Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tavoitteet

Voit selvittää mahdolliset yhdistyksen välillä HPV-infektion ja levyepiteelisyövän komponentti urothelial karsinooma (UC) virtsarakon ja vahvistamaan p16 yli-ilmentymisen korvikemarkkerina HPV infektion näiden syöpien joukossa korealaisia.

Methods

Analysoimme läsnäolo HPV-infektion käyttämällä HPV-DNA siru ja ilmentymistä p16 käytetään immunohistokemia 47 koehenkilöillä välillä heinäkuun 2001 ja maaliskuun 2011 tutkimuksessa (n = 35) osallistui potilaita, joilla levyepiteelikarsinooma erilaistumista UC virtsarakon. Vertailuryhmä (n = 12) osallistui potilaita, joilla levyepiteelikarsinooma metaplasiaa virtsarakon.

Tulokset

lähtötilanteessa ominaisuudet valvonnan ja tutkimuksen ryhmät olivat samanlaisia. HPV-DNA havaitseminen hinnat olivat noin 2 kertaa suurempi tutkimuksessa kuin kontrolliryhmässä (17,1% [6/35] versus 8,3% [1/12], tässä järjestyksessä), mutta ero ei ollut tilastollisesti merkitsevä. P16 yliekspressio havaittiin 16/35 (45,7%) tutkimusryhmä ja 1/12 (8,3%) kontrolliryhmään näytteistä (p = 0,034). Sekä HPV-positiivisuuden ja p16 yli-ilmentyminen oli läsnä 3/35 (8,8%) tutkimusryhmä näytteitä, mutta mikään kontrolliryhmään (p = 0,295). Tutkimuksessa ryhmä, prosenttiosuus HPV-positiivisia tapauksia jotka olivat tupakoimattomia oli 2 kertaa suurempi kuin prosenttiosuus HPV-negatiivisten tapausten jotka olivat tupakoimattomia (66,7% [4/6] versus 31,0% [9/29 ], tässä järjestyksessä); kuitenkin, tilastollista merkitsevyyttä ei saavutettu johtuen pienestä näytteen koosta.

Johtopäätökset

HPV-infektio voi liittyä UC virtsarakon ja levyepiteelikarsinooma erilaistumista, erityisesti tupakoimattomilla. Kuitenkin p16 ilmaisu ei näytä olevan vahva surrogaattimarkkerina oli HPV-infektion tämä syöpä.

Citation: Kim SH, Jouni JY, Chung J, Park WS, Lee KH, Seo HK ( 2014) havaitseminen HPV Infection ja p16 immunohistokemia ilmentäminen virtsarakon syövän kanssa Squamous Differentiation. PLoS ONE 9 (3): e93525. doi: 10,1371 /journal.pone.0093525

Toimittaja: Hari K. Koul, Louisiana State University Health Sciences keskus, Yhdysvallat

vastaanotettu: 08 lokakuu 2013; Hyväksytty: 06 maaliskuu 2014; Julkaistu: 27 maaliskuu 2014

Copyright: © 2014 Kim et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustusta National Cancer Center (NCC-1110510), Korean tasavalta. Kuitenkin rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Virtsarakon syöpä (BC) osuus 3,2-4% kaikista syövistä maailmanlaajuisesti ja noin 90% BC ovat urothelial karsinooma (UC). Vaikka UC virtsarakon usein polttoväli squamous erilaistuminen, se erottuu okasolusyöpä (SCC) virtsarakon, joka sisältää ainoastaan ​​keratiini muodostavien syöpä soluja. BC koostuu seka urothelial ja suomuinen fenotyyppien kutsutaan UC kanssa levyepiteelikarsinooma erilaistumiseen (UC /SCC) [1].

Tunnettuja karsinogeeneja UC virtsarakon, tupakointi on kaikkein hyvin tunnettu riskitekijä. Se vastaa lähes puolet tasapainotusliivit [2]. Muita riskitekijöitä BC sisältävät työperäisen useita aromaattisia amiineja; infektioon liittyvää Karsinogeneesin kuten schistosomal infektio; ja suuria annoksia tiettyjä lääkkeitä, kuten syklofosfamidi ja fenasetiini [3]. Kuitenkin suuri määrä tasapainotusliivit pysyvät selittämätön.

