Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoite

seulomiseksi ja luonnehtivat ituradan variantteja E-kadheriinin

(CDH1) B ei-perinnöllinen mahasyövän (GC) potilailla ja henkilöillä, joilla on vaara GC.

Methods

59 GC, 59 ensimmäisen asteen sukulaiset (FDR) GC, 20 autoimmuuni metaplastiset atrofinen gastriitti (AMAGs) ja 52 verenluovuttajien (BD) analysoitiin

CDH1

suoralla sekvensoinnilla, rakennemallinnus ja bioinformatiikan. Toiminnalliset vaikutus liitos arvioitiin varten introni mutaatioita. E-kadheriinin /β-kateniinin immunohistokemiallinen värjäys ja E-kadheriinin mRNA kvantifiointiin käyttäen RT-PCR suoritettiin.

Tulokset

GC, 4 missense variantteja (p.G274S; p.A298T; p.T470I; p.A592T), 1 mutaatio 5’UTR- (-71C G) ja 1 mutaatio introni IVS12 (c.1937-13T C) alueella ei löytynyt. Ensimmäinen patogeeninen vaikutus p.A298T mutaation ennusti proteiinin 3D-mallinnukseen. Romaani p.G274S mutaatio osoitti mitään selkeää toiminnallista merkitystä. Lisäksi ensimmäinen, introni IVS12 (c.1937-13T C) mutaation osoitettiin johtavan poikkeava

CDH1

transkriptio kanssa eksonin 11 deleetio. Tämä mutaatio löydettiin 2 GC ja 1 PU. Vuonna FDR tunnistimme 4 vaihtoehtoja: polymorfisen (p.A592T) ja 3 mutaatiot transloimattomat alueet tunnistamattoman toiminnallista roolia paitsi 5’UTR (-54G C), jotka oli todettu alentavan

CDH1

transkriptio. Vuonna AMAGs Havaitsimme 2 muutoksia: 1 missensemutaatio (p.A592T) ja 1 uusi variantti (IVS1 (c.48 + 7C T)) ilman vaikutus

CDH1

liittämiseen. Useita hiljainen ja polymorfiset substituutioita havaittiin kaikissa tutkituissa ryhmissä.

Johtopäätökset

Yleisesti tutkimuksemme parempi kuin nykyinen luonnehdinta

CDH1

mutaatioita ja niiden toiminnallista roolia GC ja yksilöillä vaarassa GC. Mutaatiot löytyy transloimattomat alueet ja tietojen liittämiseen vaikutuksista ansaitsevat erityistä huomiota kuin liittyy alentunut E-kadheriinin määrä. Hyödyllisyys

CDH1

seulonta, lisäksi tunnistaminen muiden riskitekijöiden, voisi olla hyödyllistä havaita varhaisessa vaiheessa GC potilailla on riski (eli FDR ja AMAGs), ja optio lisätutkimuksia.

Citation: Garziera M, Canzonieri V, Cannizzaro R, Geremia S, Caggiari L, De Zorzi M, et al. (2013) tunnistaminen ja karakterisointi

CDH1

Ituradan variantit Sporadic mahasyöpäpotilaista ja riskiryhmistä mahasyövän. PLoS ONE 8 (10): e77035. doi: 10,1371 /journal.pone.0077035

Editor: Amanda Ewart Toland, Ohio State University Medical Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 29 huhtikuu 2013; Hyväksytty: 05 syyskuu 2013; Julkaistu: 29 lokakuu 2013

Copyright: © 2013 Garziera et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (AIRC De Re N. 10266 ja AIRC Cannizzaro Special Program Molecular Clinical Oncology 5×1000 N. 12214), ja Direzione Centrale del Lavoro, Formazione, Università e Ricerca Della Regione Autonoma Friuli Venezia Giulian, Codice Progetto 200502027001. rahoittajat ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Dr. Valli De Re vakuuttaa, että hän on ollut mukana kirjoittamassa ja toimitusneuvosto jäsen PLoS YKSI. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

Mahasyöpää (GC) jää neljänneksi yleisin maligniteetti maailmanlaajuisesti, vaikka sen esiintyvyys ja liittyvä kuolleisuus on vähentynyt viime vuosikymmeninä. GC ennuste liittyy läheisesti taudin vaiheesta diagnoosin [1]. Varhain alkava mahasyövän (EOGC) määritellään GC esittelee vuoden iässä 45 tai nuorempi [2] ja on huono eloonjäämiseen [3], [4]. Useimmat GC ovat satunnaisia ​​ja usein kehittyvän

Helicobacter pylori

(HP) -associated gastriitti [5], [6]. Kuitenkin familiaalinen yhdistäminen tutkimukset korostaa geneettinen taipumus on satunnaista kehittämisessä GC. Taajuus familiaalinen mahalaukun yhdistäminen on noin 10%.

laajimmin hyväksytty GC histopatologinen luokitus (Lauren luokitus) [7] mukaan on olemassa kahdenlaisia ​​GC: suoliston tyyppi ja hajanainen tyyppi. Diffuusi GC näyttää suuremman perinnöllinen perusteella ja yleensä huonompi ennuste verrattuna suoliston alatyypin [8].

