Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Kiertävä endoteelisolujen ja mikropartikkelien ennusteen arvioinnissa syövän, ja saattaa olla hoitovastetta ennustavat kemoterapiaa ja antiangiogeenisesti hoitoja. Olemme tutkineet ennusteen arvioinnissa verenkierrossa endoteelisolujen ja mikropartikkeleita saaneilla potilailla pitkälle ei-pienisoluinen keuhkosyöpä.

Menetelmät /Principal Havainnot

Oheislaitteet verinäytteitä saatiin 60 potilasta ennen ensimmäistä linja, platina kemoterapian +/- bevasitsumabi, ja sen jälkeen kolmannen syklin hoito. Verinäytteitä 60 tervettä vapaaehtoista saadaan myös kontrolleina. Kiertävä endoteelisoluja mitattiin immunomagneettisen tekniikalla ja immunofluoresenssimikroskoopilla. Fosfatidyyliseriini-positiiviset mikropartikkelit arvioitiin virtaussytometrialla. Mikrohiukkasen välittämä prokoagulanttiaktiivisuutta mitattiin Endogen trombiinin määrityksessä. Tulokset: ennen ja käsittelyn jälkeiset tasot markkereita oli suurempi potilailla kuin verrokeilla (p 0,0001). Kohonneita mikropartikkeleita liittyivät elinajan pitenemiseen. Kohonneet esikäsittely Veren endoteelisolujen liittyivät lyhyempi selviytymisen.

Johtopäätökset /merkitys

veressä mikropartikkeleita ja verenkierrossa endoteelisolujen korreloivat ennusteeseen, ja voisi olla käyttökelpoinen ennustetekijöitä merkkiaineita, jos potilaalla on Pitkälle edennyt ei-pienisoluinen keuhkosyöpä.

Citation: Fleitas T, Martínez-Sales V, Vila V, Reganon E, Mesado D, Martín M, et al. (2012) Circulating endoteelisoluissa ja mikrohiukkaset Prognostiset merkkiaineet in Advanced ei-pienisoluinen keuhkosyöpä. PLoS ONE 7 (10): e47365. doi: 10,1371 /journal.pone.0047365

Editor: Rossella Rota, Ospedale Pediatrico Bambino Gesu ”, Italia

vastaanotettu: 20 huhtikuu 2012; Hyväksytty: 11 syyskuu 2012; Julkaistu: 15 lokakuu 2012

Copyright: © Fleitas et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tuettiin osittain avustusta Fundación para la Investigación, sairaala Universitario La Fe – Bancaja. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Seuraavat teollisuuden: Roche Pharma, Amgen, Lilly, MSD, ja Bayer rahoittanut ostamiseen reagenssien ja palkata laborantti mukaisesti oikeudellisten menettelyn perusta sairaalan La Fe lahjoituksia, ilman minkäänlaista kiinnostusta tutkimuksen tulokset, ja ne eivät osallistuneet millään muulla näkökohta study.This ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

Keuhkosyöpä on yksi pahanlaatuisia kasvaimia korkein esiintyvyys maailmanlaajuisesti. Ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) edustaa yli 80% keuhkosyöpää, ja useimmat niistä ovat kehittyneet tai etäpesäkkeitä diagnoosin [1].

Platinum kemoterapian on vakiohoito kehittynyt keuhkosyöpä. Useita platina dubletti tällä hetkellä käytetään yhtä tehokas, mutta eri toksisuusprofiilit [2]. Edistyminen ymmärrystä syövän biologian ovat ajaneet kehittämään lääkkeitä määrätyiltä molekyylikohteista, kuten epidermaalisen kasvutekijän reseptorin (EGFR) ja endoteelikasvutekijä (VEGF) ja sen reseptorit (VEGFRs). Jotkut sytotoksiset aineet ja kohdennettuja lääkkeitä ovat turvallisempia tai tehokkaampia tietyillä histologisia alatyyppejä, jolloin syntyy lisää yksilöllisiä hoitoja [3]. Bevasitsumabi, humanisoitu vasta-aine VEGF, on osoittanut vaatimatonta kasvua ilman taudin etenemistä (PFS) ja kokonaiselossaoloaika (OS) NSCLC yhdistettynä kemoterapia. Kuitenkin sen käyttö on rajoitettu potilaille, joilla on ei-levyepiteelikarsinooma [4]. Näistä edistysaskeleista huolimatta vain murto-osa potilaista hyötyvät hoidosta ja useimmat heistä kuolevat 2 vuotta diagnoosin jälkeen. Näin ollen on olemassa tarve biomarkkerit, jotka sallivat tunnistaa potilaat, jotka ovat todennäköisesti reagoi hoitoon.

