Krooninen sairaus

tiivistelmä

Epigeneettiset tapahtumat ovat kriittisiä tukijoita patogeneesiin syöpä, ja kohdentamalla epigeneettiset mekanismit edustaa uutta strategiaa syöpähoidon. Classic demetyloivan aineet, kuten 5-atsa-2′-deoksisytidiini (desitabiinista), pidä mahdollisuudet uudelleen ohjelmointi somaattisten syöpäsoluja, jotka osoittavat korkea terapeuttista tehoa hematologisia syöpäsairauksia. Toisaalta, epigeneettinen kiinteiden tuumorien hoidossa on usein aiheuttaa ei-toivottuja sytotoksisia sivuvaikutuksia. Asianmukaiset jakelujärjestelmiä pystyy rikastuttaa desitabiinista paikalla toimintaa ja parantaa sen hyötyosuus olisivat vähentämään myrkyllisyyden terveiden kudosten. Tässä työssä tarjoamme prekliinisissä todisteita turvallinen, monipuolinen ja tehokas kohdennettu epigeneettiset hoitamiseksi, hormoniherkkien (LNCap) ja hormoniresistentti (DU145) eturauhasen syöpiä. Romaani desitabiinista sanamuodolla, joka perustuu käyttöön suunniteltu erytrosyyttien (erytro- Magneto-hemagglutiniini Virosomeja, EMHVs) lääkeaineen antojärjestelmä (DDS) kuljettaa tätä lääkettä, on puhdistettu. Sisällä EMHVs, lääke oli suojattu ympäristöstä ja fosforyloituu aktiivisessa muodossa. Romaani magneettinen EMHV DDS, jolla on fusogeenistä proteiinia, parannettu vakautta kuljettaa lääkkeen ja osoitti korkean hyötysuhteen pitäisi rajoittaa sen toimituksen paikalla toiminta

in vivo

soveltamalla ulkoinen staattinen magneettikenttä. Tässä osoitamme, että desitabiinista ladataan EMHVs indusoi merkittävästi kasvaimen massan väheneminen eturauhassyövän ksenograftimalleissa pitoisuutena, joka on seitsemän sataa kertaa pienempi kuin terapeuttinen annos, mikä viittaa siihen, parannettu farmakokinetiikkaa /farmakodynamiikkaan lääkkeen. Nämä tulokset ovat merkityksellisiä ja keskustellaan valossa kehittää yksilöllisiä autologisten hoitoja ja innovatiivista kliininen lähestymistapa hoitoon kiinteiden kasvainten.

Citation: Naldi I, Taranta M, Gherardini L, Pelosi G, Viglione F, Grimaldi S , et ai. (2014) Novel Epigeneettiset Tavoite terapia Eturauhassyöpä: prekliiniset tutkimukset. PLoS ONE 9 (5): e98101. doi: 10,1371 /journal.pone.0098101

Toimittaja: Lucia R. Languino, Thomas Jefferson University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 30 joulukuu 2013; Hyväksytty: 28 huhtikuu 2014; Julkaistu: toukokuu 22, 2014

Copyright: © 2014 Naldi et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Consiglio Nazionale delle Ricerchen (CNR) rahoitus ja Euroopan yhteisön rahoitusta POR Creo FESR 2007-2013 BANDO UNICO R välillä 13 ja 20 minuuttia prosenttiosuus liikkuvan faasin B nostettiin 35%: iin, pidetään 2 minuuttia ja sitten ensimmäinen liikkuva faasi uudelleen käyttöön 2 minuutin kuluessa. Massaspektrometriin toimi positiivisessa sähkösumutusmoodilla ja törmäys energia oli 35 eV. Siirtymät seurataan olivat m /z 229 — 113 5-atsa-2′-dC; m /z 219 — 103 guanylurea johdannaiset; m /z 247 — 131 formuloidun johdannaisia ​​5-atsa-2′-dC. Etsimään mahdollisia fosforyloidun muodoista 5-atsa-2′-dC, 2 x 10