Äskettäin rooli virusten on saanut paljon huomiota mahdollisina syöpää erityisesti ihmisen papilloomavirus (HPV). HPV on pieni, pyöreä, kaksijuosteista DNA-virus, joka tarttuu kerrostunut levyepiteelillä ja on arvioitu yhdistetty lähes 10% kaikista syövistä maailmanlaajuisesti, erityisesti osajoukko SCC vulva, penis, peräaukon, ja nielu [4] – [7]. Joukossa eri HPV-tyypit, tietyntyyppiset, kuten HPV-16 ja HPV-18, on vakiintunut etiologinen rooli kehittämisessä anogenital syöpien. Vaikka HPV-16 ja /tai -18 geenisekvenssejä havaittiin myös virtsateiden naisten potilaalla on uusiutuva ja pysyviä virtsaputken ja virtsarakon [8], [9], useat tutkimukset ovat tutkineet mahdollisuutta, että HPV-infektio on riski tekijä UC virtsarakon; kuitenkin, niiden tulokset ovat ristiriidassa, joten mitään lopullisia johtopäätöksiä ovat mahdollisia [10] – [13].

Tähän liittyvä kysymys koskee sitä, että p16-proteiini on yli-ilmentyy UC virtsarakon. Ilmentymistä p16 tiedetään hyvin liittyvän korkean riskin HPV-infektio kohdunkaulan syövän ja pään ja kaulan alueen syöpä, ja se on ehdotettu pätevä sijaismarkkerina tunnistamiseksi biologisesti aktiivisen HPV-infektion [14] – [16]. Huolimatta monet viimeaikaiset tutkimukset keskittyvät SCC osa UC virtsarakon, on edelleen epäselvää, yli-ilmentyminen p16-proteiinin liittyy oncogenesis UC virtsarakon [5], [10], [17] – [19].

Näin ollen käsillä olevan tutkimuksen tarkoituksena oli selvittää läsnäolo HPV-infektion ja vahvistaa mahdollisuutta p16 yli-ilmentymä surrogaattimarkkerina HPV-infektion UC /SCC virtsarakon vuonna korealaiset tupakoitsijoita ja tupakoimattomien .

Materiaalit ja menetelmät

hyväksymisen jälkeen tutkimuksen meidän Institutional Review Board, 47 potilasta valittiin arkistoista sairaalan heinäkuusta 2001 maaliskuu 2011 (IRB No. NCCNCS-12 -643). Kaikki potilaat jos suullinen suostumus. Kirjallinen suostumus ei saatu, koska IRB of National Cancer Centerin hyväksytty vapauttaa kirjallisen suostumuksen menettelyä. Tutkimme parafinoidut kudosnäytteistä saatuja höyläysleikkaus virtsarakon tai cystectomy. Tutkimus koostui 35 potilasta sekavin UC /SCC virtsarakon ja kontrolliryhmässä koostui 12 potilaalla on levyepiteelikarsinooma metaplasiaa virtsarakon. Tutkimuksen ryhmä potilaita, 33 oli todisteita sekalaisen UC /SCC ja kahdella oli laaja SCC joilla on ollut UC. UC virtsarakon yksilöt luokitellaan Maailman terveysjärjestön (WHO) ja International Society of Urologisessa patologia (ISUP) luokitusperusteista ja lavastettuja mukaan TNM 2010 versio. Kukaan potilaista ei ollut tunnettu tai epäilty historia Schistosoma heamatobium infektio, kohdunkaulan SCC, tai pään ja kaulan SCC.

edustaja SCC kuuluvan kunkin parafiiniblokkiin otos valittiin perustuen läsnä riittävän laadun ja määrän uutettua DNA: ta. DNA uutettiin käyttäen Qiagen BioRobot M48 työasema (Qiagen, CA), ja määrä ja laatu DNA mitattiin käyttäen Nanodrop ND 1000 (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE). Läsnäolo HPV-infektion analysoitiin käyttämällä HPV-DNA-siru. HPV tehtiin genotyypin kohti valmistajan protokollaa käyttäen polymeraasiketjureaktiota (PCR) -pohjaisen DNA-siru-järjestelmä (Greencross, Gyeonggi, Korea), joka koostuu useista koettimia HPV-L1-sekvenssin [20]. Nämä koettimet sisältyvät koettimien korkean riskin HPV-tyypit (HPV-16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, ja 68) ja matalan riskin HPV tyypit (HPV-6, 11, 34, 40, 42, 43, 44, 54, ja 70). Konsensus PCR-tuotteet hybridisoitiin koettimiin siru, skannattu (Scanner GX, PerkinElmer, MA), ja sitten analysoitiin. PCR-monistus suoritettiin käyttäen 10 ui puhdistettua DNA: ta.