Circulating endoteelisoluja (KIE) ovat markkereita, verisuonten vauriot [5], jotka voivat olla kliinistä merkitystä syövän [6 ] – [7]. CEC määrä lisääntyy syöpäpotilailla [8] – [9] ja korreloi kasvaimen etenemiseen [10]. On ehdotettu, että määrällisesti KIE on hyödyllinen tunnistamaan potilaita, jotka hyötyisivät angiogeneesin estäjiä ja seurantaan hoitovasteen [11]. Kehittyneissä peräsuolen syövän potilaille, korkean perustason CEC määrä liittyy lyhyempi mediaani PFS [12] – [13]. Kuitenkin potilailla, joilla on rintasyöpä ja NSCLC, korkea lähtötason CEC määrä liittyy pitkittynyt PFS [11], [14].

Mikropartikkelit (kansanedustajaa) ovat pieniä vesikkeleitä (100 nm-1 um) joka suoraan lit solukalvon [15] – [16]. Ne vapautuvat eri solujen, kuten veren, endoteeli- ja kasvainsolut [16] – [17]. Altistuminen Fosfatidyyliseriinin ulkopinnan kalvo on erityispiirre kansanedustajien [18]; niiden läsnäolo lisää merkittävästi prokoagulanttiaktiivisuuden kansanedustajia edistämällä niiden osien hyytymiskaskadin. Lisäksi tuumorisolut tuottavat korkeudessa kansanedustajien ilmentävien kudostekijän [19] – [21], joka antaa heille prokoagulatiivinen potentiaalia [22]. Tässä suhteessa on raportoitu, että pitoisuudet kiertävässä kansanedustajat korreloivat Endogen trombiinin (ETG) [23]. Kansanedustajat lisääntynyt syöpäpotilailla ja niillä on rooli syövän liittyvä liikahyytymiskykyyn [20] – [21], [24] – [26]. Lisäksi päästöjen Mikrovesikkelien, kuten eksosomeiksi ja kansanedustajia, on tärkeä patologinen rooli syövän etenemiseen, helpottaa vapautumisen ja leviämisen syöpäsolujen tuottaa etäpesäkkeitä [27]. Kansanedustajat noudetaan ääreisverenkierron syöpäpotilaiden voidaan saada oleellista tietoa ennustetta ja hoitovastetta.

Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli arvioida KIE-maiden, kansanedustajat ja MP-välitteisen hyytymistekijäesiasteaktiivisuuden potilailla, joilla on kehittynyt NSCLC, ennen ja kun tavanomaisen kemoterapian, analysoida ennusteen arvioinnissa sekä vahvistaa niiden mahdollista yhteyttä tuumorivaste.

Materiaalit ja menetelmät

Tutkimusasetelma ja potilaat

Tämä ennakoiva tutkimus mukana peräkkäistä potilasta NSCLC hoidettiin Medical Oncology Department of La Fe yliopistollisen sairaalan kanssa ensilinjan kemoterapia platinapohjaisen dupleteiksi. Bevasitsumabi lisättiin hoitoon, kun ilmoitettu. Jotta sisällytetään tutkimuksessa potilaat saivat täytettävä seuraavat kriteerit: ikä 18 vuotta; IIIB tai vaihe IV histologisesti varmennettu NSCLC; elinajanodote ≥12 viikkoa; ECOG Performance Status (PS) ≤2 ja riittävä munuaisten, maksan ja luuytimen toiminta.

