Krooninen sairaus

tiivistelmä

peräsuolen syöpä (CRC) on yksi tärkeimmistä syistä syöpää liittyvä kuolema ja luotettava veripohjaisten ennustetekijöiden biomarkkerit tarvitaan kiireellisesti. Leimaus ja molekulaarinen kiertävien tuumorisolujen (CTC) on saanut lisääntyvää kiinnostusta kliinisessä käytännössä. CTC havaitseminen CellSearch

® on jo korreloi epäedulliseen lopputulokseen metastaattisen CRC. Kuitenkin CTC havaitsemismäärä in metastasoitunutta kolorektaalisyöpää tauti on alhainen verrattuna muihin kasvain yhteisöille. Siten vaihtoehtoisten (tai täydentävä) määritykset saattaisi auttaa eritellä ennustetekijöiden käyttöä CTC kuin veripohjaisten biomarkkerit. Tässä tutkimuksessa verinäytteet 47 metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilasta seulottiin CTC käyttämällä FDA-selvitetty CellSearch

® teknologiaa ja /tai AdnaTest

®. 38 näytettä voidaan käsitellä rinnakkain. Osoitamme, että yhdistetty analyysi CellSearch

® ja AdnaTest

® johtaa parannettu havaitsemiseen CTC meidän metastasoituneen kolorektaalisyövän potilaalla kohortti (positiivisuus rate CellSearch

® 33%, AdnaTest

® 30%, Yhdistetyt 50%). Vaikka CTC havaittu kanssa CellSearch

® järjestelmä liittyi merkittävästi ilman taudin etenemistä (p = 0,046), merkittävä korrelaatio koskien eloonjäämiseen voitiin nähdä vain, kun molemmat määritykset yhdistettiin (p = 0,013). Nämä havainnot voivat auttaa luomaan paremmat välineet havaita CTC kuin hoidon biomarkkereita kliinistä rutiinia tulevissa tutkimuksissa.

Citation: Gorges TM, Stein A, Quidde J, Hauch S, rock K, Riethdorf S, et al. (2016) Parempi havaitseminen Kiertävä kasvainsolujen metastasoitunut kolorektaalisyöpä jonka Yhdistelmä CellSearch

® järjestelmän ja AdnaTest

®. PLoS ONE 11 (5): e0155126. doi: 10,1371 /journal.pone.0155126

Editor: Min-Hsien Wu, Chang Gung University, Taiwan

vastaanotettu: 03 marraskuu 2015; Hyväksytty: 25 huhtikuu 2016; Julkaistu: 16 toukokuu 2016

Copyright: © 2016 solan et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperin.

Rahoitus: TMG, SR, ja KP tukivat Hampurin, Landesexzellenzinitiative Hampuri (LEXI 2012; Kasvain kohdistaminen kautta solunpintamolekyylien välttämättömiä syövän etenemiseen ja levitys). Nämä kirjoittajat myös tukee ERC Advanced tutkija Grant leikellä, Transcan ERA-Network: Grant CTC-SCAN. TMG ja KP Lisäksi tuetaan Innovatiiviset lääkkeet -aloitetta avustussopimuksen nro 115749, resurssit jotka koostuvat rahoitustukea Euroopan unionin seitsemänteen PUITTEET Programme (FP7 /2007-2013) ja EFPIA yritysten luontoissuorituksina osuuden. Rahoittajat tukivat muodossa palkkojen tekijän TMG, mutta ei ollut mitään ylimääräistä roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. Erityinen roolit nämä kirjoittajat ovat muotoutuneet ”kirjoittaja maksujen osiossa. SH on kokopäiväistä työntekijä AdnaGen GmbH, Langenhagen, Saksa. AdnaGen GmbH antoi tukea muodossa palkan tekijän SH, mutta ei ollut mitään ylimääräistä roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. Erityinen merkitys tämän kirjoittajan on nivelletty ”kirjoittaja maksujen osiossa.

