Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Se, että reseptorit TNF-sukuinen apoptoosia indusoiva ligandi (TRAIL) on lähes poikkeuksetta ilmaistaan ​​peräsuolen syöpä (CRC) edustaa perustelut työllistämiseen TRAIL-reseptorit kohdistaminen yhdisteitä terapiassa potilaiden vaikuta kasvain. Silti ensimmäinen raportteja käyttää näitä bioaktiivisten aineiden säädetty pettymys tuloksia. Siksi arveltu, että menetys membraaniin sitoutunut TRAIL-R voi olla piirre joitakin CRC, ja että arvioinnissa kalvon värjäytyminen pikemminkin kuin ilmaisee yleisesti TRAIL-R voi ennustaa vaste TRAIL-R kohdistaminen yhdisteitä tässä kasvaimen .

Tavoite ja menetelmät

Näin arvioimme immunofluoresenssimenetelmällä mallia TRAIL-reseptorien ja E-kadheriinin arvioida osa kalvoon sitoutuneiden TRAIL-reseptorien 231 valikoiduilla potilailla, joilla alkuvaiheen CRC meneillään leikkaushoitoa vain. Lisäksi tutkimme, onko kalvo värjäyksen TRAIL-reseptorit sekä läsnäolo KRAS mutaatioiden tai Mikrosatelliittimarkkerien epävakaus (MSI) oli vaikutusta eloonjäämiseen ja siten ennusteen vaikutus.

Tulokset

kuten odotettua, lähes kaikki CRC näytteet värjättiin positiivisia TRAIL-R1 ja 2. Sen sijaan kalvo värjäys nämä reseptorit oli positiivinen vain 71% ja 16% näytteistä vastaavasti. Ei korrelaatiota KRAS-mutaatio aseman tai MSI-fenotyyppiä ja ennusteen voitu havaita. TRAIL-R1 värjäytymisen intensiteetti korreloi selviytymistä yhden muuttujan analyysiin, vaan ainoastaan ​​kalvo värjäys TRAIL-R1 ja TRAIL-R2 solukalvon oli itsenäinen ennustaja eloonjäämisen (cox monimuuttujamenetelmin: TRAIL-R1: p = 0,019, RR 2,06 [1,12 -3,77], TRAIL-R2: p = 0,033, RR 3,63 [1,11-11,84]).

päätelmät

toisin kuin nykyinen oletuksia, menetys kalvon värjäytymistä TRAIL-reseptorien on yhteinen piirre alkuvaiheen CRC joka korvaa ennustetekijöiden merkitys niiden värjäytymisen intensiteettiä. Epäonnistuminen saavuttaa terapeuttisia vaikutuksia viime kliinisissä tutkimuksissa käyttäen TRAIL-reseptorit kohdistaminen yhdisteet saattavat johtua liian valinta potilaiden kasvaimia kalvoon sitoutuneiden TRAIL-reseptorit.

Citation: Kriegl L, Jung A, Horst D, Rizzani A, Jackstadt R, Hermeking H, et al. (2012) microsatellite Epästabiilius, KRAS mutaatiot ja Cellular jakelu TRAIL-reseptorit Alkuvaiheen peräsuolen syövän. PLoS ONE 7 (12): e51654. doi: 10,1371 /journal.pone.0051654

Toimittaja: Rakesh K. Srivastava, University of Kansas Medical Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 23 helmikuu 2012; Hyväksytty: 5. marraskuuta 2012 Julkaistu: 20 joulukuu 2012

Copyright: © 2012 Kriegl et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) kanssa avustuksen DFG TO 605 /2-1 EDT ja jonka Else Kröner-Fresenius Stiftung kanssa avustuksen 2011_A226 on EDT. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

kolorektaalisyöpää (CRC) on yleinen maligniteetti osuus yli 1 miljoona kasvain tapausta maailmanlaajuisesti ja edustaa neljännen kasvaimeen liittyvä kuolinsyy. Valitettavasti, vaikka parantava kirurgiset hoidot ovat toteutettavissa, jos potilaalla on kasvaimia alkuvaiheessa, ennuste joilla on pitkälle edennyt sairaus jää pettymys [1].

