Krooninen sairaus

tiivistelmä

Brain-spesifinen angiogeneesin estäjä 1 (BAI1) -associated proteiini 2-like 1 (BAIAP2L1), joka tunnetaan myös nimellä insuliinin reseptorin tyrosiinikinaasin substraatti (IRTKS), on mukana solukalvon uloke ja aktiini muodostumisen aikana solujen morphogenesis ja muuttoliike. BAIAP2L1 on äskettäin raportoitu edistää soluproliferaatiota aktivoimalla EGFR-ERK-reitin maksasolukarsinoomassa. Tässä tutkimuksessa raportoimme ensimmäinen kattava tutkimus BAIAP2L1 säätelyyn ylöspäin ihmisen munasarjasyöpä. Säätelyä BAIAP2L1 ovarioiden löydettiin alunperin aikana RNA seulonta ja vahvistanut immunohistokemiallisella tutkimuksia munasarjojen syöpien ja muiden syöpätyyppeihin. Merkittävä säätelyä BAIAP2L1 munasarjasyövän validoitiin analysoimalla useita itsenäisiä kohortteja julkisesti saatavilla aineistoja. Lisäksi BAIAP2L1 proteiinin ilmentyminen etäpesäkeleesioita oli suurempi kuin vastaava ensisijainen kasvaimia. Funktionaaliset määritykset munasarjasyöpäsoluja paljasti, että BAIAP2L1 on mukana edistämisessä solujen lisääntymisen ja välttää apoptoosin. Lopuksi Tämän tutkimuksen tulokset paitsi osoittaa, että BAIAP2L1 voidaan käyttää biomarkkerina ihmisen munasarjasyöpä, mutta myös paljastaa sen rooli syövän biologian. Edelleen selvittäminen roolin BAIAP2L1 in yhteydessä insuliinin reseptorin signalointipolkujen syöpäsolujen on perusteltua kehittää syöpähoitojen kohdistamalla syöpäspesifisessä aineenvaihduntaa.

Citation: Chao A, Tsai CL, Jung SM, Chuang WC , Kao C, Hsu A, et al. (2015) BAI1-Associated Protein 2-Like 1 (BAIAP2L1) on potentiaalinen biomarkkereiden munasarjasyövässä. PLoS ONE 10 (7): e0133081. doi: 10,1371 /journal.pone.0133081

Editor: David Wai Chan, The University of Hong Kong, HONGKONG

vastaanotettu: 27 maaliskuu 2015; Hyväksytty: 22 Kesäkuu 2015; Julkaistu: 29 heinäkuu 2015

Copyright: © 2015 Chao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä työ rahoittivat Chang Gung Medical Foundation: CMRPG3E0391 (Chao A), CMRPG3C1621-2 (Tsai CL), CMRPG3C0281-3, CMRPG3C0941-2 ja CRRPG3D0031 (Wang TH). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: tekijät Tämän käsikirjoituksen ovat seuraavat kilpailevia intressejä: Yi-Chao Lee on yksi keksijöistä US Patent No: 7192709B2, päivätty maalis 20, 2007 siirronsaajalle Digigenomics Co, Ltd. kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Epiteelin munasarjasyöpä on johtava kuolinsyy gynekologisen maligniteettien [1]. Se on yhdessä vatsakalvon syöpä ja munanjohtimen syöpä, yhdeksäs yleisin naisten yleisin kuolinsyy Taiwanissa [2]. Yleinen eloonjääminen munasarjasyöpä edelleen heikko, vaikka parannuksia munasarjasyövän [3,4]. Tyypillinen myöhäinen diagnoosi munasarjasyövän, kun tauti on jo levinnyt yli lantion aikaan kliinisen tilan, on osa syynä sen huono tulos [5]. Immunologinen havaitseminen seerumissa syöpäantigeenipep- CA125 [6] on integroitu vakiokäytäntö diagnosoimiseksi munasarjojen massojen [7]. CA125 on hyödyllinen myös seurannassa vaste ja helpottaa seurantaa munasarjasyöpäpotilaalle [8]. Kuitenkin taso CA125, joiden herkkyys on 80%, ei koholla kaikissa munasarjakasvainten ja spesifisyys voi vaikuttaa muiden pahanlaatuisten kasvainten fysiologiset olosuhteet, ja endometrioosi [9]. Siksi tunnistaminen lisämerkkiaineille tarvitaan pikaisesti täydentämään CA125 varhaiseen toteamiseen, hoitoon arviointi, ja arvioidaan ennusteen munasarjasyöpäpotilaalle.

