Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

phyllanthus

on perinteinen lääke kasvi, jota on käytetty hoidettaessa monia sairauksia, mukaan lukien hepatiitti ja diabetes. Päätavoitteena nykyisen työ oli tutkia mahdollisuuksia sytotoksisia vaikutuksia vesipitoiset ja metanoliliuosta otteita neljästä

phyllanthus

lajeja (

P.amarus, P.niruri, P.urinaria

ja

P.watsonii

) ihoa vasten melanoomaa ja syöpäsolujen.

Menetelmät /Principal havainnot

phyllanthus

kasvi näyttää sytotoksisia ominaisuuksia kanssa puolet maksimaalisesta estävä pitoisuus (IC

50) arvot 150-300 ug /ml vesiuute ja 50-150 ug /ml metanolipitoista ote, joka määritettiin käyttämällä MTS vähentäminen määrityksessä. Vertailun vuoksi kasviuutteiden ei osoittanut mitään merkittävää sytotoksisuutta normaalin ihmisen ihon (CCD-1127Sk) ja eturauhasen (RWPE-1) soluissa. Uutteet näytti toimivan aiheuttamalla muodostumista selvä ”tikapuut” pirstoutuminen apoptoottinen DNA agaroosigeelillä, näytetään TUNEL-positiivisia soluja, joiden korkeus on kaspaasi-3 ja -7 toimintaa. Laktaattidehydrogenaasi (LDH) taso oli alhaisempi kuin 15%

phyllanthus

käsiteltyjen-syöpäsoluja. Nämä osoittavat, että

phyllanthus

otteet on kyky indusoida apoptoosia minimaalisella nekroottista vaikutuksia. Lisäksi solusyklin analyysi paljasti, että

phyllanthus

indusoi Go /G1-vaiheen pysähtymisen PC-3-solujen ja S-vaiheessa pidätyksen MeWo soluja ja nämä olivat mukana kertyminen solujen Sub-G1 ( apoptoosin) vaihe. Sytotoksinen ominaisuudet voivat johtua läsnäolosta fenolisia yhdisteitä, kuten ellagitannii- neista, gallotanniineista, flavonoidit ja fenoliset hapot esiintyy sekä vedessä ja metanoliuutteessa kasvien.

Johtopäätökset /merkitys

Phyllanthus

kasvien kykenee sen kasvun estovaikutusta selektiivisellä tavalla syöpäsolujen modulaation kautta solusyklin ja apoptoosin induktion kautta kaspaasien aktivaation melanooman ja eturauhasen syöpäsoluja. Näin ollen,

Phyllanthus

voidaan hankkia kehittämiseen voimakas apoptoosin indusoiva syöpälääke.

Citation: Tang YQ, Jaganath IB, Sekaran SD (2010)

Phyllanthus

spp. Aiheuttaa Valikoiva kasvunestomenetelmää PC-3 ja MeWo ihmisen syöpäsoluja kautta modulaatio Cell Cycle ja induktio Apoptosis. PLoS ONE 5 (9): e12644. doi: 10,1371 /journal.pone.0012644

Editor: Niyaz Ahmed, University of Hyderabad, Intia

vastaanotettu: 25 kesäkuu 2010; Hyväksytty: 17 elokuu 2010; Julkaistu: 08 syyskuu 2010

Copyright: © 2010 Tang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus rahoittivat jatko Research Grant, University Malaya (UM PS183 /2009B) (www.um.edu.my) ja Malesian Agricultural and Research Development Institute (MARDI) (53-02-03-1002) (www.mardi.gov .minun). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Syöpä on annettu nimi ryhmä sairauksia, jotka syntyvät hallitsematon kasvu, leviäminen epänormaali solujen ja voi johtaa kuolemaan. On erittäin vaikea hoitaa johtuen useiden erillisten luokkia kasvaimia, joilla on erilainen hoitovaste eivätkä kaikki syöpälääkkeiden tehokkaasti antaa myönteisen vastauksen joka tapauksessa [1]. Jotkut ovat raportoitu olevan myrkyllisyys normaaleihin soluihin, mukana haittavaikutuksia kuten oksentelua, pahoinvointia ja hiustenlähtö. Siten tehoton syöpälääkkeiden ovat johtaneet korkea kuolleisuus syöpäpotilailla [2]. Melanooma on ihosyövän tyyppi, joka syntyy melanosyyttejä, pigmenttiä tuottava rusketuksen solu. Melanooma esiintyvyys ja sen kuolleisuus on korkea vaaleaihoisilla väestön kaikissa osissa maailmaa, kuten Australia, Yhdysvallat ja Iso-Britannia [3] – [4]. Eturauhassyöpä on toiseksi suurin syy syöpäkuolemista keuhkosyövän jälkeen maailmanlaajuisesti [3]. Tällä hetkellä ei ole olemassa tehokkaita hoitoja sekä melanooman ja eturauhassyöpä, ja sellaisenaan intensiivistä tutkimusta on hankittava uusi syöpälääkkeiden näitä syöpiä.