Viime vuosina kehitys ymmärrystä biologian CRC on muotoutunut useiden mekanismiin perustuvan hoitoja. Sen jälkeen tunnustamista esimerkiksi roolin EGF-R: n ja VEGF-R leviämisen ja angiogeneesissä, useita yhdisteitä kuten setuksimabi, panitumumabi tai bevasitsumabi on tehty kliininen tutkimus ja osoitettiin vaikuttavan myönteisesti potilaiden säilymiseen [2] – [4]. On odotettavissa, että kattavan luettelon osuus antama yksittäinen signalointireitteihin karsinogeneesiin mahdollistaa työllistymistä hoitojen räätälöity rajoitettu määrä yksittäisiä molekyylikohteista.

Toinen tuore esimerkki mekanismi perustuva terapia on edustettuna kehittämällä yhdisteiden kohdistaminen ”kuoleman-reseptorit” TRAIL-R1 ja TRAIL-R2 selektiivisesti apoptoosin syöpäsoluissa [5]. Kehittäminen tällaisia ​​aineita on logiikalla, jonka tutkimukset osoittavat, että tyrmäämällä TRAILin tai tukokset TRAIL-reseptorien johtaa tehostetun kasvainten ja etäpesäkkeiden muodostumista

in vivo

[6] ja että menetys TRAIL-reseptorien ilmentymistä ihmisen syövän kudoksissa korreloi huonon ennusteen ja kasvaimen uusiutumisen (Arvostellut Walczak ja työtovereiden [7]). Tässä suhteessa voisimme äskettäin osoittavat, että kalvo värjäyksen TRAIL-reseptorien määrää ennusteen kärsivien potilaiden maksasyövän [8] ja että ilmaus TRAIL sitovan liukoinen valereseptori OPG korreloi kasvaimen vaiheen ja etäpesäkkeiden muodostumista potilailla vaikuttaa by paksusuolisyöpä [9]. Tällä hetkellä useita TRAIL-reseptorit kohdistaminen yhdisteitä kliinisissä tutkimuksessa eri kasvain yksiköiden [5], [7].

Edellinen retrospektiivinen tutkimukset osoittavat lähes muuttumaton värjäyksen TRAIL-reseptorien kolorektaalisyövässä näytteistä edustaa perustelut työllistämiseen TRAIL-reseptorien kohdentamisaineita hoidossa tämän kasvain. Yllättäen kuitenkin määrällinen arviointi TRAIL-reseptorien värjäys voimakkuus oli yhteydessä eri ennustetekijöiden tuloksiin näissä tutkimuksissa [10] – [13]. Lisäksi ensimmäinen raportit alkuvaiheessa kliinisissä kokeissa TRAIL-reseptorit kohdistaminen yhdisteiden CRC osoittivat pettymys tuloksia, kehotukset lisätutkimuksia mahdollisesta roolista reseptorit TRAIL terapeuttisina tavoite tässä kasvain.

Ongelman ongelma tutkimme kohortin potilaista, joilla on varhaisessa vaiheessa paksusuolen syöpä, joilla ei ole solmukohtien tai kaukaisia ​​etäpesäkkeitä, joille ei ole muuta hoitoa kuin kirurgia, ja luokiteltu kasvain näytteiden mukaan läsnäolo tai puuttuminen TRAIL-reseptorien pinnalla tuumorisoluihin vaihtoehtona ainoa semikvantitatiivinen arviointi TRAIL-reseptorien värjäämällä käytetty aiemmissa tutkimuksissa. Huomasimme, että kolorektaalisyövissä osoittavat heterogeeninen ekspressiokuviota TRAIL reseptori-1 ja -2 suhteessa niiden membranous esiintyminen. Erot ilmentymistä TRAIL-reseptorien eri subsellulaaristen, eikä niiden värjäytymisen intensiteetti ennustivat ennusteen CRC potilailla, mikä edustaa markkerin tunnistamiseksi osajoukko kasvaimia, jotka ovat menettäneet herkkyyttä reseptori-välitteistä apoptoosia.