Staging määritettiin rinnan ja vatsan tietokonetomografia (CT) ja rungon protonien emissiotomografisen (PET) skannaus. Kolmen viikon kuluttua kolmannen syklin hoito, CT-pohjainen kliinisen Arviointi tehtiin käyttämällä Response arviointiperusteet kiinteitä kasvaimia (RECIST) [28]. Hoidon jälkeen potilaiden arvioitiin kolmen kuukauden välein. Veren biomarkkerit arvioitiin lähtökohtana ja kolmen viikon kuluttua kolmannen syklin hoito. Vertailuryhmä koostui terveillä henkilöillä vastinetta sukupuolen ja iän kanssa potilailla. Potilaiden ja verrokkien edellyttäen kirjallinen lupa. Tutkimus hyväksyi institutionaalisten Biomedical Research eettisen komitean.

biomarkkereiden Arviointi

Verinäytteet saatiin cubital ei-traumaattinen vein punktio, ja kerättiin Vacutainer ™ muoviputkiin (BD Diagnostic) kanssa kaksi eri antikoagulantit: K3 EDTA (4,3 mg) ja KIE-maissa ja natriumsitraatti (129 mM) suhteessa 01:09 (v /v, natriumsitraatti /veressä) kansanedustajille ja ETG. Näytteitä pidettiin 4 ° C: ssa ja käsitellään välillä 2 ja 4 tuntia sen jälkeen, kun kokoelma. Sitraatilla verinäytteitä sentrifugoitiin 1500 x g 30 minuutin ajan 4 ° C: ssa, jolloin saatiin verihiutaleiden plasmaa, ja sitten säilytettiin -80 ° C: ssa, jotta myöhemmin erän analyysiin.

kvantifiointi Yhteensä Mikropartikkelit

Plasma näytteet, joissa MP suspensiot analysoitiin virtaussytometrialla. Anneksiini V-FITC konjugaatteja käytettiin havaitsemaan helposti fosfatidyyliseriinin MP kalvoja. Kymmenen ui jäädytettyä plasmaa näytteet laimennettiin 500 ul: aan HEPES-puskuria, joka sisälsi 2,5 mM CaCl

2 (pH 7,4). Näytteitä inkuboitiin 60 minuuttia 4 ° C: ssa pimeässä 1 ui FITC-anneksiini V (TACS anneksiiniV, Trevigen Inc). Osto tapahtumista oli määrällisesti EPICS XL sytometrillä (Beckman Coulter) suurella virtausnopeudella 2 minuuttia, jonka aikana 325 ui tätä suspensiota analysoitiin. Standard fluoresoivia helmiä erikokoista käytettiin koko kalibrointiin (0,5-3,0 mikronia, Megamix, BioCytex) ja asettaa portille MP detektio halkaisija 0,5-1 um jälkeen yksimielisyys suuntaviiva MP mittaus [29]. Koko kansanedustajat korreloi sirontamittari (FS) ja niiden rakeisuus kanssa sivusirontavirtaussytometriaa (SS) parametreja. Lukemiseksi kanavat FS, SS ja fluoresenssi oli asetettu logaritminen vahvistus. Rajoittamiseksi taustamelu pölyltä ja kiteet, kaikki laimennus puskurit suodatettiin käyttäen 0,22 um suodattimien (Millipore). Erottamaan kansanedustajat tapahtumista melun, kansanedustajat tunnistettiin hiukkasia 0,5 ja 1,0 mm halkaisijaltaan, ja positiivisesti värjättiin anneksiini V MP suspensiona plasma valmistettiin ilman kalsiumia negatiivisena kontrollina. Määrä FITC-anneksiini V positiivinen kansanedustajat laskettiin ja ilmaistiin tapahtumaa kohti ui plasmaa.