Kilpailevat edut: SH on Site Manager Research Kehittäminen AdnaGen GmbH (Qiagen). Kaikki muut kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä olemassa. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen PLoS One politiikkaa jakaa tietoja ja materiaaleja.

Johdanto

Syöpä liittyvä kuolema johtuu yleensä uloskasvamisen aggressiivinen syöpäsolujen uusille paikoissa elin (etäpesäkkeiden muodostumista), joka on levitetty ensisijaisesta kasvaimia. Peräsuolen syöpä (CRC) on yksi yleisimmin diagnosoitu pahanlaatuinen kasvain ja yksi johtavista syövän syiden liittyvien kuolemien [1]. Noin neljäsosa potilaista CRC osoittavat etäpesäkkeitä (metastasoitunutta kolorektaalisyöpää) aikaan diagnoosin (synkroninen tauti) ja edelleen potilaista kehittyy etäpesäkkeitä aikana sairauden, jolloin suhteellisen korkea kuolleisuus liittyy CRC [2].

Eri ennustetekijöitä markkereita voidaan tällä hetkellä käytetään metastasoituneen kolorektaalisyövän, esim analyysit valkosolujen, laktaattidehydrogenaasin määrä, potilaan toimintakyvystä, lokalisointi primaarituumorin ja etäpesäkkeitä, molekyylimarkkerit (esim mutaatiot BRAF-geeni), tai pitkälle integroiva klustereiden) [3-7]. Lisäksi kasvaimen kasvua dynamiikka on osoitettu tarjota on-hoidon tietoja tulevista ennuste [8, 9].

Luettelo ja molekulaarinen kasvainsolujen vallattu vähän invasiivisia verikoe (verenkierrossa olevia kasvainsoluja, CTC) yhä kliinisessä käytössä taudin seuranta- ja löytää prognostiset merkitystä [10]. CTC on helppo saada vähemmän invasiivisia ääreisveren näytteenotto mahdollistaa jatkuvan ”reaaliaikainen seuranta” syövän etenemisen. Toistaiseksi CellSearch

® järjestelmä on ainoa lähestymistapa, joka on poistunut Yhdysvaltojen amerikkalainen FDA (Food and Drug Administration) CTC havaitsemiseksi metastaattinen rinta-, paksusuoli-, ja eturauhassyöpä [11-13]. Havaitseminen CTC käyttää CellSearch

® on hiljattain korreloi epäedulliseen lopputulokseen metastasoitunutta kolorektaalisyöpää [14]. Kuitenkin tutkimukset suoritettiin metastasoitunutta kolorektaalisyöpää käyttävillä potilailla CellSearch

® osoitti paljon pienempi saanto CTC tässä kasvaintyyppi verrattuna rinta- tai eturauhassyövän [11-13]. On odotettavissa, että ”vain” 30-40%: lla potilaista, joilla metastasoituneen kolorektaalisyövän satama 3 tai enemmän CTC per 7,5 ml verta [15]. Siksi käyttämällä muita (tai lisä) määritykset saattavat parantaa mekanismien ymmärtämistä syövän biologian ja eritellä käyttö CTC kuten syövän biomarkkereita in metastasoituneen kolorektaalisyövän. Esimerkiksi huomattava ristiriita välillä CellSearch

® ja AdnaTest

® havaitsemisessa CTC peräisin metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilaista on jo havaittu [16]. CellSearch

® järjestelmä käyttää immunovärjäyksellä ja määrittelee CTC kuin soluissa, jotka ilmentävät sekä EpCAM ja pankeratins ja jotka eivät ilmennä CD45, sekä ottaa ytimen värjättiin DAPI (4 ’, 6-diamino-2-fenyyli). Sen sijaan AdnaTest

® käyttää RT-PCR alustakohdistus kolme erilaista selostukset (

EpCAM

,

EGFR

,

CEA

) tunnistaa kasvaimen solut EpCAM rikastetun solufraktio.

