Krooninen sairaus

tiivistelmä

suuri määrä todisteita tukee avainasemassa telomere toimintahäiriö karsinogeneesissä takia induktio kromosomaalisen epävakautta. Tutkia telomere lyhentäminen syöpää edeltävät haiman vaurioita, mittasimme telomere pituudet kvantitatiivisin fluoresenssia

in situ

hybridisaatio normaaliin haiman kanava epiteelin, haiman intraepiteliaalisten neoplasiat (PanINs), ja syövät. Käytetyt materiaalit sisältyvät kirurgisesti resektoitiin haimasyövän yksilöt ilman syövän (n = 33) ja invasiivisia duktaalikarsinooma (n = 36), sekä ohjaus ruumiinavaus tapauksissa (n = 150). Verrattuna normaaliin kanaviin, telomeeripituuden aleni Panin-1, -2 ja -3 ja syöpä. Lisäksi telomeres olivat lyhyempiä syövän kuin Panin-1 ja -2. Telomeeripituuden syövän ei ollut yhteydessä histologinen tyyppi, leesiosta sijainti, tai syöpä vaiheessa. PanINs tai ilman syövän osoittivat samanlaisia ​​telomere pituudet. Ilmaantuvuus epätyypillisten mitoosin ja Anaphase sillat, jotka ovat morfologiset ominaisuudet kromosomi epävakautta, negatiivisesti korreloivat telomeeripituuden. Telomeres normaalissa kanavaan epiteelin lyheni ikääntymiseen, ja ne, PanINs tai syöpiä olivat lyhyempiä kuin ikääntymiseen verrokeilla, mikä viittaa siihen, että telomere lyhentäminen tapahtuu vaikka histologisia muutoksia ovat poissa. Tuloksemme viittaavat vahvasti siihen, että telomere lyhentäminen tapahtuu alkuvaiheessa haiman syövän synnyn ja etenee kanssa precancerous kehitykseen. Telomere lyhentäminen ja kromosomi epävakautta kanavaan epiteelin saattaa liittyä syövän synnyn haiman. Määritys telomeeripituuden vuonna haimatiehyen vauriot voivat olla arvokkaita tarkka havaitseminen ja riskinarviointi haimasyövän.

Citation: Matsuda Y, Ishiwata T, Izumiyama-Shimomura N, Hamayasu H, Fujiwara M, Tomita Ki, et al. (2015) asteittainen Telomeeri lyhentäminen ja lisääminen Kromosomi Epävakaus keskuudessa Panin asteet ja Normaali Duktaalinen epiteelin kanssa ja ilman syöpä haimassa. PLoS ONE 10 (2): e0117575. doi: 10,1371 /journal.pone.0117575

Academic Toimittaja: Arthur J. Lustig, Tulanen yliopiston Health Sciences Center, Yhdysvallat |

vastaanotettu: 28 lokakuu 2014; Hyväksytty: 28 joulukuu 2014; Julkaistu: 06 helmikuu 2015

Copyright: © 2015 Matsuda et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tätä työtä tukee osittain avustus-in-tukea Japanin Society for Promotion of Science (C, nro 25462127) ja avustuksia Syöpä tutkimuslaitos Kanazawa yliopiston ja alumniyhdistys Kagawa University lääketieteellisen tiedekunnan Sanjukai ja Y. Matsuda. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

vuosittainen ilmaantuvuus haimasyövän on kasvanut maailmanlaajuisesti [1], ja on johtava syy syövän liittyvän kuoleman [2]. Ennuste haimasyövän säilyy huonona kokonaispituudeltaan 5 vuoden pysyvyys on noin 5% [1], koska sen aggressiivinen kasvu ja korkea etäpesäke. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että haimasyövän ei synny de novo, vaan etenee monivaiheinen prosessi, johon ei-invasiivisia esiasteleesioita kutsutaan haiman epiteelinsisäisen neoplasioihin (PanINs) ja joka päättyy kohdunkaulan syöpä [3,4,5]. Mutaatiot

KRAS, CDKN2a, TP53

, ja

Smad4

, jotka kuljettaja mutaatiot haimasyöpä, kerääntyä mukaan histologinen luokan PanINs ja ajaa neoplastisten muutosta ja syövän etenemiseen [6,7 ]. On silmiinpistävää yhteys korkeaan ikään ja lisääntynyttä esiintymistä haimasyövän [8,9], ja tämä voi edustaa yhdessä vaikutukset mutaation kuorman, epigeneettiset sääntelyn, telomeerien toimintahäiriö, ja muuttunut strooman miljöö [10,11].

