Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

yli-ilmentyminen RRM1 ja RRM2 on liittynyt gemsitabiinin vastarintaa. BRCA1 yli-ilmentyminen lisää herkkyyttä paklitakselille ja doketakselin. Olemme takautuvasti tutkittiin, mikä vaikutus RRM1, RRM2 ja BRCA1 ilme lopputulos gemsitabiinin ja doketakselin kehittyneissä kuin pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) potilailla.

Menetelmät ja tärkeimmät havainnot

Kasvain näytteet otettiin 102 kemoterapia-naiivit kehittynyt pienisoluista keuhkosyöpää gemsitabiiniryhmässä doketakselin osana satunnaistetussa tutkimuksessa. RRM1, RRM2 ja BRCA1 mRNA-tasot arvioitiin kvantitatiivisella PCR: llä ja korreloivat vastaus, aika taudin etenemiseen ja eloonjäämiseen. Kuten BRCA1 nousivat, todennäköisyys vastaus lisääntynyt (Odds Ratio [OR], 1.09:

p

= 0,01) ja etenemisen riskiä laski (riskisuhde [HR], 0,99;

p

= 0,36). Kuten RRM1 ja RRM2 nousivat, todennäköisyys vastaus laski (RRM1: OR, 0,97;

p

= 0,82; RRM2: OR, 0,94;

p

0,0001) ja riski etenemisen lisääntynyt (RRM1: HR, 1,02;

p

= 0,001; RRM2: HR, 1,005;

p

= 0,01). Yhteisvaikutus havaittu BRCA1 ja RRM1 annettiin potilaille luokitellaan kolmeen riskiryhmään yhdistelmiä geeniekspressiotasot, jossa kertaa etenemisen 10,13, 4,17 ja 2,30 kuukautta (

p

= 0,001). Alhainen BRCA1 ilmentyminen oli ainoa merkittävä tekijä liittyy pidempi aika taudin etenemiseen 31 potilailla, jotka saivat sisplatiinia-pohjainen toisen linjan hoito.

Johtopäätökset

mRNA ilmentymä BRCA1, RRM1 ja RRM2 on potentiaalisesti hyödyllinen väline valittaessa pienisoluista keuhkosyöpää uunitoiveet kemoterapiaa ja optio lisätutkimuksia tulevaisuudentutkimusta.

Citation: Boukovinas I, Papadaki C, Mendez P, Taron M, Mavroudis D, Koutsopoulos A, et al. (2008) Kasvain BRCA1, RRM1 ja RRM2 mRNA eksressoitumistasojen ja kliinisen vasteen ensilinjan Gemsitabiini plus Dosetakselia Non-Small-Cell Lung Cancer Potilaat. PLoS ONE 3 (11): e3695. doi: 10,1371 /journal.pone.0003695

Editor: Torbjörn Ramqvist, Karolinska Institutet, Ruotsi

vastaanotettu: 02 kesäkuu 2008; Hyväksytty: 21 lokakuu 2008; Julkaistu: 11 marraskuu 2008

Copyright: © 2008 Boukovinas et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ osittain tukee Kreetan Association for Biomedical Research (CABRin). Dr. John Souglakos on vastaanottajaa CABRin tutkimuksen apurahan. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) edelleen johtava syy syövän kuolema [1], joilla on vain vähän parannusta selviytyminen riippumatta kemoterapian käytetään joko yhdistelmänä tai yksittäisinä aineina [2] . Yhdistelmiä kolmannen sukupolven sytostaattien, kuten taksaanit, vinorelbiini ja gemsitabiini, sisplatiinin ovat nousseet uudet standardit. Useissa vaiheen III kliinisissä tutkimuksissa pitkälle NSCLC, yhdistelmä platinaa taksaanien saavutettu mediaanielossaolosta aikoina 8-11 kuukautta ja 1-vuoden pysyvyys 31-46% [3]. Non-platina-pohjainen yhdistelmä, jossa gemsitabiinin ja doketakselin tai paklitakselin ovat tuottaneet samanlaisen selviytymisen etu suotuisampi toksisuusprofiili [4], [5]. Jotta voitaisiin edelleen parantaa selviytymistä, vaiheen III tutkimuksessa räätälöityjä sisplatiinin mukaan ERCC1 mRNA tasot vaiheessa IV ei toteutettiin. Potilaat kontrolliryhmässä saivat sisplatiinia ja doketakselin, kun taas genotyypin käsivarteen, potilailla, joilla on alhainen ERCC1 tasoilla saivat sisplatiinia ja doketakselin ja ne, joilla on korkea saivat gemsitabiinia ja doketakselin [6]. Vaikka tavoite vaste oli suurempi genotyypin varren kuin verrokkiryhmässä (50,7% vs. 39,3%), tämä ei kääntää parantunut selviytymistä. British Thoracic Oncology Group tutkimuksessa (BTOG1) myös ei löytänyt yhdistyksen välillä ERCC1 tasojen ja selviytymistä kehittyneissä NSCLC hoidetuilla potilailla dosetakselia ja karboplatiinin [7]. Retrospective tutkimukset vaiheessa IV ei ole raportoitu, että potilailla, joilla on alhainen ERCC1 tai RRM1 mRNA, oli keskimääräinen eloonjäämisaika jopa 15 kuukausia, kun gemsitabiiniryhmässä plus sisplatiini, enemmän merkittäviä eroja selviytymisen mukaan RRM1 tasolla [8], [9], [10]. Toteutettavuustutkimus räätälöityjen hoito NSCLC potilailla, joilla on korkea ERCC1 ja matalan ribonukleotidireduktaasi alayksikköä M1 (RRM1) mRNA: n ilmentymisen havaittiin, että gemsitabiini ja doketakselin voisi olla optimaalinen yhdistelmä tässä potilasryhmässä [11].