Materiaalit ja menetelmät

Kliiniset näytteet

Kolorektaalisyöpä näytteitä potilaista, joille tehtiin kirurginen resektio kanssa parantava aikomus välillä 1994 ja 2004 Münchenin yliopiston haettiin arkistoista instituutin patologian yliopistomme. Näytteenotto ja potilaiden tiedon tehtiin koostemuodossa yhteisymmärryksessä ohjeiden eettisten komitean Münchenin yliopiston. Vain peräsuolen adenokarsinomia Keskivaikeaa eriyttäminen (G2 WHO: n mukaan luokitus), T-luokkien T2 ja T3, joissa ei ole solmukohtien (N0) eikä etäinen etäpesäke (M0) aikaan diagnoosin, ja siten vaiheessa I ja II A mukaan TNM luokittelu paksusuolen syöpä, katsottiin (T2 /T3N0M0 G2) [14]. Lisäksi minimoida mahdollinen vaikutus radio- tai chemo-terapiassa TRAIL-reseptorit asemasta [15], [16] ja potilaiden ennusteeseen, potilasta joille tehtiin neoadjuvant tai adjuvanttihoito lisäksi leikkaushoitoa suljettiin pois tästä kohortissa. Survival tietoja haettiin kasvain rekisteristä Munich (www.tumoregister-muenchen.de). Tapaukset sensuroitiin jossa potilaskato havainto tai kuolleet muista syistä kuin peräsuolen syöpä. Tutkimuksessa noudattaneet eettisen komitean Ludwig-Maximilian Universität München.

rakentaminen kudossiruina

peräsuolen kudossiruina (TMA) rakennettiin kuten aiemmin on kuvattu [17]. Lyhyesti 5 um H pixel /viipymäaika 25,2 mikrosekuntia; pikselin koko 0,31 pm; laser teho 2%; master gain 600-1000. Sen jälkeen kuvankaappaus alkuperäinen LSM tiedostot muunnettiin TIFF-tiedostoja. Poissulkemiseksi intraobserver vaihtelevuuden arvioitiin näytteet kahdesti tarkkailija, joilla ei ollut aiempaa tietoa ennusteen tai muu klinikalla-patologinen muuttujia. Esimerkillinen ominaisuuksia TRAIL-reseptorien värjäämällä syöpänäytteissä tai ei-kasvain paksusuolen kudokset ovat vastaavasti kuvassa 1, kuva 2, ja kuviossa S1.

(A) Prosenttia näytteiden näkyvissä mitään värjäytymistä, heikko tai vahva immunoreaktiivisuus. (B-D): edustaja tyypillinen mikroskooppinen TRAIL-R1 värjäys (B: mitään värjäytymistä. C: heikko ja D: voimakas värjäytyminen). (D-F): värjäys TRAIL-R2 (E: mitään värjäytymistä. F: heikko ja G: voimakas värjäytyminen). Esillä osat edustavat luokan 2 paksusuolen syövän vaihe II (T3N0M0) at suurennus 630 ×.

(A) prosenttiosuus kasvaimen näytteistä osoittaa kalvon värjäytymistä TRAIL-R1 ja perävaunu R2. Edustavia tyypillinen mikroskooppinen TRAIL-R1 värjäyksen hallitseva sytoplasmista (B) tai solukalvojen värjäytymistä (C). Tyypillinen kuvio TRAIL-R2 värjäys hallitseva sytoplasmista värjäytymistä (D) tai kalvon värjäys (E). Suurennos, × 800. Esillä osat edustavat luokan 2 paksusuolen syövän vaihe II (T3N0M0) at suurennus 630 ×.

edustaja rakenteessa co-värjäytymisen TRAIL-R1 ja E-kadheriinin solukalvon paksusuolen syövän solujen konfokaalimikroskopiaa osoittavat (A) kuvio hallitseva solukalvojen värjäytymistä vs. (B) ei kalvomainen värjäystä. Värjäys TRAIL-R1 (vihreä, vasen paneeli), E-kadheriinin (punainen, keskimmäinen paneeli) ja peitot näiden värjäyksen (oikea paneeli).

Analyysit KRAS mutaatioiden

sillä analyysit mutaatioiden eksonin 2 KRAS onkogeenin kodonissa 12/13, materiaali jäljellä vain 200 231 potilasta (86,6%). Näin ollen, genominen DNA uutettiin mikrodissektion kudosalueiden, jotka sisältävät kasvaimen kuten aikaisemmin on kuvattu [19]. Pyro-sekvensointi tehtiin käyttäen pyro-Gold (Qiagen, Saksa) ja Hotstar Taq-polymeraasia (Qiagen, Saksa). PF2 aluketta käytettiin määrittämään antisense-sekvenssejä. PyroMark Q24 laite (Qiagen, Saksa) ja PyroMark ™ Q24 ohjelmistoa käytettiin sekvensointiin, ja sekvenssianalyysit [20], [21].