Telomeres ovat tandem sekvenssin TTAGGG klo kromosomi päättyy eukaryooteissa, ja avainasemassa estämään kromosomi epävakauden [12,13,14]. Vaikka telomeraasia välittämää säilyttäminen telomere toiminta on osoitettu edistää pitkälle edennyt syöpä [15], on yhtä vakuuttava kokeellista näyttöä, että puute telomeraasiaktiivisuuden ja ohimenevää ajan telomeerien lyhenemistä ja toimintahäiriöitä ajaa syöpä aloittamista indusoimalla kromosomi epävakauden [11,16]. Haimasyöpä on ominaista genomista monimutkaisuus ja epävakautta; telomere lyhentäminen, menetys TP53,

K-RAS

mutaatio, epänormaali mitoosin ja ydinvoiman poikkeavuudet ovat kaikki avustajat tämän fenotyypin [17]. Panin myös satamat kromosomi epävakautta kuten telomere lyhentäminen [18], aneuploidiaa [19], Heterotsygotian menetys [20], ja DNA-vaurioita vastaus laukaisee aktivoituminen ataksia-telangiektasiassa-mutatoitunut (ATM)-solujen syklin tarkistuspisteen kinaasi-2 (Chk2) tarkistuspiste koulutusjakson [21]. Telomere lyhentäminen vaikuttaa ennen kehittämiseen

TP53

mutaatioita aikana haiman syövän synnyn [18,22,23]. Kuitenkin mikä tahansa korjauksilla telomere toiminnon aikana syövän synnyn vaihe on jäänyt epäselväksi.

Käyttäen Southern blotting, olemme analysoineet pituudet telomeres useimmissa ihmisen elinten ja kudosten, mukaan lukien haiman pään, ja vahvisti, että telomeres lyhentää ikä, lukuun ottamatta vuonna aivokudokseen [24,25,26,27,28,29]. Arvioitu vuotuinen pienennyssuhde telomeeripituuden haimassa oli 36 emäsparia [27]. Olemme myös vahvistaneet telomeeripituuden jakaumia eri solutyyppejä kielessä, ruokatorvi-, maha-, rinta-, iho- ja haiman saarekesolujen kvantitatiivisin fluoresenssia

in situ

-hybridisaatio (Q-FISH) ja meidän alkuperäisen ohjelmiston, Tissue telo, jossa käytetään telomere: telomere /sentromeeriantigeenin suhde (TCR) tai normalisoitu TCR (NTCR) [30,31,32,33,34,35,36,37,38]. Telomeres uninvolved epiteelin ympäröivän okasolusyöpä

in situ

(CIS) kielen ja ruokatorvi olivat lyhyempiä kuin ikääntymiseen verrokeilla [34,39,40].

Tässä tutkimuksessa olemme arveltu, että haimasyöpä on todennäköisesti kyse kanavaan epiteelin lyhentää telomeres ja kromosomi epävakautta. Käyttämällä Q-FISH mittaustekniikkaa, telomere pituudet arvioitiin haiman kanavaan epiteelin tai ilman syövän, PanINs, ja haimasyöpä. Vertasimme telomeeripituuden haiman kanava epiteelin tapausten välillä osoittaa syöpä- muutos ja samanikäisillä ohjaus tapauksissa. Olemme myös histologisesti arvioi läsnäolon epätyypillisten mitoosin ja Anaphase siltojen mahdollisimman morfologiset indikaattoreina kromosomi epävakauden [41].