trombiinintuoton Mittaukset

ETG määritykset suorittaa arvioida in vitro trombiinin tuotantokapasiteettia plasman käyttämällä kalibroitua automatisoitua Thrombogram (CAT, Thrombinoscope BV). Kahdeksankymmentä ui jäädytettyä plasmaa näytteet jaettiin 96-pyöreät-pohjaisilla mikrotiitterilevyillä (Greiner Bio-One, ref650061, USA). Kukin näyte vaatii kaksi kaivot. Kaksikymmentä ui standardia trombiinin calibrator (TS20.00 Thrombin kalibraattori, Thrombinoscope BV) lisättiin yhteen kuoppaan, ja 20 ui fluorogeenisen trombiinisubstraattia kalsiumia (TS50.00 Fluka Kit Thrombinoscope BV) lisättiin sekä kuoppiin aloittaa ETG jatkuvalla verrattuna trombiinin kalibraattorin reagenssia. Trombiiniaktiivisuuteen mitattiin fluoresenssia Fluoroskan Ascent lukija fluorimetriä (Thermo Labsystems) varustettu 390/460 suodatin asetettu. Eksogeenistä kudostekijän tai fosfolipidit lisättiin. Trombiinin laskettiin käyttäen Thrombinoscope ohjelmiston ja tulokset ilmaistiin trombiinin huippu (nM) (korkeus käyrä).

kvantifiointi Circulating endoteelisoluja

eristäminen ja kvantifiointi KIE oli suoritetaan kokoverestä jota immunomagneettisen tekniikalla jälkeen yksimielisyyteen protokollaa [30]. KIE eristettiin kokoverestä 4 ° C: ssa PanMouse M450 Dynabeads (Dynal, Oslo, Norja), päällystetty sendo1 (Biocytex, Marseille, Ranska), joka on monoklonaalinen vasta-aine vastaan ​​endoteelin antigeeniä CD146. Välttää ei-spesifinen sitoutuminen leukosyyttien CD146 päällystettyjä helmiä, soluja inkuboitiin sen jälkeen, kun immu- eristämisen FITC-leimatun piikkiherne lektiini-1, (UEA1) (Sigma Aldrich, Inc.) 1 tunnin ajan pimeässä, mikä vahvistaa endoteelin luonne eristettyjä soluja. Näytteet pestiin ja suspendoitiin puskuriin, ja solut laskettiin fluoresenssimikroskopiaa käyttäen Nageotte kammioon. Tumalliset solut 10 mikrometriä pitkiä, yli viisi immunomagneettisia palloja kiinni ja positiiviset UEA1 värjäytyminen katsottiin KIE. Ryhmittymiä laskettiin yhdeksi solu. Määrä KIE ilmaistiin solua ml verta. Toistettavuus testattiin suorittamalla kuusi rinnakkaista kymmenen eri näytettä.

Tilastollinen analyysi

Tulokset annetaan keskiarvoina ± standardipoikkeamaa (SD) jatkuvien muuttujien, ja prosentteina kategorisen muuttujia. Kolmogorov-Smirnov-testiä käytettiin sen arvioimiseksi, onko kunkin parametrin seuraa normaalijakaumaa. Varianssianalyysi (ANOVA) kanssa Bonferronin post hoc analyysiä käytettiin arvioimaan markkeritaso eroja näytetyypeillä (ohjaus, esikäsittely tapauksissa ja jälkikäsittely tapausta). Kahden muuttujan korrelaatio tehtiin käyttäen Spearmańs korrelaatiota testin. OS ja PFS analysoitiin avulla Kaplan-Meyer menetelmällä, ja eloonjäämiskäyristä alaryhmien verrattiin käyttäen log-rank-testi. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin SPSS tietokoneohjelmiston, versio 15.0 for Windows (SPSS Inc., Chicago, Ill, USA). Todennäköisyys arvot 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Potilastiedot, Hoidot ja tulos

Tammi 2009 syyskuussa 2010 kuusikymmentä potilasta ja kuusikymmentä terveillä henkilöillä oli mukana. Taulukossa 1 esitetään yhteenveto kliinisen ominaisuudet tutkimusryhmän. Hoidot potilaiden saama on kuvattu taulukossa 2. Merkittävin hoitoon liittyvän toksisuuden oli hematologisia, 15% luokan 3-4 neutropeninen kuume, ja kaksi kuolemantapausta tästä syystä (molemmat potilaat saivat sisplatiinia + doketakseli). Vain 2 potilasta esittelyyn verisuonitukoksen hoidon aikana: yksi potilas, jolla tromboembolismilta, ja yksi potilas, jolla syvä laskimotukos (molemmat potilaat saivat sisplatiinia + doketakseli). Kaksi potilaista, joilla on vaikea keuhkojen verenvuoto, yksi heistä liittyvien bevasitsumabi. Tehokkuuden osalta, yli puolet potilaista objektiivisen vasteen (58,3%). Mediaani PSF oli 10 kk (95% CI, +7,9-12kuukausi) ja mediaani oli 11 kuukautta (95% CI, 8,8-13,1kuukautta). Vain 36 potilasta oli elossa tuolloin sovittu toinen veren poistoon.