CDH1

koodaava geeni E-kadheriinin on todettu olevan kausaalinen rooli noin 30% -50% perinnöllisen diffuusi GC (HDGC), autosomaalinen hallitseva GC ja lobulaarinen rintasyöpä alttius oireyhtymä muodostavat 1-3% suvuittain klusterointi GC [9], [10] ja hajanainen GC alatyyppi [11] .

CDH1

ituradan mutaatioita (tällainen mutaatio siirtyy jokaisen solun jälkeläisillä ruumis) on nimenomaan liittyy HDGC (noin 30% -40% tapauksista); suuret

CDH1

deleetioita on löydetty noin 6,5%: ssa tapauksista [12]. Perinnöllinen suoliston mahasyövän (FIGC) positiivinen suvussa on myös kuvattu mutta toistaiseksi ei ituradan

CDH1

viat on liittynyt FIGC tai suoliston GC. Tämä puute todisteita

CDH1

mutaatioita suoliston alatyyppi on johtanut hypoteesiin, että familiaalinen klustereiden näissä tapauksissa määräytyy jaetun ympäristötekijät, toisin kuin perinnöllinen geneettinen taipumus. Kuitenkin viimeaikaiset tiedot osoittavat, että

CDH1

somaattiset muutokset (esim muutoksia kerääntyvät syöpäsolujen kehon yli ihmisen elinikä) ovat yleisempiä suoliston kuin hajanainen GC [13], mikä viittaa tärkeä rooli

CDH1

sekä histotypes. Kuitenkin tarkka esiintyvyys

CDH1

ituradan muutoksia suoliston GC on vielä tuntematon.

CDH1

promoottori hypermetylaation on yleisin toinen geneettinen osuman GC karsinogeenisia prosessi [14], [15].

CDH1

mutaatiot ovat myös liittyy lisääntynyt alttius invasiivinen ja metastaattinen [16], [17] paksusuolen, virtsarakon, eturauhasen, rinnan ja gynekologisten syöpien [18] – [20]. E-kadheriinin on läpäisevä glykoproteiini, joka on rooli ylläpitämisessä epiteelin kudosrakenne ottamalla Ca

2+ riippuvainen solu-vuorovaikutuksiin [21], [22]. E-kadheriinin käsittää sytoplasmisen domeenin, lyhyt transmembraanidomeeni ja viisi solunulkoinen toista kadheriinin kaltaiset domeenit (EC1-5) span eksonit 4-13 ja sisältää hyvin säilyneitä kalsiuminsitomisominaisuudet alueilla [23], [24] ja niitä ylläpidetään kysteiinin todennäköisesti disulfidisiltojen muodostamiseksi [25].

tässä tutkimuksessa kartoitettiin

CDH1

ituradan mutaatioiden peräkkäisten satunnaisia ​​GC tapauksissa ja riskiryhmistä GC; pääasiassa ensimmäisen asteen GC-sukulaiset (FDR) ja autoimmuunisairauksien metaplastiset atrofinen gastriitti (AMAG) potilasta ohjataan meidän instituutin ruoansulatuskanavan oireet ja endoskopiamäärityksellä. Tutkia rooli E-kadheriinin ilmentymisen, rakenteellisten, toiminnallisten ja immunohistokemiallinen analyysit tehtiin näytteistä, joissa on

CDH1

ituradan mutaatio. Tavoitteena tässä tutkimuksessa oli arvioida esiintyvyyttä ja luonnehtivat

CDH1

ituradan mutaatioiden peräkkäisten satunnaista GC potilailla puuttuvat kriteerit HDGC luokittelun ja valitun riskiryhmään GC kehityksen, testata hyödylliseksi merkki parantaa kasvaimen varhaiseen havaitsemiseen. Saatuja tietoja voidaan käyttää kehittämään työkalu, joka nopeasti ja edullisesti havaitsee

CDH1

mutaatiot pääasiassa läsnä meidän väestöstä.

Tulokset

Patient kuvaamista ja

CDH1

ituradan geeniseulonta

Kliiniset ja histopatologiset ominaisuudet GC, FDR ja AMAG aiheita esitetään yhteenveto taulukoissa 1 ja 2. Niistä 59 GC potilaat, 2 (3,4%) on suvussa GC (S15 on veli S16) ilman täyttävät perinnöllinen diffuusia GC, kuten on määritelty kansainvälisessä mahasyövän Linkage Consortium (IGCLC) ajankohtana näytteenotosta. Meidän GC-sarja, 5 satunnaista varhainen GC potilailla (≤45 vuotias) oli läsnä, mutta ei

CDH1

muutoksia havaittiin näillä potilailla. Mediaani-ikä FDR oli 49 vuotta (vaihteluväli, 28-78 vuotta) ja AMAGs 56 vuotta (vaihteluväli 31-72 vuotta). Niistä 59 GC potilaat, 16 koehenkilöstä oli ensimmäisen asteen sukulainen mukana tutkimuksessa (16/59 FDR). FDR ja AMAGs tuli meidän laitoshoito gastroenterologian käynti ja gastroskopian tentti, ne ilmenevät erilaisia ​​oireita, mutta ei syöpä eikä suolen metaplasiaa /dysplasia oli läsnä näissä aineissa.