immunohistokemia (IHC) värjäys p16-proteiinin tehtiin käyttämällä spesifisiä E6H4 vasta-aineita (DAKO, Carpinteria, CA). IHC p16 ilmentymistä pisteytetty puolikvantitatiivinen komposiitti pisteytysjärjestelmä seuraavasti: (1) värjäys voimakkuus, määriteltiin 0 negatiivinen, 1+ heikkoja, 2+ maltillisen, ja 3+ vahva; (2) positiivinen alue, joka määritellään (10 X) osa värjättiin kasvainsolujen koko kasvain; ja (3) ilmaisu pisteet, määritellään värjäytymisen intensiteetti kerrottuna positiivinen alue. Korkein mahdollinen pistemäärä oli 30. yli-ilmentyminen p16 määriteltiin pisteet 20 (kuva 1).

V: okasolusyöpä komponentit alapuolella urothelial vuori. Kasvain solut ovat vahvasti positiivisia P16 (x100). B: Tämä tapaus on sekoitettu papillaarinen urothelial karsinooma (vasen ylempi) ja okasolusyöpä. Okasolusyöpä komponentti on vahva positiivinen p16. C: Levyepiteelikarsinooma metaplasiaa ei osoita ilmentymistä p16.

suhteita läsnäolo HPV-infektion ja kliinis parametreja arvioitiin Fisherin testejä ja Mann-Whitney testejä. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen STATA (release 9.2, STATA Inc, Tex, USA). Tulokset katsottiin tilastollisesti merkitsevä, jos kaksipuolinen p-arvo oli 0,05.

Tulokset

kliinis ominaisuudet 35 UC /SCC tutkimusryhmän potilasta ja 12 suomuinen metaplasiaa kontrolliryhmän potilaiden näkyvät taulukossa 1. Ei demografisia eroja ei havaittu tutkimuksessa ja kontrolliryhmissä, kuten ikä (71,2 ± 7,7 vs. 66,5 ± 10,1 vuotta, p = 0,246), miesten ja naisten suhde (82,9% vs. 66,7%, p = 0,251) , ja tupakointi historia (62,9% vs. 41,7%, p = 0,311). Tutkimuksessa ryhmä, 4 (12,1%) potilaista oli matala-asteinen karsinooma ja 29 (87,9%) oli korkea-asteen. Jäljellä 2 potilaiden saatavilla näytteet (saatu höyläysleikkaus virtsarakon) sisälsi ainoastaan ​​SCC komponentti, mikä kielletään luovutus arvosanan.

HPV-DNA havaittiin 6 35 (17,1%) tutkimusryhmä näytteet, ja 1 12 (8,3%) kontrolliryhmään näytteet (taulukko 2). Kaikki HPV olivat tyyppiä 18, lukuun ottamatta 1 valmisteluryhmän näyte, joka oli tyyppiä 35. yliekspressio p16 havaittiin 16 (45,7%) tutkimusryhmä näytteet ja 1 (8,3%) kontrolliryhmään näyte (taulukko 2). Sekä HPV positiivisuus ja p16 yli-ilmentyminen oli läsnä vain 3 (8,8%) tutkimusryhmä näytteitä eikä kontrolliryhmässä näyte.

valmisteluryhmän ei ollut eroja iän, sukupuolen, vaihe, tai asteen välillä HPV-negatiivisten ja HPV-positiivisia tapauksia. Niistä 29 HPV-negatiivinen tapauksissa 20 (69,0%) oli tupakoitsijoita tai ex-tupakoitsijoita, kun taas, että 6 HPV-positiivisten tapausten, vain 2 (33,3%) oli tupakoitsijoita tai ex-tupakoitsijoita. Tupakoitsijoille tai ex-tupakoitsijoita, prosenttiosuus HPV-negatiivisten BC oli noin 2 kertaa suurempi kuin prosenttiosuus HPV-positiivisten BC. Sitä vastoin BC näytteet tupakoimattomien osoitti noin 2-kertaa suurempi prosenttiosuus HPV-positiivisuuden kuin HPV-kielteinen (taulukko 3).