Materiaalit ja menetelmät

Potilaille ja kudosten

Haiman kudokset tässä tutkimuksessa käytetyt saatiin potilailta, joille tehtiin kirurginen hoito Tokyo Metropolitan Geriatrinen Hospital (S1 taulukko). Analysoida telomeeripituuden haimassa yksilöiden ilman patologisia muutoksia, käytimme ruumiinavaus yksilöitä saatu Tokyo Metropolitan Geriatrinen sairaala ja Japanin Punaisen Ristin Medical Center (S2 taulukko). Nämä ruumiinavaus yksilöitä käytettiin, koska on vaikeaa saada yksilöiden normaali haima unassociated pahanlaatuisuuteen tai tulehduksen kirurgisesti resekoitu materiaaleista. Vaikka olimme huolissaan siitä, että jälkipuinti muutokset vaikuttavat telomeeripituuden, olimme aikaisemmin tutkittu telomere pituudet näytteissä aivoissa ja sydämen jälkeen saatu eri jälkipuinti väliajoin käyttäen Southern blotting, ja ei havaittu huomattavia muutoksia joukossa näytteitä ajankohtina [26]. Tämä tutkimus suoritettiin periaatteiden mukaisesti kirjattu Helsingin julistuksen, 2013, ja kaikki kokeet hyväksynyt eettisten komiteoiden of Tokyo Metropolitan Geriatrinen sairaala ja Japanin Punaisen Ristin Medical Center. Tietoon kirjallinen suostumus käyttö kudosten saatiin kaikista potilaista tai menehtyneiden perheille.

paperi-ja histologinen arviointi

Kudokset kiinnitettiin 10% puskuroituun formaliiniin ja sitten altistettiin standardin kudosten käsittelyyn ja parafiiniupotusta. Kudokset leikattiin sarjoittain lohkoiksi 3 pm paksu hematoksyliinillä ja eosiinilla (H Fasmac, Kanagawa, Japani) ja sentromeerin (Cenp1-FITC koetin,” 5-CTTCGTTGGAAACGGGGT-3′; Fasmac) , ja tumat värjättiin DAPI (Molecular Probes, Eugene, OR, USA).

FISH kuvat otettiin vangiksi CCD-kamera (ORCA-ER-1394, Hamamatsu Photonics KK, Hamamatsu, Japani) asennettuna mikroskoopilla (80i, Nikon, Tokio, Japani). Mikroskooppi ohjaus ja kuva hankinta suoritettiin käyttäen Image-Pro Plus ohjelmistopaketti (versio 5.0, Media Cybernetics Co Ltd, Silver Spring, MD, USA). Otetut kuvat analysoitiin käyttämällä omaa ohjelmistoa, ”TissueTelo Ver. 3.1 ”, joka arvioi TCR: t yksittäisten ytimien, kuten on raportoitu aiemmin [30,31,32,33,44]. Koska ei ole mitään takeita, että koko ydin kaapataan kuluessa tahansa kudoksen osassa, yhteensä korjattu telomere signaali kullekin ydin normalisoidaan vastaava integroitu optimaalinen tiheys sentromeeristä [30,32]. TCR-arvot määritettiin yksittäisten solujen N-pieni, N-iso, PANIN ja syöpä, joka perustuu histologinen tulokset sarja- H 0

0,05 kaikissa analyyseissä. Perustuu TCR, vastaanotin-operaattori (ROC) analyysit suoritettiin, ja pinta-ala käyrän alla (AUC) määritettiin. Tilastolliset analyysit tehtiin käyttäen StatView J versio 5.0 ohjelmistopaketti (SAS Institute, Inc., Cary, NC, USA) ja XLSTAT (Addinsoft, New York, NY, USA).

