Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

tutkimiseksi seuraus ribonukleotidireduktaasin M2 (RRM2) on karsinogeneesi kohdun kohdunkaula ja sen suhdetta kliinis ominaisuudet ja ennusteen syöpäpotilaiden.

Menetelmät ja tärkeimmät havainnot

vaikutus RRM2 solujen elinkelpoisuus tutkittiin SiHa kohdunkaulan syöpäsolut jälkeen RRM2 knockdown ja lisäämällä sisplatiinin, joka aiheuttaa yksilöiden välisiä ja säikeen DNA siltoja. RRM2 immunoreaktiivisuus arvioitiin puolikvantitatiivinen H pisteet keskuudessa 29 normaalia, 30 matala-asteista dysplasiaa, 30 dysplasiaan ja 103 kohdunkaulan syöpä kudosnäytteiden kohdunkaulan käyttäen kudossiruina. RRM2 sitten korreloi kliinis muuttujien kohdunkaulan syövän ja potilaan selviytymistä. Suurempi myrkyllinen vaikutus solujen elinkelpoisuus käyttäen sisplatiini näkyi suurempi väheneminen RRM2 proteiinin ilmentymistä SiHa soluissa. RRM2 ilmentyminen syövän kudoksissa oli korkeampi kuin dysplasiaan, matala-asteinen dysplasia tai normaali kohdunkaulan kudoksissa. RRM2 ylössäätely korreloi syvä strooman invaasio, suuria kasvaimia ja parametrial hyökkäyksen ja ennustettu huono selviytymistä.

Johtopäätökset

RRM2 on uusi molekyyli markkeri diagnoosia ja kliinisiä tuloksia kohdunkaulan syövän. Se on mukana kohdunkaulan syövän synnyn ja ennustaa huono selviytyminen, ja se voi olla potentiaalinen terapeuttinen kohde myös sisplatiinihoitoon.

Citation: Su YF, Wu TF, Ko JL, Tsai HT, Tee YT, Chien MH, et al. (2014) Expression of ribonukleotidireduk- M2 Karsinogeneesi on kohdunkaulan ja sen suhdetta kliinis ominaisuudet ja prognoosi syöpäpotilaiden. PLoS ONE 9 (3): e91644. doi: 10,1371 /journal.pone.0091644

Editor: Chih-Xin Tang, Kiina Medical University, Taiwan

vastaanotettu: 11 tammikuu 2014; Hyväksytty: 13 helmikuu 2014; Julkaistu: 17 maaliskuu 2014

Tämä on avoin-yhteys artikkeli, vapaa kaikki tekijänoikeudet, ja saa vapaasti jäljentää, levittää, välittää, modifioitu, rakennettu, tai muuten käyttää kuka tahansa laillista tarkoitusta. Teos on saatavilla Creative Commons CC0 public domain omistautumista.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat tutkimuksen avustuksia Chung Shan Medical University Hospital, (CSH-2013-D-001) ja Taiwan National Science neuvosto (NSC 102-2314-B-040-014-MY3). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Ribonukleotidireduktaasin (RNR) on entsyymi, joka katalysoi muodostumista deoksiribonukleotidien alkaen ribonukleotidien [1]. Deoksiribonukleotidien puolestaan ​​käytetään synteesissä deoksiribonukleiinihappo (DNA) ja DNA: n korjaukseen [1], [2]. RNR koostuu kahdesta proteiinialayksiköstä kutsutaan suuri R1 (kutsutaan kuin M1 ihmisillä) ja pieni R2 [3]. R2 on luokiteltu RRM2 (ribonukleotidireduktaasia M2) ja p53R2 alayksiköt, jotka muodostavat aktiivisen heterodimeerinen tetrameerin ihmisillä [4], [5]. RNR on raportoitu korreloivan solujen lisääntymistä ja erilaistumista [6], [7], ja RNR toiminta on koordinoitava kanssa solusyklin etenemisen säilyttää tasapaino dNTP tuotannon ja DNA: n replikaatiota. Pitoisuudet R1 proteiinin suhteellisen vakaana koko solusyklin ajan, ja ne ovat aina yli RRM2 [8]. Näin ollen, solusyklin-riippuvainen aktiivisuus RNR säätelee RRM2 tasot [8].