yhdistetty analyysi molemmissa määrityksissä voitaisiin näin ollen parantaa herkkyyttä CTC osoittaminen käyttämällä kahta metodologisia lähestymistapoja (immunosolukemiallinen ja RT-PCR) ja lisäämällä erilaisia ​​CTC markkereita. Tämä on tärkeä etu, kun otetaan huomioon tunnetun fenotyypin heterogeenisyys CTC [10]. Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli analysoida kliinistä merkitystä CTC vertaamalla ja yhdistämällä kaksi erilaista määrityksiä varten CTC havaitsemista pieni kohortin metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilaiden (n = 47). Tätä tarkoitusta varten AdnaTest

® ja CellSearch

® järjestelmä työskenteli rinnakkain. Tuloksemme osoittavat, että yhdistetty analyysi molemmissa määrityksissä johtaa lisääntyneeseen detektiomäärät CTC ylimääräisiä ennustetekijöiden tietoa. Nämä havainnot voivat auttaa luomaan uusia diagnostisia välineitä käytetään of CTC kuin hoidon biomarkkereita kliinistä rutiinia tulevissa tutkimuksissa.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaan sarjan

Juokseva potilaiden ajoitettu lievittävän kemoterapiaa CRC päässä avohoidon klinikan päässä Syöpätautien ja hematologian yliopiston Medical Center Hamburg-Eppendorf rekrytoitiin. Potilaiden ominaisuudet on esitetty yhteenvetona taulukossa 1. Suurin osa potilaista oli jo laajasti esikäsitelty vastaanottamisesta 3

rd (mediaani) hoitona (vaihteluväli: 1-8). Kaiken kaikkiaan yli 80% potilaista sai fluoropyrimidiinien, oksaliplatiini, irinotekaania, ja bevasitsumabi ja noin 40% potilaista EGFR vasta-aineita. Väestörakenne ja kuviot etäpesäkkeiden olivat odotetusti, vaikka yleinen väestö oli hieman nuorempi kuin mediaani metastaattinen CRC väestön todennäköisesti liittyy yliopistosairaalan tausta. Tutkimus toteutettiin mukaisesti Maailman lääkäriliiton Helsingin julistuksen ja suuntaviivojen kokeilu ihmisten jota lääkäriliittojen osavaltion Hamburg ( ”Hamburger Ärztekammer”). Kokeellinen protokolla hyväksyttiin (hyväksynnän nro PVN-3779) eettinen komitea lääkäriliittojen osavaltion Hamburg ( ”Hamburger Ärztekammer”). Kaikki osallistujat antoivat kirjallisen tietoisen suostumuksen ennen tutkimuksen alkua. Kaikkiaan verinäytteitä (5 ml ja 7,5 ml) 47 potilasta koottiin AdnaCollect

® veriputkea (AdnaGen

®) tai CellSave

® säilyttäminen putket (Janssen Diagnostics), ja käsitellään 24 h (AdnaTest

®) tai 96 h (CellSearch

®) ohjeiden mukaan myyjien.

AdnaTest

®

rikastamisen ja analyysi verenkierrossa olevia kasvainsoluja (CTC) AdnaTest ColonCancerSelect ja AdnaTest ColonCancerDetect, (AdnaGen GmbH, Langenhagen) valmistamiseen käytettiin mRNA: n, jonka jälkeen RT-PCR myöhemmin multiplex PCR mukaisesti valmistajan ohjeiden [16]. Kaikki tarvittavat tiedot näytteen käsittely löytyy verkkosivulla https://www.adnagen.com. Lyhyesti, 5 ml verta otettiin rikastuminen CTC käyttämällä vasta-aineella päällystettyjä magneettisia hiukkasia, jotka koostuvat seoksesta, vasta-aineiden eri EpCAM epitooppeja rikastettu Sen jälkeen solut rikottiin ja mRNA puhdistettiin oligo-dT-helmiä, jotka sisältyvät kit seuraa käänteistranskriptio (Sensiscript, Qiagen, Hilden). Saatu cDNA käsitellään multiplex PCR kasvaimeen liittyvä transkriptien (