korkea kuolleisuus syöpäpotilailla on saanut monet tutkijat hankkia mahdollisten luonnollinen-tuote, joka perustuu terapeuttisten yhdisteiden [2]. Kasviperäisiä kasveja ja kasviperäisiä lääkkeitä on käytetty lähteenä mahdollisten syöpälääkkeiden perinteisissä kulttuureissa ympäri maailmaa ja ovat yhä suositumpia modernissa yhteiskunnassa [5]. Mahdollinen luonnontuote johdettu syöpälääkkeiden tiedetään olevan erilaisia ​​bioaktiivisia yhdisteitä, kuten roskovitiinilla punaisesta retiisi ja flavopiridolin välillä

Amoora rohituka

, trooppinen puu, joka on osoittanut valtavaa vaikutuksia syövän hoidossa [6] – [8].

suvun kasvin

phyllanthus

kuuluu perheeseen

Euphorbiaceae

ja on raportoitu olevan farmakologisia vaikutuksia, kuten antiviraalista hepatiitti B ja siihen liittyvät hepatiittitartunnasta [9] – [12], antibakteerinen aktiivisuus [13], [14], anti-maksa- tai maksan suojaava aktiivisuus [15] – [19] sekä anti-kasvain ja anti-karsinogeenisia ominaisuuksia [16 ], [20]. Lisäksi se on myös esillä hypoglykemian ominaisuudet [21], [22]. Vaikka kasvisukuun

phyllanthus

on osoitettu olevan hyödyllinen ihmisten terveydelle, mutta sen tehokkuus syöpää vastaan ​​ei ole täysin selvitetty.

Yksi haasteista syövän hoidossa on, että syöpä on hallussaan kyky kiertää apoptoosin (tai ohjelman solukuolema), mikä johtaa sen tehottomuudesta kuin sytotoksinen lääke tappaa syöpäsoluja. Apoptoottiset prosessi on tärkeä solukuoleman mekanismi vastauksena sytotoksinen hoito ja sen induktio on erittäin toivottavaa tila syöpälääke [23]. Solusyklin on prosessi, joka toimii avaimen ohjaamaan kasvua ja lisääntymistä solun. Häiriöitä solusyklin prosessi aiheuttaa epätasapaino soluproliferaation ja solukuoleman (apoptoosi), tämän jälkeen johtaa syövän kehittymisen. Siten solusyklin voisi toimia kohteena syöpälääke pysäyttämiseksi hallitsemattoman leviämisen syöpäsolujen ja käynnistämään ne apoptoosiin [24]. Sytotoksiset vaikutukset

Phyllanthus

uutteet (vesipitoinen ja metanoli) on kasvun inhibitio ihoa vasten melanoomaa ja eturauhasen syöpäsolujen niiden solusykliä voisi osittain selittää niiden tila toimintaa. Tavoitteena Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli selvittää sytotoksista vaikutusta

phyllanthus

poimii proliferaatioon ihon ja eturauhasen syöpäsolujen ja myös tutkimaan suhde näiden antiproliferatiivisia vaikutuksia todennäköinen apoptoosin ja solukierron modulaatio.

tulokset

Sytotoksisuus vesiliuosta ja metanoliliuosta otteita

phyllanthus

lajien

tässä tutkimuksessa tutkimme sytotoksisia vaikutuksia raakaöljyn vesipitoiset ja metanoliliuosta otteet neljästä eri

phyllanthus

lajeja,

P.amarus, P.niruri, P, urinaria,

ja

P.watsonii

, kaksi ihmisen syöpiin (MeWo ja PC-3) sekä normaali (CCD-1127Sk ja RWPE-1) solulinjat. Sytotoksiset ominaisuudet

Phyllanthus

uutteet määritettiin käyttäen MTS [3- (4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli] -5- (3-karboksimetoksifenyyli) -2- (4-sulfofenyyli) -2H -tetrazoliuminner suola) vähentäminen määrityksessä. Periaatteena tässä määrityksessä perustuu vähentämiseen kyky liukoisen tetratsoliumsuola, mitokondrion dehydrogenaasi-entsyymin elinkelpoisten solujen, värilliseksi liukoisen formatsaanituotteen, joka voidaan mitata spektrofotometrisesti. Puolen maksimaalinen estävä pitoisuus (IC

50) arvo määritettiin rakennettu annos-vastekäyrä ja asettaa parametrin sytotoksisuus.