tuhoaminen syöpäsolujen sisplatiini edellyttää sitoutumista lääkkeen DNA ja muodostumista platinan-DNA adduktit, jotka voi perustaa välisiä ja säikeen DNA siltoja, mikä rajoitti DNA: n replikaatiota [9]. Elimen irrottamisesta korjaus rajat komplementaatioryhmä 1 (ERCC1) entsyymi on raportoitu olevan tärkeä rooli korjaus välisen säikeen siltoja DNA [10] – [12]. Lisäksi R2 ilme on solusyklin riippuvaista, jolla on korkein taso samanaikaista DNA replikaatiota [4], [8], mikä viittaa siihen, että RRM2 polttoaineita DNA korjaukseen. Alustavat koe osoitti, että SiHa kohdunkaulan syöpäsolut, joilla on korkeampi RRM2 proteiinipitoisuus, esiintyy enemmän solujen elinkelpoisuutta kuin CaSki kohdunkaulan syövän soluja, joilla on pienempi RRM2 proteiinipitoisuus, joka perustuu MTT [3- (4,5-cimethylthiazol-2 -yyli) – 2,5-difenyylitetratsoliumbromidi] määritys käsittelyn jälkeen sisplatiinin. Ilmentymistasojen RRM2 proteiinin SiHa kohdunkaulan syövistä olivat 2,3-3,6 taittaa enemmän kuin CaSki kohdunkaulan syövistä. 48 tunnin jälkeen kulttuurin lisäämällä 5 uM sisplatiinin, solujen elinkelpoisuus SiHa-soluissa oli noin 80% alkuperäisestä SiHs soluja ilman sisplatiinia lisäksi ottaa huomioon, että solujen elinkelpoisuus CaSki-solujen väheni 51%: iin (SiHa vs. CaSki: 80 % vs. 51%,

p

0,001). Tämä tarkoittaa, että kohdunkaulan syövän solujen kohonnut RRM2 ilme on parempi solujen elinkykyä.

Parhaan tietomme mukaan osallistuminen RRM2 kohdunkaulan syövän synnyn ja potilaan henkiinjääminen ei ole raportoitu aikaisemmin. Siksi tavoitteet oli tutkia kliinistä seuraus RRM2 kohdunkaulan syöpä. Oletimme, että RRM2 korreloi etenemistä syövän kohdunkaulan. Olemme havainneet, onko syöpä solujen elinkelpoisuus aleni lisäyksen jälkeen sisplatiinin käyttäen MTT-määritystä, jos RRM2 geeni, joka pudotettiin kohdunkaulan syöpäsoluja. Jos RRM2 voisi vaikuttaa syöpäsolujen lisääntymistä, emme tutki vielä RRM2 immunoreaktiivisuus normaaleissa, matala-asteista ja dysplasiaan kudosten ja kohdunkaulan syöpä kudosnäytteiden kohdunkaulan ja määritteli korrelaatio RRM2 ilmaisun kohdunkaulan syöpä syövän synnyn. Lisäksi olemme liittyvä ilmaus RRM2 kanssa kliinis muuttujia potilaita, joilla on kohdunkaulan syöpä, ja tutki suhde sen ilmaisutapoja syövän uusiutumiseen ja potilaiden eloonjäämisen.

Materiaalit ja menetelmät

Soluviljely

SiHa ja ihmisen alkion munuais- 293T-solulinjat saatiin American Type Tissue Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). SiHa ja 293T solulinjat kasvatettiin Dulbeccon Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco, Grand Island, NY), johon oli lisätty 10% lämpöinaktivoitua naudan sikiön seerumia (FBS, Gibco, Grand Island, NY).

Lentivirus tuotanto ja transduktio

293T-solut transfektoitiin 5 ug lyhyt hiusneula-RNA (shRNA) plasmidi, 4 ug pCMVDR8.91 ja 0,4 ug pMD.G mukaan jetPEI DNA-transfektio reagenssia valmistajan protokollan (PolyPlus-transfektio , 101-10, Strasbourg, Ranska). Predesigned shRNA ja kohdesekvenssien ostettiin National RNAi Core Facility seuraavasti: shRRM2 # 354 (TRCN0000286354): 5′- CGG AGG AGA GAG TAA GAG AAA -3 ’; shRRM2 # 962 (TRCN0000038962): 5’- GCT CAA GAA ACG AGG ACT GAT-3 ’ja shLuc (TRCN0000072246): CAA ATC ACA GAA TCG TCG TAT. 24 tunnin kuluttua viljelyn jälkeen SiHa kohdunkaulan syövän soluja infektoitiin yhdistelmä-lentivirusvektoreita on infektiokertoimella (MOI) 1. Seuraavana päivänä väliaine poistettiin ja solut valittiin 2 ug /ml puromysiiniä (Sigma, P8833, St. Louis, MO). SiHa shRRM2 # 354 ja SiHa shRRM2 # 962 solulinjat perustettiin.