RRM1 ja RRM2 koodaavat eri geenit eri kromosomeissa ja niiden mRNA: t ilmentyvät differentiaalisesti koko solusyklin aikana. Vähentynyt ilmentyminen let-7 microRNA (miRNA) havaitaan usein NSCLC [12] ja johtaa usein yli-ilmentymisen RRM1 ja RRM2 [13]. Resistenssin gemsitabiinin on liittynyt sekä RRM1 ja RRM2 yliekspressio [14], [15]. Sirna kohdistaminen RRM2 parannettu kemosensitiivisyys gemsitabiiniannokseen haiman adenokarsinooma [16]. Tutkimuksessamme Metastasoituneen keuhkoadenokarsinooma potilailla, joita hoidettiin gemsitabiinin ja doketakselin, potilailla, joilla on alhainen sekä RRM1 ja RRM2 oli merkitsevästi suurempi vaste (60% vs. 14,2%), aika taudin etenemiseen (9,9 vs. 2,3 kuukautta), ja kokonaiseloonjääminen (15,4 vs. 3,6 kuukautta) kuin potilailla, joilla on korkea molempien geenien [17].

tiivis korrelaatio on havaittu myös välillä ekspressiotasot RRM1 ja BRCA1 [18], [19], [20], ja menetys anna-7 on osoitettu upregulate

BRCA1

sekä

RRM1

ja

RRM2

[13]. Lisäksi sekä

BRCA1

ja

RRM1

ovat yläreguloituja SV40 T /T-antigeenin allekirjoitusta [21]. BRCA1 ilmaisu annetaan ero kemosensitiivisyys syöpäsolulinjoissa [22], [23]. Munasarjasyöpä potilaiden alin terciles BRCA1- ilmaisun osoittivat herkkyyttä sisplatiinin ja kestävyys paklitakseli ja dosetakseli, kun taas korkein terciles oli vastustuskykyä sisplatiiniin ja herkkyys paklitakselin ja doketakselin [23]. Alhainen BRCA1 myös korreloi elonjäämisetua NSCLC hoidetuilla potilailla gemsitabiinin ja sisplatiinin [18].

Voidakseen vahvistaa aikaisemmat havainnot RRM1 ja RRM2 [17] ja tutkia tarkemmin roolia BRCA1 vuonna taksaania herkkyys ja kestävyys, me jälkikäteen analysoida useita kasvaimen näytettä kehittynyt pienisoluista keuhkosyöpää gemsitabiiniryhmässä ja doketakselin satunnaistetussa vaiheen III tutkimuksessa suorittaa Helleenien Oncology Research Group (Horg) [5].

Methods

potilaat

Kasvaimen kerättiin ensisijainen kasvaimia histologisesti vahvistettu käyttökelvottoman vaiheessa III B ja IV ei-jotka olivat mukana kokeellinen käsivarren Horg satunnaistetussa tutkimuksessa suorittaa huhtikuusta 1999 syyskuu 2002 [5] (ei oikeudenkäyntiä rekisteröitymistä ennen vuotta 2005). Kelpoisuusvaatimukset on aiemmin raportoitu. Tutkimuksen hyväksyi eettisten toimikuntien osallistuvien sairaaloiden ja kaikki potilaat antoivat allekirjoitettu suostumus ennen tutkimukseen osallistumista. Potilaat saivat ensilinjan gemsitabiini (Gemzar®, Eli Lilly, Indianapolis, IN, USA) 1000 mg /m

2 päivinä 1 ja 8 ja doketakseli (Taxotere®, Sanofi-Aventis, Collegeville, NJ, USA) 100 mg /m

2 päivänä 8, ihmisen granulosyyttipesäkkeitä stimuloiva tekijä tuki välein 3 viikkoa, kuten edellä on kuvattu. Potilaan arviointi suoritettiin lähtötilanteessa ja joka kolmas solunsalpaajahoitojaksoa [5].