Taulukko 1 esittää vertailun IC

50-arvot sekä raakaöljyn vesipitoiset ja metanoliliuosta otteita neljästä

phyllanthus

lajien sekä ihmisten syövän (MeWo ja PC-3) ja normaalin (CCD-1127Sk ja RWPE-1) solulinjat. Tulos paljastaa läsnäolo sytotoksisten vaikutusten

phyllanthus

lajien sekä ihon melanoomaa ja eturauhassyövän solut, joissa kunkin IC

50-arvot

phyllanthus

uutteet määritettiin. Vertailun kasvi ei osoittanut mitään merkittäviä sytotoksisia vaikutuksia ihmisen normaaleja soluja, kun taas standardi syöpälääkkeiden (5’Fluorouracil ja doksorubisiini) osoitti voimakkaampaa sytotoksinen vaikutus kuin

Phyllanthus

uutteet, mutta osoittaa toksisuutta normaaleissa -solut (taulukko 1). Niistä neljä

phyllanthus

kasvilajeja,

P.urinaria

osoitti voimakkainta sytotoksista vaikutusta, jonka jälkeen

P.watsonii, P.niruri

ja

P.amarus

. Lisäksi IC

50-arvot metanolin uutteet

Phyllanthus

lajit olivat huomattavasti alhaisemmat kuin vesipitoiset uutteet sekä syöpäsolujen osoittaa, että metanoliuutetta on sytotoksinen kuin vesipitoinen uute.

tunnistaminen polyfenolit

Phyllanthus

lajien

metanoli ja vesiliukoiset uutteet saadaan eri lajien

Phyllanthus

alistettiin HPLC-analyysi (High Performance Liquid Chromatography) kytketty valodiodin array (PDA) ja MS-MS havaitseminen voidaan tunnistaa polyfenolien yhdisteiden (taulukko 2). Kaksitoista tärkeimmät yhdisteet tunnistettiin sen perusteella, niiden retentioaikojen UV spektri, ja vanhemman massaspektrit ja toissijainen pirstoutuminen kuvioita. Yhdisteet havaitut gallushappona, galloylglucopyronside, digalloylglucopyronside, trigalloylglucopyronside, tetragalloylglucopyronoside, corilagen, geraniin, rutiini, quercetin glucoside, quercetin diglucoside, quercetin rhamnoside, ja caffeolquinic hapan.

DNA: n fragmentoituminen

Yksi biokemiallisten tunnusmerkkejä apoptoottisessa prosessissa on muodostumista tuman DNA pirstoutuminen, joka osoittaa, että läsnä on tyypillisiä tikkaiden DNA-fragmentteja 180-200 emäsparia ja monikerrat agaroosigeelillä. Sen sijaan satunnainen pilkkominen DNA nekroottiset solut tuottavat hajanainen preparaatti kun elektroforeesi DNA. Näin ollen, DNA-geelielektroforeesia menetelmää käytettiin määrittämään mahdollinen tila solukuoleman aiheuttama

Phyllanthus

uutteet. Kuvio 1A osoittaa, että läsnä on DNA-fragmentit, käsittelemällä MeWo solujen

Phyllanthus

tiivisteet ja samanlaista mallia nähtiin standardi lääkeaineen (5’Fluorouracil) positiivisena kontrollina. Ei tikkaat muodostuminen havaittu hoitamattomilla soluissa. Näitä ilmiöitä havaittiin myös PC-3 solulinja sekä otteita kuten kuvassa 1B. Näin ollen tämä osoittaa, että molemmat uutteet

Phyllanthus

olivat pystyy aiheuttamaan apoptoosin tai ohjelmoidun solukuoleman on MeWo ja PC-3-solut vasteena sytotoksisille vaikutuksille

Phyllanthus

.

Kaista 1 -4: vesipitoinen ja Lane 6-9: metanoli uutteita

P.amarus, P.niruri, P.urinaria

ja

P.watsonii

, siinä järjestyksessä. Kaista 5 ja 10: 1 kb: n DNA-markkeri, kaista 11: vakio lääkkeen, jossa A) 5’Fluorouracil varten MeWo ja B) doksorubisiini PC-3-soluja. Kaista 12: käsittelemättömät solut.

TUNEL määritys ja Apoptotic Index

TUNEL (terminaali deoksinukleotidyylitransferaasilla dUTP nick end merkinnät) määritys on tekniikka mahdollistaa havaitsemisen apoptoottisten solujen leimaamalla ilmaiseksi lopussa apoptoottista DNA: ta markkeria, jota voidaan visualisoida valomikroskoopilla. Kuten kuviossa 2 on esitetty, apoptoottisia soluja havaittiin ruskean värinen solujen

Phyllanthus

poimii saaneilla MeWo (kuvio 2A, nuolenpää) ja PC-3 (kuvio 2B, nuolenkärki) syöpäsolut, niiden ulkonäkö olivat samankaltaisia sen apoptoottiset solut, jotka olivat läsnä positiivisesta kontrollista, apoptoottiset-indusoija antisyöpälääkeaine (5’Fluorouracil ja doksorubisiini), kun taas elävät solut värjättiin sininen. Tämä edelleen vahvistaa, että

Phyllanthus

uutteita pystyy aiheuttamaan apoptoosin ihon melanooma ja eturauhasen syöpäsoluja. Populaatiot solukuoleman voidaan laskea ja ilmaista matemaattisesti, tunnetaan apoptoottiset indeksi. Kuviosta 2C solukuoleman prosenttiosuuden (apoptoottisten indeksi) käsiteltyä-MeWo ja PC-3-solut huomattavasti suurentunut jopa 50% verrattuna kontrolliryhmään 72 tuntia hoidon

Phyllanthus

uutteet. Lisäksi prosenttiosuus

Phyllanthus

uutteet indusoi apoptoottisia soluja oli lähellä syöpälääkkeiden (5’Fluorouracil ja doksorubisiini), jossa on vain 8%: n ero.

