Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

mTOR signalointireitin on keskeinen rooli syövän synnyn ja munuaissyövän (RCC). Olemme pyrkineet tutkimaan vaikutusta geneettisten vaihteluiden mTOR-reittiin liittyvien geenien riskiä RCC.

Methods

genotyyppi 8 potentiaalisesti toiminnallinen polymorfismien

AKT1

,

AKT2

,

PTEN

ja

mTOR

geenejä käyttäen TaqMan -menetelmä tapauskontrollitutkimuksessa 710 RCC potilaiden ja 760 syöpää vapaa aiheista. Ehdoton logistinen regressio, oikaistu mahdollisten häiritsevien tekijöiden käytettiin riskin arvioimiseksi yhdistysten. Sitten tutkittiin toimivuutta tärkeitä polymorfismien.

Tulokset

Näistä 8 polymorfismien säätämisen jälkeen monimuuttujille, löysimme merkittävä yhdistyksen välillä yhden vaihtoehdon (rs2295080) kun promoottori

mTOR

ja vähensi RCC riski (

P

= 0,005, OR = 0,74, 95% CI = +0,59-+0,91, TG /GG

vs.

TT). Toinen vaihtoehto (rs701848) 3’UTR alueella

PTEN

liittyi lisääntynyt RCC riski (

P

= 0,014, OR = 1,45, 95% CI = 1,08-1,96, CC vs . TT); kuitenkin, yhdistys ei ollut merkittävä oikaisun jälkeen monivertailuja. Lisäksi havaitsimme alempi

mTOR

mRNA-tasoja, kun läsnä on rs2295080G alleeli on normaali munuaisten kudoksiin. Lusiferaasireportterigeenin määritys osoitti, että rs2295080G alleeli merkittävästi vähentynyt lusiferaasiaktiivisuus. Mikään muu Merkitsevä yhteys valitun polymorfismien ja RCC riski havaittiin.

Johtopäätökset

Tuloksemme viittaavat siihen, että toiminnallinen

mTOR

promoottori rs2295080 variantti vaikuttaa RCC alttiuden moduloimalla endogeenisen

mTOR

ekspressiotason. Riski vaikutukset ja toiminnalliset vaikutukset

mTOR

rs2295080 variantti on vielä validointi.

Citation: Cao Q, Ju X, Li P, Meng X, Shao P, Cai H, et al . (2012) Toimiva Variant

mTOR

Promoottori Moduloi Sen Expression ja liittyy munuaissyöpä Risk. PLoS ONE 7 (11): e50302. doi: 10,1371 /journal.pone.0050302

Editor: Balraj Mittal, Sanjay Gandhi Medical Institute, Intia

vastaanotettu: 26 heinäkuu 2012; Hyväksytty: 18 lokakuu 2012; Julkaistu: 28 marraskuu 2012

Copyright: © 2012 Cao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Program for Development of Innovative Research Team ensimmäisessä Affiliated sairaala Nanjing Medical University, maakunnan aloite ohjelma korkeutensa Disciplines Jiangsun maakunnassa, National Natural Science Foundation of China [lupanumeroon 81171963 ja 81102089] ja Natural Science Foundation Jiangsun maakunnassa [lupanumeroon BK2008473 ja BK2011773]. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

munuaissyövän (RCC) on yleisin munuaissyöpä, mikä vastaa yli 80% kaikista pahanlaatuisten munuaisten kasvaimet [1], [2]. Vaikka tarkkaa syytä RCC vielä tunneta laajalti poikkeava angiogeneesi pidetään tunnusmerkki tämän taudin [3], [4]. Useimmissa satunnaisten ja perinnöllisten RCC tapauksissa von Hippel-Lindaun (VHL) tuumorisuppressorigeenin on toiminnallisesti häiritä, ja tulokset on konstitutiivisen aktivaation hypoksia-indusoituva tekijä (HIF) ja sen jälkeen induktion kohdegeenien, kuten VEGF [4] . Geneettisiä vaihteluita angiogeneesiin liittyviä geenejä on ehdotettu vaikuttaa ihmisten alttiutta RCC [5], [6], [7]. Viime aikoina suuri genomin laajuinen yhdistys tutkimuksessa Yhdysvalloissa on havaittu mielenkiintoinen muunnelma