Tutkimuksen suunnittelu

Tämä tutkimus oli retrospektiivinen analyysi ennusteen arvioinnissa on BRCA1, RRM1 ja RRM2 mRNA ilmaisun NSCLC hoidetuilla potilailla ensivaiheen gemsitabiinia ja doketakselin. Kaikki käytettävissä kasvainbiopsioissa primaarikasvaimen yli 100 solua jakso otettiin mukaan analyysiin. Kaikki tehokkuustulokset arvioitiin kaikkia rekisteröityjä potilaat merkitsivät Intent-to-treat perusteella.

geeniekspressioanalyysissä

Kaikki parafinoidut kasvaimia tarkistaa kaksi riippumatonta patologit määritellä sopivin kasvain alue mikrodissektion varmistaa vähintään 90% syöpäsoluja. Pahanlaatuisten solujen hankittiin käyttäen Eppendorf pietsosähköistä microdissector (Eppendorf, Hampuri, Saksa). RNA puhdistettiin Trizol LS-menetelmällä (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), mitä seurasi saostus isopropanolilla ja DNaasikäsittely (Ambion, Austin, TX, USA). cDNA-synteesi suoritettiin käyttäen SuperScript III käänteistranskriptaasia (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Suhteellinen kvantitointi geenin ilmentyminen suoritettiin käyttäen ABI Prism 7900HT Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). (Lisätietoja on geenien ilmentymisen analyysi, katso teksti S1).

Tilastolliset analyysit

Lisäksi analysoidaan ekspressiotasot kunkin geenin jatkuvana muuttujana, geenien ilmentyminen oli myös luokiteltu terciles vuonna velvoittaa tutkimaan riskin suuntaus geenin muuttujia ja voidakseen tunnistaa helposti ryhmille geeniekspressiotasot eri riskejä. Vastaukset kirjattiin mukaisesti RECIST kriteerien [24]. Mediaani aika kasvaimen etenemiseen ja eloonjäämiseen laskettiin hoidon aloittamisesta ensimmäiseen dokumentoitu taudin etenemiseen tai kuolemaan, vastaavasti.

Mahdollista yhdistyksen välillä lähtötilanteesta vaste ja geeniekspressiotasot verrattiin joko kaksi sivuinen Fisherin testiä tai Chi-neliö testi kategorinen muuttujien ja Kruskal-Wallisin testi jatkuvia muuttujia. Normaalisuus jatkuvien muuttujien todennettiin kanssa Kolmogorov-Smirnov testi. Spearman testiä käytetään arvioimaan korrelaatio BRCA1, RRM1 ja RRM2 mRNA: n ilmentymisen. Kaikki mahdolliset riskitekijät vaste arvioitiin on yhden muuttujan analyysiin, ja monimuuttuja logistinen regressioanalyysi, jossa tarkistetaan pariton tunnusluvut ja niiden 95% luottamusväli (CI), käytettiin arvioimaan, mitkä tekijät ovat vaikuttaneet merkittävästi vasteen. Hosmer-Lemeshowin todennäköisyyden testiä käytettiin arvioimaan sovituksen hyvyys.

Yhdistyksen riskitekijöiden kanssa aika-to-tapahtuman päätepisteisiin analysoitiin log-rank-testi, ja Kaplan-Meier menetelmää käytettiin piirtää vastaava aika-to-etenemistä ja eloonjäämistä käyriä. Univariate Coxin regressioanalyysi, jossa riskisuhteita ja 95% CI, käytettiin arvioimaan yhdistyksen välillä jokainen mahdollinen ennustetekijä ja selviytymistä sekä aika taudin etenemiseen. Nämä tekijät sisällytettiin monimuuttuja Coxin suhteellisen vaarat regressiomallia, jossa vaiheittain siten (sekä eteen- ja taaksepäin) arvioida itsenäistä merkitystä eri muuttujien eloonjäämiseen ja aika taudin etenemiseen. Uskottavuussuhde testillä arvioida sovituksen hyvyys, ja Wald testi käytettiin arvioitaessa kertoimen merkitystä. Kun kyseessä on potentiaalisten monivertailuja,

p

-arvot korjattiin kanssa Bonferronin korjauksen.