CDH1

geeniseulonta tulokset luetellaan taulukossa 3

uusi

mutaatiot: 1 introni (ID 5), 1 missense (ID 10), ja 2 hiljainen (ID 13 ja ID18). Kaiken kaikkiaan löysimme 4 vaihtoehtoja, jotka koodaavat aminohappo (AA) korvaaminen (1 novel (ID10) ja 3 Aiemmin muissa populaatioissa (ID 11, tunnus 12, ID 15), 1. 5’near geenialueen ja 2 mutaatiot transloimattomassa (UTR) sääntely elementti (ID 1, ID 3, jo raportoitu) ja 6 substituutioita introni alueilla (kolme mutaatiota: tunnus 5, ID 9, ID 17, kolme introni polymorfisia variantteja: tunnus 4, ID 6, ID 8, luultavasti ole vaikutusta GC cancerogenesis). ei deleetioita tai insertioita löydettiin eksonissa rajoja.

Muut muutokset johtivat yhteiseen polymorfismit (taajuus vähintään 1% väestöstä) tai hiljaiset mutaatiot että koodaavat samaa aminohappoa kuin alkuperäinen säikeen. ei ole tilastollinen yhteys havaittiin yksi neljästä potilasryhmille testattiin tunnus 4, ID 6 tai tunnus 19 variantteja.

RefSNP (rs) numerot tunnistaa geneettisiä variantteja aiemmin julkaistu sekä niiden raportoitu taajuudet (NIEHS Environmental Genome Project, Seattle, WA (URL: https://evs.gs.washington.edu/niehsExome/Käsiksi elokuu 2013); ftp://ftp.1000genomes.ebi.ac.uk/vol1/ftp/phase1/analysis_results/paper/Accessed päivänä joulukuuta 2012) on esitetty taulukossa 3.

Kaikki

CDH1

variantteja heterotsygoottisessa tilassa paitsi tunnus 4 ja ID 19, jossa homotsygoottinen tila havaittiin myös.

Taajuus mutaatioiden ja varianttien laskettiin henkilöillä ilman GC tai AMAG sairaus (52BDs + 59FDRs, n = 111). Kuusitoista FDR oli ensimmäisen asteen sukulaisia ​​meidän GC-sarja; kun yksi variantti oli läsnä GC ja siihen liittyvät FDR tapauksessa voimme sulkea pois FDR yksilön taajuuden laskentaa. ID4 esimerkiksi oli läsnä 5 FDR liittyvät meidän GC meidän sarjassa; Siksi vertailupopulaatiossa taajuus muuttunut yhteensä 111-106 yksilöitä (7FDRs + 8BDs /106; 14,5%). Kuvio 1 havainnollistaa sekvensointi kromatogrammeja romaanin mutaatioiden olemme löytäneet. Olemme aiemmin raportoineet ID 10 kromatogrammissa toisessa paperissa [26].

(A) ID 5, uusi introni mutaatio lähellä eksonia 1 (IVS1 c.48 + 7C T) löytyy yksi potilas vaikuttaa AMAG (S121). (B) ID 13, hiljainen mutaatio (c.1416C T) kanssa konservoitunut Ala tähteen asemassa 472

CDH1

eksonissa 10 (p.T472T) todettu yksi GC (S4). (C) ID 18, hiljainen mutaatio (c.2073C T) kanssa konservoitunut Ala tähteen asemassa 691

CDH1

eksonissa 13 (p.A691A) todettu yksi GC (S48).

bioinformatiikka- ennakoiva rooli ja rakennemallinnus tulokset missensemutaatio varianttien löytyi

missensemutaatio muuntunut jäännökset löydettiin kaikki lokalisoitu E-kadheriinin ekstrasellulaarisen domeenin. Kodoni asema epäkypsien ja kypsien (sen jälkeen, kun N-pään katkaisukohta) proteiineja ja tietoja PolyPhen-2 ja SIFT