EPAS1

(koodaa HIF-2 alfan) kuin alttius lokuksen RCC on Euroopan väestöstä [7]. Kuitenkin Kiinan väestön että arvioimme, emme onnistuneet kopioimaan merkittäviä havaintoja välillä polymorfismien

HF1A

[8] sekä

EPAS1

[9] ja riski RCC, joka osoittaa, että on olemassa eroja geneettinen arkkitehtuurin etnisten ryhmien, ja tutkivat geneettisen vaihtelun muissa kandidaattigeenit on edelleen tarpeen. Tässä esillä olevassa tutkimuksessa olemme laajentaneet etsintä tärkeä signalointireitille käsittää fosfoinositidi-3-kinaasi (PI3K), fosfataasi ja tensin homologi (PTEN), v-akt hiiren thymoma viruksen onkogeenin homologi (AKT), ja kohde nisäkkäässä rapamysiini (mTOR).

mTOR signalointireitin on keskeinen rooli solujen kasvua, selviytymistä, proliferaatiota ja angiogeneesiä [10]. PI3K: t aktivoituvat reseptorityrosiinikinaasit, kuten epidermaalisen kasvutekijän reseptorin (EGFR), verisuonen endoteelin kasvutekijän reseptori (VEGFR) ja insuliinin kaltainen kasvutekijä-reseptori (IGFR); aktivointi sitten johtaa kinaasikaskadin kautta AKT ja mTOR [11]. Tämä polku on negatiivisesti säätelee tuumorisuppressorigeeniä

PTEN

kautta defosforyloitumista fosfatidyyli trisfosfaattia (PIP3) [12]. Geneettiset muutokset mTOR reittiin liittyviä geenejä, mukaan lukien mutaatiot

PI3K

,

AKT

, ja

PTEN

, helpottaa kasvaimen kehittymisen ja ovat yleisiä ihmisen syövissä [13], [ ,,,0],14], [15]. Merkitystä mTOR signaloinnin RCC on korostettu menestystä käyttämällä estäjiä mTOR (temsirolimuusin ja everolimuusin) potilailla, joilla on edennyt sairaus [16], [17].

Yhden nukleotidin polymorfismien (SNP) in ehdokas geenit ovat osoittautuneet vaikuttaa ihmisten alttiutta RCC [7]. Ottaen huomioon kriittinen rooli mTOR väylän RCC, on mahdollista, että SNP tällä reitti voi olla tärkeä rooli RCC kehittämisessä. Ei kuitenkaan julkaistu tutkimus on vielä käsitellyt tätä asiaa. Niinpä tässä tutkimuksessa käytiin läpi 5 ytimen geenejä (

PI3KCA

,

AKT1

,

AKT2

,

PTEN

, ja

mTOR

) tässä reitin ja analysoitiin 8 potentiaalisesti toiminnallinen SNP näiden geenien ja niiden vaikutus esiintyminen RCC kiinalaisessa väestöstä.

Potilaat ja menetelmät

Ethics selvitys

tutkimus hyväksyi Institutional Review Board of Nanjing Medical University, Nanjing, Kiina. Tällä rekrytointi, kirjallinen suostumus saatiin kaikki osallistujat mukana tässä tutkimuksessa.