Western blot-analyysi

Ekvivalenttinen määrä kokonaisproteiinia käsiteltiin 12% SDS-PAGE: lla ja elektroblotattiin Hybond ECL PVDF kalvoja, inkuboitiin primaarisilla vasta-aineilla ihmisen RRM2 (GTX103193, GeneTex, Inc .; Irvine, CA 92606 USA) ja β-aktiini (A5441, Sigma, St. Louis, MO).

MTT [3- ( 4,5-cimethylthiazol-2-yyli) -2,5-difenyylitetratsoliumbromidi] määritys

SiHa shRRM2 # 354, SiHa shRRM2 # 962 ja SiHa shLuc-solut ympättiin 96-kuoppaiselle mikroviljelylevyille levyyn 5000 solua /kuoppa ja annettiin kiinnittyä yön yli. Seuraavana päivänä solut altistettiin eri pitoisuuksina (0, 25, 50 uM), sisplatiinin DMEM, jota oli täydennetty 10% FBS: ää, ja inkuboitiin 48 tunnin ajan. Kasvualusta korvattiin tuoreella kasvualustalla, joka sisälsi MTT: tä (0,2 mg /ml) ja levyjä inkuboitiin vielä 3 tuntia. Sitten väliaine poistettiin ja dimetyylisulfoksidia (DMSO) lisättiin liuottamaan MTT formatsaanikiteet. Absorbanssi väri mitattiin 570 nm, ja solujen elinkyky laskettiin prosentteina elävien solujen koko väestöstä.

Tutkittavat ja immunohistokemiallinen ilmentymistä RRM2 syövän, korkea-asteen ja matala-asteista dysplasiaa ja normaaleissa kudoksissa käyttämällä kudossiruina

rakennettu kaksi formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut kudossiruina (MaxArray kudoksen ytimet, Zymed, South San Francisco, Kalifornia), joka koostuu 29 normaalia, 30 matala-asteista dysplasiaa, 30 dysplasiaan ja 103 kohdunkaulan syöpä kudosnäytteiden kohdunkaulan. Nämä kudosnäytteet kerättiin histopatologista parafiiniblokit Pathology osastot Chung Shan Medical University. Kaikkiaan 103 potilasta, joilla kohdunkaulansyöpä rekrytoitiin peräkkäin maaliskuussa 1999 ja maaliskuussa 2006. Ne järjestetään mukaan vuoden 2009 International Federation of Gynecology and Obstetrics (FIGO) Luokitus [13] ja saivat tavanomaista hoitoa protokollia laitoksella Naistenklinikka , Chung Shan Medical University Hospital, Taiwan. Kolmekymmentä potilaalla on dysplasiaan oli saanut suuren silmukan excisions of muutosta vyöhykkeen, yhteensä vatsan kohdunpoisto (TAH), tai kokonaan emättimen kohdunpoisto (TVH). Patologinen diagnoosi Näiden näytteiden paljasti kohtalainen, -kar- tai levyepiteelisyöpä (SCC) in situ. Kolmekymmentä potilaalla oli matala-asteinen dysplasia, joista saavat colposcopy ohjaama booli koepaloja, kaikki todettu lievä dysplasia patologiset tutkimukset. Kaksikymmentäyhdeksän normaali kudosnäytteiden kohdunkaulan kerättiin saaneilla potilailla TAH tai TVH hyvänlaatuisen kohdun sairaus ilman kohdunkaulan solumuutoksia. Tissue microarray osat (MaxArray 96 kudoksen ytimet kussakin kudoksessa microarray, Zymed Laboratories Inc.) inkuboitiin anti-RRM2 vasta-aineita (ab57653, Abcam Inc. MA, USA). Puolikvantitatiivista H pistemäärä RRM2 immunoreaktiivisuus määritettiin kertomalla suhteellinen pisteet värjäytyneiden solujen niiden immunologista intensiteetti [14], [15]. Ensisijainen kliininen päätepiste oli korreloivan ilmentymisen RRM2 säilymisen potilaiden kohdunkaulan syöpä. Tutkimus hyväksyi Chung Shan Medical University Hospital Institutional Review Board (CSMUH IRB, CS12218 ja CS12242) ja tietoinen suostumus saatiin kunkin potilaan. Seurasimme REMARK suosituksia kasvainmarkkereiden tässä tutkimuksessa [16].