Tulokset

Telomeeri lyhentäminen haiman syövän esiasteita

Koska valvonta Q-FISH-analyysi, TIG-1 selliosasto asetettiin samalla levyllä yhdessä kunkin haima näytteen (Fig. 1A). Telomeerit (punainen) näkyivät ytimet normaalin kanavan (Fig. 1 B ja C, nuolet), kun taas PANIN-1, -2 ja -3, ja syövän osoitti heikkoa telomere signaalit (Fig. 1 D, E, F ja G ). Selvitimme TCR Kunkin vaurion käyttäen Tissue Telo ohjelmistopaketti. Jakaumia telomere intensiteetin merkitty TCR laskivat telomeeripituuden vuonna PanINs ja syövissä verrattuna normaaliin kanavaan (S2 Kuva. A ja B). Verrattuna normaalin kanavan (N-pieni ja N-iso), NTCR arvot PANIN-1, -2, ja -3 ja syövän merkittävästi vähentynyt (Fig. 1 H,

P 0

0,05 ). Lisäksi NTCR arvot syövän olivat alhaisemmat kuin Panin-1 ja -2 (Fig. 1 H,

P 0

0,05). Ei ollut merkittävää eroa pienten ja suurten kanavan epiteelin. NTCR normaali kanavien ja PanINs ja ilman syövät osoitti myös merkittäviä eroja (S3 kuvassa., Harmaa palkki vs valkoinen bar). NTCR haiman syöpiä eikä korreloinut kasvaimen vaiheessa sijainti tai histologinen luokitus (S3 taulukko).

Original suurennos, X400. Punainen, telomere-Cy3-signaali; vihreä, sentromeeriantigeenin-FITC signaali; sininen, DAPI counterstaining DNA. (A) Q-FISH kuva ohjaus TIG-1 selliosasto sijoitettu samalle dia yhdessä haima osissa. (Bg) Q-FISH kuvia normaalin pienen kanavan (N-pieni) (b), normaali suuri kanava (N-iso) (c), PANIN-1 (d), PANIN-2 (e), PANIN-3 ( f), ja haiman invasiivisia adenokarsinooma (g). Telomere signaalit olivat ilmeisiä normaaleissa pieni kanavan (b, nuolet) ja normaalin suuri kanavan (c, nuolet), kun taas telomere signaalit laski PANIN-1 PANIN-3 perustuu visuaaliseen arviointiin (d, e ja f). Telomere signaalit olivat juuri ja juuri näkyviä syöpäsoluissa (g). (H) Box-ja-hiuksenhienosti käyrä NTCR kunkin haimatiehyen vauriot kirurgisesti resektoitiin potilailta haimasyöpä (n = 36) ja ilman haimasyöpä (n = 33). *

P 0

.

05

vs N-pieni ja N-iso. †

P 0

.

05

vs N-pieni, N-iso, Panin-1 ja -2.

telomeeripituuden ja kromosomi epävakautta

Epätyypilliset mitoosien lukien moninapainen mitoosien (Fig. 2A) ja rengas mitoosien (Fig. 2B), sekä Anaphase sillat (Fig. 2C), havaittiin haimasyöpä. Mitoosien hyvin harva normaalissa kanavaan, kun taas Panin ja syövän osoitti lisääntynyt määrä mitoosien (taulukko 1, *

P 0

.

05, ** P 0

.

01

). Epätyypilliset mitoosien ja Anaphase siltoja ei havaittu normaalissa kanavaan, mutta korotettiin syöpä (taulukko 1, *

P 0

.

05, ** P 0

.

01

). Haimasyöpä oli mitoosi-indeksi on 0,7%, ja 26% mitoosien oli epätyypillinen tai mukana Anaphase siltoja.

(a-c) edustaja epätyypillinen mitoottisiin lukuja. Nuolet osoittavat moninapaista mitoosin (a), rengas mitoosin (b), ja Anaphase silta (c). (D ja e) välinen korrelaatio NTCR ja mitoosin Leesioihin kokonaisuudessaan (d) ja yleistä miinus syöpä (e). Data näytetään, kuinka monta prosenttia mitoosi kuvioiden joukossa solujen kokonaismäärään. (F ja g) välinen korrelaatio NTCR ja prosenttiosuus epätyypillinen mitoosien tai Anaphase siltojen joukossa vaurioita kokonaisuudessaan (f) ja yleistä miinus syöpä (g). Data näytetään prosentteina epätyypillisten mitoosien tai anafaasia siltojen joukossa kokonaismäärä mitoottisia.

