Krooninen sairaus

tiivistelmä

kasvutekijän reseptorin monoklonaalinen vasta-aine on hyväksytty metastasoituneen kolorektaalisyövän potilaat kuljettavat KRAS villityypin DNA. Kuitenkin viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että potilailla, joilla KRAS G13D Mutaatio voi hyötyä EGFR-vasta-aine-hoidon. Tässä tutkimuksessa yritimme tutkia, runsaasti KRAS mutaatio voi vaikuttaa tehoon EGFR vasta-hoidon. Olemme ensinnäkin perustettiin PNA-PCR-menetelmän, joka voisi laskea prosenttiosuuden KRAS-mutaation kokonais-DNA ja osoittanut kykynsä 47 kolorektaalisyöpä näytteitä otetaan KRAS mutaatioita. Sitten analysoimme korrelaation runsaasti KRAS mutaatioiden ja tehoa EGFR vasta-hoidon toisessa 35 metastasoituneen kolorektaalisyövän potilaalla. Olemme osoittaneet, että PNA-PCR-määritys voi laskea runsaasti KRAS-mutaatio ja prosenttiosuus mutantti-DNA kasvainsoluissa vaihteli paljon (10,8% ~98.3%) on 47 peräsuolen syöpäpotilailla. Teho EGFR-vasta korreloi runsaasti KRAS mutaatiot: KRAS mutaatio alle 30% ryhmästä, taudintorjuntatoimia oli 44,4% (4/9); taudintorjuntatoimia osuus 30~80% ryhmässä oli 5,6% (1/18) ja 80% ryhmässä oli 12,5% (1/8) (P = 0,038). Yhteenvetona Tutkimuksemme osoitti, että PNA-PCR-menetelmällä voisi helposti havaita prosenttiosuus KRAS mutaatio kasvainsoluissa ja peräsuolen syövän potilaille, joilla on alhainen runsaasti KRAS mutaatio saattaisi hyötyä EGFR vasta-terapia.

Citation: Yu S, Xiao X, Lu J, Qian X, Liu B, Feng J (2013) peräsuolen syövän Potilaat, joilla alhainen runsaus KRAS mutaatio voivat hyötyä EGFR Antibody Therapy. PLoS ONE 8 (7): e68022. doi: 10,1371 /journal.pone.0068022

Editor: Ramon Andrade de Mello, Lääketieteellinen tiedekunta, Porton yliopisto, Portugali

vastaanotettu: 01 helmikuu 2013; Hyväksytty: 24. toukokuuta 2013 Julkaistu: 09 heinäkuu 2013

Copyright: © 2013 Yu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Työ tukivat Wu Jieping Medical Foundation (320.6700.09050), https://www.wjpmf.org/. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

epidermaalisen kasvutekijän reseptorin (EGFR) monoklonaalinen vasta-aine on hyväksytty metastasoituneen kolorektaalisyövän potilaalla ei ole KRAS mutaatioita. KRAS mutaatiot on kuvattu esiintyvän noin 40% paksusuolen ja peräsuolen syövän ja useimmat niistä (90%) esiintyy kodonissa 12 ja 13 [1], [2]. Useat faasin II ja III kliinisissä tutkimuksissa ovat osoittautuneet puute vastaus EGFR hoitoa läsnäollessa KRAS mutaatioiden [3], [4], [5]. Nämä tulokset johtivat Euroopan lääkeviraston ja Food and Drug Administration rajoittamaan EGFR hoitoa vain potilaille kuljettavat villityypin KRAS kasvainten vuonna 2009 [6].

Kuitenkin viimeaikaiset tutkimukset osoittivat, että KRAS G13D-mutaatio ja kodonin 12 mutaatiota todellisuudessa ole samanlaisia ​​ennustaa kliinisiä tuloksia anti-EGFR-hoidon metastaattisessa kolorektaalisyövässä (metastasoitunutta kolorektaalisyöpää) potilasta [7], [8]. Potilaat kuljettaa KRAS G13D mutaatio saisivat kuitenkin Setuksimabihoitoa [9]. Monimuuttuja-analyysissä, potilailla, joilla on G13D-mutaatio kasvaimia Setuksimabihoitoa saaneilla oli pidempi kokonaiselinaika (mediaani, 7,6 kuukautta vs 5,7 kuukautta) ja pidempi ilman taudin etenemistä (mediaani, 4,0 kuukautta vs 1,9 kuukautta) kuin muut KRAS mutantti kasvaimissa [10]. Useita meta-analyysi sai myös samankaltaisia ​​tuloksia [7], [11]. Muu kuin, että yhdistetyssä analyysissä kolme kokeet osoittivat, että tietty mutaatio KRAS kodonissa 12 oli myös erilainen vaikutus hoidon tehoon kolorektaalisyövässä potilaiden ja kasvaimen varustettujen KRAS G12D-mutaatio osoitti vahva trendi suotuisampaa tulos verrataan muihin kodonissa 12 mutaatiot [12]. Kaikki nämä tutkimukset osoittivat meille, että kaikki KRAS mutantti kasvaimet olivat resistenttejä anti-EGFR-hoitoa. Kuten tutkimukset jatkui, se ei riittänyt karkeasti erottaa potilaille, joilla KRAS-mutaatio asema.