TUNEL-analyysi MeWo ja PC-3 syöpäsolut jälkeen käsitelty

phyllanthus

otteet 100 x suurennus. TUNEL-positiivisia (apoptoottisten) solujen olivat havaittavissa ruskeana värjättyjen solujen (punainen nuoli) in

phyllanthus

uutteiden-käsitellylle A) MeWo ja B) PC-3-solujen ja normaalia elävää solua värjäytyvät kuten sininen väri. C) Kaavio näyttää prosentteina apoptoottisten indeksi (%) käsittelemätöntä ja käsitelty (

phyllanthus

tiivisteet ja syöpälääkkeiden) MeWo ja PC-3 syöpäsolujen TUNEL analyysiin.

Phyllanthus

uutteet aiheuttama kaspaasi-3/7 aktivoinnit

kaspaasien aktivaatio (aspartaatti tietyn kysteiiniproteaasin) on yksi biokemiallisia muutoksia apoptoosin aikana. Tasot kaspaasi 3/7 aiheuttama

Phyllanthus

hoito oli merkittävästi lisääntynyt (3-4 taittuu) verrattuna käsittelemättömään ryhmään (kuvio 3) sekä uutteet

Phyllanthus

. Taso kaspaasi 3/7 standardin lääkkeiden, 5’Fluorouracil ja doksorubisiinin MeWO ja PC-3-soluissa, vastaavasti, olivat 6-taittuu lisääntyy verrattuna kontrolliryhmään ja 0,5 kertaa suurempi kuin

Phyllanthus

otteet 72 tunnin kuluttua hoidon. Nämä osoittavat, että indusoiman apoptoosin

phyllanthus

uutteiden välittyvät kaspaaseiksi aktivaation.

Kaavio osoittaa kaspaasi-3 ja -7 käsitellyissä ja käsittelemättömien ryhmien MeWo ja PC-3-solujen . Bars esittävät keskiarvo ± SE

phyllanthus

uutteiden aiheuttama minimaalinen nekroottinen vaikutus

kuolion on toinen muoto solukuoleman, joka aiheuttaa tulehdusreaktio ympäröivien solujen avulla vuodon solunsisäisen sisällön. Kuten kuviossa 4, osuus LDH tasojen tuloksena tuotettua hoidon sekä otteita

Phyllanthus

lajeja oli vähemmän kuin 10% MeWo soluja ja vähemmän kuin 15% PC-3-soluissa, verrattuna kuin kontrolliryhmien 72 tunnin kuluttua hoidon. Nekroottisen vaikutus Metanoliuutteet oli jyrkempi, jossa se havaittiin olevan 4% korkeampi kuin vesipitoinen uute

Phyllanthus

lajeja. Tämä viittaa siihen, että

Phyllanthus

lajien hallussaan minimaalinen nekroottisen vaikutuksia ja ihon melanooma oli vähemmän altis näyttää nekroottisen vaikutus kuin eturauhasen syöpäsoluja. Sen sijaan, LDH taso indusoi positiivisen kontrollin (5’Fluorouracil ja doksorubisiini) oli 25% suurempi kuin käsittelemättömissä soluissa ja 18% vaihtelu

Phyllanthus

käsiteltyä-soluilla 72 tuntia hoidon jälkeen.

kaavio näyttää prosentteina LDH tasot

phyllanthus

-kahviuutteet käsitelty MeWo ja PC-3 syöpäsolujen olivat korkeammat kuin käsittelemättömän ryhmän 72 tunnin hoidon jälkeen. Bars osoittavat keskimääräinen prosenttiosuus ± SE

phyllanthus

otteita aiheuttaa solukierron pysähtymisen seuraa apoptoosin

määrittämiseksi vaiheen solusyklin joka estyy

Phyllanthus

kasviuutteita, sekä MeWo ja PC-3-soluja käsiteltiin niiden IC

50-arvot 24, 48, 60 ja 72 tunnin ajan ja analysoitiin sitten virtaussytometrillä. Kinetiikka solusyklin jakautumisen käsitellyn ja käsittelemättömän ryhmien MeWo ja PC-3-solut on esitetty kuviossa 5 ja 6, vastaavasti. Muutokset jakelu käsiteltyjen solujen eri vaiheissa solusyklin olivat havaittavissa 24 tunnin kuluttua hoidetaan

phyllanthus

poimii molemmille syöpäsolun linjat.