mikrosatelliittimerkkien vakausanalyysia

Voit selvittää tilan Mikrosatelliittimarkkerien vakauden [microsatellite vakaus (MSS) tai korkea-asteen microsatellite epävakaus (MSIH)], kaksi mononukleotidi toista markkereita BAT-25 ja BAT-26 tutkittiin. DNA monistettiin duplex PCR (Qiagen DNA Multiplex PCR kit, 100 nM BAT25 ja 100 nM BAT26 alukkeita – Taulukko S3) käyttämällä seuraavaa sykliprofiilia: denaturaatio 95 ° C: ssa 15 minuutin ajan, 34 sykliä denaturointi 94 ° C 30 sekuntia, pariutuminen 57 ° C: ssa 90 sekunnin ajan ja pidennys 72 ° C: ssa 60 sekunnin ajan, ja lopullinen vaihe 60 ° C: ssa 30 minuutin ajan, kuten aiemmin on kuvattu [22], [23]. 1 ui PCR-tuotetta sekoitettiin 18,5 ul: aan erittäin deionisoitua formamidia (Hidi formamidi) ja 0,5 ui DNA-Size Standard LIZ 500 /(-250) (molemmat Applied Biosystems, Darmstadt, Saksa). Tämä seos denaturoitiin 3 min ajan 94 ° C: ssa, välittömästi jäihin, ja erotettiin käyttäen ABI 3130 Genetic Analyzer. Tulokset analysoitiin GeneMapper Software (Applied Biosystems).

Analyysi ilmentymisen liitoksen muotoja KRAS4A ja KRAS4B

Tästä tutkimuksessa riittävästi materiaalia jäi vain 128 231 kasvainnäytteet (55,4 %). Näin ollen koko RNA eristettiin mikropaloitelluista kasvaimen alueilla käyttäen RNeasy-sarjat (Qiagen, 74404), kuten aiemmin on kuvattu [24]. RNA mitattiin UV-fotometria. 200-1000 ng RNA isolaatteja käänteistranskriptio, kun läsnä oli 100 uM satunnaisia ​​heksameerialukkeita ja 200 U RevertAid käänteistranskriptaasia (sekä Fermentas, St. Leon, Saksa; SO142, EP0441). 2 ui raakaa RT-reaktiota käytettiin templaattina RT-qPCRs käyttämällä Light Cycler 480 Probes Master (Roche, 04902343001), joilla on erityisiä alukepareja ja Universal ProbeLibrary Probes (Roche – Taulukko S3). Cp (kriittinen piste) arvot RT-qPCRs spesifinen

KRAS4A, KRAS4B

ja viittaus geeni

HPRT

(

hypo-ksantiinikumia phosphoribosyl- transferaasi

) määritettiin käyttäen LightCyclerTM 480 laite (Roche). Kaikki pitoisuudet on

KRAS4A, KRAS4B

erityinen RNA: t normalisoitiin sen ilmentymisen

HPRT

geenin (ΔCp). Kokeet tehtiin kaksoiskappaleet ja toistettiin ainakin kahdesti. Validoida kokeellinen järjestelmä, suhteelliset määrät kahta silmukoitumisvariantit KRAS4A ja KRAS4B arvioitiin solulinjoissa SW948 ja HCT15, koska se oli kuvattu, että SW948 ilmaista enemmän KRAS4A variantin kuin HCT15-solujen [25]. Tämä tulos oli toistettavissa (kuva S3) siten validoida koejärjestelyistä. Lisäksi meidän luki järjestelmä osoitti korkean luotettavuuden kuin kalibrointikäyriä käyttämällä määriteltyjä määriä templaatti-DNA osoitti lineaarisuus vähintään neljän log skaalaa alas 100 kappaletta tietyntyyppisiä RNA (kuva S3).