9 juuri valmistettua A-EMHVs jätettiin 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan. Peräkkäin, näytteet lyysattiin ja suodatetaan, kuten edellä on kuvattu, ja 400 ng CTP lisättiin näytteiden sisäisinä standardeina. Liikkuva faasi koostui 20 mM DMHA pH 7,0 (liuotin A) ja metanoli-vesi 80:20 (liuotin B). Ensimmäiset 12 minuuttia olivat isokraattinen ajaa 10% liuotinta B; välillä 12 ja 15 minuuttia prosenttiosuus liikkuvan faasin B nostettiin 80%, pidettiin 1 minuutin ajan, ja sitten ensimmäinen liikkuva faasi uudelleen käyttöön 2 minuutin kuluessa. Massaspektrometri toiminut negatiivinen sähkösumutusmoodilla ja törmäys energia oli 15 eV. Siirtymät seurataan olivat m /z 482 — 384 varten CTP; m /z 467 — 369 5-atsa-2′-dC trifosfaatti; m /z 387 — 289 5-atsa-2′-dC difosfaattia; m /z 307 — 208 5-atsa-2′-dC monofosfaatti vastaa poistamiseen neutraalin molekyylin H

3PO

4. Kalibrointikäyrällä, kuusi erilaista CTP standardiliuosten käytettiin. Piikin pinta-ala suhde näyte /CTP käytettiin kvan-.

sy- tofluorimetrisillä (FACS)

LNCap ja DU145 soluja tiheydellä 1,5 x 10

5 ympättiin 6- kuoppaisilla mikrotiitterilevyillä solusyklin määrityksissä. 24 tunnin kuluttua elatusaine korvattiin väliaineessa, joka sisälsi: ei lääkettä (CTRL); ilmaiseksi 5-atsa-2′-dC annoksina 6,8 ug tai 120 ng; 1,5 x 10

8 A-EMHVs (joka sisälsi noin 120 ng 5-atsa-2′-dC).

jälkeen 24, 48 ja 96 tunnin inkuboinnin, valvonta- ja käsitellyt solut kerättiin ja analysoitiin FACS. Tumat värjättiin 10 ug /ml propidiumjodidia (PI) hypotoniseen liuokseen (1 x PBS, joka sisältää 0,1% natriumsitraattia ja 0,1% Triton X-100) 30 minuutin ajan 4 ° C: ssa pimeässä arvioimiseksi solusyklin vaiheissa.

apoptoottisia soluja havaittiin anneksiini V -testi (BioVision). Käsiteltyjen ja käsittelemättömien solut suspendoitiin 1 x sitomispuskurissa ja inkuboitiin huoneen lämpötilassa 15 minuuttia anneksiini V-FITC: llä ja propidiumjodidia (PI) lisättiin ytimien värjäystä valmistajan ohjeiden mukaisesti.

virtaussytometrialla tehtiin käyttäen Becton-Dickinson FACScan CentroII ja tulokset analysoitiin FlowJo ohjelmisto.

Eläimet

kokeissa suoritettiin eläin laitoksen Marshall University, synnynnäistä joilta puuttuu kateenkorva BALB /c-nude-hiiriin, homotsygoottisia

nu Twitter /

nu

alleeli, oli kasvatettu talossa. Siirtomaa 8- 12 viikkoa vanhoja koiraspuolisia hiiriä kehitettiin jalostuskarjan saatiin Charles Rivers Laboratories (Wilmington, MA). Nämä eläimet käytettiin LNCap vierassiirrekokeissa.

käytetyt eläimet kokeessa suoritettiin ”Toscana Life Sciences” eläin laitos oli atyymisissä Nude-Foxn1

nu

uroshiirillä, 6 viikon ikäisille, ostettu Harlan Laboratories (Udine, Italia). Nämä eläimet käytettiin DU145 ksenografteissa.