prosenttiosuus

phyllanthus

uutteet-käsitellyissä soluissa A) Sub-G1, B) Go /G1, C) S, ja D) G2 /M-vaiheisiin MeWo solujen eri aikavälein (24, 48, 60 ja 72 tuntia) hoidon . Palkit osoittavat keskimääräistä prosenttiosuutta ± SE

prosenttiosuus

Phyllanthus

uutteet-käsitellyissä soluissa A) Sub-G1, B) Go /G1, C) S, ja D) G2 /M-vaiheisiin PC-3-solujen eri aikavälein (24, 48, 60 ja 72 tuntia) hoidon harkko osoittavat keskimääräi- ± SE

Kuten nähdään kuviossa 5,

phyllanthus

otteita esiintyi kasvua pidätys on S-vaiheen MeWo solujen 24 tuntia ja pysyi ilmeinen 72 tunnin jälkeen hoidon ja tämän mukana oli kertyminen solujen Sub-G1 (apoptoosin soluissa) vaiheen sekä vesipitoisissa ja metanoliliuosta otteita. Prosenttiosuus apoptoottisten solujen oli kasvanut ajasta riippuvalla tavalla 1,8%: iin 24 tuntia 6,1%: iin 72 tunnin verrattuna kontrolliryhmiin (kuvio 5A). Samaan aikaan solujen prosenttiosuus on S-vaiheessa käsiteltiin MeWo solujen kohonnut 15%: iin yli tarkastuksia 72 tunnin hoidon jälkeen (kuvio 5C). Lisäksi solujen prosenttiosuus Go /G1 ja G2 /M vaiheiden väheni ajan käsittelemällä

phyllanthus

poimii johtuu siitä, että käsitellyistä soluista on pidätetty S-vaiheessa ja sen jälkeen kertynyt Sub-G1 (apoptoosin) vaihe (kuvio 5B ja 5D). Kuitenkin teho

Phyllanthus

poimii aiheuttaa S-vaihe pidätys ei ollut niin voimakas kuin standardi lääkeaineen (5’Fluorouracil), jossa on 22,1%: n ero 72 tuntia hoidon jälkeen.

PC-3-solut,

phyllanthus

esiintyi kasvua pysähtyminen Go /G1 vaiheeseen 72 tunnin kuluttua hoidon kertymistä apoptoottisten solujen Sub-G1 vaihe sekä vesipitoiset ja metanoliliuosta otteita. Prosenttiosuus apoptoottisten solujen kasvoi 3,4%: iin 24 tunnin ajan 7,4%: iin 72 tuntia käsittelemätön ryhmät (kuvio 6A). Prosenttiosuus käsitelty PC-3-soluja Go /G1-vaiheesta oli 13,7% 24 tuntia, ja tämä nousi 18,8%: iin 72 tunnin enemmän kuin käsittelemättömissä ryhmissä (kuvio 6B). Kuitenkin prosenttiosuus käsitellyn-PC-3-solujen S ja G2 /M-vaiheisiin väheni ajan hoidon (kuvio 6C ja 6D), johtuu siitä, että käsitelty PC-3-solut pidätettiin Go /G1 vaiheeseen ja sen jälkeen kertynyt Sub-G1 vaiheissa. Vaikka doksorubisiini osoitti G2 /M vaiheessa pidätyksen PC-3-solut 24 tuntia ja pysyi ilmeinen 72 tunnin kuluttua hoidon aloittamisesta.

Keskustelu

Ihminen on käytetty laitoksissa laajasti hoidettaessa erilaisia ​​sairauksia muinaisista ajoista lähtien [7]. Kasviperäisiä kasveja ja kasviperäisiä lääkkeitä on käytetty laajalti perinteisessä kulttuureissa ympäri maailmaa ja ovat kasvattaneet suosiotaan modernissa yhteiskunnassa luonnollisina vaihtoehtoina tuottaa uusia potentiaalisia terapeuttisia yhdisteitä tautien torjuntaa [5]. Kuusikymmentä prosenttia nykypäivän käytettävissä syöpälääkkeiden peräisin luonnontuotteista, ja niiden johdannaiset (mukaan lukien antibiootit). Tämä on johtanut enemmän luottamusta luonnontuotteiden tärkeinä lähteinä kehittää tehokkaita syöpälääkkeiden [7].