Tutkimuskanta

Kaiken 710 tapaus potilaalla on RCC ja ryhmä 760 syöpää vapaa valvontaa palvelukseen First Affiliated sairaala Nanjing Medical University, Nanjing, Kiina toukokuun 2004 ja syyskuun 2011, ja kirjoittautui tapauskontrollitutkimuksessa. Sisällyttäminen kriteerit tapausten ja kontrollien on kuvattu muualla [8]. Lyhyesti, kaikki vastadiagnosoidun potilaalla on histopatologisesti vahvistettu tapaus RCC ja joilla ei aiemmin ole muiden syöpien tai edellisen kemoterapiaa tai sädehoitoa otettiin peräkkäin palvelukseen rajoituksia iän ja sukupuolen. Tauti oli luokiteltu Maailman terveysjärjestön kriteerien ja lavastettuja mukaan vuonna 2002 Yhdysvaltain sekakomitean Cancer (AJCC) TNM luokittelu. Kontrollit rekrytoitiin aiheista jotka hakivat lääkärintarkastus että poliklinikoilla sairaalassa ja oli taajuus sovitetaan tapauksissa iän (± 5 vuotta) ja sukupuoli. Syöpä-vapaa ohjaus ei geneettisesti liity tapauksiin ja ei ollut yksilöllinen syöpä. Ennen rekrytointi, yhdenmukaisella lomakkeella annettiin kautta face-to-face haastattelut koulutettu haastattelijat keräämään demografisia tietoja ja liittyvät tekijät. Kukin potilas lahjoitti 5 ml laskimoverta jälkeen tarjoamalla kirjallinen lupa. Vastausprosentti tapausten ja verrokkien oli yli 85%.

SNP valinta

tarkistetaan 5 core geenien mukana mTOR-signalointireitin:

PI3KCA

,

AKT1

,

AKT2

,

PTEN

ja

mTOR

. SNP Näiden geenien valittiin perustuen HapMap tietoihin (https://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/) ja dbSNP data (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/). Potentiaalisesti toiminnallinen polymorfismien tunnistettiin mukaisesti seuraavin perustein: (1) sijaitsee 5′-alueiden, 5 tulkitsemattoman alue (UTR), 3 ’UTR tai koodaavat alueet, joilla aminohappo muuttuu; (2) pienet alleelin taajuus (MMM) 5% Kiinan väestön tai (3) liittyy syövän riskiä aiemmissa tutkimuksissa. Kriteerien mukaan, 8 SNP tunnistettiin, kuten rs2494750 ja rs2498786 in

AKT1

, rs33933140 ja rs7254617 in

AKT2

, rs11202607 ja rs701848 in

PTEN

sekä rs2295080 ja rs2536 in

mTOR

.

DNA: n eristämistä ja genotyypityksen

Perimän DNA uutettiin perifeerisestä verestä proteinaasi K ruoansulatusta ja fenoli-kloroformiuutolla. Genotyypin Näiden 8 SNP suoritettiin käyttäen ennalta suunniteltu TaqMan SNP genotyypin Analyysit (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) laboratoriossa Department of Molecular and Genetic toksikologian, Nanjing Medical University, Nanjing, Kiina. Sekvenssit alukkeiden ja koettimien on lueteltu taulukossa S1. Reaktioseos 10 ui sisälsi 20 ng genomista DNA: ta, 3,5 ui 2 x TaqMan-genotyypin Master Mix, 0,25 ui alukkeita ja koettimia sekoitetaan ja 6,25 ui kahteen kertaan tislattua vettä. Monistus suoritettiin seuraavissa olosuhteissa: 50 ° C 2 min, 95 ° C: ssa 10 min, mitä seurasi 45 sykliä 95 ° C 15 sekuntia, ja 60 ° C 1 min. Amplifikaatiot ja analyysi tehtiin 384-hyvin ABI 7900HT Real Time PCR System (Applied Biosystems) seuraten valmistajan ohjeita. SDS 2.4 ohjelmisto (Applied Biosystems) käytettiin alleeliset syrjinnästä. Genotyypin hinnat Näiden SNP olivat kaikki yli 98%. Laadunvalvontaan, 4 negatiivisia kontrolleja sisällytettiin jokaiselle levylle ja 5% näytteistä valittiin satunnaisesti toistuvaa genotyypitystä vahvistusta; ja tulokset olivat 100% sopusoinnussa.