Molemmissa tapauksissa Eläimiä pidettiin mikro-isolaattorit HÖYRYKARKAISTUT häkkejä polyesterikuitua suodatin kattaa, alle alkio-tilassa. Kaikki ruoka, vesi, ja vuodevaatteet steriloitiin ja eläimet pidettiin ympäristön lämpötilan ollessa 23 ± 2 ° C: huoneissa, joilla on 12 tunnin valo /pimeä sykli.

röntgenkuvaus

Kateenkorvattomiin BALB /c-nude-hiiriin injektoitiin 1,5 x 10

8 EMHVs suspendoitiin 150 ul: aan 1 x PBS.

jälkeen EMHVs häntälaskimoinjektio, yksi ryhmä eläimistä altistettiin ulkoisen magneettikentän asettamalla kahden oksidin magneetit alemman sivusuunnassa vatsan alueella 30 minuutin ajan (EMHVs-MF), kun taas hiiret pidettiin alle 2% isofluoraanilla anestesian. Neodinium magneetit (pyöreä 5,0 mm) noin pakoteluonteisuus 1000 KOersted, käytettiin. Kontrolliryhmä hiirillä oli häntälaskimoon injektoitiin EMHVs kuten aiemmin on kuvattu, mutta ei ulkoista magneettikenttää käytettiin (EMHVs-NMF). Tunnin kuluttua hoidon, hiiret tapettiin CO

2 tukehtumisen ja kertymistä rauta helmiä arvioitiin röntgenkuvauksessa. Kuvantamisen analyysi suoritettiin käyttäen Philipsin DigitalDiagnost suora digitaalinen röntgenkuvaus, jossa tasainen ilmaisimen tekniikkaa (Philips, Hampuri, Saksa) annoksella 60 kVp 5 mAs.

Kasvainten ksenografti menettelyjä

Sekä joilta puuttuu kateenkorva BALB /c Nude ja Nude-Foxn1

nu

hiiret nukutettiin 2,5% isofluraania käsittelyn aikana.

asettaminen mallit: LNCap tai DU145 solut konsentroitiin 7 × 10

6 tai 4,5 x 10

6 vastaavasti 1 x PBS, ja injektoidaan subkutaanisesti 01:01 kanssa MatrigelTM tyvikalvon matriisin (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) vasempaan kylkeen kunkin hiiren (kokonaistilavuus 200 ui). Kun ksenografteja alkoi kasvaa, niiden koot (mm

3) mitattiin kahdesti viikossa digitaalinen työntömitta ja tilavuus laskettiin käyttäen standardin kaavalla: pituus x leveys

2/2. Kasvaimen ksenograftit annettiin kasvaa noin 100 mm

3 ja tämä tilavuus valittiin alkuvaiheessa varten hoidon aloittamista. Hiiret satunnaistettiin (n = 6), nukutettiin ja valmistettiin häntälaskimoinjektio valitun hoidon. Ennen kutakin injektiota, kasvaimet mitattiin ja verrattiin vastaaviin alkutilavuudet, jotta normalisoinnista (X = 100 x volyymi

1 /volyymi

0). Satunnaistamisesta: Hiiret jaettiin seitsemään eri ryhmään sekä kokeellisia asetuksia (LNCap tai DU145 ksenografteissa) ja ne käsiteltiin seuraavat: 1 x PBS (CTRL); 85 ug 5-atsa-2′-dC (2,5 mg /kg) (A1); 120 ng 5-atsa-2′-dC (A2); 1,5 × 10

8 puretaan EMHVs puuttuessa staattisen magneettikentän (EMHVs-NMF); 1,5 × 10

8 puretaan EMHVs ja staattinen magneettikenttä kohdistetaan kasvaimen (EMHVs-MF); 1,5 × 10