BAIAP2L1 /IRTKS (Gene ID 55971) sijaitsee kromosomissa 7q21.3 -q22.1. BAIAP2L1 koodaa 511 aminohapon proteiinia, jonka molekyylipaino on noin 57 kD [10,11]. BAIAP2L1 yhdessä BAIAP2 (IRSp53), BAIAP2L2 (FLJ22582), kuuluvat IRSp53 perhe, ja kaikki jakavat IMD (IRSp53 ja Missing-in etäpesäkkeiden domain) ja SH3 domain [12]. IMD domain kuuluu suuremman perheen Bin-Amphipsin-Rev167 (BAR) domain [12], ja BAR domain muodostaa puolikuun muotoinen himmennin, joka voi sitoutua voimakkaasti kaareva, negatiivisesti varautuneet kalvo [13]. Lisäksi IMD on aktiinifilamentin-sitova kyky [12]. SH3-domeeni on tunnettu useita proteiini-proteiini-vuorovaikutuksia [14]. Siksi jäsenet IRSp53 perheen nähdään tukirakenteen proteiinien tai sovittimia, jotka auttavat kokoonpano proteiinin komplekseja aktiinin filamentti tai kalvoon tietyn kaarevuus.

BAIAP2L1 voi moduloida klustereita lyhyen aktiini nippujen aikana solun liikkumista [15]. Vuonna enterohemorraginen

Escherichia coli

, monet raportit BAIAP2L1 liittyvät sen samankaltaisuus BAIAP2 in aktiini-rikas kalvo ulokkeita, nimeltään jalustat [16,17,18,19]. Nisäkässoluissa, BAIAP2L1 on myös yhdistetty Src-riippuvaisen solumigraation [14,19,20] ja MDM2-välitteisen p53 ubikitinaation [21]. Tuumorigeneesiin, BAIAP2L1 on raportoitu edistää soluproliferaatiota aktivoimalla EGFR-ERK-reitin maksasolukarsinoomassa [22]. Onkogeeniset FGF-reseptori 3 (FGFR3) -BAIAP2L1 fuusio geeni tunnistettiin virtsarakon syöpiä [23] ja keuhkosyövässä [24], ja sen tunnistaminen voi auttaa valittaessa potilaita FGFR-täsmähoitoihin. Tähän mennessä roolin BAIAP2L1 munasarjasyövän ei ole määritelty.

Me raportoimme tässä ensimmäinen kattava tutkimus BAIAP2L1 säätelyyn ylöspäin munasarjasyöpiä. Säätelyä BAIAP2L1 ovarioiden ensin paljastettu Clontech Cancer profilointi Array ja vahvisti immunohistokemiallista tutkimuksissa. Julkisia aineistoja käytettiin vahvistamaan, että ilmaus BAIAP2L1 on merkittävästi suurempi munasarjasyövän kuin normaaleissa kudoksissa, ja muiden syöpien. Funktionaaliset määritykset munasarjasyöpäsoluja osoittavat BAIAP2L1 on mukana edistämisessä solujen lisääntymisen ja välttää apoptoosin. Nämä tulokset viittaavat siihen, että säätelyä BAIAP2L1 voidaan käyttää mahdollisena biomarkkerina munasarjasyövän.

Materiaalit ja menetelmät

Microarray-analyysi differentiaalisesti ilmentyvien geenien

Oligonukleotidi mikrosiruja, jotka sisältävät 18861 antureista (Compugen Inc., Tel Aviv, Israel) käytettiin analysoimaan ilmentyvät eri geenien välillä RNA ihmisen normaalia munasarjan (luettelonumero CR0856, Clontech, CA, USA) ja ihmisen munasarjakasvain (luettelonumero 64011-1, Clontech, Palo Aito, CA). Menettelyt CyDye merkintöjen ja skannaus olivat samanlaisia, jotka raportoitiin aiemmin [25]. Niistä differentiaalisesti ilmentyvien geenien välillä normaalin munasarjan ja munasarjatuumori, BAIAP2L1 valittiin edelleen vahvistaa. Cancer Profilointi Array II kalvoja (luettelo # 7847-1, Clontech, Palo Alto, CA), hybridisoitiin radioleimatun cDNA-koetinta varten BAIAP2L1. Array sisältää 154 näytettä eri syöpätyyppien rinta-, munasarja-, peräsuolisyöpä, maha-, keuhko-, munuais-, virtsarakko-, vulva, eturauhasen, kohdun, kohdunkaulan, kilpirauhasen, kives, iho, ohutsuoli, haima, henkitorvi, ja maksan ( S1 kuviossa).