Analyysi

mTOR

mRNA ilmaisu

Kahdeksantoista poistaa kirurgisesti munuaissyövän kudosten kanssa pariksi paratumor munuaisten kudosten ja vielä 24 paratumor munuaisten kudokset käytetään analysoida

mTOR

mRNA

in vivo

. Kudokset otettiin kirurgisesti poistettu näytteitä potilaista ja otettiin heti varastoitiin nestemäisessä typessä. RNA eristettiin noin 100 mg kudosta käyttäen TRIzol reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ja käänteiskopioitiin yksijuosteiseksi cDNA käyttäen oligo (dT) alukkeen ja Superscript II (Invitrogen).

mTOR

RNA taso mitattiin kvantitatiivisen reaaliaikaisen käänteistranskriptio (RT) -PCR ABI Prism 7900 järjestyksessä tunnistusjärjestelmä (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA).

ACTB

käytettiin sisäisenä referenssinä geenin. Käytetyt alukkeet

mTOR

olivat 5 ’-TTGCTTGAGGTGCTACTG -3′ (sense) ja 5’-CTGACTTGACTTGGATTCTG-3 ’(antisense), ja alukkeet

ACTB

olivat 5′-TGGCACCCAGCACAATGAA -3 ’(sense) ja 5′-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3’ (antisense). Reaktioseos sisälsi 0,1 M kutakin aluketta, 2 x SYBR Green PCR Master Mix (TaKaRa, Berkeley, CA, USA), ja 1 ui cDNA: ta (1:10 laimennos). Monistus suoritettiin seuraavissa olosuhteissa: 95 ° C 30 s, ja 40 sykliä 95 ° C 15 s ja 60 ° C: ssa 30 s. Kukin reaktio tehtiin kolmena kappaleena.

rakentaminen promoottori-reportteri plasmidit

rakentamiseksi kohde

mTOR

promoottori-reportteri plasmidit, syntetisoimme DNA-fragmentti, joka sisälsi joko rs2295080G alleeli tai T-alleelin monistamalla 998-bp (-617-381 emästä verrattuna transkription aloituskohdasta)

mTOR

promoottorialueen käyttäen alukkeita restriktiokohtia. Alukkeet olivat 5′-ACTTAGAGCTCAAACAGGGATGGGGCTGGGGGAGAGGGA-3 ’(eteenpäin) ja 5′-ACTTAAGATCTCGAAACGTCTTTTGATGCAGTAATTCCT-3’ (reverse), ja niihin sisältyi Sacl- ja Nhel-restriktiokohtia. Saatu PCR-tuotteet sen jälkeen hajotettiin Sacl: llä ja Nhel: llä ja kloonattiin pGL3-Basic-vektoriin (Promega, Madison, WI, USA), joka sisältää tulikärpäsen lusiferaasi-geeni reportterin. Konstruktit olivat kaikki varmistettiin DNA-sekvensoinnilla.

Solulinjat

munuaissyövän adenokarsinoomasolulinja (786-o), ihmisen alkion 293-munuaissoluja (HEK-293) ja HeLa-solulinjat ystävällisesti Dr. Z. Zhang (Department of Molecular and Genetic toksikologian, School of Public Health, Nanjing Medical University, Nanjing, Kiina) ja käytettiin raportoitu aiemmin [18], [19].

transfektio ja lusiferaasireportteri- määritykset

786-o, HEK-293- ja HeLa-solut siirrostettiin 24-kuoppaisille viljelylevyille. 24 tunnin kuluttua kukin kuoppa transfektoitiin 1 ug kutakin

mTOR

-reporter plasmidi käyttämällä Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Sisäisenä standardina, kaikki plasmidit kotransfektoitiin 8 ng PRL-SV40, joka sisälsi Renilla lusiferaasigeeniin. PGL3-Basic vektori ilman inserttiä käytettiin negatiivisena kontrollina. Neljäkymmentä kahdeksan tuntia transfektioiden jälkeen solut lyysattiin passiivisen (Promega) ja lusiferaasiaktiivisuus käyttäen Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega). Riippumattomat kokeet tehtiin kolminkertaisina kunkin plasmidirakenteen.