Kaikki tilastolliset laskelmat suoritettiin SPSS, versio 15.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL , USA). Kaksipuolinen

p

-arvot alle 0,05 pidettiin merkittävinä.

Tulokset

Potilaan ominaisuuksista ja potilaan kliinisen

Alkuperäisessä Satunnaistetussa tutkimuksessa [ ,,,0],5], 209 NSCLC potilasta hoidettiin gemsitabiinin ja doketakselin; 107 eivät olleet mukana tässä tutkimuksessa puutteen takia kasvainkudoksen (Fig. 1). Kliiniset tiedot ja näytteet primaarikasvaimista olivat käytettävissä 102 potilasta, jotka olivat mukana tässä tutkimuksessa. Monistaminen BRCA1, RRM1 ja RRM2 menestyi 96 näytettä. Kahdeksankymmentäyksi oli adenokarsinoomat, kymmenen okasolukarsinoomia, ja viisi suurta-solukarsinoomat. Potilaiden ominaisuudet on esitetty taulukossa 1. Alkuperäisessä tutkimuksessa vastausprosentti oli 30%, aika taudin etenemiseen 4 kuukautta, ja eloonjäämismediaani 9 kuukautta [5]. Lopputulokseen 96 potilasta arvioitiin tässä tutkimuksessa oli samanlainen: vastausprosentti 30,5%, aika taudin etenemiseen 4,2 kuukautta, ja eloonjäämismediaani 10,5 kuukautta.

Kaksisataa ja yhdeksän potilasta hoidettiin gemsitabiinin ja doketakselin osana vaiheen III satunnaistetussa tutkimuksessa pitkälle NSCLC [5]. Tuumorinäytteiden saatiin yhteensä 102 potilasta; 68 potilasta sulkea pois, koska vain Sytologisten saatiin näyte, ja 39 keuhkoputkien koepaloja sisälsi liian vähän kasvainsolujen analysoitavaksi. mRNA: n ilmentymisen analyysi oli mahdollista Tuumorinäytteissä alkaen 96 102 potilasta.

BRCA1, RRM1 ja RRM2 mRNA ekspressiotasot

Mediaani mRNA-ekspressiotasot olivat 3,64 (vaihteluväli 0- 34.37) varten BRCA1, 0,82 (vaihteluväli 0-+325,23) varten RRM1 ja 27,16 (vaihteluväli +0,97-256,84) varten RRM2 (taulukko 1). Ilmentymistasoja ei noudattanut normaalijakaumaa (Fig. S1). Ei ollut mitään korrelaatiota iän, sukupuolen, PS tai sairauden vaiheessa ja BRCA1, RRM1 tai RRM2 mRNA-tasoja. Merkittäviä korrelaatioita havaittiin yleistä välillä BRCA1 ja RRM1 (ρ = 0,27;

p

= 0,008) ja ei-merkitsevä suuntaus korrelaatio RRM1 ja RRM2 (ρ = 0,19;

p

= 0,06 ) mRNA-tasot. Siellä oli myös merkittävä käänteinen korrelaatio BRCA1 ja RRM2 mRNA-tasot (ρ = -0,25;

p

= 0,02). Taulukko 1 osoittaa myös mRNA ekspressiotasot kolmesta geenien mukaan terciles.

Geenien ilmentyminen ja hoitovastetta

Jotta ennustaa hoitovasteen, logistinen regressiomalli varten asennettujen ilmentymisen kunkin geenin jatkuvana muuttujana. Kuten BRCA1 nousivat, todennäköisyys vastaus kasvoi merkittävästi (Odds Ratio [OR] = 1,09; 95% CI, 1,02-1,16;

p

= 0,01). Sitä vastoin, kuten RRM2 nousivat, todennäköisyys vaste väheni huomattavasti (OR = 0,94; 95% CI, ,91-,97;

p

0,0001). Samanlainen, mutta ei-merkitsevä suuntaus havaittiin RRM1 tasoilla (OR = 0,97; 95% CI, ,77-+1,23;

p

= 0,82).

Kun hoitovaste oli luokiteltu niiden geeniä ekspressiotasot jonka terciles, että suurin osa vastaajista oli korkea BRCA1 ilmaisun ja alhainen RRM2 ilme: 58,6% korkein tercile BRCA1- ilmaisun (

p

= 0,002) ja 72,4% alimmassa tercile of RRM2 ilmaisun (

p

0,0001) (taulukko 2).

univariate regressioanalyysimme osoitti, että alhainen RRM2 ilmaisua, ECOG 0, ja korkea BRCA1 ilmentyminen oli merkitsevästi yhteydessä suurempi todennäköisyys vasteen (taulukko 2). Monimuuttujakalibrointiin regressioanalyysimme näistä muuttujista yhdessä RRM1 ja sairauden vaiheessa vain pieni RRM2 ilmaisu noussut itsenäisenä ennustava tekijä vastaus (taulukko 2).