immunohistokemiallinen analyysi kliinisen tuumorikudosten

Formaliinifiksoidusta parafiiniin upotetut (FFPE) tuumorikudoksissa munasarjasyövän saatiin Chang Gung Memorial Hospital. Kliiniset tiedot potilaista oli arkistoitu n tietopankkiin naistentautien Cancer Research Center, Chang Gung Memorial Hospital, Taiwan. Tutkimuksen hyväksyi Institutional Review Board of Chang Gung Memorial Hospital (IRB No.95-1328B). Kirjallinen suostumus luovuttajalta tai lähiomaisen saatiin käyttöön tämän otoksen tutkimukseen. Kaupallisesti saatavilla kudosmatriisien sisältyvät: FDA805-1and 805-2 (S1 taulukot) (US Biomax-. Inc, Rockville, MD, USA), BC 111109, BC 111110, ja OV8011-2-BX (S2 taulukot) (US Biomax. Inc , Rockville, MD, USA).

FFPE kudoksen diat (munasarjasyöpä ja normaali munasarja, kukin 4 mm: n paksuinen), poistettiin parafiini ksyleenillä ja rehydratoitiin pitoisuuksien alentamista etanolia. Leikkeitä immunovärjättiin anti BAIAP2L1 vasta-aineen 1: 1000 laimennus käyttäen Bond-Max automatisoitu immunohistokemiallista stainer (Leica, Saksa). Yleinen immunohistokemiallista pisteet (histoscore) tässä tutkimuksessa oli positiivisten solujen prosenttiosuuden kerrottuna sen värjäyksen intensiteetti (0 = negatiivinen, 1 = heikko, 2 = kohtalainen, 3 = voimakas), ja vaihteli 0-300 (100% kerrottuna 3) [26,27].

Kulttuuri ja hoitoon solulinjojen

Ihmisen munasarjasyövän solulinjoissa (TOV112D, TOV-21G, SKOV3, MDAH2774), keuhkojen fibroblastisolut (HFL1), ja normaali aortta sileän lihaksen solujen (T /G HA-VSMC) saatiin American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). TOV112D, TOV-21G, SKOV3, MDAH2774, ja HFL1 viljeltiin DMEM /F12, jossa oli 10% naudan sikiön seerumia, ja sopivia määriä penisilliiniä ja streptomysiiniä, 37 ° C: ssa 5% CO2. T /G HA-VSMC-soluja viljeltiin DMEM /F12, jossa oli 10% naudan sikiön seerumia, 0,05% mg /ml askorbiinihappoa, 0,01 mg /ml insuliinia, 0,01 mg /ml transferriiniä, 10 ng /ml natriumseleniitillä, ja 0,03 mg /ml endoteelisolujen kasvun täydentää. Apoptoosin analyysiä varten solut transfektoitiin BAIAP2L1 siRNA olivat joko säteilytetään UV (100 J /M

2) tai käsiteltiin 10 uM sisplatiinin (Fresenius Kabi, NC, USA) 24 tuntia ennen analyysiä.

transfektio pieniä häiritseviä (si) RNA

MDAH2774 ja SKOV3 (8000 ja 4000-soluissa, vastaavasti, 96-kuoppaisilla levyillä) transfektoitiin 1 pikomooli pieniä häiritseviä-BAIAP2L1 (CCCGAATTCACAAAGGGTAAATAAT, Invitrogen, Carlsbad, CA) in Lipofectamine RNAimax (Invitrogen, Carlsbad, CA) valmistajan protokollaa. 48 tunnin kuluttua transfektion, suppressio kohdennettujen geenien vahvistettiin western blot-analyysit.

RNA ja reaaliaikainen Q-PCR

Kokonais-RNA eristettiin TRIzol reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA). RT-QPCR, ensimmäisen juosteen cDNA syntetisoitiin oligo-T pohjamaali käyttäen standardi III ensimmäisen juosteen synteesiin (Invitrogen, Carlsbad, CA). Ilmaisu taso BAIAP2L1 (forward-aluke: CACCCGACTACTTGGAATGCT, käänteinen aluke: CGTTGGCATCGTTAGGAGC) kvantitoitiin käyttämällä SYBR Green määritystä (Applied Biosystems). Glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH) lausekkeen (eteenpäin-aluke: 5′-GGTATCGTGGAAGGACTCATGAC-3 ’, käänteinen aluke: 5′-ATGCCAGTGAGCTTCCCGT-3’) käytettiin sisäisenä kontrollina. Thermocycles olivat seuraavat: alkudenaturaatio 95 ° C: ssa 10 min, jota seurasi 45 sykliä 95 ° C 15 s ja 60 ° C 1 min. Reaktiot suoritettiin ABI PRISM 7900 HT väline (Applied Biosystems). Laskelmat tehdään syklin keskimääräisen kynnys (Ct) arvo kullekin kahden mittauksen.