epidermaalisen kasvutekijän reseptori

(

EGFR

),

karsinoembryonaalinen antigeeni

(

CEA

) ja

EpCAM

) sekä

Actin

kuten siivous ohjaus. PCR suoritettiin käyttäen HotStarTaq Master Mix (QIAGEN GmbH, Hilden, Saksa). Visualisointi PCR-fragmenttien suoritettiin 2100 Bioanalyzer käyttäen DNA1000 määritystä (Agilent Technologies, Waldbronn, Saksa). CTC positiivisesti tunnistettu, jos ainakin yksi multiplex-PCR-markkereita havaittiin.

CellSearch

®

eristämiseksi CTC käyttäen CellSearch

®, CTC havaitseminen suoritettiin, kuten on kuvattu muualla [17]. Kriteerit tapahtuma määritellään CTC olivat: pyöreä ja soikea morfologia, näkyvä nucleus (DAPI-positiivinen), ja positiivisen värjäytymisen malli epiteelin tiettyyn soluun (Keratiini-positiivisia ja CD45-negatiivinen). EGFR määritys CTC, The CellSearch

® Kasvain Fenotyypitys Reagent EGFR sovellettiin neljänteen kanavaan järjestelmän [18].

Tilastollinen

Jotta vertailla tuloksia CellSearch

® järjestelmän ja AdnaTest

® kokeita, CTC lukumääristä CellSearch

® tiedot muunnettiin positiivinen (≥3 CTC) tai negatiivinen ( 3 CTC) alkaen ≥3 CTC /7,5 ml veri on liitetty huonoon kliiniseen tulokseen [13]. CTC tila (positiivinen /negatiivinen) sekä korrelaatio etäpesäkkeitä sijainti testattiin 2×2 Fisherin testiä [19] ja korjattu useita testejä. McNemarin testi Yate n korjaus jatkuvuuden suoritettiin löytää välisen sopimuksen menetelmistä. Etenemisestä vapaa ja kokonaiseloonjääminen (PFS ja OS) arvioi sekä menetelmiä laskettiin Kaplan-Meyer käyrät ja vertailtiin log-rank-testi [20].

Tulokset

Kliinisen näytteen analyysin avulla AdnaTest

® ja CellSearch

®

Käyttämällä AdnaTest

®, 13 ulos 43 (30%) analysoitiin potilaista oli positiivinen CTC. CTC positiivisesti tunnistettu, jos ainakin yksi multiplex-PCR-markkereita havaittiin. CTC 8 potilaista ilmeni positiiviset signaalit

EpCAM

. Neljä näistä potilaista lisäksi osoitti signaalit

CEA

, kun taas yksi potilas oli positiivinen

EpCAM

,

CEA

, ja

EGFR

. Viisi potilasta osoitti yksinomaan signaalit

CEA

ilman ilmentymissignaaleja muuhun markkeri (kuvio 1A). Sillä CellSearch

® analyysit, vain potilaille, joilla on ≥3 CTC luokiteltiin ”CTC-positiivinen”, koska tämä cut-off oli korreloi epäedulliseen lopputulokseen metastasoitunutta kolorektaalisyöpää [13, 21]. Neljätoista ulos 42 (33%) analysoiduista näytteistä oli positiivisia CTC (alue: 3-44 solua). EGFR-positiivisten solujen (kohtuullisesta voimakkaaseen ilmaus) löydettiin kuudessa niistä 14 potilaasta (alue 1-4 EGFR-positiivisten solujen CTC-positiivisten kohortti) (kuvio 1 B). Tässä tutkimuksessa 38 kliinistä verinäytteet voitiin analysoida samanaikaisesti. Yhdistämällä AdnaTest

® ja CellSearch

® 19 ulos 38 (50%) analysoiduista näytteistä tuli positiivinen CTC (kuvio 1 C). Tässä ryhmässä