Olemme löytäneet negatiivinen korrelaatio NTCR ja ilmaantuvuus mitoosien (Fig. 2D, vaurioiden,

P 0

.

0001

, R

2 = 0,075; Kuva. 2E, vaurioita lukuun ottamatta syöpiä,

P = 0

.

0098

, R

2 = 0,031). Ilmaantuvuus epätyypillinen mitoosien tai Anaphase sillat osoitti myös negatiivinen korrelaatio kanssa NTCR (Fig. 2F, vaurioiden,

P 0

.

0001

, R

2 = 0,121; Kuva . 2G, vaurioita lukuun ottamatta syöpiä,

P = 0

.

0262

, R

2 = 0,023).

Telomeeri lyhentäminen ei-syöpä kanava epiteelin

arvioimiseksi korjauksilla telomeres soluissa ilman histologisia muutoksia, analysoimme telomeeripituuden in ei-syöpä kanava epiteelin (N-iso) käyttäen ruumiinavauksen yksilöitä. NTCR normaali kanava epiteelin korreloi negatiivisesti lisääntynyt iän (Fig. 3A, musta viiva,

P 0

.

0001

, R

2 = 0,327). Jaoimme ruumiinavauksen tapauksissa kahteen ryhmään, eli ne, ja ilman PanINs, ja potilaita, joilla Panin olivat vanhempia kuin verrokeilla (S2 taulukko, ***

P 0

.

0001

). Vuonna ohjaus ja Panin ryhmiä, oli negatiivinen korrelaatio NTCR ja iän (Fig. 3A, ohjaus, sininen viiva,

P 0

.

0001

, R

2 = 0,296; Panin, vihreä viiva,

P 0

.

0001

, R

2 = 0,252). NTCR normaalin kanavan epiteelin väheni 29% vuoden Panin ryhmässä verrattuna kontrolliryhmään (Fig. 3B, **

P 0

.

01

kontrolliryhmään verrattuna). Samanikäisiin analyysit paljastivat negatiivinen korrelaatio NTCR normaalin kanavan epiteelin ja iän (Fig. 3C, musta viiva,

P = 0

.

0001

, R

2 = 0,111 ). Vuonna Panin ryhmässä oli negatiivinen korrelaatio NTCR normaalin kanavan epiteelin ja ikä (Fig. 3C vihreä viiva,

P = 0

.

0002

, R

2 = 0,183), kun taas tämä suhde ei ollut tilastollisesti merkitsevä kontrolliryhmässä (Fig. 3C sininen viiva,

P = 0

.

1934

, R

2 = 0,041). NTCR normaalin kanavan epiteelin väheni 16% Panin ryhmässä verrattuna samanikäisiin ohjaimet (Fig. 3d, *

P 0

.

05

vs. kontrolli).

(a) NTCR normaaliin kanavaan epiteelin 150 ruumiinavauksessa tapauksissa oli negatiivinen korrelaatio iän tapauksia yleinen (n = 150, musta), kontrolliryhmä (n = 77, sininen) ja Panin ryhmä ( n = 73, vihreä). (B) vertailu NTCR normaaliin kanavaan epiteelin väliin ohjaus ja Panin ryhmiä. **

P 0

.

01

kontrolliryhmään verrattuna. (C) NTCR normaalissa kanavaan epiteelissä yksilöistä yli 50-vuotta (n = 113). Sininen, ohjaus (n = 43); vihreä, Panin ryhmä (n = 70). (D) vertailu NTCR normaaliin kanavaan epiteelin väliin ohjaus ja Panin ryhmiä. *

P 0

.

05

kontrolliryhmään verrattuna.

yhteenlaskettu analyysejä ruumiinavaus ja kirurgisesti resektoitiin tapauksissa jaoimme tapauksissa kolmeen ryhmään: valvonta ( ilman Panin ja haimasyövän), tapauksia Panin ja tapaukset haimasyöpä. NTCR normaalin kanavan epiteelin osoittivat negatiivista korrelaatiota iän (Fig. 4A, musta viiva,

P 0

.