Geenien ilmentyminen ja aika taudin etenemiseen

Euroopan univariate analyysi aika taudin etenemiseen paljasti, että ainoa kliininen muuttuja liittyy etenemiseen oli PS (riskisuhde [HR] PS 1-2, 1,55; 95% CI, 0,99-2,41;

p

= 0,05) (taulukko 3). Yksiulotteista analyysi aika taudin etenemiseen mukaan geeniekspressiotasot kuin jatkuvia muuttujia osoitti, että kun RRM1 ja RRM2 arvot nousivat, etenemisen riskiä kasvoi merkittävästi: RRM1 (HR 1,02; 95% CI, 1,01-1,02;

p

= 0,001); RRM2 (HR, 1.005; 95% CI, 1,001-1,008;

p

= 0,01). Kuitenkin, kuten BRCA1 nousivat, etenemisen riskiä vähentynyt (HR 0,99; 95% CI, 0,95-1,02;

p

= 0,36).

Kun geenin ilmentymisen tasot olivat luokiteltuna terciles, etenemisen riskiä oli suurempi potilailla välituotteiden ja korkein terciles sekä RRM1 ja RRM2 kuin niille alimman tercile: RRM1 väli- tercile (HR, 1,20; 95% CI, 0,72-1,97;

p

= 0,49); RRM1 korkein tercile (HR, 1,51; 95% CI, 0,91-2,51;

p

= 0,11); RRM2 väli- tercile (HR 1,28; 95% CI, 0,77-2,13;

p

= 0,35); RRM2 korkein tercile (HR, 1,93; 95% CI, 1,16-3,22;

p

= 0,01) (taulukko 3). Etenemisen riskiä oli suurempi potilailla välituotteiden ja alin tercile BRCA1- kuin niille korkeimman tercile: BRCA1 väli- tercile (HR, 1,33; 95% CI, +0,80-+2,22;

p

= 0,28) ; BRCA1 alin tercile (HR, 1,51; 95% CI, 0,91-2,49;

p

= 0,11) (taulukko 3). Aika taudin etenemiseen mukaan geeniekspressiota terciles on esitetty taulukossa 3.

monimuuttujatestausta mallin varustettu muuttujia tutkitaan muuttujan asetus.

Kun vuorovaikutus termejä tutkittiin tarkistaakseen, ovatko ne paransi huomattavasti sovi, mikään ei ollut merkittävä paitsi BRCA * RRM1, joka antoi merkityksen

p

= 0,02 malliin ilman vuorovaikutusta aikavälillä (taulukko S1). Moniulotteinen malli sitten ositettiin RRM1 (taulukko S2) ja ilman taudin vaiheessa. Tässä mallissa, potilaiden alin tercile on RRM2 edelleen on alhaisin riski etenemisen, riippumatta RRM1 tasoilla.

Potilaat luokitellaan kolmeen ryhmään sen mukaan, etenemisen riskiä, ​​joka perustuu vuorovaikutukseen havaittu RRM1 ja BRCA1. Kaksikymmentäneljä potilasta oli matalan riskin ryhmään (väli BRCA1 + alhainen RRM1; korkea BRCA1 + alhainen RRM1; korkea BRCA1 + väli RRM1); 42 potilasta oli väli-riskiryhmään (matala BRCA1 + alhainen RRM1 keskivälin BRCA1 + korkea RRM1; korkea BRCA1 + korkea RRM1); ja 30 potilasta oli riskiryhmään (pieni BRCA1 + väli RRM1 keskivälin BRCA1 + väli RRM1; alhainen BRCA1 + korkea RRM1).

mediaani etenemiseen oli 10,13 kuukautta (95% CI, 7,65 -12,62) potilaille matalan riskin ryhmään, 4,17 kk (95% CI, 72,90-+5,44) potilaille väli-riskiryhmään, ja 2,30 kuukautta (95% CI, 1,76-2,84) potilailla on korkean riskiryhmään (

p

= 0,001) (taulukot S2, S3, Fig. 2).

