei-syöpäkudoksessa. Esimerkiksi Luuydinsuppressioriskin ääreishermoston häiriö, kardiotoksisuus ja munuaistoksisuutta usein aiheuttama.

Äskettäin heterogeeninen geenien ilmentyminen syövässä kudoksissa ilmoitettiin kautta tutkimuksia peräkkäisen munuaisten kasvain-biopsianäytteistä [29]. Jopa saman kasvaimen näytteen eri geenien ilmentyminen allekirjoitukset havaittiin eri näytteen alueet ja ensisijainen versus metastaasien [29]. Toistaiseksi lukuisia molekyylikohteista on tunnistettu syöpälääkkeen kehittämiseen. Vuodesta näkökulmasta mutaatioiden tai ero ilmauksia geenien aikana syövän kehityksen, on välttämätöntä, että kaikkein välttämätön geeni tarvitaan syövän kasvua on suunnattu. Verrattuna muihin molekyylitason kohdennettuja hoitoja, RECQL1-siRNA kohdistetaan vain DNA: n korjaukseen, ja toimii riippumatta siitä, onko geenin mutaation tai ilmentymisen allekirjoituksen muutos ominaisia ​​syöpään. Uskomme, että RECQL1 on yksi vain muutaman kandidaattigeenin tavoitteita, jotka eivät vaikuta normaaliin solupopulaatioiden.

Lopuksi RECQL1 olisi pidettävä uutena proliferatiivinen merkki. Lisäksi RECQL1-siRNA voi olla mahdollista soveltaa uutena terapeuttinen menetelmä vastaan ​​OC eri histologisia ja kliinisiä tekijöitä, mukaan lukien platina kestävästä alatyyppiä.