Kiertävä Marker Tasot ja Korrelaatiotutkimus

Tasot KIE-maiden, kansanedustajien ja ETG potilailla ja valvonta on esitetty taulukossa 3. keskimääräiset tasot KIE-maiden ja kansanedustajat olivat merkittävästi korkeampia (P 0,0001) potilailla verrokkeihin nähden. Ei kuitenkaan ole merkittäviä eroja ei havaittu ennen ja käsittelyn jälkeiset tasot KIE-maiden ja kansanedustajat. Tasot ETG nosti merkittävästi potilailla, ainoastaan ​​esikäsittelyä näytteistä (P 0,01).

väliset korrelaatiot Veren markkereita osoitti, että MP tasot korreloivat positiivisesti ETG tasoilla sekä ennen (Spearman r = 0,60, P 0,001) ja käsittelyn jälkeen (Spearman r = 0,68, P 0,001).

kiertävä merkkiaineet ja kliinistä hyötyä

analyysi yhdistysten välillä kiertävän markkereita ja kliinisten tulosten osoittivat että pohjapinta kansanedustajat tasot 3278 MP /ul (vastaten 99

persentiilin kontrolleissa) liittyi parempi PFS (15 vs. 9 kuukautta; p = 0,04) ja OS (16 vs. 10 kuukautta, p = 0,04) . Mitään tällaista yhdistys ei löytynyt KIE tai ETG (taulukko 4). Lisäksi pohjapinta tasoilla KIE 152 solua /ml (vastaten 75

persentiilin potilailla) on liitetty huonompi OS (16 kuukautta vs. 9 kuukautta vastaavasti; Log listalla 4,3; p = 0,04) (kuvio 1 ).

ylimpään raja laskettiin arvot KIE 152 solua /ml (vastaten 75

persentiili potilaan ryhmä) KIE: verenkierrossa endoteelisolujen.

keskustelu

tulokset nykyisen tutkimuksen osoittavat, että CEC, MP, ja ETG tasot ovat koholla potilailla, joilla on NSCLC verrattuna terveisiin verrokkeihin. Kemoterapia ei muuttanut määriä näitä markkereita. Olemme myös löytäneet yhdistyksen välillä korkea MP tasolla, sekä ennen ja jälkeen hoidon, ja selviytymistä. Lisäksi olemme havainneet yhdistyksen välillä esikäsittely tasojen KIE-maiden ja selviytymistä.

Tuloksemme osoittavat yhdistyksen välillä korkea esi- ja jälkikäsittelyvaiheet tasojen kansanedustajat ja elinajan pitenemiseen. Parhaan tietomme, tämä on ensimmäinen tutkimus osoittaa tällaisen yhdistyksen potilaalla on NSCLC. On kasvavaa kiinnostusta luonnehdinta kansanedustajien ja niiden mahdollinen rooli biomarkkereina eri sairauksiin [31]. Potilailla, joilla on kastraatio vastustuskykyisten eturauhassyöpä, korkea verihiutaleperäisten MP tasot liittyivät lyhyen selviytymisen [32]. Tutkimus potilailla, joilla on hengitysvaikeusoireyhtymä osoitti positiivisen korrelaation korkea valkosolujen johdettujen kansanedustajat ja selviytymisen [33]. Tulokset kokeellinen tutkimus, jossa on hiiren Lewisin keuhkokarsinooma malli, osoitettiin, että lymfosyyttien johdettu kansanedustajat kohdistuu antiangiogeenistä ja proapoptoottiset vaikutuksia, jotka johtivat kasvaimen kasvun inhibition vähentämällä VEGF tasot [34]. Vaikka meillä ei tunnettu tulleiden niiden solujen alkuperä, nämä havainnot voivat tarjota ja selityksen välistä positiivista MP tasoja ja selviytymisen että olemme löytäneet tässä tutkimuksessa.