in silico

analyysien tulokset on esitetty taulukossa 4. Kaikki neljä missense vaihtoehdot ovat mahdollisesti haitallista, jonka PolyPhen -2, mutta vain p.A298T (ID 11) ja p.A592T (ID 15) substituutiot voivat vaikuttaa proteiinin toimintaan, jonka SIFT analyysi (taulukko 4). P.G274S (ID 10) että olemme hiljattain kuvattu [26], ei kuitenkaan häiritse paikallista ympäristöä, mutta tuo potentiaalinen tähteen fosforylaatiota ja glykosylaation, joilla voi olla mahdollisia vaikutuksia vakauden ja eheyden E-kadheriinin kuten me hypoteesin [26]. Patogeeniset vaikutus ID 11 korvaaminen on aiemmin perustettu [27], mutta tässä ensin osoitettiin rakenneanalyysiin. Kuten on havainnollistettu kuviossa 2A, AA muutos eksonissa 7 p.A298T (ID 11) on sijoitettu lähelle interaktiivisella välisellä alueella protomeerien EC1 ja EC2. Siten alaniini-treoniini polaarisen tähteen korvaaminen voidaan ajaa H-sidoksen muodostumisen kautta oxydrilic ryhmä ja tämä saattaa häiritä paikallista proteiinin rakenne alueella, joka on olennaista Ca

2+ vuorovaikutusta. Treoniini asemassa 144 on steerisesti osoittanut häiritsevä, koska se on vuorovaikutuksessa kaksi asparagiinihappotähteitä (Asp136 ja Asp 138), jotka ovat suoraan mukana Ca

2 + sitova. Lisäksi sidospituudet ovat erityisen korosti, on alle 3 Å (kuvio 2B).

A-B PyMOL ja Coot ohjelmistot esityksiä EC1-EC2 protomeereissä perustuu ihmisen sekvenssin (ATE koodi: 2O72); C-F, EC3 ja EC4 protomeereissä perustuvat hiiren E-kadheriinin (ATE koodi: 3Q2W) mukaan Coot ohjelmisto. (A) Cartoon esitys kohokohtia A144 (

keltainen

) kanta: A144 on lähellä kalsium sivustoja (

violetti

) ja läheisyys dimeroitumisen rajapinnan EC1 (

sininen

) -EC2 (

vihreä

) verkkotunnuksia. (B) Rakenteelliset edustus A144T substituution EC2 domain. Kanta AT144 on korostuu keltaisella. Treoniini asemassa 144 on varsin dramaattisia paikallisen rakenteen, koska se on vuorovaikutuksessa kaksi asparagiinihappotähteitä (

vihreä

) suoraan osallisena kalsium- sivustoja, ja nämä side pituudet ovat erityisen korosti ollessa alle 3 Å. (C) T316 (

keltainen

) on

O

-glycosilated (

sininen

) ja läsnä pinnalla EC3 verkkotunnuksen. (D) Hydrofobinen sivusuunnassa ketju I316 (

keltainen

) ei voi olla

O

-glycosilated ja edistää proteiini-proteiini vuorovaikutusten. (E) Minkään methylenic sivuketju A438 (

keltainen

) mahdollistaa konformationaalisen vapauden pinnalla EC4 verkkotunnuksen. (F) T438 (

keltainen

) korvaaminen ei ole dramaattinen paikallisia rakenne, mutta se voisi olla potentiaalinen sivusto translaation jälkeiset modifikaatiot. Kalsiumionit on korostettu (

vihreä

).

Koska huomioon loput kaksi missensemutaatioita, niillä on vähemmän selkeä toiminnallinen vaikutus kuin myös esitetty taulukossa 4. p .T470I (ID 12) korvaamista [28] muuttuu AA pinta extradomain EY3 kypsässä proteiinissa (kuvio 2C). Sekä hiiren E-kadheriinin ja N-kadheriinin sekvenssi (PDB-koodi: 3Q2W) treoniini on yleensä löytyy

O

-glycosylated viittaa tärkeä rooli tämän tähteen proteiinin rakenne. Kuitenkin, kuten osoitti kuviossa 2D, muutos isoleusiini, ei-polaarinen AA hydrofobinen sivuketju, joka voi läpikäydä translaation jälkeisiä muutoksia, ei osoita erityisesti molekyylien välistä jännitystä. Oletamme, että solunulkoiseen, kun läsnä on isoleusiinitähde samassa asemassa kuin treoniini voi suosia proteiini-proteiini-vuorovaikutusten ja tämä mutaatio voisi siten olettaa suojaava merkitys. Viimeinen mutaatio ilmoiteta, p.A592T (ID 15), havaittiin kaikissa ryhmissä testattu (katso taulukko 3), mikä viittaa epätodennäköinen vaikutus GC synnyssä. Tällöin alaniini on extradomain EC4 kypsän E-kadheriinin (kuvio 2E) tarjoaa konformationaalisten vapautta, vaikka läheisyyteen Ca

2 + sitoutumiskohtia. Treoniinin korvaaminen tässä on rajallinen vaikutus paikalliseen rakenteeseen ja vääntö kulmat proteiinin. Emme kuitenkaan voi sulkea pois, että oxydrilic sivusuunnassa ketju voisi olla translaation jälkeinen muokattu erityisesti tilanteessa ja siten vaikuttamaan rakenteeseen ja toimintaan

CDH1

(kuvio 2F).