8 EMHVs sisälsi 120 ng 5-atsa-2′-dC (A-EMHVs-NMF); 1,5 × 10

8 EMHVs sisälsi 120 ng 5-atsa-2′-dC ja staattinen magneettikenttä kohdistetaan kasvaimen (A-EMHVs-MF).

Injection protokolla: Hiiret joka toinen viikko annettiin suonensisäisesti 150 ul hoito per rokotus, yli 3 viikkoa. Kunkin injektion jälkeen näihin ryhmiin valitaan käsiteltäväksi myös staattisen magneettikentän (EMHVs-MF ja A-EMHVs-MF), kaksi maan magneetteja (1000 KOersted) levitettiin ksenografti massa 30 minuutin ajan sen varmistamiseksi, intra-kerääntymiseen kasvaimeen. Hiiret olivat sitten annettiin talteen ja seurata mahdollisten hätä. Lopussa hoitokuurin tai kun tuumorin tilavuus oli noin 400 mm

3, hiiret tapettiin CO

2 tukehtumisen ja eturauhassyövän massa, maksa, munuaiset otettiin talteen ja säilytettiin -80 ° C: ssa, kunnes lisäanalyysi.

morfologinen ja immunohistokemiallinen analyysi tuumoriksenograftien

Pakastetut näytteet säilytettiin -80 ° C: ssa oli tasapainottua -20 ° C: ssa yön yli ennen leikkaamista mukaan kryostaattiin (Microm HM 500 W) seuraava upottaminen vuonna lokakuu

Peräkkäisen sarja kryoleikkeet 5-6 um paksuus saatiin keskelle (suurin) osa kustakin näytteiden saatettu positiivisesti varautunut dioja, ilmakuivattu muutamaksi minuutiksi ja sitten kiinteä kylmällä asetonilla . Kahden neljä leikkeet värjättiin Mayerin hematoksyliinillä histopatologista tutkimusta.

pesun jälkeen 1 x PBS ja inkubointia H

2O

2 huoneenlämmössä endogeenisen peroksidaasin salpaamiseksi, osio inkuboitiin laimennetulla normaali esto seerumi valmistettiin lajeista, jossa sekundäärinen vasta-aine on valmistettu. Laseja inkuboitiin kosteassa kammiossa yön yli 4 ° C: ssa primaaristen ihmisen reaktiivisten vasta-aineiden Ki67 (klooni SP6, kani monoklonaalinen vasta-aine, Thermoscientific) laimennoksena 1:200 ja DNMT3b (klooni 52A1018, hiiren monoklonaalinen vasta-aine, IMGENEX) on laimennos 1 :150. Seuraavat 30 min toissijainen biotinyloitua vasta-ainetta ja 30 min Vectastain Elite ABC-reagenssiin kalvot olivat sitten inkuboimalla peroksidaasin substraattiliuosta (DAB). Objektilasit vastavärjättiin Mayerin hematoksyliinillä 1 min, ja asennettu vesi- Mount Nopea (Bioptica). Mikroskooppinen tutkimus toteutettiin vuosina 2x 40x suurennos alle Olympus BX43 valomikroskoopilla käyttöliittymät videokamera digitaalisen hankintaa ja kuvantaminen analyysi (DP20 Olympus). Arvot DNMT3b ja Ki67 positiivinen tumat ilmaistiin prosentteina positiivisia tai negatiivisia soluja yli laskenta vähintään 500 solua yhteensä 20x: n alkuperäinen suurennos.

Tilastollinen analyysi

solusyklivaiheista ilmaistaan keskiarvona ± SD vähintään n = 3. Kolme tapaa ANOVA levitettiin vertailla vaikutus eri hoitoja (CTRL, 6,8 ug 5-atsa-2′-dC, 120 ng 5-atsa-2′-dC; 1,5 × 10

8 A-EMHVs) solusyklin vaiheisiin (sub G1, G0-G1, S, G2-M) ja One-Way ANOVA käytettiin vertailla vaikutus A-EMHVs hoito valitaan ajankohtina (24 , 48 ja 96 tuntia).

apoptoottisia soluja ilmaistiin keskiarvona ± SEM vähintään n = 3. tilastollinen analyysi suoritettiin One-Way ANOVA itsenäisesti aikaisin ja myöhään apoptoosin log muuttaneet tietojen parantamiseksi normalisointi. Parittaiset vertailut testattiin käyttämällä Tukeyn rehellisesti merkitsevä ero kriteerejä.