Tilastollinen analyysi

Cross-tabulations laskettiin Fisherin testiä. Kaplan-Meier-analyysi käytettiin arvioitaessa syövän tiettyjä selviytymistä. Merkitys Kaplan-Meierin tilastoa testattiin soveltamalla log-rank-testi. Monimuuttujamenetelmin tehtiin käyttämällä Coxin monimuuttuja regressiomallin. Tilastot laskettiin SPSS versio 15.0 (SPSS Inc.). p-arvot 0,05 katsottiin olevan tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Potilaat ja näytteet

seulonta syövän yksilöitä tehtiin potilailla, joille tehtiin kirurginen resektio kanssa parantava aikomus vuosien 1994 ja 2004 meidän laitokselle. Valinta Näytteiden rajoittui peräsuolen adenokarsinooman, joilla on kohtalainen erilaistumiseen (G2), T-luokkien T2 ja T3 potilailla, joilla ei ole solmukohtien (N0) eikä etäinen etäpesäke (M0) aikaan diagnoosin, ja rajoitettu potilaille, jotka saavat leikkaushoitoa vain . Tämä johti kokoelma 231 potilasta analyysiä varten. Sarjaan kuului 55% miehiä ja 45% naisia ​​potilaista. 64% potilaista oli yli 65-vuotiaita (keski-ikä 56 ± 8,1 vuotta), kun taas loput 36% potilaalla oli keski-ikä oli 75 ± 6,9 vuotta. 85% potilaista oli diagnosoitu kasvain vaiheessa T3, kun taas 15% potilaista vaikutti kasvain vaiheessa T2. Eloonjääntitulokset sensuroitiin kuten tapauksessa seuranta lopetettiin tai potilasta kuoli muista syistä kuin peräsuolen syöpä. Ominaisuudet tässä potilasryhmässä on esitetty yhteenvetona taulukossa 1.

TRAIL-R1 ja TRAIL-R2 värjäytymisen peräsuolen syövän näytteissä

arvioimiseksi värjäytymisen TRAIL-reseptorien Tuumorinäytteissä ensin suorittanut semikvantitatiivinen analyysi perustuu luokitteluun näytteiden mukaan ilman värjäystä tai läsnä ollessa heikko tai voimakas värjäytymisen intensiteetti kunkin reseptoreihin. Tämän kriteerin, 87 (38%) paksusuolensyöpä näytteessä oli vahva positiivinen värjäytyminen, 129 (56%) oli heikkoa värjäytymistä, kun taas 15 (6%) näytteistä värjättiin kokonaan negatiivisia TRAIL-R1 (kuvio 1). TRAIL-R2 Tuumorinäytteissä tutkittiin, voimakas värjäytyminen havaittiin 110 (48%) tapauksista, heikko värjäytyminen 116 (50%), kun taas vain 5 (2%) näytteet värjättiin negatiivinen TRAIL-R2 (kuvio 1). Myöhemmässä analyysissä olemme määritetään solun jakautuminen TRAIL-R1 ja TRAIL-R2 luokittelemalla kasvaimen näytteiden mukaan läsnä tai poissa värjäyksen vastaaville TRAIL-reseptorien solukalvojen. Arvioituna immunohistokemiallisella värjäyksellä ja päällekkäiset immunofluoresenssimenetelmällä mallia TRAIL-reseptorien ja E-kadheriinin, kalvo värjäytymistä TRAIL-R1 voitu havaita 163 (71%) tapauksista, kun taas negatiivisesti värjätty tai yksinomaan sytoplasmaattinen värjäys löydettiin 68 (29 %) tapauksista. Sillä TRAIL-R2 solukalvojen värjäytymistä havaittiin 36 tapausta (16%); sytoplasmaattinen tai negatiivinen värjäytyminen havaittiin 195 tapauksessa (84%).

Näin ollen, kun taas useimmat kasvainnäytteitä värjättiin yhteensä positiivisia TRAIL-reseptori-1 ja 2, osa tuumorinäytteet osoittaa kalvon värjäytymistä näille reseptoreille oli huomattavasti alempi. Kun lauseke intensiteetti ja solujen jakautumista TRAIL-reseptorien kasvain näytteet analysoitiin suhteessa eri kliinis-patologinen muuttujat kuten KRAS-mutaation tilan ja läsnäolon Mikrosatelliittimarkkerien epävakautta, mitään korrelaatiota voitu havaita arvioituna Fisherin testiä (taulukot S1 ja S2).