Western blot-analyysi

Solut hajotettiin jääkylmässä radioimmunosaostuskokeella lyysipuskuria [1% Triton X- 100, 1% NP-40, 0,1% SDS, 0,5% DOC, 20 mM Tris-hydroksimetyyli-aminometaani (Tris-HCl, pH 7,4), 150 mM NaCl: a, proteaasi-inhibiittorit (Sigma, St. Louis, MO, USA), ja fosfataasi-inhibiittorit (Sigma, St Louis, MO, USA)] 30 minuutin ajan. Elektroforeettisen erotuksen 13% natriumdodekyylisulfaattia-polyakryyliamidigeeleillä, proteiinit geeleillä siirrettiin nitroselluloosakalvoille (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Ruotsi). Proteiini Näytteet analysoitiin käyttäen anti-BAIAP2L1 (Abnova, Taipei, Taiwan), anti-katkaistuun kaspaasi 3 (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA), anti-PARP (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) ja anti- aktiini (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) kuten ensisijainen vasta-aineita ja vastaavia piparjuuriperoksidaasikonjugoitua toissijainen vasta (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). Leimatut proteiinit todettiin sitten tehostetun kemiluminesenssin (ECL, Millipore, ja Bradford, MA, USA). Jokaisesta näytteestä, juovien voimakkuudet normalisoitiin P-aktiini.

solunelinkykyisyysmääritys

jälkeen pudotus endogeenisen BAIAP2L1 ilmaisun siRNA 48 tuntia, soluproliferaatiota aktiivisuus mitattiin 3- (4 , 5-dimetyylitiatsol-2-yyli) -2,5 difenyylitetrat- (MTT) menetelmää (Sigma, M5655-1G). MDAH2774 ja SKOV3-solut maljattiin 8000 ja 4000 solua /kuoppa, vastaavasti, 96-kuoppaisilla levyillä. Työskentely pitoisuus MTT-liuosta oli 1 mg /ml. Optinen tiheys mitattiin käyttäen Victor2 Skannaus multi-kuoppaisilla spektrofotometrillä absorbanssi aallonpituudella 570 nm. BrdU-määrityksessä BAIAP2L1 pudotus munasarjasyöpä soluja inkuboitiin BrdU: ssa 6 tuntia. DNA-synteesi-aktiivisuus määritettiin käyttämällä BrdU ELISA-kittiä (Roche Applied Science), kuten aikaisemmin on kuvattu [26].

havaitseminen geenin välisen fuusion FGFR ja BAIAP2L1

Kokonais-RNA uutettiin 8 juuri jäädytetty munasarjasyöpä kudoksiin protokollia, jotka raportoitiin aiemmin [28]. Detection of FGFR3-BAIAP2L1 fuusiogeeni suoritettiin KAPA2G nopea PCR-sarjat (Kapabiosystem, Wilmington, MA), seuraavissa olosuhteissa: 95 ° C 3 min, jota seurasi 35 sykliä 95 ° C 30 sekuntia, 53 ° C: ssa 30 s ja 72 ° C 30 sekuntia, ja päättyi 72 ° C: ssa 10 min. PCR-alukkeet raportoitiin aiemmin [24]. RNA virtsarakon syövän SW780 soluja käytettiin positiivisena kontrollina havaitsemiseksi FGFR3-BAIAP2L1 fuusio geeni [23].

Tietojen analysointi mikrosirujen in julkisesti saatavilla tietokannoissa

Data kanssa sarjanumero GSE14407 [29], GSE2109, ja GSE36133 [30] haettiin Gene Expression Omnibus (GEO, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/geo/). Expression analyysi tehtiin käyttämällä Affymetrix Expression Console (Affymetrix, Santa Clara, CA).