Potilaat luokitellaan kolmeen ryhmään sen mukaan etenemisen riskiä, ​​perustuu monen havaittu RRM1 ja BRCA1. Kaksikymmentäneljä potilasta oli matalan riskin ryhmään (väli BRCA1 + alhainen RRM1; korkea BRCA1 + alhainen RRM1; korkea BRCA1 + väli RRM1); 42 potilasta oli väli-riskiryhmään (matala BRCA1 + alhainen RRM1 keskivälin BRCA1 + korkea RRM1; korkea BRCA1 + korkea RRM1); ja 30 potilasta oli riskiryhmään (pieni BRCA1 + väli RRM1 keskivälin BRCA1 + väli RRM1; alhainen BRCA1 + korkea RRM1). Mediaani aika taudin etenemiseen oli 10,13 kuukautta (95% CI, 7,65-12,62) potilaille matalan riskin ryhmään, 4,17 kk (95% CI, 72,90-+5,44) potilaille väli-riskiryhmään, ja 2,30 kuukautta ( 95% CI, 1,76-2,84) potilaiden käyttöön riskiryhmään (

p

= 0,001) (Katso myös taulukot S2, S3).

Geenien ilmentyminen ja selviytyminen

Kun yhden muuttujan analyysin selviytymisen, ainoa merkittävä kliininen muuttuja oli PS (HR PS 1-2, 1,94; 95% CI, 1,21-3,12;

p

= 0,005) (taulukko 4 ). Kuten RRM1 ja RRM2 arvot nousivat, kuoleman riskiä lisääntynyt: RRM1 (HR, 1,01; 95% CI, 1,00-1,02;

p

= 0,005); RRM2 (HR, 1,004; 95% CI, 1,00-1,008;

p

= 0,06). Kuitenkin, kuten BRCA1 nousivat, kuolleisuusriski väheni (HR 0,99; 95% CI, ,96-+1,03;

p

= 0,60). Kun geeniekspressiotasot luokiteltiin vuonna terciles, saman riskin suureneminen kuoleman havaittiin korkeampi Sekä RRM1 ja RRM2 alentavat BRCA1 (taulukko 4). Monimuuttujakalibrointiin mallissa mukaan lukien kaikki muuttujat yhden muuttujan analyysin, vain PS muodostunut merkittävä tekijä eloonjäämisen (taulukko 4).

Geenien ilmentyminen ja toisen linjan hoitona

Toinen line hoitoa annettiin 31 potilasta, 90,3% heistä saivat sisplatiinia kemoterapiaan. Ei ollut eroja geeniekspressiotasot välillä saaneilla potilailla ja ne eivät saa toisen linjan hoito. Aika taudin etenemiseen kaikilla 31 potilaalla laskettuna alusta toisen linjan hoito oli 3,40 kuukautta (95% CI, 2,73-4,07). Toisin kuin kuvion havaittu ensivaiheen hoidolle, alhainen BRCA1 liittyi merkittävästi pienin riski etenemisen toisen linjan hoito. Mediaaniaika taudin etenemiseen oli 6,60 kuukautta potilaiden alimmassa tercile, 2 kuukautta niille väli tercile, ja 2,40 kuukautta niille korkeimman tercile BRCA1- ilmaisun (

p

= 0,004) (taulukko 5, Fig. 3). BRCA1 mRNA ilmaisu nousi ainoa merkittävä tekijä sekä yhden ja usean analyysejä aika taudin etenemiseen 31 potilailla, jotka saivat toisen linjan hoito (taulukko 6).

Toisin kuin kuvion havaittu ensilinjan terapia, alhainen BRCA1 liittyi merkittävästi pienin riski etenemisen toisen linjan hoito. Mediaaniaika taudin etenemiseen oli 6,60 kuukautta potilaiden alimmassa tercile, 2 kuukautta niille väli tercile, ja 2,40 kuukautta niille korkeimman tercile BRCA1- ilmaisun (

p

= 0,004) (taulukko 5) . (Lisätietoja, katso teksti.)

Keskustelu

Tämä tutkimus on löytänyt käänteinen korrelaatio RRM2 mRNA ilmaisun ja vastaus gemsitabiinia plus dosetakselia kehittynyt NSCLC potilaat. Potilaat, joilla on alhainen RRM2 mRNA ilmaisun saavutetaan huomattavasti korkeampi vaste ja aika taudin etenemiseen kuin ne, joilla on korkea RRM2 ilme. Lisäksi RRM2 mRNA ilmentyminen paljastui itsenäisenä ennustava tekijä vastausta. Nämä tulokset vahvistavat myös aiemmat havainnot pienessä kohortin keuhkojen adenokarsinoomat käsitelty saman annoksen [17]. Vaikka mediaani RRM2 tasot olivat erilaisia ​​näissä kahdessa tutkimuksessa, mahdollisesti pieniä eroja potilasryhmissä tai joissakin vaiheissa RNA ja PCR kvantifiointiin menettelyjä, korrelaatio mRNA-tasoja ja kliinisiä tuloksia oli samankaltainen molemmissa tutkimuksissa. Kiinnostavaa, siirtogeenisiä hiiriä kehitettiin keuhkoadenokarsinooma, mutta ei muita kasvaimia, kun läsnä on RRM2 yliekspressio [25]. Aiemmissa takautuva tutkimuksissa [8], [9], huomasimme, että korkea RRM1 ennusti pidempi eloonjäämisen vaiheessa IV ei saaneilla potilailla gemsitabiinin ja sisplatiinin mutta ei saaneista sisplatiini- ilman gemsitabiinia.