Tässä tutkimuksessa, sekä vesipitoiset ja metanolin otteita neljän kasvilajit

phyllanthus

näkyy sytotoksisia vaikutuksia ihmisen ihon melanooma (MeWo) ja eturauhasen (PC-3) solulinjat. Vaihtelut IC

50-arvot

phyllanthus

otteita melanoomaa vastaan ​​ja syöpäsolujen saattaa johtua taso vaihtelee bioaktiivisten yhdisteiden läsnä jokaisessa

phyllanthus

lajeja kuten quercetin, gallushappona, ja caffeolquinic happoa, jotka ovat osoittautuneet olevan syöpää vaikutuksia [16], [25] – [27]. Lisäksi, saatujen tietojen mukaan metanolipitoinen uute

Phyllanthus

näytti olevan selvempi sytotoksinen vaikutus kuin vesiuute, joka osoittaa metanoli-liukoinen bioaktiivisten yhdisteiden sisältämät

Phyllanthus

ovat todennäköisesti tehokkaampi kuin vesiliukoiset bioaktiivisten yhdisteiden tappaa syöpäsoluja. Niistä neljä

phyllanthus

lajeja käytetään,

P. urinaria

voimakkaimmin sytotoksista vaikutusta. Tämä voi liittyä sen yksinoikeudella sisältöä trigalloylglucopyronoside ja tetragalloylglucopyronosid. Mielenkiintoista,

phyllanthus

otteita ei aiheuttanut merkittäviä muutoksia solun elinkelpoisuutta sekä normaalin ihmisen ihon (CCD-1127Sk) ja eturauhasen (RWPE-1) solulinjat. Nämä havainnot korreloivat suorittaman Huang et al. jossa

phyllanthus

kasvien näytetään valikoiva tappamista vastaan ​​syöpäsoluja [28]. Tämä selektiivinen sytotoksinen vaikutus on tärkeä kriteeri, koska tällä hetkellä saatavilla lääkkeitä kohdistaa normaalit solut samoin ja johtaa sivuvaikutuksia.

elämän ja kuoleman solun ohjataan solusyklin, joka on tiukasti säännelty sykliini sykliini-riippuvaisten kinaasien (CDK), CDK-inhibiittorit (CDKI) ja muut tuumorisuppressorigeeneille. Täten vapautuminen solusyklin johtaa epänormaali leviämisen DNA-vaurioituneita soluja ja evasiveness apoptoosin [29].

Phyllanthus

uutteet häiritsi solusyklin MeWo solujen S-faasin kanssa, jolloin mikä tarkoittaa, että ne voivat ovat häirinneet DNA-synteesiä, etenemisen pysäyttäminen solusyklin S-vaiheessa ja johtaa apoptoosin. S-vaiheen pidättäneet

phyllanthus

poimii siitä MeWo solu voi johtua: (1) esto cdc25 entsyymeistä [16], [30] – [32], tai (2) estämällä DNA topoisomeraasi II joka johtaa kaspaasien aktivaatio [16], [33]. Siten korkea kaspaasi-3 ja -7 toimintaa havaittiin 72 tunnin jälkikäsittely

phyllanthus

otteita. Kuitenkin S-vaiheen pysähtymisen näytteillä

Phyllanthus

uutteet ei ole niin jyrkkä kuin 5’Fluorouracil, joka on S-vaiheen herkkä iho syöpälääke, joka osoittaa, että

Phyllanthus

uutteet todennäköisesti tappaa melanoomasoluja muutoinkin kuin häiritsevät solusyklin, kuten muutokset melanooman solussa signalointireitteihin myös FAS-reitin [34]. Lisätutkimukset käsitellään tilassa toimia

phyllanthus

poimii melanoomasoluissa.

phyllanthus

otteita kohdistuu niiden kasvun pysähtymisen käsitellyissä-PC-3-solujen keräämällä solut Go /G1-vaiheen, mikä tarkoittaa, että

phyllanthus

otteet saattavat häiritä proteiinisynteesiä PC-3-solut siten pysäyttää niiden etenemistä G1: stä S-vaiheeseen aikana solusyklin ja myöhemmin aloittamista apoptoosin. Tämä voi johtua siitä, että inhiboivia vaikutuksia MDM2-proteiinin, joka vähentää solujen proliferaatiota ja indusoi apoptoosin korkeus p21, Bax ja pRb tasolla sekä vähentäminen hyperfosforyloidun Rb ja E2F1 [35].

phyllanthus

indusoimaan apoptoosin PC-3-solut saattavat liittyä kohoamista Bax ja Fas-reseptorin /ligandin geenin ilmentymisen ehdottama Huang et al. [25]. Korkeuksia Bax-proteiinin liittyy osallistuminen mitokondrion (luontainen) väylän apoptoosin johon liittyy vähentäminen mitokondrion kalvon potentiaalia, sytokromi C tiedotteet ja myöhemmin johtaa caspases aktivointi [36]. Korkea kaspaasi-3 ja -7 toimintaa havaittiin soluissa, joita käsiteltiin