Keskustelu

Lisäksi tupakointi, työperäinen altistuminen aromaattisia amiineja, ja tiettyjen lääkkeiden, kuten syklofosfamidin ja fenasetiini, kuten tunnettuja riskitekijöitä BC, HPV-infektio on myös ehdotettu mahdollisena aiheuttava tekijä UC virtsarakon [21], [22 ]. Esiintyvyys HPV UC virtsarakon raportoitu aikaisemmissa tutkimuksissa on vaihdellut 0%: sta 81,3% [23] – [25]. Ero johtuu todennäköisesti näytteenotto ongelmia, saastuminen, detektioherkkyyttä järjestelmien ja maantieteellisiä eroja [26].

Youshya et al. [21]. raportoi, että 60% potilaista oli positiivisia HPV L1 kapsidiproteiinista ilmentymistä immunovärjäyksellä, vaikka PCR: llä käyttäen konsensus GP5 + /6 + alukkeita ei havainnut HPV-DNA. Ehdotettu syy erilaisuuden HPV havaitseminen hinnat oli vasta-aineita käytettiin ja herkkyys analyysin havaitsemiseksi DNA: iden [27]. Tässä tutkimuksessa käytimme HPV-DNA-siru mikrosiru järjestelmän. HPV oligonukleotidi microarray järjestelmä on äskettäin kehitetty bioteknologian, joita voidaan soveltaa kliinisessä käytännössä havaitsemiseen ja genotyypin HPV. HPV-DNA-chip mikrosiru on osoittanut herkkiä havaitsemiseksi HPV-DNA kuin PCR yksin kudosnäytekappaleessa [28], [29].

HPV hakeutuu okasolujen ja sen yhteys ihmisen SCC on kohdunkaulan, pään ja kaulan, ja peräaukon on vakiintunut [7]. Nykyisessä tutkimuksessa havaitsemismäärä HPV-DNA oli 2 kertaa suurempi tutkimusryhmän vaihtelevin UC /SCC virtsarakon (17,5%) kuin kontrolliryhmä kanssa levyepiteelikarsinooma dysplasia (8,3%). Emme kuitenkaan voi vahvistaa tilastollisesti merkittävä kasvu riskin HPV-infektio tutkimusryhmässä, todennäköisesti koska suhteellisen pieni otoskoko (taulukko 2). Meidän havainnot ovat yhdenmukaisia ​​muiden tutkimusten, joissa HPV-DNA havaittiin molemmissa UC virtsarakon ja SCC virtsarakon [30].

Vaikka HPV-infektio on liittynyt BC monissa tutkimuksissa, on tärkeää ymmärtää, että tällainen yhdistys ei vastaa syy. Mikään aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että on olemassa suora yhteys HPV-infektion ja syövän syntymistä BC, vaikka mahdollisuus on syy-asema on ehdotettu, koska samankaltaisuutta kohdunkaulan ja pään ja kaulan alueen syöpien, jolle syy-yhteys on perustettiin [19] [31], [32]. Tämän kysymyksen, yritimme vahvistaa p16 yli-ilmentymisen korvikemarkkerina aktiivisen HPV-infektion BC; Emme kuitenkaan pystyneet havaitsemaan vahvan yhteyden p16 yli-ilmentymisen ja HPV-infektio UC /SCC virtsarakon (taulukko 2).