Tilastolliset analyysit

Erot jakaumia demografisten ominaisuuksien, valittujen muuttujien ja taajuudet genotyyppien tapausten ja kontrollien välillä testattiin Studentin t -testi (jatkuvien muuttujien) tai χ

2-testi (kategorisen muuttujat). SNP-alleelin taajuudet kontrolliosallistujaan testattiin lähtö Hardy-Weinberg tasapainoa jonka hyvyys fit χ

2-testi ennen tarkempaa analyysiä. Liitot välinen polymorfismien ja riski RCC arvioitiin laskemalla kertoimet suhdeluvut (syrjäisimmillä alueilla) ja 95%: n luottamusvälit (CI) alkaen ehdoton regressioanalyysimme kanssa mahdollisten sekoittavien tekijöiden mukauttamisen. Käytimme väärä löytö määrä (FDR), joka perustuu Benjamini-Hochberg menetelmä säätää

P

vastinetta monivertailuja. Liitot katsottiin tilastollisesti merkittäviksi, kun FDR-oikaistu

P

arvot olivat alle 0,05. Erot lusiferaasireportterigeenin ilmentymisen eri promoottorikonstrukteja, sekä mRNA: n ja proteiinin tasot munuaisten kasvain tai normaaleissa kudoksissa, joilla on erilaiset genotyypit arvioitiin Studentin t-testillä tai yksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA), ja

P

0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä. Kaikki analyysit suoritettiin ohjelmiston SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC, USA) kaksipuolisella

P

arvoja.

Tulokset

Ominaisuudet RCC potilaiden ja verrokkien

frekvenssijakaumat valittujen ominaisuuksien 710 tapausten ja 760 säätimet on esitetty taulukossa 1. ei ollut merkittäviä eroja tapausten ja kontrollien osalta ikä, sukupuoli, BMI ja juominen tila ( kaikki

P

0,05). Oli kuitenkin enemmän tupakoitsijoita, verenpainetauti potilaat ja diabeetikot joukossa tapauksia kuin keskuudessa tarkastukset (

P

= 0,035, 0,001 ja 0,001, tässä järjestyksessä). 710 potilasta, 62,8% potilaista oli I vaiheessa, kun taas 19,6, 7,3 ja 10,3% havaittiin olevan vaiheen II, III ja IV sairauksia, vastaavasti. Prosentuaalinen Ydinteollisuudessa päässä I-IV oli 19,2, 48,0, 24,5 ja 8,3 vastaavasti.

genotyypin ja alleelifrekvenssien

AKT1 Twitter /

AKT2

/

PTEN Twitter /

mTOR

polymorfismien ja RCC riski

Liitot näiden polymorfismien ja RCC riski parhaalla geneettinen malli on esitetty taulukossa 2 ja yksityiskohtainen genotyyppi jakaumat polymorfismien ovat esitetään taulukossa 3. genotyyppi taajuudet näistä 8 SNP valvoo kaikkia sopeutui Hardy-Weinberg tasapaino. Merkittävimmät SNP liittyy RCC riski oli rs2295080, joka sijaitsee promoottorin alueella

mTOR

. Verrattuna yksilöiden kuljettaa rs2295080TT genotyyppi, yksilöt kantaen TG ja TG /GG genotyypit molemmat aiheuttaa pienempi riski RCC (