in vivo

Tulokset ilmaistaan ​​keskiarvona ± SEM n = 6 Yksisuuntainen ANOVA levitettiin verrata kasvaimen massan väheneminen arvioinnissa on ksenograftissa implantin jälkeen valitut hoitoon käytetään kerättyjen tietojen viimeisen injektion. Kuvata syöpäkasvain vähennysmäärään (50%) hiirillä valittu hoitoja, Kaplan-Meier-analyysi sovellettiin seurasi log-rank-testi.

Ethics lausuntoja

Ihmisen punasolujen saatiin verensiirtoon pussit kerätään nimetön terveitä vapaaehtoisia luovuttajia, jotka ovat antaneet tähän kirjallinen lupa suorittaa mukaisesti Italian hallituksen lain. Se ei ollut tarpeen hyväksyntää institutionaalisesta Review Board (eettinen komitea), sillä kumpikaan suoraan ihmisten osallistumista eikä osallistumista ihmisen tutkimuksia on ennakoida tässä työssä. Näytteet ovat toimittaneet Azienda Ospedaliera Universitaria Senese.

prekliinisen Tutkimus toteutettiin tiukasti mukaisesti suosituksia Opas hoito ja käyttö Laboratory Animals kansainvälisen suuntaviivojen käsittelystä laboratorioeläinten ja soveltamalla 3R-kokeita (mukaisesti NIH ja Euroopan komission suositukset).

protokollia eläinkokeet hyväksyttiin eettisen komitean Marshall yliopiston (Huntington, WV, USA) (Luvan numero: # 458 /2010) ja jonka eettisten komiteoiden Toscana biotieteiden ja Istituto Superiore di Sanità (ISS) puolesta Italian terveysministerin (Luvan numero: # CNR-270111 exp1 /PROT1). Eläinten hyvinvointi seurattiin vastaavasti Langford et ai, 2010. [36] ”

Tulokset

Characterization uudenlaisten syövänvastainen formulaatio punasolujen perustuvan lääkeaineen jakelujärjestelmä

parantaa suorituskykyä profiilia 5-atsa-2′-dC pro-drug, osalta kemiallinen vakaus, farmakokinetiikkaa ja farmakodynamiikkaa, suunniteltu magneettisten punasolujen harjoittajat (EMHVs) käytettiin lääkeannostelun järjestelmä (DDS). kinetiikka EMHV DDS sisäistäminen ja sen myrkyllisyys sekä tehokkuutta ja tämän uuden syövän vastaisen 5-atsa-2′-dC formulaatiota testattiin ensin

in vitro

in hormoniherkkien (LNCap) ja resistenttejä (DU145) syöpäsolujen.

sisäistäminen EMHVs kantoaallon kasvainsolun

in vitro

.

kineettinen of EMHVs sisäistämisen molempiin LNCap ja DU145 syöpäsolujen vahvistettiin CLSM analyysi ( CSLM) seuraamalla jakelu vapautuu fluoresoiva NP: itä (vihreä) sytoplasmaan kohdesolujen (Fig. 1). Eräs esimerkki DU145 naiiveja soluja on esitetty kuviossa. 1A. Internalisaatio tehdään jo 6 tunnin kuluttua hoidon, kun EMHVs löytyi sisältä sytoplasmassa DU145 soluja. Tässä vaiheessa EMHVs silti säilyttää ennallaan kalvo ja niiden sisältö NP: itä (Fig. 1 B). Samoin mitä löytyy edellisessä työssä [33], kun sisäistämisen EMHV kalvo sulakkeet kalvoineen isäntäsolun vapauttaen fluoresoivan sisällön koko sytoplasmatilassa (Fig. 1 C-E). Viimeistään ajankohtina (48-96 tuntia) laajalle levinnyt fluoresenssi NP: itä on havaittavissa sytoplasmassa vaikka isännän solut näyttävät morfologisesti terveitä eikä sytotoksinen vaikutus on näkyvissä (Kuva. 1D-E).