Tilastollinen

Kruskal-Wallisin H menetelmää käytettiin analysoimaan erojen RRM2 ilmaus keskuudessa kohdunkaulan syöpä, korkea -laadun dysplasia, matala-asteinen dysplasia ja normaalin kudosnäytteistä. Mann-Whitneyn testiä käytettiin post-hoc-analyysi. Vastauksena useisiin Analyysien Hommel menetelmää käytettiin säätämään

p

arvoja WinPepi ohjelmistoa, versio 10.0.

liittyvät ilmaukset RRM2 kanssa kliinis potilaiden ominaisuuksiin kohdunkaulan syöpä käyttäen chi-neliö tai Fisherin tarkkaa testeissä.

P

arvot ja kertoimet suhdeluvut analysoitiin WinPepi Software, versio 10.0. Kaplan-Meier -käyrät piirrettiin kohdunkaulan syövän potilaiden perustuu RRM2 lauseke todennäköisyys toistumisen tai kokonaiselinaika välillä ensisijainen leikkaus ja kuoleman tai toistumista tai tutkimuksen lopussa (31 toukokuu 2012). Mean (mediaani) elossaoloaika ja 5-vuoden eloonjäämisluvut arvioitiin Kaplan-Meier tuote raja menetelmällä. Monimuuttuja ja univariate Coxin regressiomalleja käytettiin arvioimaan ennusteen arvioinnissa biologisten ja kliinisten parametrien kanssa tai ilman säätö RRM2 ilmaisun ja kliinis muuttujia. Tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen SPSS tilasto-ohjelmalla (versio 11.0, SPSS, Inc., Chicago, IL). Kaikki tilastolliset testit olivat kaksipuolisia ja

p

arvo on alle 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Kun RRM2 geeni tippuu alas SiHa kohdunkaulan syöpäsolut käyttävät shRRM2 # 354 ja RRM2 # 962 taso RRM2 proteiinin väheni enemmän merkittävästi SiHa shRRM2 # 354 kuin # 962 solulinjoissa (kuvio 1A). Kun 25 uM sisplatiinin lisättiin SiHa shRRM2 # 962 ja # 354 solulinjojen solujen elinkelpoisuus ei ollut pienentynyt # 962 soluissa, mutta väheni merkittävästi vuonna # 354 solut (

p

0,001 ) kontrolliin verrattuna SiHa shLuc soluja, jossa kontrollivektorin shLuc transfektoitiin SiHa kohdunkaulan syövän soluja (kuvio 1 B). Kun 50 uM sisplatiinin lisättiin SiHa shRRM2 # 962 ja # 354 solulinjojen solujen elinkelpoisuus laskettiin sekä # 962 (

p

0,001) ja # 354-solut (

p

0,001), verrattuna kontrolliryhmään SiHa shLuc soluja (kuvio 1 B).

(A) Protein tasot RRM2 havaittiin SiHa kohdunkaulan syövän solujen shRRM2 # 354 tai # 962 käyttäen Western-blottauksella. β-aktiini käytettiin sisäisenä kontrollina. Suhteellinen ilmauksia RRM2 /β-aktiini ovat osoitti. Vaikutus RRM2 geenin Knockdown oli vahvempi SiHa solujen shRRM2 # 354 verrattuna niihin, joilla shRRM2 # 962. (B) suurempi myrkyllinen vaikutus solujen elinkelpoisuus käyttäen sisplatiini havaittiin SiHa solujen shRRM2 # 354 kuin ne, joilla on shRRM2 # 962 kontrolliin verrattuna SiHa shLuc soluja, joissa shLuc transfektoitiin SiHa-soluissa. Elinvoimaisten solujen havaittiin käyttäen 3- (4,5-cimethylthiazol-2-yyli) -2,5- difenyylitetratsoliumbromidi-määrityksellä. RRM2, ribonukleotidireduktaasi M2; ***

p

0,001.