Transcript analyysi Introniset ituradan mutaatioita

Tutkitaan jos introni mutaatiot havaittu omassa GC-sarja (taulukko 3) saattaa aiheuttaa vaikutusta liittämiseen, suoritimme

CDH1

transkriptio analyysi. Polymorfiset ja hiljainen variantteja suljettiin pois tämän analyysin, koska ne todennäköisesti ole patogeeninen rooli. cDNA valmistettu ääreisverenkierron valitun GC yksilöiden kätkeminen introni tunnus 5, ID 9 tai tunnus 17 mutaatioita (taulukko 3) verrattiin että kahdelta terveitä verenluovuttajia, yksi ainoa, jolla on sama tunnus 17 mutaation GC potilaiden (BD koodi S190 ), ja toinen (BD koodi S189) sanotun

CDH1

mutaatio.

ID 5 ja ID 7 introni mutaatioita, amplifioimme alue kattaa osan eksonin 1 osaan eksonista 5, ja ID 17-mutaatio, eksonin 10-13 (kuvio 3). RT-PCR eksoni 1-5 fragmentteja ei todettu eroja, kun ajetaan 4% agaroosigeelillä (kuvio 3A) eikä sen jälkeen kaksisuuntaisen sekvensointi (tietoja ei osoittivat); by Converse ID 17 introni variantti voi vaikuttaa silmukoinnin johtaa epänormaaliin pienempiin

CDH1

transkripti (kuvio 3B). Kun eristäminen ja sekvensointi, huomasimme, että pienemmän bändi johti ohitetun transkriptio puuttuu eksoni 11, jossa eksonin 10 liitetty suoraan eksonia 12. Tämä poikkeava transkripti havaittiin myös BD S190 kuljettavat samaa ituradan korvaaminen (kuva 3B).

Yhteensä mRNA eristettiin PBMC kunkin edustettuna näytteen ja retrotrascribed yhden säikeen cDNA täydentää: (A) eksonit 1-5 noin 768 bp. Toisessa kaistaa AMAG (S121) potilas kantaa tunnus 5 mutaatio (IVS1 c.48 + 7C T); kolmannen kaistan FDR (S97) kantavat ID 9 mutaatio (IVS4 c.532-18C T); (B) eksonit 10-13 noin 686 bp. GC (S10), GC (S46) ja BD (S190) kantavat ID 17 mutaatio (IVS12 c.1937-13T C). Keltainen nuolet todisteita pienempi nauha, joka vastaa poikkeavaan selostukset josta puuttuu eksoni 11; (C) β-aktiini käytettiin sisäistä vahvistusta valvontaa. MW: 1 Kb DNA tikkaat. PCR-tuotteet ajettiin 4%: isessa ja geeli värjättiin SYBR Green dyef

Analyysi

CDH1

proteiinin runsauden ja mRNA: n ilmentymisen taso henkilöillä osoittaa

CDH1

Introniset mutaatiot

vertailu E-kadheriinin mRNA-ekspression taso suoritettiin EBV kuolemattomiksi lymfosyytit saadaan perifeerisestä verestä S10 ja S190 (mutaatio ID 17), S97 (ID 9) ja S189 (ei

CDH1

mutaatiot) aiheita. Aihe S10 vaikutti mahasyövän, jollei S97 on ensimmäinen aste suhteellinen potilaan kanssa mahasyövän (FDR), kun taas S189 ja S190 olivat molemmat verenluovuttajia. Me havaittiin kontrollin verenluovuttajien (S189), jossa ei ole

CDH1

mutaatio ja potilaita, suhteellinen voimakas lasku E-kadheriinin ilmentymisen (noin 60%, kuva 4) potilaan S10 joilla on molemmat ID 17 mutaation ja GC, kun taas vain noin 2%: n vähennys verenluovuttajien S190, joilla on sama tunnus 17 mutaatio (

p

0,05, suhteessa GC S10). For S97 (mutaatio ID 9, FDR aihe), havaitsimme samanlainen E-kadheriinin ilmentymisen kuin kontrolliryhmän S189.

suhteellinen kvantitointi E-kadheriinin mRNA tasot EBV kuolemattomaksi lymfosyyteissä (LCL). LCL -soluja syntyvät kylvämisen 2,5 × 10

6 PBMC kuolemattomiksi B.95.8 EBV ja viljeltiin suspensiossa. Noin 8 miljoonaa solut kerättiin jokaisesta näytteestä jälkeen kuolemattomaksi. Potilaat testattiin olivat: GC S10 kätkeminen ID 17 variantti (IVS12 c.1937-13T C), FDR S97 kantaen ID 9 (IVS4 c.532-18C T), BD S190 kanssa ID 17 ja BD S189 ilman