edustaja CLSM kuvia EMHVs sisäistäminen ja julkaissut nanohiukkasten jakelu (vihreän fluoresenssin signaalia, B-E) isäntäsolun sytoplasmaan useita ajankohtina on kuvattu. Naiivi soluja (A) raportoidaan kontrollina. (B), 6 tunnin kuluttua hoidon, ehjä EMHV on läsnä sytoplasmassa (nuoli). 24 tunnin (C) partikkelit ovat ilmeisesti vapautettu EMHVs. Otetuissa kuvissa 48 (D) ja 96 (E) tuntia, nanopartikkelit ovat ilmeisesti tasaisesti jakautunut koko sytoplasmassa. Puute myrkkyvaikutus punasolujen lääkeannostelun järjestelmä hoitoon arvioitiin FACS-analyysi (F), jossa solu profiili käsiteltyjen solujen (EMHVs) valittuina ajankohtina ei näy merkittäviä muutoksia Saharan vaiheessa jakaumat suhteen ohjaus (CTRL).

puute myrkyllisyyden EMHV harjoittajien solumalleja.

myrkyllisyys EMHV DDS vastaan ​​isäntäsoluihin arvioitiin analysoimalla solusyklivaiheista kohdesolujen. Kun käsitelty kuormittamattomassa EMHVs 48 ja 96 tuntia, ei muutosta LNCap ja DU145 solufaasia jakelu oli havaittavissa ja solut säilyttivät normaalin solusyklin ajaksi hoidon (Fig. 1 F). Tämä havainto viittaa siihen, että EMHVs lääkeaineen antojärjestelmä ei aiheuta mitään toksista vaikutusta syöpäsolujen sinänsä.

Kemiallinen stabiilisuus 5-atsa-2′-dC osaksi EMHV bioreaktoriin (A-EMHVs).

5-atsa-2′-dC on pro-lääkkeen ja se vaatii aktivoida fosforylaation nukleosiditrifosfaatista ennen kohdistaa inhibitio DNA: n metylaatio [37].

Äskettäin on osoitettu, että punasolujen toimivat bioreaktorit, koska niiden entsymaattisten järjestelmien [34]. Tämä tekee niistä sopivat kapselointia varten, pro-lääkkeitä, jotka on myöhemmin muuttuu aktiivinen lääkeaine [38]. Lastaus 5-atsa-2′-dC pro-lääkeaineen EMHV bioreaktoriin järjestelmä saavutettiin standardoitua protokollaa (katso materiaalit ja menetelmät). HPLC-MS käytettiin määrittämään kokonaismäärä lääkkeen sisällä DDS (A-EMHVs) ja havaitsemaan sen aktiivisen fosforyloidun muotoja. Kromatogrammi näytteiden inkuboitiin 24 tuntia 37 ° C: ssa esiin sekoitus erilaisia ​​fosforyloitua muotojen 5-Aza2′-dC (Fig. 2). Di- ja tri-fosfaatin muotoja fosforyloitua 5-Aza2′-dC eluoituvat huoneenlämpötilassa 16,6 ja RT 16,5 vastaavasti (Fig. 2B ja 2C). Kuvio 2D esittää huippu sytidiinin thriphosphate (CTP; RT: 16,5), sisäistä standardia, että me lisätty näytteitä kontrollina. Vaikuttaa siltä, ​​että tri-fosfaatin muoto 5-Aza2′-dC overbears muiden fosforyloidun muotoja todistaa korkea hyötysuhde EMHVs kuin bioreaktorit. Olemme havainneet, että 1,5 x 10

8 A-EMHVs mahtuu noin 120 ng kokonais-lääkkeen ja että aktiivinen fosforyloitua muotoja 5-atsa-2′-dC edustaa 50% kaikista ladattu lääkeaineen A-EMHVs.