värjäytyminen RRM2 oli ydin- ja ekspressiokuviota RRM2 proteiinin tuumorikudoksissa oli kasvain hylsyjen kohdunkaulan syövän kudossiruina. (Kuvio 2). Mediaaniarvon kaikki H tulokset kasvaimen solujen 103 kohdunkaulan syövän ytimien oli 1,0. Mediaani H tulokset 29 normaalia, 30 huonolaatuisen dysplasia ja 30 dysplasiaan kudokset olivat 0,5, 0,5 ja 0,5, vastaavasti. RRM2 ilme oli merkitsevästi erilainen eri kohdunkaulan syöpä, dysplasiaan, matala-asteinen dysplasia ja normaaleissa kudoksissa (

p

0,001, Kruskal-Wallisin H-menetelmä). RRM2 ilmentyminen syöpäsoluissa oli korkeampi kuin dysplasiaan (mediaani H pisteet: 1,0 vs. 0,5; Hommel sovitetusta

p

0,001), matala-asteista dysplasiaa (mediaani H pisteet: 1.0 vs. 0,5; Hommel sovitetusta

p

= 0,002) tai normaali (mediaani H pisteet: 1,0 vs. 0,5; Hommel sovitetusta

p

0,001) kudoksiin. Kun H tulokset RRM2 kohdunkaulan syövän kudokset olivat mediaaniarvon 1 tai enemmän, niiden immunohistokemiallista ilmaisuja oli pidettävä korkea (positiivinen); muuten ne pidetään alhainen (negatiivinen).

(A) Korkea RRM2 immunovärjäyksellä (vasemmalla) ja matala RRM2 immunovärjäys (oikealla) kohdunkaulan syövän kudoksissa. (B) Korkean RRM2 immunovärjäyksellä (vasemmalla) ja matala RRM2 immunovärjäys (oikealla) kohdunkaulan dysplasiaan. (C) Korkea RRM2 immunovärjäyksellä (vasemmalla) ja matala RRM2 immunovärjäys (oikealla) kohdunkaulan huonolaatuisen dysplasia. (D) Korkea RRM2 immunovärjäyksellä (vasemmalla) ja matala RRM2 immunovärjäys (oikealla) normaaleissa kohdunkaulan kudoksissa. Suurennus: 200 x; RRM2, ribonukleotidireduktaasia M2.

keskimääräinen ikä potilaiden kohdunkaulan syöpä oli 51,4 ± 11,8 vuotta. Potilaat, joilla kohdunkaulan syöpä kohdunkaulan olivat kliinisesti lavastettuja perustuu 2009 FIGO Classification, ja 68 potilasta lavastettu I, 32 lavastettu II, 2 lavastettu III ja 1 lavastettu IV. Mediaani seuranta-ajan leikkauksen jälkeen oli 61,0 kuukautta ja keskimääräinen elinaika oli 103 kuukautta. 5 vuoden pysyvyys oli 80,6%. Kaksi potilasta menetettiin seuranta, 25 potilasta kuoli ja 16 potilasta uusiutunut. Värjäys RRM2 oli vahvempi vanhemmilla potilailla [ 50 vuotta;

p

= 0,004, kerroinsuhde (OR): 4,97], joilla on pitkälle edennyt sairaus (≥stage II;

p

= 0027; OR: 4,01), syvä strooman invaasio (

p

0,001 tAI: 12.46), suuria kasvaimia (

p

= 0,001; OR: 2,62), kohtalainen tai heikko solujen erilaistumiseen (

p

0,001 TAI: 15,98), parametrial invaasio (

p

= 0.022; OR: 7,97), ja se oli yleensä voimakkaampi potilailla, joilla imusolmuke etäpesäke (

p

= 0,066; OR: 6,10) (taulukko 1).

Univariate analyysi paljasti, että potilaalla on syöpä kudoksiin näytteille positiiviset RRM2 immunoreaktiivisuus oli huonompi selviytyminen kuin ne, joilla on syöpä kudoksiin näytteille negatiivinen RRM2 immunologista [5 vuoden pysyvyys: 76,4 vs . 95,5%; riskisuhde (HR): 7,94, 95%: n luottamusväli (CI): 1,07-58,82;

p

= 0,016] (taulukko 2). Muita merkittäviä tekijöitä huonosta selviytymisen mukana syvä strooman invaasio, suuri kasvain halkaisija, parametrial invaasio ja lantion imusolmuke etäpesäke (taulukko 2). Kuitenkin monimuuttuja-analyysi paljasti, että huono selviytyminen havaittiin vain potilailla, joiden syöpä kudoksiin näytteillä syvä strooman invaasio (HR: 6,25, 95% CI: 1,43-27,03,

p

= 0,015) (taulukko 2).

Kaplan-Meier -käyrät piirrettiin todennäköisyys uusiutumisen ja eloonjäämisen mukaan ilmaisut RRM2 (kuvio 3). Olemme havainneet, että potilailla, joilla on positiivinen RRM2 ilmaus yleensä on suurempi todennäköisyys uusiutumisen (

p

= 0,094) (kuvio 3A). Lisäksi potilaat, joilla on positiivinen RRM2 ilme oli huomattavasti huonompi selviytymisen kuin ne, joilla on negatiivinen RRM2 lauseke (

p

= 0,016; Kuva 3B).