EGFR Twitter /EGFR-signaalit eivät korreloineet koska vain yksi potilas oli

EGFR

positiivisten kanssa AdnaTest

®, mutta oli EGFR-negatiivinen CTC kanssa CellSearch

® (potilas 42). Yksityiskohtainen yhteenveto CTC analyysien on lueteltu taulukossa 2. Viisitoista näytteet CTC-negatiivisia sekä CTC määrityksissä ja 5 potilasta oli CTC-positiivisia sekä määrityksissä. Seitsemän näytettä oli positiivisia CellSearch

® ja negatiivinen AdnaTest

®, kun taas seitsemän tapausta oli yksinomaan positiivisia AdnaTest

®. Tulokset molemmissa määrityksissä ei korreloi merkittävästi (Cohenin kappa = 0,1066, p = 0,51) (kuvio 1 D).

(A) Yhteenveto merkkianalyysit of CTC havaittujen kanssa AdnaTest

®. CTC positiivisesti tunnistettu, jos vähintään yksi multiplex PCR-markkereita (

EpCAM

,

CEA

, tai

EGFR

) havaittiin. (B) CTC luettelointia by CellSearch

® kuten EGFR määritys. (C) CTC positiivisuus nopeus on AdnaTest

®, CellSearch

®, tai molemmat määritys yhdistelmänä. (D) välinen vertailu AdnaTest

® ja CellSearch

® järjestelmä.

Korrelaatio CTC havainnoistaan ​​metastaattisen päällä ja terapia

käyttäminen AdnaTest

®, ei havaittu yhteyttä koskien CTC-positiivisuus ja sijainti etäpesäkkeitä (p 0,05). Samanlaisia ​​löydöksiä käytettäessä CellSearch

® (p 0,05). Yhdistämällä molemmat määritykset eivät myöskään johda merkittävä korrelaatio etäpesäkkeiden sijainti ja CTC tila (p 0,05). CTC tila ei korreloi, jossa on yksi tai useita etäpesäkkeitä (p 0,05) missä tahansa CTC analyysimenetelmiä. Mielenkiintoista, CTC positiivisuus rate liittyi suurempi hoidoittain, mediaani 2

toinen rivi tapauksessa CTC negatiivisuuden verrattuna mediaani 4

th rivi tapauksessa CTC positiivisuus.

Korrelaatio CTC havainnoistaan ​​kliiniseen tulokseen

Kaplan-Meyer käyrät ja log-rank tilastotieto CTC-negatiivisten ja CTC-positiivisia tapauksia ei paljastanut mitään merkittävää korrelaatiota koskien ilman taudin etenemistä (PFS) käytettäessä AdnaTest

® (p = 0,43) (kuvio 2A). Sillä CellSearch

® Merkitsevä yhteys PFS ja CTC tila havaittiin (p = 0,0467) (kuvio 2B). Yhdistelmä molemmissa määrityksissä taas ei osoittanut merkittävää korrelaatiota PFS mutta paljasti suuntauksen (p = 0,084) (kuvio 2C).

Testasimme myös, onko läsnä CTC jonka AdnaTest

®, CellSearch

® tai yhdistetyt tulokset, jotka heikentävät yleistä (OS) meidän metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilaan kohortissa. Käyttämällä Kaplan-Meier-analyysi merkittävä korrelaatio voitiin nähdä vain, kun molemmat määritykset yhdistettiin (p = 0,013), kun taas yksittäiset määritykset yksin edellyttäen merkittäviä varoituksia syntymässä olevista (AdnaTest

®: p = 0,31, CellSearch

®: p = 0,080) (kuvio 3A-3C).