Prognostic merkitys TRAIL-reseptorin ilmentymisen ja solusijaintipaikan kolorektaalisyövässä

Kun ilmaus TRAIL-reseptorien katsottiin suhteessa selviytymisen peräsuolen syöpäpotilaiden, TRAIL -R1 värjäyksen intensiteetti (korkea ilmaisu vs. matala /ei lauseke) liittyi merkittävästi parempi ennuste: 5 vuoden pysyvyys potilaiden kasvaimia kokonaiskäyttöaste korkeamman TRAIL-R1 ilmentyminen oli 70% vs. 56%: lla potilaista, joilla on alhainen tai kaikkiaan mitään värjäytymistä varten TRAIL-R1; 10 vuoden selviytymisen näille potilaille oli vastaavasti 31% vs. 25% (p = 0,008; Kuva 4A). Lisäksi, kun kasvain näytteet luokitellaan sen mukaan, läsnä tai poissa ollessa kalvon värjäytymistä TRAIL-reseptorit, potilailla, joilla on kasvaimia, joilla TRAIL-R1 värjäys pinnalla solukalvojen osoitettiin olevan parempi ennuste vs. potilailla, joilla sytoplasmaattinen tai ei värjäytymistä (5 vuoden pysyvyys 65% vs. 44%, 10-vuoden pysyvyys: 30% vs. 22%, p = 0,003 – kuvio 4B).

(A) Survival käyrä kärsivien peräsuolen syöpä acc . ja TRAIL-R1 värjäytymisen intensiteettiä. Tässä ja seuraavissa kuvaajat sensuroitu tapauksissa on merkitty rastilla. (B) eloonjäämiskäyristä saman potilaiden väestö luokitellaan sen mukaan TRAIL-R1 värjäys solukalvon. (C) Survival juoni potilaiden mukaan värjäytymisen intensiteetti TRAIL-R2 (vahva vs. heikko ilmaus). (D) selviytymisen juoni saman potilaan väestöstä luokitellaan sen mukaan TRAIL-R2 solu jakeluun. (E) Survival potilaista mukaan solukalvojen värjäytymistä asemaan sekä TRAIL-reseptorit. Kaplan-Meier käyrät edustavat eloonjäämiseen liittyvän solukalvojen värjäytymistä TRAIL reseptori 1 ja 2 vs. potilaiden kasvaimia negatiivisesti värjäytyneet sekä TRAIL reseptoreihin.

Kun TRAIL-R2 värjäys katsottiin, sen intensiteetti ilmaisun ei merkittävästi korreloineet säilymiseen (p = 0,17; kuvio 4C). Kuitenkin, jos potilaat stratifioitiin läsnäolo tai puuttuminen värjäytymisen solukalvojen, kalvon värjäytymistä TRAIL-R2 Tuumorinäytteissä korreloi merkittävästi parempi potilaan eloonjäämisen (5-vuoden eloonjääminen: 83% vs. 57%; 10- vuoden pysyvyys: 38% vs. 26%, p = 0,015; Kuva 4D). Kun potilaiden eloonjääminen analysoitiin mukaan kaksinkertaisen positiivisuutta TRAIL-reseptorit, eli kun eloonjäämisen potilailla, joilla on samanaikaisesti kalvon värjäyksen TRAIL-R1 ja TRAIL-R2 verrattiin potilaiden, joilla ei esiinny värjäytymistä tai sytoplasmaattinen värjäys vain, selviytymisen potilailla, joilla on kalvon värjäytyminen sekä TRAIL-reseptorien kasvoi 92% vs. 44%: lla potilaista, joilla ei ole kalvo värjäytymistä (p = 0,012, kuvio 4E). Lisäksi analyysi huomioon mahdollisesti, että, kuten aiemmin on raportoitu, KRAS mutaatioita, vähentynyt määrä silmukoivat KRAS4A suhteessa silmukointivariantin KRAS4B, tai MSI-fenotyyppi saattaa vaikuttaa eloonjäämiseen paksusuolen syövän potilaille [26] – [28] , ei havaittu merkitsevää ennustetekijöiden vaikutusta meidän potilaiden kohortissa (kuva S2).

Lopuksi arvioimaan tietyn vaikutuksen TRAIL-reseptorien värjäys eloonjäämiseen, Coxin regressioanalyysi myös samanaikaisesti solun jakautumista TRAIL reseptoreihin, niiden värjäytymisen intensiteetti ja muiden asiaan kliinis-patologisten muuttujia suoritettiin. Tämä osoitti, että kalvo värjäyksen TRAIL-R1 ja TRAIL-R2 yksilöllisesti ja itsenäisesti ennustaa selviytymisen meidän peräsuolen syöpäpotilaiden kollektiivinen (TRAIL-R1: p = 0,019, RR 2,06 [1,12-3,77], TRAIL-R2: p = 0,033 RR 3,63 [1,11-11,84]). Sen sijaan, huolimatta merkittävästä yhdistyksen löytyy pitkän rank testi, värjäytymisintensiteettiä /ilmentymisen TRAIL-reseptorien ei voitu vahvistaa niin itsenäinen riskitekijä uusiutumisen (taulukko 2).