Tietojen analysointi

tulokset

in vitro

tutkimukset ovat peräisin vähintään kolmesta itsenäisestä kokeita ja analysoidaan kaksisuuntaisella t-testillä. Erot histoscores kahden ryhmän välillä verrattiin käyttäen opiskelija T testi. Kaksisuuntainen P-arvojen 0,05 pidettiin merkittävinä. Tilastolliset analyysit tehtiin SPSS tilasto-ohjelmalla, versio 17,0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

Tulokset

munasarjasyöpiä ilmaista korkeampia BAIAP2L1 kuin muiden syöpien

10 munasarjojen kasvaimia yksilöitä tutkittu koostuu 6 pahanlaatuisten syöpien, 2 rajatapaus vakavien cystadenoma (koordinoida #E ja N), ja 2 leiomyooma (koordinaatit #F ja J) (kuvio 1A). Muut gynecologic syöpä ja normaalit kudokset kohdun ja kohdunkaulan alkuperä määritettiin myös. Kaikissa kolmessa kudostyypeistä, BAIAP2L1 ekspressiotasot kasvainkudoksissa olivat huomattavasti korkeampia kuin normaaleissa kudoksissa. Samoin mRNA: n ilmentyminen BAIAP2L1 munasarjasyövän solulinjoissa oli suurempi kuin normaali solulinjat (kuvio 1B). Kanssa RNA ilmaisun tuloksia, BAIAP2L1 proteiinin ilmentyminen on suurempi munasarjasyövän kuin normaaleissa kudoksissa, kuten on esitetty FDA805-1and 805-2 kudosmatriisien (kuvio 2).

(A) Cancer Profilointi Array II (BD Clontech) ja cDNA: n, jotka ovat peräisin normaalista kudoksesta (N) ja kasvaimen kudokset (T) munasarjan, kohdun ja kohdunkaulan. Kvantitointi mRNA kasvaimen ja normaaleissa kudoksissa eri sivustoja näkyvät oikeassa paneelissa. BAIAP2L1 ilmentyminen kasvaimissa oli merkittävästi korkeampi kuin normaaleissa kudoksissa (** P 0,01). (B) BAIAP2L1 RNA ilmentymistä munasarjasyövän solulinjoissa oli normaalia korkeampi solulinjat. Munasarjasyöpä linjat sisältyvät vakavien tyyppi (SKOV3), endomet- tyyppi (TOV112D, MDAH2774), ja selkeä solutyyppi (TOV21G). HFL1 on ihmisen normaali keuhkojen fibroblastisolu, ja T /G HA-VSMC on ihmisen normaali aortta sileitä lihassoluja.

Lyhenteet

: t, kasvain; N, normaali.

Tulokset olivat peräisin kaupallisesti saatavilla kudosmatriisien FDA805-1and 805-2, joka sisältää normaalia elimet ja vastaavat kasvaimet (S2 taulukot). Suluissa tarkoittaa tapausten määrä on kudosmatriisien. Yleinen immunohistokemiallista pisteet (histoscore) oli positiivisten solujen prosenttiosuuden kerrottuna sen värjäyksen intensiteetti (0 = negatiivinen, 1 = heikko, 2 = kohtalainen, 3 = voimakas), ja se vaihteli 0-300 (100% kerrottuna 3).

metastasized munasarjasyöpä kudoksiin ilmaista korkeampi BAIAP2L1 kuin ensisijainen syöpä

proteiini tasojen BAIAP2L1 193 munasarjasyövän kudoksia, jotka sisältävät vakavien, endomet-, kirkas solu, ja mucinous solutyyppejä analysoitiin ( kuva 3). Ekspressiotasot BAIAP2L1 eivät olleet erilaisia ​​joukossa erilaisia ​​solutyyppejä munasarjasyöpä, vaihe ja laatu kunkin histologisen alatyypin, mutta kunkin munasarjasyövän ilmaistuna merkittävästi korkeampi BAIAP2L1 kuin normaali munasarjojen kudoksissa (kuvio 3). Expression of BAIAP2L1 analysoitiin edelleen 14 pariksi näytteitä primääri munasarjojen syöpien ja niiden vastaavat metastaasien (S3 taulukot). Metastaattisen sivustot ovat omentum (n = 7), imusolmukkeesta (n = 3), parametrium (n = 1), ohutsuolen (n = 1), umpisuoli (n = 1), ja aivot (n = 1). Kaksitoista 14 paria oli korkeampi BAIAP2L1 lausekkeita metastaasien kuin ensisijainen kasvaimia (p 0,05) (kuvio 4).

immunohistokemialliset tutkimukset tehtiin munasarjasyöpä kudoksiin (n = 193) ja normaalit kontrollit (n = 20). Ylempi paneeli osoittaa immunohistokemiallisella värjäyksellä intensiteetti (0 = negatiivinen, 1 = heikko, 2 = kohtalainen, 3 = voimakas). Yleinen immunohistokemiallista pisteet (histoscore) oli positiivisten solujen prosenttiosuuden kerrottuna sen värjäyksen intensiteettiä, ja vaihteli 0-300 (100% kerrottuna 3).