Koska kasvain oli suuri heterogeenisyys, eri kasvain kudosten voi olla myös vaihteleva runsaasti KRAS mutantti syöpäsoluja. Koska jokainen seulonta menetelmä oli sen herkkyys, kun kasvaimen KRAS mutaation suhteessa pienentää jossain määrin, tämä kasvaimen näyte voidaan tunnustetaan KRAS villityypin. Kun yhä useammat erittäin herkkä seulontamenetelmiä on vahvistettu, lisää kasvain näytteet luokitellaan KRAS mutantti ne [13], [14]. Emme vielä tiedä, ovatko nämä näytteet ovat resistenttejä EGFR-vasta-terapia. Tässä tutkimuksessa olemme arveltu runsaus KRAS mutaatio voi vaikuttaa tehokkuuteen EGFR hoitoa. Oikeastaan, samanlainen meidän hypoteesia, vuonna 2011, Zhou et al havaitsivat, että korkea runsaasti EGFR mutaatioita oli objektiivisen vasteen kuin vähäisessä määrin ei-pienisoluinen keuhkosyöpä käsitelty gefitinibin [15].

esitämme entinen tutkimuksessa olemme perustaneet PNA-PCR (peptidinukleiinihappoja-PCR) menetelmä, joka voisi estää monistuminen KRAS villityypin DNA. Tässä tutkimuksessa ensin muokannut PNA-PCR tapa varmistaa, että se voisi täysin tukahduttaa monistamiseen KRAS villityypin DNA: n ja vahvisti sen tukahduttaminen kyky 47 kasvainnäytteestä laakeri KRAS mutaatioita. Sitten määrällisesti ja laskea osuus KRAS mutantti-DNA kasvainkudoksissa ja totesi, että osuus vaihteli paljon. Lopuksi vertasimme suhde KRAS mutaatio runsautta ja tehokkuutta setuksimabia toisessa 35 metastasoitunut kolorektaalisyöpä potilailla.

PNA-PCR-menetelmällä on perustettu ennen laboratoriossamme [16], ja tässä tutkimuksessa teimme pieniä säätöjä, jotta varmista, että se voisi mitata ja laskea osuus KRAS mutantti-DNA. Tämä menetelmä voi lisätä KRAS mutantti-DNA yksinomaan ja voi mitata KRAS mutantti-DNA samanaikaisesti. Samaan aikaan, voimme myös määrällisesti määrän kokonais-DNA (sekä KRAS mutantti ja KRAS villityypin DNA) kirjeitse kvantitatiivinen PCR (PCR ilman PNA). Sitten voimme helposti laskea prosenttiosuuden KRAS mutantti-DNA yhteensä DNA.

Materiaalit ja menetelmät

Solulinjat ja Potilaat

Colon sinoomasolulinjoja SW480 ja SW116 (hankittu BIOK KM, Kiina) käytettiin tässä tutkimuksessa. Solulinja SW480 sisältää homotsygoottinen KRAS kodonin 12 mutaatio (GGT → GTT) ja SW116 satamat villin tyypin KRAS-geeniä. Kaikkiaan 47 kolorektaalisyövän potilaiden FFPE yksilöitä, joiden KRAS asema oli osoittautunut mutantti joko KRAS kodonissa 12 tai kodonissa 13 saatiin Tornissa Hospital marraskuusta 2008 joulukuuhun 2010. Toinen 35 peräsuolen syövän potilaille, joilla KRAS-mutaatio kerättiin Jiangsu Cancer sairaalan vuodesta 2006 vuoteen 2010. Eri potilailta ennen, kaikki nämä 35 potilasta sai setuksimabia hoitoa. Tietoon kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta ennen hoidon aloittamista. Kaikki hoito tehtiin hoitavan lääkärin ennen tutkimuksen suunnittelu. Tutkimuksen hyväksyi institutionaalisten eettinen komitea sairaaloiden (eettinen komitea Rumputorni sairaalan ja eettisen komitean Jiangsu Cancer sairaala) ennen tätä tutkimusta tehtiin.