keskustelu

TRAIL-reseptorit patofysiologiassa ja terapiassa paksusuolisyövän

häviäminen TRAIL-reseptorien on osoitettu olevan tärkeä rooli syövän kehittymisessä. Erityisesti useat eri tutkimukset tukevat käsitystä, että TRAIL signalointi toistetaan

in vivo

tärkeä tehtävä estää etäpesäkkeiden muodostumisen [29] – [32]. Äskettäin on myös esitetty, että ilmentyminen TRAIL-reseptorien korreloi että useiden merkkiaineiden apoptoosin, mikä tarjoaa yhteyden toiminnallista roolia näiden reseptorien ja niiden prognostiset merkitystä [33].

Edellinen raportteja lähes kaikkialla läsnä ilmentyminen TRAIL-reseptorien CRC edusti perustelut käytön TRAIL-reseptorien kohdentamisaineita hoitoon tämän kasvain. Yllättäen kuitenkin, kun taas usein menetys TRAIL-reseptorien on raportoitu useita kasvaimen yhteisöjä voisi este kliinistä tehoa tällaisten yhdisteiden [8], [10], [34], [35] mitään systemaattista arviointia kalvon värjäytymistä TRAIL reseptorien CRC näytteitä on saatavilla. Lisäksi ensimmäinen raportit alkuvaiheessa kliinisissä kokeissa TRAIL-reseptorit kohdistaminen agonisti- vasta-aineita CRC ole selviä merkkejä tehon [36] kehotukset lisätutkimuksia siitä TRAIL-reseptorit kuten terapeuttinen kohde hoidettaessa tämän kasvain. Tämän kysymyksen, sen pohjalta meidän viimeaikaisten havaintojen maksasolukarsinoomassa [8] otimme arviointi solujen jakautumista TRAIL-reseptorit kriteerinä arvioitaessa niiden ennustetekijöiden merkitys. Myös vähentämään mahdollisia painottaminen tekijät, päätimme analysoida homogeeninen potilaan kollektiivinen kasvaimia alkuvaiheen ilman etäpesäkkeitä leikkauspotilaiden vain.

Prognostic merkitystä TRAIL-reseptorien värjäys voimakkuus

Yhteisymmärryksessä aiempien tutkimusten kanssa, [10], [12], [13], meidän kohortin valtaosa näytteistä osoitti positiivista värjäytymistä varten TRAIL-R1 ja TRAIL-R2, noin puolet näytteistä osoittaa vahvaa värjäytymistä (kuvio 1). Kuten olemme arvioineet ennustetekijöiden merkitys TRAIL-reseptorien värjäys, TRAIL-R1 intensiteetin värjäyksen tulokset (vahva vs. matala /ei-värjäys) osoitti merkittävää korrelaatiota eloonjäämiseen pitkällä rank testi, korkeamman TRAIL-R1 värjäytymisen intensiteetti liittyessä parempi eloonjääminen (p = 0,008, kuvio 4A); sen sijaan, TRAIL-R2 värjäytymisen intensiteetti, KRAS-tilan suhteellinen määrä silmukointivariantin KRAS4A tai MSI-fenotyypin eikä korreloinut selviytymisen (kuvio 4C, kuvio S2). Nämä tulokset ovat yhtäpitäviä aiempien tutkimusten kanssa, jotka ilmoitetaan positiivinen korrelaatio potilaiden selviytymisen ja ilmentyminen TRAIL-R1 [10], [33]. Tuntemattomista syistä, ei ole vaikutusta [13], tai jopa negatiivinen korrelaatio TRAIL-R1, mutta trendikäs positiivinen korrelaatio TRAIL-R2 selviytymisen myös raportoitu [12].