CDH1

mutaatio. S189 pidettiin viite (arvo 1) Tulokset edustavat kolmen erillisen kokeen. E-kadheriinin ilmentymisen taso oli normalisoitu normalisoitiin p-aktiini Data esitetään keskiarvoina ± SD. *, P 0,05, **, p 0,01.

immunohistokemiallinen analyysi kasvaimen mahalaukun kudoksesta introni ID 17 tapauksessa (potilas koodi S10, kuvio 5E) osoitti alennettua ilmaus membraanisidotut E-kadheriinin että sinettisormuksella kasvainsoluja (mustat nuolet), kun taas molemmat ja sytoplasman värjäytymistä oli läsnä normaalissa epiteelissä. Saman potilaan oli vähentynyt β-kateniinin värjäytymistä sinettisormuksella soluja verrattuna vahva tämän proteiinin ilmentymisen normaalissa vierekkäisissä soluissa (kuvio 5H). Menetys Sekä E-kadheriinin ja β-kateniinin värjäytymistä oli myös havaittavissa toisen potilaille (S46), jolla on sama introni ID 17 mutaatio ja vaikuttaa GC liian (kuvio 5F ja 5I, vastaavasti E-kadheriinin ja β-kateniinin) .

(A) hematoksyliinillä ja eosiinilla värjäytyminen normaalissa mahalaukun kudoksessa. (B) hematoksyliinillä ja eosiinilla värjäytymistä kasvainkudoksessa GC S10 kanssa sinettisormus cell carcinoma: sinettisormus solut korostettu mustat nuolet. (C) hematoksyliinillä ja eosiinilla värjäys todisteet hajanainen histotype GC S46. (D) E-kadheriinin värjäytyminen normaalissa mahalaukun kudoksessa. (E) vähentäminen E-kadheriinin värjäytymistä sinettisormuksella solujen GC S10 suhteessa viereiseen normaaleihin soluihin; sinettisormus solut korostettu mustat nuolet. (F) menetys E-kadheriinin ilmentymisen diffuusi kasvainsolujen GC S46 verrattuna normaaliin kudokseen (oikealla puolella mikrovalokuva). (G) β-kateniinin värjäytyminen normaalissa mahalaukun kudoksessa. (H) heikosti β-kateniinin värjäytyminen sinettisormus soluissa (mustat nuolet) GC S10. (I) menetys β-kateniinin värjäytymistä kasvainkudoksessa GC S46 verrattuna normaaliin kudokseen (oikealla puolella mikrovalokuva). Kaikki valomikroskooppikuvat otettiin 400 x suurennus.

Keskustelu

GC potilailla on tyypillisesti huono ennuste [29]. Tunnistaminen potilailla, joilla on lisääntynyt riski sairastua GC ja varhaisen havaitsemisen GC ovat lupaavia lähestymistapoja vähentää sairastuvuutta ja kuolleisuutta GC. FDR GC potilaiden tiedetään olevan 2-3 -kertaisesti kohonneen riskin GC, mikä johtuu todennäköisesti altistumisen samaan ympäristöön liittyvien riskitekijöiden ja /tai perinnöllinen alttius syövälle [30].

parietaalisolujen tuhoaminen löydetty AMAG yhdistettynä tärkeä rooli E-kadheriinin in epiteelin polaarisuus ja mahalaukun rauhas arkkitehtuuri, viittaa siihen, että ituradan korjauksilla

CDH1

voisi olla ylimääräinen riskitekijä GC kehityksen AMAG potilaalla [31].

Vuonna 1998 Guilford ja kollegat kuvattiin ensimmäisen kerran ituradan mutaatioita

CDH1

geeni [28]. Tämän jälkeen erilaisia ​​mutaatioita on raportoitu perheiden vaihtelevan etnisten ryhmien kanssa diffuusi GC [32], [33]. Ensimmäinen

CDH1

ituradan mutaatio kuvattiin italialainen perhe vuonna 2006, potilaalla, jotka täyttivät IGCLC kriteerit HDGC [34]. Kuitenkin vain harvat tutkimukset raportoivat

CDH1

ituradan mutaatioita satunnaisia ​​GC tapauksissa ilman familiaalinen aggregaatiota tai henkilöillä, joilla on riski sairastua GC [35], [36]. Lisäksi näissä tutkimuksissa toiminnalliset vaikutukset

CDH1

variantteja usein ole tutkittu.

Vahvuus tutkimus on kokoelma 59 valkoihoinen potilaalla on satunnaista GC, 59 FDR ja 20 AMAGs jotka osallistui meidän gastroenterologia palvelua viime vuosina mahalaukun oireita ja diagnoosi tai poissulkeminen GC jälkeen endoskooppinen ja histologiset kudosten arviointia.