(A) Potilaat, joilla positiivinen RRM2 yleensä on suurempi todennäköisyys uusiutumisen (N = 99,

p

= 0,094), verrattuna potilailla, joilla on negatiivinen RRM2. (B) Potilaat, joilla positiivinen RRM2 oli huomattavasti pienempi eloonjäämisen (N = 101,

p

= 0,016), verrattuna potilailla, joilla on negatiivinen RRM2. RRM2, ribonukleotidireduktaasia M2.

Lopuksi havaitsimme, että kohdunkaulan potilaiden sisplatiinia Päihdehuoltolain joiden syöpä kudoksiin näytteillä positiivinen RRM2 immunoreaktiivisuus oli huonompi ennuste. Kolmekymmentä-yksi potilailla, joilla on kohdunkaulan syöpä saivat samanaikaista sädehoitoa (CCRT) käyttämällä sisplatiinia tai adjuvanttihoitoa sisältäviä sisplatiinia. Niistä 28 potilasta, joilla oli syöpä kudoksiin positiivinen RRM2, 14 uusiutuivat tai vanhentunut. Kuitenkin 3 potilasta, joilla oli syöpä kudoksiin negatiivisia RRM2, mikään niistä osoitti uusiutumisen tai vanhentunut.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että sytotoksiset vaikutukset sisplatiinin korotettiin soluissa jossa pieneni enemmän RRM2 ilmaisun (shRRM2 # 354) verrattuna soluihin vähemmän vähentäminen RRM2 ilmaisun (shRRM2 # 962). Koska RRM2 voi polttoaineen DNA: n korjaukseen, ja koska solusyklin-riippuvainen aktiivisuus RNR säätelee RRM2 tasot [8], RRM2 liittyy solujen lisääntymistä. Jos siis RRM2 geeniä pudotettiin SiHa- kohdunkaulan syövän solujen, solujen lisääntymistä voi vaikuttaa. Tätä tukee havainto, että knockdovvn RRM2 proteiinin merkittävästi esti solun kasvua UM-UC-3 virtsarakon syövän solujen [17]. RRM2 ylössäätely on todettu lisäävän soluproliferaatiota ja pahanlaatuistumisriskin tiettyjen syöpien, ja että inhibitio RRM2 vähentää solujen lisääntymistä in vitro ja in vivo [18], [19]. Lin et ai. olettaisi, että vakaa knockdovvn R2 alayksikköä johtaa laski sisplatiinin aiheuttama aukontäyttö- synteesiä nukleotidin Leikkauskorjauksessa ja alennetun dATP tasolla G

2 /M vaiheessa solusyklin, ja että tämä häiritsee korjaus yksijuosteisten aukkojen, jotka muuten muutetaan double-säikeen katkoksia seuraavassa S-vaiheen HCT-116 ihmisen paksusuolen syöpäsoluissa [20]. Vaikka RRM2 geeni joka pudotettiin ja ekspressiotasot RRM2 oli vähentynyt, SiHa shRRM2 # 354 ja # 962 solulinjoissa oli vielä tarpeeksi ekspressiotasot RRM2 vastahakoisesti säilyttää elinvoimaisten solujen 48 tunnin jälkeen kulttuuri esillä olevassa tutkimuksessa (data ei osoitti). Näin ollen, solu elinkykyä SiHa shRRM2 # 354 ja # 962 solulinjoja ei vähentynyt tilastollinen merkitykset, verrattuna kontrolliin SiHa shLuc solujen tutkimukseen. Äänenvaimennusjärjestelmä RRM2 yksinään ei ollut vaikutusta tarpeeksi vahva, jotta solujen elinkelpoisuuden kanssa tilastollista merkittävyyttä. Sisplatiini sitoutuu DNA ja edistää muodostumista platina-DNA adduktit, jossa voidaan vahvistaa sisäiseen ja DNA-säikeen siltoja ja sitten estää DNA: n replikaatiota [9]. RRM2 ei estänyt sisplatiinin myrkyllisyyttä erikseen. Lisäyksen jälkeen sisplatiini, The pahentaa vaikutus vähensi solujen lisääntymistä johtuvat välisiä ja säikeen DNA siltoja sisplatiinia ja pienentyneen DNA täydentää by RRM2 Knockdown vähentänyt elinvoimaisten solujen tilastollisin merkitykset in # 354 ja # 962 solulinjoissa. Vaiennettaisi RRM2 ilmaisun SiHa- # 354 ja # 962 solua soluja lisätyn sisplatiinin myrkyllisyyttä.