HPV koodaa kaksi onkoproteiineja: E6 ja E7 [33]. E6-proteiini sitoutuu villityypin (wt) p53, mikä puolestaan ​​johtaa ubikitiini-välitteisen hajoamista p53 tai suoraan inaktivoimalla paino–p53 muodostamalla kompleksi [34], [35]. E7 sitoutuu pRb ja vapauttaa E2F transkriptiotekijä, joka myöhemmin helpottaa solujen lisääntymistä. P16 on sykliiniriippuvaisen kinaasin (CDK) estäjä, joka estää CDK4-välitteisen fosforylaation pRb ja myöhemmin G1-S etenemistä. HPV-infektoidut solut yli-ilmentävät p16 yrittää kompensoida E7 aiheuttama menetys pRb. Koska nämä negatiivista palautetta välisiä pRb ja p16 yli-ilmentyminen p16 on nyt käytetään usein korvikemarkkerina HPV onkogeenin ilmentymisen. Tässä tutkimuksessa p16 oli yli-ilmentynyt 45,7% UC /SCC näytteitä; kuitenkin sekä HPV-positiivisuuden ja p16 yli-ilmentyminen oli läsnä vain 8,6%. Tämä havainto siten osoittaa, että p16 ilmaisu ei ehkä ole vahvaa surrogaattimarkkerina oli HPV-infektion UC /SCC, joka on sopusoinnussa tulosten Alexander et al. [10].

Muita havaintoja kohteisiin tässä tutkimuksessa olivat HPV ja suurempi prosenttiosuus tupakoimattomien HPV-positiivisten ryhmässä kuin HPV-negatiivinen ryhmä. Lähes kaikki HPV-positiiviset näytteet tutkimusryhmässä oli tyyppiä 18. Ainoa poikkeus oli näyte HPV-tyypin 35, jota on pidetty variantti HPV 16 ja jota ei ole aiemmin eristetty virtsarakon [36]. Kuten on hyvin tunnettua, että HPV-tyypit 16 ja 18 on luokiteltu korkean riskialtista HPV varten johtava syy syöpä eri HPV-tyypit [7], [16], [37], [38], tuloksemme kanssa HPV-tyyppien 18 ja 35 voidaan tukivat hypoteesia HPV-infektion, yhdessä syövän synnyn virtsarakon syöpään. Vaikka todennäköisyys kasvaa HPV-positiivisuus tupakoimattomilla ei ollut tilastollisesti merkitsevä koska pieni otoskoko, tämä havainto viittaa siihen, että HPV-infektio voi edelleen liittyä kehittämiseen sekoitettu UC /SCC virtsarakon, erityisesti ei- tupakoitsijoita, koska se kaksi kertaa suurempi prosenttiosuus HPV-positiivisuuden kuin tupakoitsijat (p = 0,286, taulukko 3).

Tämä tutkimus oli joitakin rajoituksia. Retrospektiivinen tutkimus, jossa suhteellisen pieni määrä näytteitä rajoittanut tilastollinen voima ja potentiaali harhaa. Serologisiin HPV ehdottanut Badawi ei voitu suorittaa, koska tutkimuksen suunnittelu, vaikka vasta-ainevaste (immunoglobuliini [Ig] G) L1 capsids voitaisiin käyttää markkerina kumulatiivisen HPV vastuita [9]. Vertailuryhmä oli levyepiteelikarsinooma metaplasiaa, kun taas kontrolliryhmä normaali uroteeliin ehkä ollut tarkoituksenmukaisempaa esittää vahvan yhteyden HPV-infektion ja syövän syntymistä UC /SCC. Tämä tutkimus kuitenkin on merkittävä määritettäessä suhde HPV-infektion esiintyvyys BC yhtenä aiheuttavat tekijät karsinogeneesissä virtsarakon ja tämä on ensimmäinen paperin kuvataan kliinistä merkitystä mahdollinen yhteys HPV-infektion ja virtsarakon syövän ei- tupakoitsijoita.

Johtopäätös

tulosten perusteella tämän tutkimuksen, HPV-infektio näyttää liittyvän kehittämiseen sekoitettu UC /SCC virtsarakon, erityisesti tupakoimattomien keskuudessa korealaiset. Kuitenkin rooli HPV-infektion kehittämistä tämän tyyppinen syöpä voi olla yhtä merkittävä kuin SCC kohdunkaulan tai pään ja kaulan. Lisäksi p16 ilmaisu ei näytä olevan vahva surrogaattimarkkerina oli HPV-infektio UC virtsarakon ja levyepiteelikarsinooma erilaistumista.