merkittävä korrelaatio alkuun tercile BRCA1- mRNA ilmaisun ja parannetun vasteen havaittiin tässä tutkimuksessa lisää yhä enemmän todisteita, että BRCA1 on ratkaiseva välittäjäaine DNA-vaurioita vastaus [26]. Alhainen BRCA1 ilmaisu antaa lisääntynyt herkkyys Sisplatiinin [22], [23], [27], [28] ja etoposidin [22] ja kestävyys antimikrotubulusaine lääkkeitä, kuten paklitakseli [22], [23], [28], doketakseli [23] ja vinorelbiini [22], kun taas korkeat BRCA1 ilmentyminen johtaa resistenssin sisplatiinia [22], [23], [27], [28] ja etoposidin [22] ja herkkyys paklitakseli [22], [23], [28], doketakseli [23] ja vinorelbiini [22]. Esillä olevassa tutkimuksessa potilaat, joilla on alhainen BRCA1 mRNA ilmaisu oli huono vaste ja aika taudin etenemiseen ensilinjan gemsitabiini ja doketakselin; Sen sijaan ne on saatu mahdollisimman paljon hyötyä toisen linjan sisplatiinin perustuvaa hoitoa, saavuttaa mediaaniaika taudin etenemiseen oli 6,6 kuukautta.

Useita kerroksia todisteet osoittavat, että kumoamisen BRCA1 toiminta johtaa vastustuskyvyn antimikrotubulusaine huumeiden . Karan tarkastuspiste viat liittyvät vastustuskyvyn taksaaneja ja vinka. Suppressio

Mad2

tai

bubR1: tä

paklitakselin saaneilla rintasyövän MCF-7-solut poistetaan kara tarkistuspisteen toiminta, mikä parantaa paklitakselin kestävyys [29]. Lisäksi downregulation BRCA1 ilmaisun välittää paklitakseli vastus kautta ennenaikaisen inaktivoinnin karan tarkistuspiste MCF-7-soluihin downregulation bubR1: tä [30].

BRCA1

toimintahäiriö liittyy läheisesti kara tarkistuspisteen vikoja mutta ei G2 vaiheen muutoksiin. Itse asiassa joukko geenin ilmentymisen muutoksia johtuen knockdown endogeenisen BRCA1 on havaittu eturauhasen (DU-145) ja rinta (MCF-7) syöpäsolujen DNA-siru analyysi [31]. Eri luokkien geenit vaimentua BRCA1-pudotus solujen, myös geenien transkriptio ja solukierron säätelyssä sekä DNA: n kahdentumisen ja korjauksen. BRCA1-lyhyt häiriöitä RNA: t (siRNA: t) aiheutti myös downregulation DNA topoisomeraasi II alfa (TOP2A), entsyymiä, joka osallistuu DNA-replikaatioon ja molemmissa DNA-vaurio reagoivien G2 tarkastuspiste ja G2 decatenation tarkistuspisteen. Tämän tarkistuspisteen vaatii TOP2A, ATR, WRN (Werner oireyhtymä helikaasi), ja BRCA1; se on puutteellinen solujen mutantti

BRCA1

. Kuitenkin toisin kuin

BRCA1

-mutant solulinjat, knockdovvn villityypin BRCA1 ei vaimentanut tätä tarkistuspisteen mutta osoitti vaimenemisen sukkularihmaston tarkastuspiste [31]. BRCA1 säätelee positiivisesti ekspressiota monien geenien mukana karan tarkistuspisteen, kuten

Bub1

ja

bubR1: tä

. Yhdenmukaisesti näiden havaintojen, solut esikäsitellään BRCA1-siRNA: t eivät pidättämään metafaasissa hoidon jälkeen nokodatsoli [31].