Ylempi kenttä esittää BAIAP2L1 ilmentymistä edustava pari ensisijainen munasarjasyöpä ja sen metastasoitunut päällä.

Useita, toisistaan ​​riippumattomia aineistoja vahvistaa säätely ylöspäin BAIAP2L1 munasarjasyövän

data in GSE14407 datajoukon [29] osoitti, että BAIAP2L1 mRNA-ekspressio oli merkittävästi suurempi munasarjasyövän epiteelisoluissa (CEPI, 11,8 ± 0,28 on esitetty keskiarvona ± keskivirhe) kuin normaalissa munasarjojen pinnan epiteeli (OSE, 10,8 ± 0,22) (p = 0,004) (kuvio 5A). Kudoksessa ilmentymistaso, GSE36133 tietokokonaisuus osoitti BAIAP2L1 oli merkitsevästi suurempi 182 primääri munasarjojen ja munanjohtimet tubal syöpiä (10,4 ± 0,09) verrattuna 1680 primaarisyöpien lähinnä rinta-, paksusuoli-, peräsuolen, kohdun limakalvon, keuhkojen ja munuaisten (9,8 ± 0,04) (p = 4,5 x 10

-7) (kuvio 5B). GSE2109 datajoukon [30] paljasti lisäksi, että BAIAP2L1 oli merkitsevästi korkeampi 49 munasarjasyövän solulinjoissa (9,4 ± 0,17) kuin 972 syöpäsolulinjoissa, jotka ovat peräisin muista kudoksista (8,6 ± 0,07) (p = 0,004) (kuvio 5C).

(A) mRNA ilmentymisen tasot BAIAP2L1 munasarjasyövän epiteelisolujen (CEPI) eristettiin from12 munasarjojen serous adenokarsinooma ja munasarjojen pinnan epiteeli (OSE) 12 normaalin ihmisen munasarjat. Tietoja noudetaan GSE14407. (B) Ilmaisulla tasot BAIAP2L1 kudoksissa munasarjasyövän (OV, n = 182) ja syövän muiden ensisijaisten sivustoja (n = 1680). Tietoja noudetaan GSE36133. (C) ilmentyminen tasot BAIAP2L1 solulinjoissa munasarjasyövän (OV, n = 49) ja muuta alkuperää (n = 972). Tiedot haetaan GSE2109.

puuttuminen geenin fuusio välillä FGFR ja BAIAP2L1 munasarjasyövän

Yksikään 8 testattujen munasarjasyövän RNA sisälsi transkriptio fuusio geenin välillä FGFR ja BAIAP2L1, kun taas RNA virtsarakon syövän SW780 solut ilmensivät selostukset fuusio geenin (S2 Kuva).

BAIAP2L1 paitsi edistää solujen lisääntymistä, vaan myös ehkäisee apoptoosia munasarjasyöpäsoluja

Koska BAIAP2L1 on osoitettu edistää soluproliferaatiota maksasolukarsinoomassa (HCC) [22], testasimme myös roolia BAIAP2L1 solujen kasvun munasarjasyöpäsoluja. Knockdovvn BAIAP2L1 kanssa (kuvio 6A) siRNA tekniikka estivät solukasvua useissa munasarjasyövän solulinjoissa, jotka on esitetty tulokset BrdU määrityksissä (kuvio 6B) ja MTT-määritysten (kuvio 6C).

BAIAP2L1 kaksi munasarjasyöpä solulinjoja (MDAH2774 ja SKOV3) on knockdowned kanssa si-RNA: ta (A) ja analysoitiin (B) BrdU incorportation määritys ja (C) MTT-määritys. (D) BAIAP2L1 Knockdown in SKOV3- soluissa lisäsi lohkaisu kaspaasi 3 ja PARP, jotka olivat indikaattorit apoptoosin. Soluja säteilytettiin UV (100 J /M