Kuten koottu taulukkoon 3, erilaisia ​​ituradan

CDH1

versioiden havaittu. Vuonna 59 GC-sarja, ilman Monimuotoinen ja hiljaisia ​​muutoksia, jotka todennäköisesti ole patogeeninen rooli, löysimme 6 eri substituutioita 9 potilaalla (9/59 GC = 15,2%): 4 missense tyyppi (ID 10, tunnus 11, ID 12, ID 15) 4 erillistä potilaalla (6,8%) ja 2 ei-missensemutaatio tyyppi (ID 2 ja ID 17) 5 erillistä GC (3,4%).

ID 10 (p.G274S) on uusi missensemutaatio että löysimme vanhan miehen kanssa GC sekoitettu histotype. Tämä vaihtoehto ei havaittu 187 vapaa-syöpä yksilöitä (108BDs + 59FDRs + 20AMAGs) mikä sulkee pois polymorfia. Patogeenisen vaikutuksen ID 10 mutaatiota ei tukenut jälkeen toiminnallista (aggregaatiota ja hyökkäys)

in vitro

määrityksissä äskettäin raportoitu [26], kuitenkin tietoja

in silico

luonnehdinta mutaation ja väheneminen β-kateniinin ilmaisun löytyy kasvainkudoksessa ei voi täysin sulkea pois tämän merkitystä mutaation GC kehittämiseen. Siten tämän päivän tunnus 10 on edelleen uusi

CDH1

mutaation kanssa synnyssä määrittämättömän merkityksen.

ID 11 (p.A298T) korvaamista eksonissa 7

CDH1

on jo kuvattu 36-vuotias nuori valkoihoinen mies on HDGC perhe [27]. Meidän sarja, tämä muunnos havaittiin vain 1 uros (S47) 74-vuotiaan sekoitetulla histotype. Mahdollinen patogeeninen vaikutus tämän mutaation on vahvistettu kautta

in vitro

toiminnallisia tutkimuksia eri laboratorioissa [27], [37], [38]. Tässä ensimmäinen mallinnuksen tulokset (kuva 2A-B) analysoimalla 3D proteiini-ligandi sitovia vuorovaikutuksia, tukevat voimakkaasti mahdollisuuksia muuttuneen proteiinien toimintaa ja johtavat mahdollisesti molekyylimekanismin että yllä tätä prosessia. Mahdollinen muuttunut proteiinien toimintaa tukivat myös SEULOA analyysi (taulukko 4), jossa on hyvät pisteet. Lisäksi tuoreessa tutkimuksessa, käyttäen

in silico

proteiini suunnittelu FoldX algoritminen lähestymistapa [39], toistaa, patogeeninen rooli ID 11 (p.A298T) korvaamista, joka perustuu laskemiseen natiivin tilan vakaus muutosten (AAG 0,08 kcal /mol) [40]. Tekijät tunnettu potilaat kätkeminen tämän missensemutaatio olevan nuorempi ikä diagnoosin ja hajanainen histotype. Meidän tapauksessamme korosti, että tunnus 11 voidaan myös havaita vanhassa potilaalla sekavin GC.

ID 12 (p.T470I) löydettiin 57-vuotias mies (S39), jossa diagnoosi GC . Tämä muutos oli ensimmäinen kuvattu perheen maori etnisyyden kanssa EOGC, mutta aihe osoittaa tämä mutaatio ei vaikuttanut GC ajankohtana tutkimuksen [28]. Täällä, huomasimme, että p.T470I AA muutos siedetty SEULOA ja myös mallintamalla analyysi. Valitettavasti kasvaimen Biopsiakudos yksilö oli riittämätön suorittamaan E-kadheriinin IHC värjäystä.

ID 15 korvaaminen (p.A592T) havaittiin kussakin kliinisessä ryhmässä testattu, mikä viittaa todennäköiseen polymorfinen diffuusio. Kuitenkin, tämä muunnos on aiemmin raportoitu liittyvän kilpirauhasen kasvaimet ja lobulaarinen rintasyöpiä [41] – [43]. Rakenteiden analysointi ja

in vitro

[35] ja

in silico

tutkimuksissa [38], [40] eivät tue synnyssä tämän variantin GC.

suosittelema viime kliinisen hoidon suuntaviivat [44], tähystys valvonta tulisi suorittaa vuosittain henkilöitä, joiden mutaatiot määrittelemätön merkitys (esim missense). Mielestämme koehenkilöt kätkeminen ID 15 ja ID 10, on noudatettava enintään 10 vuotta ennen ilman rooli vaikka heikko tätä muutosta patogeneesissä GC.