DNA uutetaan SW480, SW116 ja FFPE kudokset

Kun manuaalinen macrodissection of FFPE kudoksia, hematoksyliinillä ja eosiinilla värjättyjen osat FFPE kudoksen tarkisti kolmea kokenutta patologit arvioida runsaasti syöpäsoluja. Yksityiskohtainen arviointimenetelmä on kuvattu aiemmin [17]. Näytteen kasvainsolujen osuus on keskiarvo arvoista, jotka saatiin kolmella patologit. Genominen DNA eristettiin FFPE näytteistä, SW116 ja SW480: n kanssa palauttaa kaikki yhteensä nukleiinihapon eristäminen kit (luettelonro. AM1975, Ambion) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Negatiivinen kontrolli suoritettiin tutkia saastumisen mahdollisuus. DNA pitoisuudet määritettiin UV (260 nm) spektrofotometrillä.

PNA-PCR Plus pyrosekvensointi

PNA-PCR ja pyrosekvensointi olosuhteet on kuvattu aikaisemmin lukuun ottamatta PCR Master Mix [16]. Lyhyesti, PCR master mix sisälsi lopulliset pitoisuudet reagenssien seuraavasti: 1 x SYBR Esiseos Ex Taq Mix (TaKaRa, koodi DRR041A), 0,15 umol /L eteenpäin ja reverse-alukkeita, 0,5 umol /l PNA ja tietyn määrän DNA: ta. PNA-sekvenssi oli 5′-CCTACGCCACCAGCTCC-3 ’. Forward-aluketta sekvenssi oli 5’-GCCTGCTGAAAATGACTGAATATAA-3 ’ja käänteinen aluke oli 5′-biotiini-CGTCAAGGCACTCTTGCCTAC-3’. Lämpövuorottelu suoritettiin käytettäessä Mx3000P (Stratagene) reaaliaikainen PCR-ohje ja sykliolosuhteet olivat seuraavat: 98 ° C 30 s ja sitten 40 sykliä 98 ° C: ssa 10 s, 72 ° C: ssa 10 s, 62 ° C 20 s ja 72 ° C: ssa 20 s. Pyrosekvensointi suoritettiin pyrosekvensointi PSQ96 HS System (Biotage AB). Sekvenssi pyrosekvensointi aluke oli 5′-TGTGGTAGTTGGAGCT-3 ’. Nukleotidin erivapaus järjestys oli syklinen TACG 5 ’3’.

Potilasjoukko ja Hoito-ohjelmat

takautuvasti analysoitiin 35 potilasta, joilla on histologisesti vahvistettu metastasoitunutta kolorektaalisyöpää kanssa KRAS mutaatio vuodesta 2006 vuoteen 2010. Kaikki kasvaimet olivat peräsuolen adenokarsinoomat. Potilaat antoivat tietoisen kirjallisen suostumuksen ja hoidettiin setuksimabia tai ceruximab-pohjaiset hoidot. Setuksimabia annosteltiin yksittäisenä aineena tai yhdistelmänä kemoterapian perustuva hoito samalla annoksella taudin etenemiseen saakka. Setuksimabia ylläpitäjä annoksella 250 mg /m

2 (aloitusannos oli 400 mg /m

2). Oli 28 potilasta, jotka saivat setuksimabia yksin. Oli 4, jotka saivat 5-Fu hoito plus Setuksimabihoitoa epäonnistumisen jälkeen 5-Fu hoito. Toinen 3 potilasta sai irinotekaani, 5-Fu ja setuksimabihoito jälkeen tauti etenemistä irinotekaani plus 5-Fu terapia.

Kliininen arviointi ja kasvaimen vasteen kriteerit

kliininen vaste arvioitiin 2 kuukauden välein by tietokonetomografia (CT) skannaus rintakehän ja vatsan ja /tai magneettiset vaste scan (MR). Response arviointiperusteet kiinteä kasvain (RECIST) versio 1.0 otettiin kliiniseen arviointiin. Mukaan RECIST versioon 1.0, täydellinen vaste (CR) määriteltiin katoavat kokonaan tavoite vammat; osittainen vaste (PR) oli vähintään 30%: n lasku summasta pisimmän halkaisijan (SLD) kohde vaurioiden ottaen vertailukohdaksi lähtötilanteessa SLD; etenevä sairaus (PD) oli vähintään 20% lisäys SLD kohde vaurioita, kun vertailukohdaksi pienin SLD ollut sitten hoidon aloittamista; vakaa tauti (SD) ei ollut riittävä lasku SLD saada PR eikä riittävää lisäystä SLD saada PD. Kaksi onkologit ja radiologeja todentaa kliinisen vasteen kaikkien potilaiden pidennetyn tavalla.