2) tai käsiteltiin 10 uM sisplatiinia 24 tunnin apoptoosin. Selvästi visualisoida ero voimakkuudet pilkkoa PARP bändejä, kaksi valotusajat käytettiin aikana kemiluminesenssin: pitkä (60 sekuntia) ja lyhyt (10 sekuntia). Aktiini taso käytettiin normalisoimaan määrän tulon proteiinia. (E) kvantitatiivinen analyysit pilkotun kaspaasi 3 ja PARP. Esitetyt tulokset ovat keskiarvo ± keskivirhe kolmesta itsenäisestä kokeesta. Tähdellä merkitsevät tilastollista merkitsevyyttä (p 0,05).

apoptoosin väyliä, pro-kaspaasi 3 aktivoituu ja pilkotaan 17-kDa ja 12-kDa fragmentit, ja sitten proteolyyttinen entsyymi digests loppupään proteiineja, kuten poly (ADP-riboosi) polymeraasi (PARP) [31]. Ilman DNA loukkauksia (UV- tai sisplatiini), knockdovvn BAIAP2L1 yksin hieman lisääntynyt lohkaista PARP tasoilla (kuvio 6D ja 6E). UV-säteilytyksen jälkeen tai sisplatiinihoitoon 24 tuntia, knockdovvn BAIAP2L1 lisääntynyt proteiinin tason katkaistun kaspaasi 3 ja halkaistut PARP. Nämä tulokset viittaavat siihen, että BAIAP2L1 voivat suojata soluja apoptoosilta.

Keskustelu

BAIAP2L1 ilmentyminen on osoitettu lisäävän maksasolukarsinoomassa [22]. Tässä tutkimuksessa, integroiva tietokanta-analyysit BAIAP2L1 on GSE14407 ja GSE36133 syövän kudoksissa sekä GSE2109 solulinjat vahvistaa meidän immunohistokemiallinen tulokset korkean BAIAP2L1 ilmentymisen munasarjojen syöpien. Nämä tulokset osoittavat, että ensimmäistä kertaa, että BAIAP2L1 ylössäädellään ihmisen munasarjasyöpiä osuus lisääntyi solujen lisääntymisen ja kestävyys apoptoosin munasarjasyöpä.

havaintoja, BAIAP2L1 histoscores metastaasien ovat korkeammat kuin primääri munasarjojen syöpiä, viittaavat siihen, että BAIAP2L1 voi edistää tuumorin eteneminen ja metastaasit. Nämä tulokset ovat yhtä mieltä havaintoja, BAIAP2L1 osallistuu solukalvon muodonmuutoksia ja aktiinisytoskeletonin remodeling, jotka ovat tärkeitä solujen vaeltamiseen [20]. Vaikka onkogeeniset FGF-reseptori 3 (FGFR3) -BAIAP2L1 fuusio geeni on tunnistettu virtsarakon syöpiä [23] ja keuhkosyövässä [24], emme voineet havaita transkriptio fuusio geenien BAIAP2L1 tässä tutkimuksessa rajoitettu määrä näytteitä. Läsnäolo FGFR-BAIAP2L1 geenin fuusio on osoitettu kääntää suurempaa proteiinia muissa syövissä [24], mutta olemme määritelleet BAIP2L1 vain yhden juovan 57 kD western blot-analyysi munasarjasyöpäsoluja, sulkee pois läsnäolo FGFR -BAIAP2L1 geenifuusiolla.

BAIAP2L1 on myös osoitettu, että taudin etenemistä nivelreuman, jossa BAIAP2L1 ekspressiota fibroblastien kaltaisten synoviaalisolujen korreloi positiivisesti C-reaktiivinen proteiini (CRP), joka on yhteinen kliininen markkeri tulehdus [32]. CRP on osoitettu ennustaa selviytymisen potilailla, joilla on munuaissolukarsinooma, virtsarakon syöpien, ja eturauhassyöpä, ja sisällyttäminen CRP osaksi ennustemalleja niille syöpien parantaa mallien ennakoiva tarkkuus [33]. Nämä havainnot yhdessä kannatettava että BAIAP2L1 on mukana tulehdus ja tuumorigeneesin yleensä [34].