Prognostic merkitystä solun jakautumisen perävaunu reseptorit vaihtoehtona värjäystä intensiteetti

pyrkimys selventää tätä asiaa, me jälkeen arvioitiin, onko läsnäolo tai puuttuminen solukalvojen värjäytymistä TRAIL-reseptorit voisivat paremmin korreloi selviytymisen sitten ainoana arvioida niiden värjäytymisen intensiteettiä. Toisin kuin lähes kaikkialla värjäystä TRAIL-reseptorit, huomattava osa näytteistä oli negatiivinen kalvon värjäytymistä TRAIL-R1 ja TRAIL-R2 (kuvio 2). Hyväksymällä tämän kriteerin, viiden vuoden eloonjääminen potilailla kasvaimia näytteille TRAIL-R1 tai TRAIL-R2 värjäys solukalvon oli korkeampi kuin potilaat, joilla ei värjäytymistä tai sytoplasmista värjäytymistä vain (kuva 4). Potilaat kasvaimia kaksinkertaisella-positiivisia solukalvojen värjäytymistä sekä TRAIL-reseptorien selvisivät huomattavasti kauemmin verrattuna potilaisiin osoittaa kaksinkertaisen negatiivinen solukalvojen värjäytymistä (kuvio 4E). Se, että monimuuttuja-analyysia, joka käsittää vaikutus solujen jakautumista TRAIL-reseptorien samoin kuin niiden värjäytymisen intensiteetti, tämä ei voitu vahvistaa itsenäisinä ennustetekijä viittaa siihen, että havaitseminen TRAIL-reseptorien värjäys solukalvon on suuret tekijä selviytyminen: tämä on yhdenmukainen käytettävissä olevien tietojen kärsivien maksasyövän [8], jossa viimeaikainen

in vitro

todisteita roolista TRAIL-reseptorien sisäistämisen vastuksessa TRAIL [18] ja sen havainnon kanssa, että membraaniin sitoutunutta TRAIL-reseptorit altistetaan vaikutuksen kiertävän TRAIL. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet mitään ennustetekijöitä merkitystä TRAIL-R2 tai vain suuntaus on positiivinen korrelaatio tämän reseptorin ekspressio ja selviytyminen [12]; oletamme, että epäonnistuminen tunnustamaan TRAIL-R2 määritettäessä potilaan selviytymistä aiemmissa tutkimuksissa heijastaa korkeampi ennustetekijöiden merkitys solujen jakautumista TRAIL-reseptorien vs. että niiden värjäytymisen intensiteettiä.

kliinisiä seurauksia toiminnallinen merkitys TRAIL-reseptorien värjätä solukalvojen

ilmaisun puuttumista TRAIL-reseptorien on mahdollisten seurausten suhteen työllistämiseen agonistinen vasta kohdistaminen TRAIL-reseptorit tällä hetkellä kliinisissä tutkimustehtävissä syöpähoidon: vaikka voisimme vahvistavat, että valtaosa kasvaimista värjättyä positiivisia TRAIL-reseptorit, huomasimme, että menetys TRAIL-reseptorien solukalvon on usein ominaisuus CRC hallitseva ennustetekijöiden merkitystä; olisi siksi harkittava jättäminen osoittaa merkkejä tehon viime kliinisissä tutkimuksissa käyttäen TRAIL-reseptorit agonisti- vasta [36] voisi johtua riittämättömästä valinta potilaiden kasvaimia kalvoon sitoutuneiden TRAIL-reseptorit. Toisaalta, johtuen summattu ennustetekijöiden vaikutusten TRAIL-R1 ja TRAIL-R2, potilaalla ilmenee solukalvojen värjäytymistä sekä reseptorien voisi hyödyntää antamalla yhdistetyllä vasta-aineiden kohteena sekä reseptorien tai antamalla rekombinantin TRAIL [37] .

se, että riippumatta niiden sijainnista solussa, lähes kaikki kasvain näytteet osoittivat jossain määrin värjäytymistä TRAIL-reseptorien hyväksyy ajatus, että geneettinen menetys tai mutaatio TRAIL-reseptorien on harvinainen tapahtuma syöpäsolut [34], [38]. Erot solun jakautuminen näiden reseptorien ehdottaa sen sijaan, että heikentyvän TRAIL-reseptorien ihmiskaupan ulomman solukalvon tai mekanismeja sisäistämisen osansa määritettäessä toiminnallinen menetys TRAIL-reseptorien. Tämän huomioon, endosytoosi välittyy clathrin äskettäin kuvattu aiheuttaa resistenssin TRAIL rintasyöpäsoluissa [18], ja useita yhdisteitä, osoitettiin lisäävän ilmentymistä TRAIL-reseptorit sekä niiden sijaintia päälle solukalvojen [39], [ ,,,0],40].