ID 2 tunnistimme C to-G muutos ennen aloituskodonin (-71C G,

CDH1

5’UTR alue), joka edusti yleisin variantti liittyy GC meidän sarjassa, esiintyy kolmessa 59 GC potilaiden ( 5,1%). Tämä variantti myös raportoitu Suomen tutkimuksessa [45] 1 13 (7,7%) GC: lla potilaista ja 2 51 valvonnan (3,9%), ja myös kaksi EOGC potilasta Pohjois-Amerikan alkuperää (3,4%) [46] . Kaiken kaikkiaan tiedot näistä tutkimuksista viittaavat siihen, että tunnus 2 on melko yleinen mutaatio mutta kirjoittajat eivät ilmoita tietoja ID 2 variantti suhteessa E-kadheriinin ilmentymisen tila. ID 2 löydettiin meidän sarjassa yhdessä suoliston, yksi sekoitettu, ja yksi diffuusi GC histotypes. Kaikki nämä potilaat olivat yli 50 vuotta diagnoosin ja olivat negatiivisia HP infektio. Mikään verrokeilla (n = 111) testattiin ilman GC osoitti, tämä mutaatio (taulukko 3).

in situ

arviointiin tai korrelaatio ID 2 ja E-kadheriinin ilmentymisen ei voinut suorittaa puuttumisen vuoksi kasvaimen materiaalia. Mahdollinen patogeeninen vaikutus tämän promoottorin vaihtoehtoa E-kadheriinin ilmentymisen tason ansaitsee lisätutkimuksia.

intronisekvenssejä ID 17 variantti (IVS12 c.1937-13T C) havaittiin 2 naarasta GC (2/59 GC = 3,4%) sekä positiivisia HP infektiota, ja havaittiin myös 1 BD (1/52 = 1,9%, taulukko 3). Sama muutos on aiemmin raportoitu lobulaarinen rintasyövän korkean taajuuden (12/53 = 23%) [47], vuonna HDGC perheet (2/27 = 7,4%) [48] ja EOGC potilailla (7/79 = 8,9% ) [46], mutta myös suhteellinen ohjaus väestöstä [46]. Huomattavaa on, että osoitamme ensimmäistä kertaa, että tämä korvaaminen johtaa poikkeavaan

CDH1

transkriptio kätkeminen poisto

CDH1

eksonissa 11. eksoni 11, sekä osittaiset sekvenssit reunustavien eksonien , kodifioidaan varten EC4 verkkotunnuksen kypsän proteiinin [25]; ID 17 on out-of-kehyksen poiston ja johtaa muodostumista ennenaikaisen stop-kodonilla asemassa 384 EC4 promoottorin. Näin ollen käännetty proteiini

CDH1

ID 17 säikeen voisi puuttuu transmembraanidomeeni ja sytoplasminen häntä, joka on mukana β-kateniinin sitova. Sekä S10 ja S46 GC potilailla, joilla on ID 17-mutaatio, osoitti ilmentyminen vähenee E-kadheriinin ja β-kateniinin IHC-analyysit (kuvio 5); GC S10 potilas, jolla on sinettisormus karsinooma, oli diagnosoitu iässä 61 vuotta, ja GC S46 potilas, jolla on diffuusi adenokarsinooma, oli diagnosoitu iässä 58 vuotta. Lisäksi arviointi E-kadheriinin ilmentyminen EBV kuolemattomaksi B-lymfosyytit osoittivat vahvaa vähennys (60%) vuonna GC S10 kätkeminen ID 17 mutaatio verrattuna BD ohjaus (S189) sanotun

CDH1

muutoksia, mutta myös verrattuna yhden verenluovuttajana (S190), joilla on samat ID 17 variantti. Koska kaikki aineet kantavat ID 17 mutaation Heterotsygoottisesti varten

CDH1

geeni, meidän tiedot osoittivat, että S190 yksittäisiä, mutta ei tuumorisolujen S10 ja S46 potilaat voivat hyödyntää joitakin korvaavia mekanismi, joka ehkäisee E-kadheriinin alassäätöä. Kasvaimissa, E-kadheriinin ali-ilmentyminen on sidoksissa parantaa β-kateniinin transkriptionaalisen aktiivisuuden, joka on pääasiallinen efektori Wnt-reitin [49]. Ilmentymisen suuri määrä geenejä, jotka liittyvät kasvaimen etenemiseen, mukaan lukien sykliini-D1, c-

myc

, endoteelikasvutekijä, ja surviviini ohjataan Wnt /β-kateniinin reitin [50]. E-kadheriinin sitoutuminen P-kateniinin estää sen translokaatio tumaan; vastaavasti, vähentäminen E-kadheriinin ilmentyminen voi suosia GC synnyssä kautta lisääntynyt ydinvoiman β-kateniinin kerääntyminen. Koska potilaat S10 ja S46 kanssa ID17 muunnos molemmat naiset osoittavat Helicobacter pylori (HP) infektio, oletamme, että tunnus 17 saattaa liittyä sukupuoleen erityinen ennustetekijä (on hyvin tiedossa, että esiintyvyys GC on suurempi miehillä kuin naisille) ja /tai HP infektio. Deleetio eksonista 11.

CDH1

geeni myös kuvattu HDGC potilaalla, mutta tässä viimeksi mainitussa tapauksessa poikkeava liitos liittyi eri introni mutaatio (IVS11 c.1711 + 5G A) [27] .