Phyllanthus

uutteet. Go /G1-vaiheen pysähtymisen PC-3:

phyllanthus

otteita saattaa liittyä sen korkea pitoisuus fenolisia yhdisteitä. 12 polyfenolit tunnistettu

phyllanthus

, luokitellaan neljään pääryhmään, nimittäin ellagitannii- neista, gallotanniineista, flavonoidit ja fenoliset hapot kanssa ellagitannii- neista on yleisin ryhmä yhdistettä. Ellagitannii- neista ovat myös runsaasti löytyy granaattiomena ja on tutkittu melko perusteellisesti sen monipuolinen terapeuttisia vaikutuksia myös sen syöpää estävät ominaisuudet [37]. Geraniin, tärkein ellagitannin löytyy kaikista P

hyllanthus

lajeja, on osoitettu edistää kasvua pidätystä muiden syöpien, mukaan lukien paksusuolen syöpä [38], [39]. Kuitenkin standardi lääke eturauhassyövän, doksorubisiini, häiritsi syöpäsolujen kasvun pidättämällä ne G2 /M vaiheessa ja lopulta aloittamista apoptoosin erilaisia ​​mekanismeja, kuten estoa topoisomeraasin entsyymejä nähty muissa tutkimuksissa [40], [ ,,,0],41].

kaspaasi-3 ja -7 toimintaa käsitellään syöpäsolujen apoptoosin aikana tuloksia: (1) entsyymin inaktivoitumisen poly (ADP-riboosi) polymeraasin tai PARP, ja (2) aktivointi kaspaasi aktivoitu DNaasia (CAD), tämän jälkeen aiheuttaa DNA-fragmentaation, joka on yksi ominaisuuksista apoptoosin [42], [43]. Siten korkeus näiden kaspaasien jälkeen

Phyllanthus

hoitojen avulla ulkonäkö apoptoottisten DNA-fragmenttien agaroosigeelillä, mikä vahvistettiin edelleen läsnäolo TUNEL-positiivisia soluja. Näin ollen, sytotoksiset vaikutukset

Phyllanthus

uutteet ihmisen ihon (MeWo) ja eturauhasen (PC-3) syöpäsolulinjoissa on välittyy apoptoottinen mekanismi, kaspaasi-3 ja -7, ja tämä voi johtua läsnäolosta gallushappoa löytyy

phyllanthus

otteita. Gallushappona on aiemmin osoittautunut apoptoosin kautta kaspaasi-3 aktivointi [44].

luonnollinen tuotepainotteisessa lääkekehitysyhtiö, nekroosi voi esiintyä yhdessä apoptoosin. Tämä on osoitettu monissa syöpälääkkeiden, kuten kladribiini, sisplatiini, doksorubisiini ja 5’fluorouracil, joilla on sekä apoptoottisten ja nekroottisten vaikutukset [45], [46]. LDH ovat ryhmä entsyymejä, jotka ovat läsnä kehossamme ja niiden epätavallisen korkea osoittaa terveysongelmia. Soluissa, LDH tuotetaan pääasiassa mitokondrioita ja niillä on tärkeä rooli hapetus laktaatti ja vähentää pyruvaatti [47]. Vuonna nekroottinen solukuolema, solukalvon eheyden on menetetty, ja tämä johtaa siihen, että vuoto sytoplasmisen sisällön solunulkoiseen ympäristöön aiheuttaa tulehdusreaktion, [23]. Mittaukset LDH-entsyymin indikaattorina kuolion, osoitti, että

Phyllanthus

lisäksi ottaa apoptoottista aktiivisuutta, niillä on myös vähäinen kapasiteetti indusoimaan nekroottisen solukuoleman sekä MeWo ja PC-3-soluja. Yhdessä tulokset osoittavat, että

phyllanthus

tehdas hallussaan dual-valmiudet solukuoleman, ehkäpä johtuen raakaöljyn luonteesta

phyllanthus

otteita, jossa kaikki mahdolliset bioaktiiviset yhdisteet sekoitetaan yhteen ja saattaa toimia yksin tai synergian, mikä edistää tämän dual-valmiudet solukuoleman ”vaikutuksia.

Nämä bioaktiiviset yhdisteet uskotaan omaavan sytotoksisuuden kohti syöpäsoluja kyvyllään häiritä solujen kasvua syövän ja aloittaa niiden apoptoottiseen solukuolemaan. Vaikka yksityiskohtaisia ​​tai taustalla olevien mekanismien valikoivuus

phyllanthus

kasvi ihoa vasten ja syöpäsolujen on vielä epäselvä, havaintomme ovat osoittaneet, että

phyllanthus

kasvien kykenee sen kasvun estämistä kohti syöpäsolujen kautta modulaatio solusyklin ja apoptoosin induktion kautta kaspaasien aktivaation. Edelleen puhdistukset

phyllanthus

tiivisteet ja tutkimukset apoptoosireittiä tarvitaan paljastaa tarkkaa vaikutustapa

phyllanthus

kasvi sen syövän ominaisuuksia.