keskustelu

peräsuolen syöpä on yksi suurimmista syistä syöpään liittyvä kuolema ja luotettava veripohjaisten biomarkkerit tarvitaan kiireesti parantaa etukäteen hoidon valinta ja muutoksia hoidon aikana. Tähän mennessä eniten käytetty veripohjaisten markkerina CRC on CEA saada varoituksia syntymässä olevista lähtötilanteessa ja ennustavaa tietoa hoidon aikana [22-24]. Huolimatta laajalle levinnyt käyttö CEA kuin veri biomarkkereiden se ei ole sairaus erityinen, vaikuttavat muut tekijät, ja ole yhtä luotettavia kuin muiden uudempia veren perustuu biomarkkerit (esim CTC) [25].

käyttöjärjestelmä on luotettavin päätepisteen kliinisissä tutkimuksissa ja havaita CTC on jo osoitettu olevan prognostinen vaikutuksia monilla kasvainten yhteisöjä, kuten metastasoituneen kolorektaalisyövän [11, 12, 21, 26-28]. Meidän kohortti, voisimme tarkkailla korkeammat CTC havaitseminen hinnat ja parempi prognostista tietoa OS kun kampaus kaksi erilaista CTC havaitsemisjärjestelmät-FDA-selvitetty CellSearch

® teknologia ja AdnaTest

®. Ennuste PFS korreloi merkitsevästi CTC havaitsemiseen käytettäessä CellSearch

® yksin (p-arvo 0,046 vs. 0,43 käytettäessä AdnaTest

® ja 0,084 yhdistettyjen analyysien molempien määritykset). Kuitenkin PFS määritelmän tarkoitetaan sitä päivää, jona etenemistä havaitaan ja lisäksi riippuu radiologisia arvioinnin kliinikon, joten PFS enemmän epäluotettavia päätepiste.

Merkittävät diskordansseja välillä CellSearch

® ja AdnaTest

® havaitsemiseen CTC on jo julkaistu [16, 29, 30]. Kuitenkaan mikään näistä tutkimuksista korreloi esiintyvyys CTC kliiniseen lopputulokseen. Esillä olevassa tutkimuksessa yhdistelmän CellSearch

® järjestelmän ja AdnaTest

® lisäsi havaitsemiseen korko 30%: sta 50% (30% käytettäessä AdnaTest

®; 33% käytettäessä CellSearch

® (≥3 CTC); 50%, jos molemmat määritykset yhdistettiin). CTC positiivisuus määrä näyttää olevan yhteydessä kehittynyt linjan hoito (taulukko 2), joka puoltaa olettaen, että suurempi CTC laskee jotta potilaat voivat hankkia vastustuskyvyn systeemisiä hoitoja. Ottaen huomioon merkityn heterogeenisuus CTC CRC [31], kun läsnä on enemmän CTC pitäisi lisätä mahdollisuus satamaan resistenttejä klooneja.

Vaikka voisimme osoittavat selvästi, että molemmat menetelmät yhdessä parantavat positiivisuus korko CTC 50% potilaista oli edelleen negatiivinen läsnäolosta huolimatta ilmeistä etäpesäkkeitä. Lisäksi tekniset rajoitukset määritykset (katso seuraava kohta) saattaa olla mielenkiintoinen biologia takana havainto, että CTC tasot CRC ovat alhaisemmat kuin rintasyöpä. Voisi väittää, että kasvainsolujen levittäminen CRC on vähäisempi, mikä myös selittää, miksi CRC maksan etäpesäkkeitä voidaan parantaa leikkauksella noin 20%, kun taas tällainen hoito on harvoin saavutetaan sama kohtelu rintasyövän.