P

= 0,021, OR = 0,81, 95% CI = ,68-,97 ja

P

= 0,005, OR = 0,74, 95% CI = 0,59-0,91, vastaavasti). Yhdistyksen välinen rs2295080 ja RCC riski säilyi merkitsevänä säätämisen jälkeen monimuuttujille (FDR = 0,040). Tämän lisäksi SNP, variantti homotsygoottinen (CC) toisen SNP (rs701848), joka sijaitsee 3’UTR alueella

PTEN

oli myös merkitsevästi liittyy suurentunut RCC riski (

P

= 0,014, OR = 1,45, 95% CI = 1,08-1,96). Kuitenkin tämä yhdistys jäi vain marginaalisesti merkitsevä säätämisen jälkeen monimuuttujille (FDR = 0,056). Koska PTEN negatiivisesti säätelee mTOR-signalointireitin, me sitten tutkitaan, oliko vuorovaikutusta

mTOR

rs2295080 ja

PTEN

rs701848 vaikuttamaan RCC riski, kuitenkin, kuten on esitetty taulukossa 4, mitään merkittävää vuorovaikutus havaittiin (

P

vuorovaikutus = 0,118), vaikka yksilöiden sekä riski genotyyppien (rs2295080 TT ja rs701848 CC) oli merkitsevästi lisääntynyt RCC riski 1,72. Koska

mTOR

rs2295080 tuottanut parhaan yhdistävä signaali joukosta valitun polymorfismin, me sitten keskityttiin sitä seuraavia toiminnallisia kokeita.

Expression of

mTOR

RCC ja assosiaatioita

mTOR

rs2295080 ja

mTOR

ilmaisu

sitten tutkitaan ilmaus

mTOR

RCC ja assosiaatioita rs2295080 polymorfismin ja

mTOR

ilmentymisen paratumor munuaisten kudoksissa käyttäen reaaliaikaista kvantitatiivinen RT-PCR. Kuten kuviossa 1A on esitetty,

mTOR

ilmentymistaso tuumorikudoksessa oli merkittävästi suurempi kuin viereisen normaaleissa kudoksissa (

P

= 0,018). Lisäksi verrattuna yksilöiden kuljettaa TT genotyyppi, yksilöiden kuljettaa G-alleelin (TG ja GG genotyyppien) oli alhaisempi

mTOR

lauseke (

P

= 0,003 ja 0,011 TG

vs.

TT ja GG

vs.

TT, vastaavasti) (Fig. 1 B). Nämä tulokset viittaavat siihen, yliekspressio

mTOR

voi edistää munuaisten syövän synnyn ja että rs2295080, joka sijaitsee

mTOR

promoottori, voi olla mukana munuaisten karsinogeneesissä säätelemällä transkriptionaalisen aktiivisuuden ja ilmentymisen tasot

mTOR

.

(A) jakelu ja vertailu

mTOR

ilmaisun karsinoomia ja viereisten normaaleissa kudoksissa (

P

= 0,018). (B) välisestä assosiaatiosta

mTOR

ilmentymistä munuaiskudoksiin ja

mTOR

rs2295080 genotyypit.

mTOR

rs2295080 TT genotyyppi liittyy huomattavasti suurempi mTOR ilmaisu kuin

mTOR

rs2295080 TG (

P

= 0,003) ja GG (

P

= 0,011) genotyyppiä.

toiminnallinen luonnehdinta

mTOR

rs2295080

Jotta voidaan tutkia, onko muutos on toiminnallisesti merkittävä muuttamalla

mTOR

promoottori aktiivisuus, me sitten syntyy reportterigeenirakenteilla joissa on joko rs2295080 G tai T-alleelin ja transfektoitiin HEK293, 786-o ja HeLa-solulinjojen kanssa reportteri plasmideilla. Kuten kuviossa 2 on esitetty, konstrukti, joka sisältää rs2295080G alleelin ajoi huomattavasti pienempi reportterigeenin ilmentyminen verrattuna sisältävät rs2295080T alleelin näissä solulinjoissa. Nämä tulokset osoittivat, että rs2295080G alleeli promoottorialueella oli alennettu transkriptionaalista aktiivisuutta

mTOR

.