0001

, R

2 = 0,290). Vuonna ohjaus ja Panin ryhmien NTCR negatiivisesti korreloi iän (Fig. 4A, ohjaus, sininen viiva,

P 0

.

0001

, R

2 = 0,293; Panin , vihreä viiva,

P 0

.

0001

, R

2 = 0,220). Vuonna haimasyövän ryhmä, suhde ikä ja NTCR ei ollut tilastollisesti merkitsevä (kuvio. 4A, punainen viiva,

P = 0

.

5147

, R

2 = 0,015) . Vuonna Panin ryhmässä ja haimasyövän ryhmä, NTCR väheni 26% ja 23%, vastaavasti, verrattuna kontrolliryhmään (Fig. 4B *

P 0

.

05

, **

P 0

.

01

vs. kontrolli). Samanikäisiin analyysit osoittivat negatiivista korrelaatiota NTCR normaalin kanavan epiteelin ja iän (Fig. 4C, musta viiva,

P = 0

.

0001

, R

2 = 0,081). Panin ryhmät osoittivat myös negatiivista korrelaatiota NTCR ja iän (Fig. 4C, vihreä viiva,

P = 0

.

0002

, R

2 = 0,155), kun taas tällaista korrelaatio näkyi ohjaus ja haimasyövän ryhmät (Fig. 4C, ohjaus, sininen viiva,

P = 0

.

1004

, R

2 = 0,048, haimasyöpä, punainen linja,

P = 0

.

5147

, R

2 = 0,015). NTCR väheni 15% Panin ryhmässä ja 9% haimasyövän ryhmä suhteessa samanikäisiin ohjaimet (Fig. 4D, *

P 0

.

05

kontrolliryhmään verrattuna).

(a) NTCR normaaliin kanavaan epiteelin 150 ruumiinavaus ja 69 kirurgisesti resektoitiin tapauksissa negatiivisesti korreloi iän tapauksissa yleinen (n = 219, musta), kontrolliryhmään (n = 91, sininen) ja Panin ryhmä (n = 92, vihreä), mutta suhde ei ollut tilastollisesti merkitsevä haimasyövän ryhmä (n = 36, punainen). (B) vertailu NTCR normaaliin kanavaan epiteelin väliin ohjaus, Panin ja haimasyöpä ryhmiä. *

P 0

.

05

kontrolliryhmään verrattuna. **

P 0

.

01

kontrolliryhmään verrattuna. (C) NTCR normaaliin kanavaan epiteelin yksilöistä yli 50-vuotta (n = 182). Sininen, ohjaus (n = 57); vihreä, Panin (n = 189); punainen, haimasyöpä ryhmä (n = 36). (D) vertailu NTCR normaaliin kanavaan epiteelin joukossa ohjaus, Panin ja haimasyöpä ryhmiä. *

P 0

.

05

kontrolliryhmään verrattuna.

Keskustelu

Tämä tutkimus paljasti, että telomeres histologisesti normaalissa kanavaan epiteelin liittyvä PanINs tai syöpiä olivat lyhyempiä kuin tavanomaisessa kanavassa epiteelin unassociated kanssa PanINs tai syöpiä, ja että telomeerit lyhentää vähitellen Panin-1 Panin-3. Ikääntyminen yhdessä lisääntyneen PanINs, myös korreloi selvästi lyhentäminen telomeres normaalissa kanavaan epiteelin. Nämä tulokset osoittavat, että vanhuksilla, kanavan epiteelin, joka satamat lyhentää telomeres, voi aiheuttaa PanINs ja haimasyöpä. Lisäksi verrattuna samanikäisiin valvonta, telomeres histologisesti normaalissa kanavaan epiteelin lyhenivät yksilöiden PanINs tai syöpiä, mikä viittaa siihen, että muut tekijät kuin ikä saattaa vaikuttaa telomeeripituuden. Aiemmin olemme raportoineet, että taustalla epiteelin CIS ruokatorven, kielen, ja iho on lyhyempi telomeres ja kromosomi epävakautta kuin kontrolli kudoksen [34,36,40]. Yhdessä kriittinen telomere toimintahäiriö taustalla, johtuen mahdollisesti suurempia vuosittaisia ​​telomeerivasta poistuman, voisi aiheuttaa kromosomi epävakautta ja syövän syntymistä haiman tiehyen epiteeli.