havainnot osoittivat, että RRM2 immunoreaktiivisuus syövän kudoksissa on korkeampi kuin dysplasiaan, matala-asteinen dysplasia ja normaali kudoksia kohdunkaulan. RRM2 yli-ilmentyminen on korreloitu kohdunkaulan syövän synnyn. Fan et ai. osoitettu, että R2-proteiini ei ole vain nopeutta rajoittava komponentti ribonukleotidi vähentämiseen vaan kykenee myös yhteistyössä eri onkogeenien mekanismeihin solutransformaatioon ja kasvaimen kehittymisen [21]. RRM2 alayksikön yli-ilmentyminen on havaittu myös mahasyövän ja virtsarakon syövän kasvaimia [17], [22]. Toisin kuin havainnot Morikawa et al. [17], jossa positiivinen värjäytyminen karsinooma in situ kudoksissa virtsarakon osoitettiin, RRM2 säätelyä ei löydy dysplasiaan kudoksissa kohdunkaulan nykyisessä tutkimuksessa. Tämä voi johtua eri yhteistyössä onkogeenien jotka muuttavat solujen eri mekanismeilla. Onkogeeniset stressi on raportoitu tuottaa dNTP puute ja tästä DNA: n replikoitumiseen stressi tyypillinen varhainen onkogeenisen tapahtumaa [23]. RRM2 on raportoitu transkriptionaalisesti säätelee solusyklin liittyviä tekijöitä, kuten E2F [24]. Lisäksi Liu et ai. ehdotti, että kohonnut hRRM2 ilmaus aiheuttaa oksidatiivista stressiä ja aktivoi Ras /Raf /MAPK signaalireitin [25]. Värjäytymistä RRM2 havaittiin olevan ydin- tässä tutkimuksessa. Niida ja Zhang totesi, että RRM2 rekrytoimista tumaan varmistamaan paikallinen saatavuus dNTP tehokkaan DNA korjautumissynteesin vastauksena DNA vaurioita [26], [27]. D’Angiolella et ai. todettiin, että vastauksena genotoksinen stressi, RRM2 kerääntyy ytimet HeLa kohdunkaulan syövän soluihin [2]. He osoittivat lisäksi, että ajoitus RRM2 kumuloitumista DNA-vaurioita rinnasteinen ajoitus DNA korjaukseen.

Tutkimus osoitti, että positiivinen RRM2 ilmentyminen korreloi huonon kliinis ominaisuudet, kuten ikä, pitkälle muut kuin vaiheen I , syvä strooman invaasio, suuria kasvaimia, korkealaatuista kasvaimet ja positiivinen parametrial hyökkäystä. RRM2 yleensä erittäin pitkälle ilmaistaan ​​potilailla, joilla on positiivinen lantion imusolmuke etäpesäke leikkauksen. Joissakin syöpien, korkea RRM2 ekspression on raportoitu korreloivan solu- invasiivisuus [28], kasvaimen angiogeneesiä [19], etäpesäke [25] ja huono potilaan tulokset [29]. Yliekspressio RRM2 on osoitettu korreloivan lisäys solujen invasiivinen potentiaalia ihmisen KB nielun karsinooman solulinjassa [3]. RRM2 voivat olla vuorovaikutuksessa eri onkogeenien, jotka edistävät kasvaimen etenemistä ja parantaa invasiivisuus syöpäsolujen [30]. Morikawa et ai. osoittivat, että RRM2 yliekspressio on vain huomattavasti liittyy muscularis propriaan invaasio, mutta eivät osoittaneet merkittävää yhdessä muiden parametrien, kuten imusolmuke etäpesäke [17]. Wang et ai. osoittivat, että munasarjasyöpäpotilaalle kliinisiä FIGO vaiheissa III-IV läsnä suurempi RRM2 geeniekspressioiden kuin ne, joilla kliinisen FIGO vaiheet I-II [31].