Materiaalit ja menetelmät

kasviuutteita ja Standard Drugs

vesipitoiset ja metanoliliuosta otteita neljästä

phyllanthus

lajeja (

P.amarus, P.niruri, P.urinaria, ja P .watsonii

) saatiin Dr. Indu Bala, bioteknologiakeskuksen MARDI. Juuri korjattu laitos näytteet pestiin, kuivattiin huoneen lämpötilassa ja sitten kylmäkuivataan. Vesipitoisen uutteen, kuivattiin kasvi näytettä liotettiin ultra puhdasta vettä, kun taas absoluuttista metanolia käytettiin metanolipitoista uutteen valmistamiseksi. Sitten näytteet homogenoitiin uuttopuskurin, ja supernatantti kerättiin kolmen kierroksen jälkeen uuton. Doksorubisiini ja 5’Fluorouracil olivat vakiolääkkeen käytettiin positiivisina kontrolleina tässä tutkimuksessa. Molemmat tutkitut näytteet; kasviuutteita ja vakiolääkkeen säilytettiin -20 ° C: ssa.

Korkean suorituskyvyn nestekromatografia yhdistettynä elektronisuihkuionilähteellä (ESI) ja massaspektrometria (LC-MS- MS) analyysi

vesi uuttaa näytteet, 2 ml supernatanttia kuivattiin vakuumissa keskitin (keskitin 5301 eppendorf, Saksa) ja uudelleen liuotettiin 20 mg /ml 30% metanolia ennen kuin sille tehdään LC-MS-MS-analyysi. Niille näytteistä uutettiin metanolilla, yhteensä supernatantti haihdutettiin pyöröhaihduttimella (Rotavapor RII, BUCHI, Sveitsi) ja uudelleen liuotetaan uudelleen 20% metanolia. Sitten näytteet erotettiin kiinteän faasin uutolla (SPE) -pylvääseen (LiChrolut RP-18 1000 mg /6 ml, Merck Saksassa), liikkuvalla faasilla 60% metanolia ja 70% metanolia. Kaikki eluoituu konsentroitiin 0,5 ml, sitten laimennettiin 8 kertaa 40% metanolia ennen kuin sille LC-MS-MS-analyysia.

Näytteet erotettiin käyttämällä HPLC-järjestelmää, joka on muodostettu HPLC binary pumppu, autosamplerista injektori osastoon ja diodirividetektorilla (DAD) (1200-sarja, Agilent Technologies, Saksa). Erotukset suoritettiin käyttäen käänteisfaasi-C-18, 150 mm x 4,6 mm i.d., 5 um partikkelikoko Thermo Hypersil GOLD sarakkeessa (Thermo Scientific, UK). Erottelu on kehitetty käyttäen liikkuvaa faasia, 0,1% muurahaishappoa vedessä (liuotin A) ja 0,1% muurahaishappoa asetonitriilissä (liuotin B) gradientilla asetus liuotin B: 5% (5 min), 5-90% (60 min), 5% (4 min), virtausnopeudella 1 ml /min. Injektiotilavuus asetettiin 20 ui ja löydöistä olivat molemmat 280 nm ja 360 nm. Massaspektrometriaa analyysi, 3200 QTrap LC /MS /MS-järjestelmä (Appiled Bioscience – MDS Sciex) käytettiin raudan lähteen ja jännitteen pidettiin 500 ° C: ssa ja -4,5 kV: n negatiivinen ionisointi, vastaavasti. Typpi generaattori asetettiin käyttää 60 psi verho kaasun virtaus, 90 psi lähde kaasuvirtausaukkoa 60 psi pakokaasuvirrasta. Kahdenlaisia ​​Skannaustilat valittiin: parantaa massaspektrometri (EMS) ja parantaa ioni tuote (EPI) ja täysi tarkistus massaspektrejä vaihtelevat

m /z

100-1200.

Soluviljely

Skin melanooma MeWo (HTB-65) solun, eturauhassyöpä PC-3 (CRL-1435) solujen normaali ihosta CCD-1127Sk (CRL-2565) ja eturauhasen RWPE-1 (CRL-11609) solu linjat hankittiin American Type Culture Collection (ATCC). Neljä solulinjoja viljeltiin eri medioiden, EMEM (Eaglen minimum essential medium) varten MeWo soluja, RPMI-1640 (Roswell Park Memorial Institute) PC-3-solut, ja keratinosyyttien kasvualustaa, CC-4455 (Lonza, USA) RWPE-1-soluissa ja DMEM (Dulbeccon modifioitu Eaglen) CCD-1127Sk soluissa. Kasvualustaa täydennettiin 10% lämpöinaktivoitua naudan sikiön seerumia (FBS, Gibco). Soluja ylläpidettiin kostutetussa ilmassa 5% CO

2 37 ° C: ssa. Solut kerättiin käyttämällä 0,25% trypsiiniä (Hyclone), kun ne saavuttavat 70-80% konfluenssiin dosviljelypulloihin.