Tilastollinen analyysi

Potilaat, joilla on CR, PR ja SD määriteltiin potilailla, joilla on taudin torjuntaa ja sairaat ohjaus oli lasketaan määrä tautien valvontaa potilaan /lukumäärän kaikilla potilailla. Chi-square suoritettiin vertaamaan taudin valvonnan määrä eri ryhmien 35 peräsuolen potilailla. Chi-square suoritettiin SPSS 16.0. P-arvo on 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

validointi PNA-PCR menetelmä Solulinjoihin

Huomasimme, että kun lisäsimme 100 ng KRAS tyyppinen DNA PNA-PCR-määritys, PNA hillitsevän monistuminen villityypin DNA: ta. Tämä tukahduttaminen ei ollut täydellinen ja vakaa toistuvan testien (Fig. 1A). Kuitenkin, kun lisäsimme 100 ng KRAS villityypin DNA: ta ja 0,01 ng KRAS mutantti-DNA: PNA-PCR-määritys, KRAS villityypin DNA voi olla täysin ja pysyvästi tukahdutetaan ja vain KRAS mutantti-DNA: ta monistettiin vahvistamisen jälkeen pyrosekvensointi (Fig. 1B), joka osoitti, että jopa mutantti-DNA oli harvinaista verrataan villin tyypin, PNA määritys edelleen monistaa mutantti-DNA yksinomaan ja tämä vahvistus voisi auttaa tukahduttaa villityyppisen DNA vahvistusta kokonaan.

(A) on ovat villin tyypin PCR-tuotteet lisätessä 100 ng KRAS villityypin DNA PNA-PCR. (B) on vain KRAS mutantti PCR-tuotteita, kun lisätään 100 ng villityypin DNA: ta ja 0,01 ng KRAS mutantti-DNA.

Jotta varmistaa vakautta määrityksen, me vähensi villityypin DNA: n 10 ng lisätään määrityksessä ja havaittiin, että PNA voisi täysin ja pysyvästi tukahduttaa monistuminen villityypin DNA: han jopa ilman KRAS mutantti-DNA (ei PCR-tuotteet, vahvistus geelielektroforeesilla ja pyrosekvensointi, tietoja ei ole esitetty ). Siksi seuraavassa kokeessa, me kontrolloi DNA lisätään määrityksessä enintään 10 ng.

validointi PNA-PCR menetelmä syövän Potilaan kasvain Kudokset

Yhteensä 47 peräsuolen syöpäpotilaiden vahvistettiin kuljettaa KRAS mutaation COLD-PCR /Sangerin sekvensoinnin [17]. Kaikkiaan oli 15 G12D, 13 G12V, 13 G13D, 2 G12S, 2G12A, 2G13R ja 1G12C KRAS mutaatioita (yksi potilas kantaa kahdenlaisia ​​KRAS mutaatioita). Prosenttiosuus kasvaimen solun FFPE näytteiden lueteltu taulukossa 1. Ei enemmän kuin 10 ng DNA: ta FFPE näytettä lisättiin PNA-PCR-määritys, ja PCR-tuotteet sekvensoitiin pyrosekvensointi. Kuten odotettua, PNA-PCR-määritys monistettu KRAS mutantti-DNA yksinomaan. Kuvio 2 osoittaa, että ei villityyppisen DNA monistettiin PNA-PCR-määrityksen.

Tuumorikudos sisältää GGT → GCT mutaatio. B Tuumorikudos sisältää GGT → GAT-mutaatio. C Tuumorikudos sisältää GGC → GAC mutaatio.

Tunnista ja Lasketaan KRAS DNA

Ennen ilmaisemiseksi prosenttiosuutena mutantti-DNA kasvainkudoksen, analysoimme standardikäyrää PNA-PCR-määritys ja löysi regressiosuoraa oli lineaarinen (kulmakerroin = -3,25; r = 0,977) välillä 0,02-10 ng KRAS mutantti-DNA (Fig. 3), mikä tarkoittaa tässä analyysissä voisi määrällisesti KRAS mutantti-DNA.