Nykyisessä tutkimuksessa, yhden muuttujan analyysi paljasti, että kohdunkaulan syöpää sairastavilla potilailla syvä strooman invaasio, suuri kasvain halkaisija, parametrial invaasio, ja lantion imusolmuke etäpesäke, sekä positiiviset RRM2 ilmaisu on huono keskiarvo ja mediaani säilymiseen, huono 5 vuoden pysyvyys ja korkea HR kuoleman. Potilaat, joilla positiivinen RRM2 ilmaisuja havaittiin merkittävästi pienempi selviytymisen ja suurempi todennäköisyys toistumisen. Rosty et ai. käyttivät Affymetrix HG-U133A oligonukleotidi microarray osoittaa, että HPV E6 /E7 ilmentyminen on keskeinen rooli etenemistä invasiivisen kohdunkaulan syövän kautta vapauttamisen kohdunkaulan syövän leviämisen klusterin geenien lisääntynyt keskimäärin ekspressiotasot 123 ainutlaatuinen tunnettujen geenien, mukaan lukien RRM2 [ ,,,0],32]. Keskimääräinen ekspressiotasot näiden geenien olivat korkeampia kohdunkaulan syöpäkasvainten varhainen uusiutuminen kuin kasvaimissa suotuisa kurssi. RRM2 on myös raportoitu olevan prognostinen biomarkkeri on paksusuolen ja peräsuolen syöpiä [33]. Wang et ai. todettiin, että selviytymisen potilaita, joilla on alhainen RRM2 mRNA taso on merkittävästi parempi kuin potilailla, joilla on korkea munasarjasyövän [31]. Coxin suhteellinen riskimalli analyysi, kuolleisuusriskiä potilaille, joilla on korkea ekspressiotasot RRM2 mRNA 2,553 kertaa suurempi kuin niille, joilla on alhainen ilmaisuja. Kuitenkin vain syvä strooman invaasio on itsenäinen ennustetekijä potilaille, joilla on kohdunkaulan syöpä monimuuttujamenetelmin nykyisessä tutkimuksessa. Monet tutkimukset ovat tukeneet että strooman invaasio on voimakas itsenäinen ennustaja kokonaiselossaoloaikaa potilaiden kanssa kohdunkaulan syövän [34] – [39].

Jos potilas saa sisplatiinin sisältävää hoitoa, joiden syöpä kudoksiin esitti positiivinen RRM2 ilme näytti huonompi ennuste kuin ne, joilla on negatiivinen RRM2 ilme. Syöpäsolut ovat herkempiä sytotoksista vaikutusta RNR esto kuin normaalit solut, koska lisääntynyt tarve dNTP varten lisääntymistä ja laski sopeutumiskykyä ja alhainen vastata sääntelyn signaaleja. Näin ollen, tämä entsyymi on pitkään pidetty olevan erinomainen kohde syövän kemoterapiassa [3], [40]. Koska solusyklin-riippuvainen aktiivisuus RNR säätelee tason RRM2 [8], [21], rooli RRM2 on erittäin tärkeää.

On olemassa useita rajoituksia tämän tutkimuksen. Otoskoko potilaista, jotka saivat sisplatiinia hoitoa CCRT tai apuaineen kemoterapiaohjelmat oli hyvin pieni. Suurin osa potilaista kohdunkaulan syöpä oli vaiheen I tai II, ja siksi vain harvat potilaat saivat sisplatiinia sisältävää hoitoa. Vain 3 potilaalla on negatiivinen RRM2 ilmaisut saivat sisplatiinia liittyviä adjuvanttihoito ja heillä kaikilla oli parempi ennuste. Tämä merkitsee myös sitä, että kohdunkaulan syövän potilaille, joiden syöpä kudoksiin esillä negatiivinen RRM2 ilmaisu oli parempi ennuste, ja siksi monet näistä potilaista, jotka saivat sisplatiinia sisältävän hoidon oli hyvin rajallinen. Lisäksi monet sekoittavat tekijät olisi säädettävä, kuten strooman invaasio syvyys, kasvaimen, kasvaimen koon, emättimeen tai parametrial invaasio, imusolmuke etäpesäke ja kemoterapiaohjelmat. Emme voineet siis analysoida vaikutuksen RRM2 ilmaisua potilailla, jotka saivat sisplatiinia kanssa tilastollista merkittävyyttä. Lisätutkimukset ovat perusteltuja määrittämään vaikutuksen RRM2 tarkkaa vaikutusta sisplatiinin.

Toistaiseksi harvat tutkimukset ovat tutkineet seuraus RRM2 kohdunkaulan syöpä. Tuloksemme viittaavat siihen, että RRM2 voisi olla uusi molekulaarinen merkkiaine diagnosointiin ja kliinisiä tuloksia kohdunkaulan syövän. Se on mukana kohdunkaulan syövän synnyn ja ennustaa huono selviytyminen, ja se voi olla potentiaalinen terapeuttinen kohde myös sisplatiinihoitoon.