(A) kromatogrammit 5-atsa-2′-dC mono-fosfaatti; (B) di-fosfaatti (RT: 16,6); (C) tri-fosfaatti (RT: 16,5) ja (D) sisäinen standardi CTP (RT: 16,5).

Anti proliferatiivista aktiivisuutta A-EMHVs

in vitro

.

antiproliferatiivista vaikutusta A-EMHV asiakkuutta solusyklin pysähtymiseen ja apoptoosiin testattiin sekä eturauhassyövän malleissa: hormoniherkkien LNCaP ja androgeenista riippumaton eturauhassyöpä DU145 solulinja, jossa perinteiset hoitomenetelmät ovat haittaavat puute reagoida hormonihoito ja PSA-antigeenin ekspression on solukalvon.

vaikutus 1,5 x 10

8 A-EMHVs hoidon, joka sisälsi noin 120 ng sisäinen 5-Aza2′-dC, on verrattiin vapaan 5-atsa-2′-dC käytettiin annosta 2,5 uM (yhteensä 6,8 ug) skaalataan alas hoitoannos käyttää klinikat. Vertasimme myös vaikutusta saman määrän 5-atsa-2′-dC sisältämää A-EMHVs (120 ng), jota käytetään vapaan lääkkeen liuoksessa.

hormoni reagoiva LNCap-soluja (Fig. 3A) , A-EMHVs indusoi merkittävän rikastamisen osa G1 viittaavia aktivoinnin apoptoottista vastetta (kuvio. 3A). Tämä muutos oli jo havaittavissa 48 tunnin kuluttua hoidon (Fig. 3A keskimmäinen paneeli) ja saavutti tilastollinen merkitys 96 tunnin (ANOVA p 0,05). Samanlainen siirtyminen kohti osa G1 jakautuminen saatiin myös käyttäen 6,8 ug vapaata 5-atsa-2′-dC (ANOVA p 0,05), mutta tämä annos on yli 50 kertaa suurempi kuin 5-atsa-2′-dC ladattu osaksi A-EMHVs. Lisäksi vaikutus 6,8 ug vapaata 5-atsa-2′-dC hoito näyttää olevan oireiden alkamisesta myöhemmin verrataan A-EMHVs. Tämä johtuu todennäköisesti siitä, että 5-atsa-2′-dC, kapseloitu EMHVs on helposti muuttaa fosforyloitu muotoja parantaa 5-atsa-2′-dC farmakokinetiikkaa /farmakodynamiikkaan. Varsinkin pienillä annoksilla vapaata 5-atsa-2′-dC (120 ng) ei aiheuttanut sub G1 siirtyminen vaikutus ja solukierron jakautumisprofiili ei poikennut ohjata enintään 96 tuntia.

1,5 x 10

8 A-EMHVs hoito, joka sisältää 120 ng sisäinen 5-atsa-2′-dC, verrattiin 6,8 ug ilmainen 5-atsa-2′-dC ja 120 ng ilmaiseksi 5-atsa-2′-dC altistuksia 24 (ylhäällä) 48 (keskellä) 96 (alhaalla) tuntia. Käsittelemättömiä soluja käytettiin kontrollina (CTRL). Molemmissa LNCap (A) ja DU145 (B) solulinjat, A-EMHVs indusoi merkittävän rikastamisen Saharan G1 solu jakelu (mustat palkit) jo havaittavissa 48 tunnin kuluttua hoidon (A ja B keskimmäinen paneeli, vastaavasti), joka kestää enintään 96 tuntia (* ANOVA p 0,05). Vastaavia siirtyminen kohti osa G1 jakautuminen saatiin myös käyttäen 6,8 ug vapaata 5-atsa-2′-dC (§ANOVA p 0,05), mutta vain havaittu 96 tuntia. Ei siirtyminen solusyklin jakeluun havaittiin ilmaiseksi 120 ng 5-atsa-2′-dC, ei poikkeava valvontaa.

Samanlainen suuntaus sub G1 faasi kuvattu hormonin resistenttien DU145 solulinja