Vaihtelevia määriä KRAS mutantti-DNA piirrettiin Ct-arvoja (kynnys sykli). Slope, r arvo ja regressiolinjan näkyvät.

Ei enempää kuin 10 ng DNA FFPE kudoksesta (2 ui) lisättiin PNA-PCR-määritys ja säännöllinen PCR (ilman PNA) vastaavasti (kaikki reaktiot suoritettiin kolmena kappaleena). Yksi näytteen kokonais-DNA ja KRAS mutantti-DNA voidaan lukea standardikäyrää. DNA-määrä säännöllisesti PCR oli kokonais-DNA kuten kaikenlaisia ​​DNA voidaan yhtä monistettiin ja DNA määrä PNA-PCR-määritys KRAS mutantti-DNA: ta, villityypin yksi ei täydentää tässä määrityksessä. Prosenttiosuus KRAS mutantti-DNA laskettiin määrä KRAS mutantti-DNA /määrä kokonais-DNA. Prosenttiosuus KRAS mutantti-DNA-kasvainsoluissa laskettiin prosenttiosuutena KRAS mutantti-DNA: ta kokonais-DNA /osuus kasvainsolujen kasvainkudoksessa. Prosenttiosuus mutantti-DNA-kasvainsoluissa vaihteli 10,8%: sta 98,3% (taulukko 1). Kaikkiaan oli 10 näytettä, jotka sisältävät mutantti-DNA alle 30%, 27 näytettä 30%: sta 80% ja 10 näytettä yli 80%.

Suhteellinen KRAS Mutaatio tuumorisoluissa ja korrelaatio Response

Potilaan ominaisuuksista ja prosenttiosuus KRAS mutaatio kasvainsoluissa on lueteltu taulukossa 2. osuus osittainen vaste oli 2,9% (1/35), stabiili tauti 14,3% (5/35) ja etenevä sairaus 82,9% ( 29/35). Korrelaatio prosenttiosuus KRAS mutaatio kasvainsoluissa ja tautien torjunta oli lueteltu taulukossa 3. Kaikkiaan KRAS mutaatio alle 30% ryhmän taudin kontrolli oli 44,4%; taudintorjuntatoimia osuus 30~80% ryhmässä oli 5,6% ja 80% ryhmässä oli 12,5% (p = 0,038). Oli arvoinen huomata, että 80% ryhmän potilaalla, joilla oli stabiili tauti sisältää G13D mutaation. Tässä tutkimuksessa vastausprosentti oli 18,5% (5/27) KRAS 12 kodonin mutaatiot ja 12,5% (1/8) KRAS G13D-mutaatio (taulukko 4). Emme havainneet, että potilailla, joilla KRAS G13D-mutaatio oli parempi vaste (taulukko 4).

Keskustelu

Tämä tutkimus osoitti, että PNA-PCR menetelmä voisi mitata ja laskea KRAS mutaatio n runsaasti syöpäsoluja. Sikäli kuin tiedämme, olemme ensinnäkin osoitti, että alhainen runsaasti KRAS-mutaatio ( 30%) saattavat myös hyötyä anti-EGFR hoito metastasoituneen kolorektaalisyövän potilaalla. Koska aiemmat tutkimukset kyse ainoastaan ​​siitä, onko mutaatio oli positiivinen, tutkimuksemme paljastanut uuden tutkimuksen käsite EGFR vasta-terapia.

Tässä tutkimuksessa oli 7 potilasta hoidetaan sekä setuksimabia ja kemoterapiaa. Kuitenkin kaikki nämä 7 potilaat saivat setuksimabia epäonnistumisen jälkeen alkuperäisen kemoterapiaa. Siksi me yleensä sitä mieltä, että potilaiden hoitovaste lähinnä vaikuttanut setuksimabia. Vaikka oli tutkimuksissa osoitettu, että potilailla, joilla KRAS G13D-mutaatio osoitti vahva trendi suotuisampaa tulos verrataan kodonin 12 mutaatiota, emme onnistuneet tarkkailla tätä tutkimuksessamme mahdollisesti siksi, että rajoitettu määrä potilaita tässä tutkimuksessa.