(A) Kaavamainen esitys toimittaja sisältävien plasmidien

mTOR

rs2295080 T tai G-alleelin, joka lisättiin ylävirtaan lusiferaasireportterigeenin on pGL3-Basic-plasmidin. (B) 2-konstruktit transfektoitiin transientisti HEK-293, 786-o ja Hela-soluissa, vastaavasti. Kaikki konstruktit kotransfektoitiin PRL-SV40 standardoida transfektion tehokkuutta. Arvot ovat keskiarvoja ± SD yli 3 eri kokeesta, jotka olivat kukin suoritettiin kolmena rinnakkaisena.

Keskustelu

ennalta tutkimuksessa tutkimme assosiaatiot 8 potentiaalisesti toiminnallinen polymorfismien mTOR signalointireitin liittyviä geenejä ja RCC alttius kiinalaisessa väestöstä. Tutkimuksemme ehdotti, että rs2295080 muunnos promoottorialueen

mTOR

liittyi vähentynyt riski RCC. Yhdistyksen Tutkimuksen tulokset rs2295080 vahvistivat myöhemmin edelleen toiminnallista analyysiä variantin. Ensin havaitsimme, että

mTOR

mRNA taso aleni yksilöitä jotka kantoivat rs2295080 G-alleelin

in vivo

. Sitten,

in vitro

määrityksissä, huomasimme, että rs2295080 G-alleelin vähensi transkriptionaalista aktiivisuutta

mTOR

. Nämä tulokset viittaavat siihen, että

mTOR

rs2295080 on funktionaalinen SNP. Parhaan tietomme mukaan tämä on ensimmäinen tutkimus, jossa arvioidaan roolia polymorfismit mTOR signalointireitin liittyvien geenien esiintyminen RCC.

Nämä havainnot ovat biologisesti uskottavia, varsinkin kun otetaan huomioon keskeinen roolit on mTOR väylän solukuoleman ja selviytymistä. Yli aktivointi mTOR on pidetty tunnusmerkki RCC, vaikka siitä yli aktivointia mTOR syntyy lisääntynyt proteiinin ilmentymisen tai yli fosforylaation mTOR-proteiinin vaikuttaa epämääräiseltä [20], [21]. Koska tärkeä rooli mTOR, voisi odottaa, että korkeampi ekspressiotaso mTOR kokonaisproteiinia voivat helpottaa munuaisten syövän synnyn, jota tukevat useat tutkimukset tutkimalla ilmaus

mTOR

munuaisten solulinjoissa [21] ja nephrectomy RCC yksilöt [22]. Tutkimuksessamme olemme myös havaittu, että mRNA taso

mTOR

oli merkitsevästi korkeampi RCC kudoksessa kuin paratumor munuaisten kudoksiin, mikä edelleen varustettu näyttöä aiheuttava rooli

mTOR

ilmaisun RCC. Yli-ilmentyminen

mTOR

on myös ehdotettu olevan huono ennustetekijä useissa ihmisen syövissä, mukaan lukien RCC [22], keuhkosyöpä [23], rintasyöpä [24], kurkunpään okasolusyöpä [25 ] ja sappiteiden adenokarsinooma [26]. Kun otetaan huomioon rooli mTOR helpottamisessa syövän kehittymisessä ja etenemisessä, alennettua tasot mTOR vuoksi rs2295080 muunnos promoottori voi pienentää syöpäalttiutta, mikä saattaa selittää havaintomme yhdistyksen tutkimuksissa.