Molemmat analyysit käytetty meidän tutkimuksissa luottaa ilmaus epiteelisolujen pinnan markkereita ja ovat siten todennäköisesti kaipaamaan CTC populaatiot, joille on tehty täydellinen epiteelin-to-mesenkymaalitransitioon (EMT) [32-34]. Kuitenkin viime aikoina työ on osoitettu, että syöpäsolut, jossa on välissä fenotyyppi ovat luultavasti aggressiivinen ne pystyvät levittämään ja selvitä kaukaisiin sivustoja, koska niiden korkea plastisuus [35, 36]. CellSearch

® järjestelmän ja AdnaTest

® ovat molemmat pystyvät havaitsemaan EMT liittyviä CTC [37, 38]. Siten CTC määrityksissä käytetty tässä tutkimuksessa tavoite epiteelin ja väli CTC, kun taas puhdas mesenkymaaliset CTC (puuttuvat Ilmaisulla epiteelin markkereita) todennäköisesti menetetään. Havaitseminen puhtaan mesenkymaalisten CTC on muutenkin hyvin vaikeaa, koska vaikka etiketti-vapaata (eli EpCAM riippumaton) kaapata järjestelmiä käytetään (esim suodattimet) epiteelin markkereita, kuten keratiineista sovelletaan yleensä toteamiseksi CTC koska puutteen mesenkymaaliset markkereita, jotka eivät ole ilmaisseet ympäröivään verisoluja. Tässä yhteydessä plastin-3, aktiinia niputtaminen proteiini ei vaimentua aikana EMT CRC ja rintasyöpäsolujen-ja ei ilmenny leukosyyteissä-voisi olla merkittävä edistysaskel [33, 34].

Cell-free nukleiinihapot (esim cell-free kasvaimen DNA: ta tai miRNA) ovat myös tällä hetkellä keskustellaan olla sopivia uusia veripohjaisten biomarkkerit [39]. Muutokset niiden pitoisuus sekä DNA muutokset on jo osoitettu käytettäväksi diagnostiikkaan, hoitoon seurantaan, ennakoivaa tai prognoositarkoituksessa [40-43]. Kuitenkin suurin osa ctDNA on johdettu apoptoottisten kasvainsolujen, mutta CTC-analyysi etuna on tutkia elinkelpoisia tuumorisoluja, jotka voivat myös parantaa nykyistä ymmärrystä kasvainsolujen levittämisen syöpäpotilailla. Lisäksi toistaiseksi ei standardoitua määritys /protokolla havaitsemiseksi soluttoman nukleiinihapoista tai miRNA voitaisiin perustaa metastasoitunutta kolorektaalisyöpää tauti ja erilaisia ​​lähestymistapoja löytämisen näiden biomarkkereiden käytetään laboratorioissa ympäri maailmaa. Aivan äskettäin, standardoitu työnkulku strategia ehdotettiin normalisoimiseksi miRNA ekspressiotietojen uutena lähtökohtana standardoituja menettelyjä, jotta tietojen vertailu eri laboratorioissa [44]. Standardoitujen assys joita voidaan käyttää kumppani diagnostiikassa on painopiste vasta perustetun EU-IMI konsortio nimeltään Cancer ID (www.Cancer-id.eu).

Paljon keskustelua on käynnissä onko CTC voidaan käyttää nestemäistä koepaloja ohjaavana yksilöllinen hoito päätöksiä [10]. Käyttäen AdnaTest

® ja CellSearch

® pystyimme havaitsemaan asiaa hoitotavoitteet kuten

EGFR Twitter /EGFR. Signaalit

EGFR Twitter /EGFR CTC ei korreloinut tutkimuksessamme välillä AdnaTest

® ja CellSearch

® (taulukko 2), joka johtuu todennäköisesti eri CTC populaatioiden jää meidän määritykset . Tämä osoittaa jälleen toisiaan täydentäviä molemmissa määrityksissä.

Yhteenvetona voisimme osoittaa, että yhdistämällä erilaisia ​​CTC määritysten lisää ulkonäköä CTC käytettäessä valitsemattomat ryhmässä metastasoituneen kolorektaalisyövän potilaita. Merkittävä korrelaatio OS voitiin nähdä vain, kun molemmat määritykset yhdistettiin (p = 0,013). Nämä havainnot voivat auttaa luomaan CTC kuin hoidon biomarkkereita kliinistä rutiinia tulevissa tutkimuksissa.