Tuloksemme osoittivat, että prosenttiosuus KRAS mutantti-DNA-kasvainsoluissa vaihteli 10,8%: sta 98,3% ja tämä jakauma oli jatkuvaa. Kuten odotimme, potilaat laakeri vähäisessä määrin (alle 30%) KRAS-mutaatio oli korkeampi taudin tarkastusmäärin setuksimabista kuin muissa ryhmissä (44,4% 30% vs 5,6% 30~80% ryhmässä ja 12,5% 80% ryhmässä, P = 0,038). Jos me sulkea pois taudin valvonnan potilas kuljetti G13D mutaatio 80% ryhmässä, suuntaus, että alhaiset runsaus oli korkeammat tautien torjuntaan oli selvempi.

Vaikka suora Sangerin sekvensoinnilla pidettiin perinteinen toteutustapa seulonta KRAS mutaatiot, enemmän ja enemmän korkea herkkyys menetelmiä, kuten COLD-PCR, ARMS, mutantti-rikastettu PCR, kilpailukykyinen monistus erilaisesti sulaminen amplikonien (CADMA) [18], [19], [20], [21] sovellettaisiin screen KRAS mutaatioita. Nämä menetelmät avustaa meitä löytämään lisää KRAS mutantti näytteitä. Kuitenkin myös nämä näytteet voivat hyötyä anti-EGFR hoito on edelleen tuntematon. Tutkimuksemme osoitti, että nämä näytteet on alhainen runsaasti KRAS mutaatiot voisivat hyötyä EGFR vasta-terapia.

Miksi kasvain alhainen runsaasti KRAS mutaatio yleensä vastauksena EGFR vasta-hoito? Yksi mahdollinen selitys oli, että kasvainsolut oli suuri heterogeenisyys. Kun KRAS mutantti kasvainsolut olivat vähemmistö, suurin osa KRAS villityypin kasvainsoluja voitaisiin myös tappoi EGFR-vasta-hoitoa ja tässä prosessissa syöpäpotilailla voisi näyttää suhteellisen pitkän aikaa stabiili tauti tai jopa osittainen vaste. Koska hoito jatkuu, yhä useammat KRAS villityypin kasvain on pyyhitty pois, runsaasti KRAS mutaatio tulee suurempi ja potilaat on yleensä etenemistä sairaus ja tulevat vastustuskykyisiksi EGFR vasta-terapia.

Nämä voisivat myös miksi EGFR-vasta-hoito on aluksi tehokas useimmille KRAS villityypin syöpäpotilaille ja sitten losts sen tehokkuutta hoito jatkuu. Tuore artikkeli julkaistiin

Nature

todettu, että 60% potilaista, joille kehittyi vastustuskyky EGFR-vasta hoitoon osoitti hankinnan johdetun KRAS mutaatioita [22]. Meillä on taipumus uskoa, että tämä ”toissijainen” KRAS mutaatio todella olemassa primaarikasvaimen kudoksissa. Koska kasvainsolut sisältävät tämän mutaation oli liian vähän, emme voineet havaita niitä ennen hoitoa. Koska hoito jatkui osuus kasvainsolujen mukauttaa vuoden hoidon paineen. Tässä tilanteessa anti-EGFR-hoidon menetti tehokkuus ja ”sekundaarinen” KRAS mutaatioita voidaan myös helposti havaita.

Vielä tärkeämpää on, Misale et al havaitsivat myös, että KRAS Mutanttialleelit voitiin havaita veren anti- EGFR hoito potilailla jo 10 kuukautta ennen röntgenkuvissa dokumentointia taudin etenemiseen [22]. Toisin sanoen, vaikka KRAS mutanttialleelit on olemassa, potilaat voivat silti olla suhteellisen pitkä aika (10 kuukautta) ja stabiili tauti. Tämä artikkeli tulos osuu havaintomme ja osoittaa, että olemassaolo KRAS mutaatioita ei tarkoita täydellistä vastus.

Vaikka jotkut tutkijat olivat maksanut huomiota erottaa matalan ja korkean runsaasti EGFR-mutaatio äskettäin [15], meidän etu oli selvempi kuin meidän menetelmä voisi helposti ja tarkasti laskea tarkka prosenttiosuus KRAS mutanttialleelit. Tämä tarkka laskelma voi heijastaa prosenttiosuutta KRAS-mutaation objektiivisemmin ja auttaa muita laboratorio tarkistaa meidän päätellä helpommin.

Yhteenvetona Tutkimuksemme osoitti, että PNA-PCR-menetelmällä voisi helposti havaita prosenttiosuus KRAS mutaatio kasvainsoluissa . Kolorektaalisyöpä potilaalla on matala runsaasti KRAS mutaatio saattaisi hyötyä EGFR-vasta-hoidon ja lisätutkimusta tarvitaan useampia potilaita.