Mielenkiintoista, BRCA1-siRNA: t aiheuttivat myös downregulation aineenvaihdunnan geenien, kuten

RRM2

ja

dihydrofolaattireduktaasi (DHFR) B [31]. Lisäksi integroitu geeni allekirjoitusta useista siirtogeenisiä malleja epiteelisyövissä luontainen toiminnot Simian virus 40T /t-antigeenejä koostuu säätelevien geenien solujen lisääntymisen, lisääntymistä ja DNA: n korjaukseen. BRCA1 on yli-ilmentynyt kolme T /T-antigeenistä siirtogeenisen hiiren mallia (rinta-, keuhko-, eturauhas-), kuten myös muita geenejä, mukaan lukien

Bub1b

,

TOP2A

,

DHFR

tymidylaattisynteesin (TS) B, ja

RRM1

[21].

rajoitettu tehoa nykyisestä kemoterapian lähestymistavat on epitomized metastaattisessa NSCLC, jossa aika taudin etenemiseen vaihtelee +5,2-+5,5kuukausi, joissa eri yhdistelmiä kemoterapiaa, kuten dosetakselia ja sisplatiinin [32] tai uusien yhdisteiden kuten pemetreksedi- (estäjä TS ja DHFR) plus sisplatiinin [33]. Siksi huolimatta taannehtivuus Tässä tutkimuksessa aika taudin etenemiseen 10 kuukautta 24 96 potilaista matalan riskin ryhmään (korkea BRCA1 ja matala RRM1 tasolla), käsiteltiin dosetakselia ja gemsitabiinin, edustaa lupaavaa uutta maamerkki, joka ansaitsee validointi prospektiivisessa tutkimuksessa räätälöityjä kemoterapiaa. Nämä kliiniset havainnot ovat samanlaisia ​​kuin saatiin EGFR tyrosiinikinaasin estäjät NSCLC potilaiden kätkeminen

EGFR

mutaatioita. Ainoassa ennakoiva tutkimus raportoitu hoidon gefitinibin 31 NSCLC potilaalla on

EGFR

mutaatioita, aika etenemiseen 9,2 kuukautta saavutettiin [34].

Nykyisestä tutkimuksessa, emme voi onko mRNA: n ilmentymisen BRCA1, RRM1 tai RRM2 voi olla prognostista – sekä ennakoivaa – rooli. Alkuvaiheen, chemonaive, resektoitiin pienisoluista keuhkosyöpää, BRCA1 mRNA ilmaisu oli ainoa itsenäinen ennustetekijöiden muuttujan [20]. Vastaavasti, korkea mRNA: n ekspressio ja BRCA1-vuorovaikutuksessa proteiinin BACH1 /Brip1 on löydetty aggressiivinen rintasyöpiä [35]. Lisäksi, BRCC36 on osoitettu olevan läsnä BRCA1-RAP80 kompleksin [36], ja yli-ilmennetään rintasyövän, jossa se antaa radioresistance [37]. Tämä korostaa sitä mahdollisuutta, että BRCA1 – tai useita vuorovaikutuksessa kumppanit – voi antaa huonon ennusteen sekä vastustuskykyä sisplatiinia tai muita DNA: ta vaurioittavien aineiden kanssa.

Yhteenvetona havaintomme osoittavat, että tehokkuus gemsitabiinin ja doketakselin voi olla parani kun räätälöidä mRNA ilmaus BRCA1, RRM1 ja RRM2. On kiehtova spekuloida, että BRCA1 voi tulla tärkeä ennustava markkeri muokkaamalla pemetreksedi ja sisplatiinin potilailla, joilla on alhainen BRCA1 tasolla, koska BRCA1 voisi olla korvike DHFR ja TS tasolla [21], [31]. Tulevaisuudentutkimuksista räätälöityjen kemoterapia perustuu näiden geenien ilmentymistä on avattu.

tukeminen Information

Kuva S1.

Rasiakuvaajat osoittaa mRNA: n ilmentymisen arvot BRCA1, RRM1 ja RRM2. Numeeriset arvot näkyvät kunkin rasiakuvaaja ovat arvoja, jotka poikkeavat mediaani. Nämä numeeriset arvot on todennäköisyys kuuluvan jakelun näiden geenien.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0003695.s001

(2,25 MB TIF) B Taulukko S1.

vuorovaikutukset aikaa taudin etenemiseen

doi: 10,1371 /journal.pone.0003695.s002

(0,05 MB DOC) B Taulukko S2.

Monimuuttuja-analyysi aikaa taudin etenemiseen ositettu RRM1

doi: 10,1371 /journal.pone.0003695.s003

(0,04 MB DOC) B Taulukko S3.

Mediaaniaika taudin etenemiseen ositettu RRM1

doi: 10,1371 /journal.pone.0003695.s004

(0,04 MB DOC) -iin Text S1.

Boukovinas ym – BRCA1

doi: 10,1371 /journal.pone.0003695.s005

(0,04 MB DOC) B