Aiemmassa tutkimuksessa käytetään kalojen analyysi on osoittanut, että telomere lyhentäminen oli lähes universaali kaikissa histologisia laatuja Panin [18]. Tässä tutkimuksessa Heek et al. määrätietoisesti telomeeripituuden 10 ytimiä kustakin vaurio, ja siksi heterogeenisuus telomeeripituuden jakelu on voinut vaikuttaa niiden tulokset. Sen sijaan päätimme telomeeripituuden yli 100 ytimiä kustakin vaurion, ja löysi käänteinen korrelaatio telomeeripituuden ja Panin histologisia laatu. Tuloksemme viittaavat siihen, että telomere lyhentäminen noninvasive vauriot haiman kanava aiheuttaa kertyminen kromosomipoikkeavuuksien, mikä kehittämiseen invasiivisen ductal adenokarsinoomia.

Sekä solujen lisääntymisen ja telomeraasiaktiivisuuteen vaikutus telomere lyhentäminen. Esillä olevassa tutkimuksessa mitoosi-indeksi oli negatiivinen korrelaatio telomeeripituuden, mikä osoittaa, että telomeerit tullut lyhentää aina solun jakaa. Suurempi määrä solujen lisääntymisen takia tulehduksen ja myöhemmin kudosten uudistumista voisi johtaa nopeampaan telomeerivasta lyhentäminen. Emme kuitenkaan ole analysoida suhdetta telomeraasiaktiivisuudelle, solujen kasvua suhde ja telomeeripituuden koska käyttö formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut kudokset teki tämän mahdottomaksi.

haimasyöpä, myös tunnistettu korkea ilmaantuvuus Anaphase sillat ja epätyypillinen mitoosi lukuja, joiden osuus oli noin neljännes kaikista mitoosien. Aiemmassa tutkimuksessa on haimasyövän solulinjoissa osoitti Anaphase sillat olivat havaittavissa 14-50% of Anaphase soluja yhdessä sillan-rikkoutuminen-sulkujaksolla aiheuttama telomeerisesti toimintahäiriö [18]. Pahanlaatuiset kasvaimet näytä muodostavan heterogeeninen ryhmä, joka voidaan luokitella perusteella sekä kromosomi epävakaus ja telomeerivasta huolto mekanismi. Joukossa peräsuolen syöpiä, joilla on kromosomi epävakaus näyttää lyhentää telomeres ja telomeraasi aktivointi, kun taas ne, joilla on kromosomi vakautta osoittavat pidentyminen telomeres ilman rasvaa ja telomeraasin aktivointi [47]. Esillä olevassa tutkimuksessa, kaikki invasiivisen haimatiehyen adenokarsinooman osoitti selvästi lyhentää telomeres. Aikaisempi raportti on ilmoittanut, että acinar-to-ductal metaplasiaa rinnalla Panin myös näyttelyitä telomere lyhentäminen; Näin ollen acinar-to-ductal metaplasiaa on pidetty esiasteleesio haimasyövän [48]. Yhdessä saatavilla olevat tiedot viittaavat siihen, että telomere riippuva kromosomi epävakaus saattaa olla merkittävä rooli haiman karsinogeneesissä.

Nykyinen havainnot viittaavat siihen, että määrittäminen telomeeripituuden soluissa saatu biopsialla tai näytteitä haiman mehu voi olla arvoa sekä havaitsemiseen ja riskien arviointi haimasyövän. ROC-analyysit ero haimasyövän vaurioita (mukaan lukien PANIN-3 ja syövät) ja ei-syöpäkudoksessa (mukaan lukien normaali kanava, PANIN-1 ja -2) käyttäen NTCR paljasti käyttökelpoisuutta telomeeripituuden indikaattorina syövän alttiuden (S4 kuvio .). AUC NTCR oli 0,869, joka on samanlainen kuin seerumin CA19-9 [49,50].