Voimakas korrelaatiota ei havaittu MP tasojen ja ETG. Tämä havainto on sopusoinnussa aikaisempien tietojen, mikä osoittaa, että läsnäolo kansanedustajien plasmassa merkittävästi vaikuttaa ETG sekä normaali [35] ja patologisten tilojen [23], [36]. Lisääntynyt määrä verenkierrossa kansanedustajien ja niiden vastaavuus korkealla ETG havaitun tutkimuksessamme vahvistavat roolia ETG syövän liikahyytymiskykyyn, kuten aiemmin raportoitu [29] – [33]. Lisäksi, kuten viime aikoina osoittaneet, mittaamista ETG voi tunnistaa syöpäpotilaille suuri riski laskimotromboembolian [37].

Havaitsimme yhdistyksen välillä korkea esikäsittely tasojen KIE-maiden ja köyhien selviytymistä. Ei ole pitävää tietoa ennustetekijöiden arvosta KIE syövässä. Useimmat tutkimukset ovat yhtä mieltä, että korkea KIE liittyy huonoon ennusteeseen [10], [12] – [13]. Kuitenkin muut tutkimukset ovat tuottaneet kiistanalaisia ​​tuloksia [11], [14]. Beerepoot et ai. [10] tutkivat tasot elinkelpoisten KIE potilailla, joilla on erityyppisiä syöpiä; he huomasivat, että CEC laskee olivat korkeampia potilailla kuin terveillä koehenkilöillä, ja että kemoterapia lisääntynyt CEC laskee. Nämä kirjoittajat määritellään KIE kuin CD146 +, ylimääräisiä värjäytyminen CalceinAM määrällisesti eläviä soluja; ei ole muita markkereita, kuten UEA1, käytettiin vahvistamaan endoteelin solujen luonteesta. Tutkimuksen mukaan Kawaishi et al. [14] Yhdistyksen välillä kasvoi esikäsittely tasot KIE-maiden ja hyvää ennustetta potilaille, joilla on NSCLC. Tässä tutkimuksessa endoteelimerkkiaineelle CD146, DNA-markkeri DAPI, ja aktivaatiomarkkeria CD105 käytettiin valita KIE yhdessä CD45 hävittää hematopoieettiset solut. Sitä vastoin potilailla, joilla kolorektaalikarsinoomasta kemoterapiaa ja bevasitsumabia, Ronzoni et al. [12] löydetty lepää CEC laskee olevan pienempi potilailla, jotka saavuttivat radiologisia vasteen verrattuna potilailla ei saavuteta vastetta. Tutkimuksen mukaan Matsusaka et al. [13], osoitti, että potilailla, joilla hoitoa edeltävälle tasolle CXCR4-positiivisten KIE 20% mononukleaarisolujen oli huonompi PFS ja OS. Nämä tulokset ovat yhdenmukaisia ​​saatujen Tutkimuksessamme jossa korkeat KIE olivat yhteydessä huonoon OS. Koska erilaisia ​​tekniikoita kvantifiointiin käytetään endoteelisolujen ponnisteluja tarvitaan sopivimman solun fenotyyppejä kunkin kliinisen tilanteen ja selittää nykyisen ristiriitoja.

Tulokset antavat uutta tietoa ennusteen arvioinnissa kansanedustajia ja KIE potilailla, joilla on NSCLC. Rooli kansanedustajat ja KIE mahdollisina biomarkkereita potilailla, joilla on NSCLC, hoidetaan perinteisellä kemoterapiaa tai kohdistettuja hoitoja, takaa lisätutkimuksia, koska ymmärtää paremmin niiden rooli voi avata uusia näkökulmia aloilla diagnosointiin ja hoitoon.

Kiitokset

kirjoittajat kiittää Rafael Rosell ja Stefano Indraccolo tarjota hyödyllisiä kommentteja käsikirjoituksen. He myös kiittää Josefa Llorens, Ursula Salinas ja Adela Mañez niiden teknistä apua.