Kaikkein ratkaisevia tehtäviä BAIAP2L1 nisäkkäillä ovat äskettäin paljastui Han ryhmä käyttäen hiiressä lähestymistapa [35]. BAIAP2L1 toimii insuliinin reseptorin (IR) adapterin, joka aktivoi IR-insuliinireseptorisubstraatti 1/2 (insuliinin reseptori substraatti 1/2) -AKT signalointireitin kautta stimuloiva tyrosiinifosforylaatiota IR. BAIAP2L1-hiirillä näkyy insuliiniresistenssiä ja epänormaali glukoosin homeostaasiin [35]. Lisäksi maksan ilmentyminen BAIAP2L1 väheni hiirillä ja ihmisillä, joilla on tyypin 2 diabetes, mielikuvan kyseessä BAIAP2L1 downregulation ja diabetes. Mielenkiintoista, maksan lasku BAIAP2L1 diabeetikoilla näytti olevan miesten ja naisten ristiriita, jonka kirjoittajat oletettu johtuvan riittämätön otoskoot [35]. Valossa genomin laajuinen yhdistys tutkimuksessa, jossa BAIAP2L1 on erittäin liittyy verenkierrossa sukupuoleen sitovan globuliinin [36], sukupuoli riippuvainen säätely BAIAP2L1 toimintojen edelleen arvoinen opiskelee.

Lisäksi aktiini liittyviä toiminnot BAIAP2L1, jotka ovat pääasiassa selvitetty bakteerien tutkimuksista [16,17,18,19], löytö BAIAP2L1 IR-IRS-AKT reittejä voi valaista sen roolia syöpäspesifisessä aineenvaihduntaa. Tarjota rakennuspalikoita kasvaimen kasvua, syöpä solujen lisätä rasvahappojen synteesiä ja glutamiini aineenvaihduntaa, kustannuksella käyttämällä tehottomia aerobinen Glykolyysivaiheen [37]. Pitoisuudet glukoosi kiinteitä kasvaimia ovat yleensä alhaisemmat kuin normaaleissa kudoksissa [38], mikä syöpäsolut usein haluta glukoosin ja glutamiinin [39]. Jatkotutkimuksissa voi osoittautua, että BAIAP2L1 on mukana saada enemmän glukoosin pääsyn syöpäsoluja, ehkä lisäämällä tehokkuutta Glut kuljettajat. Lisäksi useat alavirran efektorit IR ovat (i) MAPK: t, joiden tiedetään edistävät solujen proliferaatiota [22] ja (ii) PI-3K, joka lisää proteiinien synteesiin ja rasvahappojen ja estää syöpäsolujen apoptoosin [40].

Johtopäätökset

tämän tutkimuksen tulokset paitsi osoittavat, että BAIAP2L1 voidaan käyttää biomarkkerina ihmisen munasarjasyöpä mutta myös paljastaa sen rooli syövän biologian. Kliiniset tutkimukset suuria määriä näytteitä ja kvantitatiivisia analyyseja on tarpeen vahvistaa käyttökelpoisuutta BAIAP2L1 kliinisessä käytännössä. Edelleen selvittäminen roolin BAIAP2L1 in yhteydessä IR-IRS-alavirtaan efektoreja reittejä syöpäsolujen on perusteltua kehittää syöpähoitojen kohdistaminen syöpäspesifisessä aineenvaihduntaa.

tukeminen Information

S1 Kuva. MRNA: n profiilit BAIAP2L1 kudoksista ja solulinjoista.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0133081.s001

(DOCX)

S2 kuviossa. Absence of fuusio geenin välillä FGFR3 ja BAIAP2L1.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0133081.s002

(DOCX) B S1 Taulukot. FDA kudosmatriisien (805-1 ja 2) sekä histoscores on BAIAP2L1.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0133081.s003

(DOC)

S2 Taulukot. Kudosmatriisien (BC 111109, BC 111110, ja OV8011-2-BX) ja histoscores on BAIAP2L1.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0133081.s004

(DOCX)

S3 Taulukot. Kliiniset tiedot 14 asiassa munasarjojen syöpiä ja histoscores of BAIAP2L1 perusterveydenhuollossa syövän ja etäpesäkkeitä sivustoja.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0133081.s005

(DOCX) B

Kiitokset

kirjoittajat kiittää kasvain Bank, Chang Gung Memorial Hospital ja Jung-Erh Yang hänen erinomaisesta teknisestä avusta. Kiitämme tohtori Su-Fang Lin National Health Research Institutes (Miaoli, Taiwan) tarjoamiseksi yhteensä RNA SW780-solujen ja tohtori Shihtien T. Wang (Department of Pediatric Nephrology, lastensairaala, University of Illinois Medical School at Chicago) varten Englanti editointi. Tutkimus tukivat Chang Gung Medical Foundation: CMRPG3E0391 (Chao A), CMRPG3C1621-2 (Tsai CL), CMRPG3C0281-3, CMRPG3C0941-2 ja CRRPG3D0031 (Wang TH).