Haiman neuroendokriinisiä kasvaimia on usein muuttunut pidentyminen telomeres (ALT), joita havaitaan suurempi paikoista telomere signaaleja [51], mutta tässä tutkimuksessa, ei ole suurempi täplät telomere signaaleja näkyivät haiman kanava ja syöpiä. Vaikka Q-FISH menetelmä on erittäin tarkka ja toistettavissa, sillä on useita haittoja: (1) läsnäolo telomere fuusiota ei voida arvioida. (2) poikkeavuutta sentromeeristä saattaa vaikuttaa telomere /centromere suhde. (3) Kuten muidenkin FISH menetelmillä, ei ole mahdollista havaita telomeerien ja sentromeerin signaaleja, jos kiinnittäminen ja muilla näytteen valmistuksen tekniikoita ovat sopimattomia.

Yhteenvetona telomere lyhentäminen tapahtuu haimatiehyen epiteelin varhaisessa vaiheessa syövän ilman mitään selvää histologisia muutoksia. Kriittisesti lyhentää telomeres haiman kanava epiteelissä ja noninvasive duktaalisessa vauriot johtavat kertyminen kromosomipoikkeavuuksien, ja puolestaan ​​kehittämiseen haiman invasiivisen ductal adenokarsinoomia kautta PanINs. Määritys telomeeripituuden vuonna haimatiehyen vauriot voivat olla arvokkaita tarkka havaitseminen ja riskinarviointi haimasyövän.

tukeminen Information

S1 Kuva. Haiman kanava, noninvasive duktaalisia vaurioita ja invasiivisia ductal adenokarsinoomia.

(A) Kuvat ovat N-pieni (intralobular kanava, nuolet), N-iso (interlobular kanavat, nuolet), Panin-1, -2, ja -3 ja haimasyöpä. (B ja c) esiintymistiheys Panin iän kirurgisesti resektoitiin (b, n = 36) ja ruumiinavaus (c, n = 150) tapausta haimasyöpä. Panin-1 yleistyi iän myötä, kun taas Panin-3 ei havaittu tapauksissa ilman haimasyövän.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0117575.s001

(TIF)

S2 Kuva. Jakamiin telomere intensiteetti ilmaistaan ​​TCR TIG-1-solut, haiman kanava, ja ductal vaurioita.

TCR taipumus olla pienempi Panin ja syövän vaurioita kuin normaalissa kanavaan epiteelin (N-pieni ja N-iso) in tapaus haimasyövän (a) ja joka tapauksessa ilman haimasyöpä (b).

doi: 10,1371 /journal.pone.0117575.s002

(TIF)

S3 Fig. Vertailu NTCR erilaisten kudosten välillä haimasyövän tapauksissa ja valvontaa.

Ei ollut tilastollisesti merkitseviä eroja NTCR välillä syövistä (harmaa palkki) ja valvonta (valkoinen palkki). ND, mitään eroa.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0117575.s003

(TIF)

S4 Fig. ROC-käyrä analyysi NTCR havaitsemiseksi haimasyövän.

NTCR kirurgisesti resektoitiin tapauksissa käytettiin ROC-analyysi ero haimasyöpä (mukaan lukien syöpä ja PANIN-3) ja ei-syöpä kanava (mukaan lukien normaalin kanavan ja PANIN-1 ja -2).

doi: 10,1371 /journal.pone.0117575.s004

(TIF) B S1 Taulukko. Ominaisuudet ja ilmaantuvuus PanINs kirurgisesti resekoituun tapauksissa.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0117575.s005

(DOCX)

S2 Taulukko. Ominaisuudet ja ilmaantuvuus PanINs in ruumiinavauksen tapauksissa.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0117575.s006

(DOCX)

S3 Taulukko. Telomeeripituuden ja kliinis ominaisuudet kirurgisesti resektoitiin haimasyövän tapauksissa.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0117575.s007

(DOCX) B