Lisäksi

PTEN

rs701848 polymorfismi marginaalisesti liittyy suurentunut RCC riski oikaisun jälkeen monivertailuja. On huomattava, että tämä polymorfismi sijaitsee 3 ’UTR alue

PTEN

; Siksi se on biologisesti uskottava, että tämä SNP voisi muuttaa

PTEN

ilmaisun vaikuttamalla mRNA vakautta, ja sitten vaikuttaa syöpäalttiutta. Kuitenkin hypoteesin tehtävä tämän SNP vielä tutkittava tulevissa tutkimuksissa. Koska aktivointi mTOR signalointi säätelee negatiivisesti

PTEN

, olisi mielenkiintoista nähdä, jos on olemassa yhteisvaikutus välillä

mTOR

rs2295080 ja

PTEN

rs701848 polymorfismit. Emme kuitenkaan ei löytänyt merkittävää vuorovaikutusta näiden 2 SNP, vaikka yksilöiden riskiin genotyypit molemmat kaksi SNP (rs2295080 TT ja rs701848 CC) oli merkitsevästi lisääntynyt RCC riski 1.57.

Toistaiseksi useat molekyylikohteena aineita, kuten tyrosiinikinaasin estäjä sunitinibi, The VEGFRs -estäjä patsopanibille, ja mTOR estäjien temsirolimuusin ja everolimuusia, on hyväksytty hoitoon potilaille, joilla on edennyt RCC. Viimeksi Xu

et al.

Osoittivat, että geneettinen polymorfia angiogenesis- ja altistumista liittyvät geenit voivat ennustaa hoitovastetta patsopanibille monoterapiana RCC [27]. Sitä paitsi, on myös näyttöä siitä, että geneettinen polymorfia geenien sunitinibi farmakokinetiikkaa liittyvät ilman taudin etenemistä (PFS) in mRCC hoidetuilla potilailla sunitinibilla [28]. On syytä huomata, että

mTOR

rs2295080 polymorfismi on ehdotettu liittyvän kliinisiä tuloksia ruokatorven syövän hoidetuilla potilailla sädehoitoa [29]. On kuitenkin edelleen puutteellista, joissa tutkitaan perinnöllinen geneettinen vaihtelu vastauksena hoitoon mTOR-inhibiittorit. Kun otetaan huomioon toiminnallinen rooli rs2295080 polymorfismi ilmentymisen moduloimiseksi

mTOR

, tämä polymorfismi voisi olla lupaava geenimerkki tutkia suhteen ennustamiseen hoitovasteen temsirolimuusille tai everolimuusin. Kuitenkin ollut saatavilla tietoa näiden lääkeaineiden hoitojen meidän RCC potilailla rajoittaa Tutkimuksemme puuttua tähän asiaan; Näin kehotamme tutkimuksensa muissa tutkimuksissa, jotka keskittyvät hoitoon RCC potilaista.

Yhteenvetona tulokset viittaavat siihen, että

mTOR

rs2295080 vaikuttaa RCC alttius meidän Kiinan väestön. Tutkimuksemme korostetaan myös, että

mTOR

rs2295080 variantti voi vaikuttaa RCC alttiuteen moduloimalla endogeenisen

mTOR

ekspressiotason. Lisäksi tulokset Tutkimuksemme aiheuttavat joitakin tärkeitä kysymyksiä, esimerkiksi, ovatko erillisten ilmentymistason

mTOR

aiheuttama rs2295080 polymorfismi vaikuttaa fosforylaation tasoon mTOR ja sitten muuttaa sen loppupään signaali, ja onko tämän polymorfismi vaikuttaa RCC ennustetta ja vaste RCC potilaiden hoitoon temsirolimuusilla ja everolimuusin. Jatkotutkimuksissa enemmän kattava suunnittelu ja muun käytettävissä tietoa näistä lääkehoitoon saattaa auttaa näiden kysymysten.

tukeminen Information

Taulukko S1.

sekvenssit alukkeiden ja koettimien käyttää esillä olevassa tutkimuksessa.

doi: 10,1371 /journal.pone.0050302.s001

(DOC) B