Krooninen sairaus

tiivistelmä

Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että

c-MET

on yli-ilmentynyt tapauksissa aggressiivinen virtsarakon syöpä (BCA). Tunnistaminen ylikuulumisen välillä

c-MET

ja muut RTK kuten

AXL

ja

PDGFR

mukaan

c-MET

verkon geenejä (

c-MET

–

AXL

–

PDGFR

) voivat olla kliinisesti merkityksellisiä BCA. Täällä me tutkia ilmaus

c-MET

verkko geenejä voidaan käyttää tunnistamaan BCA, joilla on kasvanut riski sairastua aggressiiviseen tauti.

In vitro

analyysi,

c-MET

Knockdown tukahdutetaan solujen lisääntymistä, invaasiota, ja muuttoliike ja lisääntynyt herkkyys sisplatiinin indusoiman apoptoosin. Lisäksi

c-MET

verkon geeni (

c-MET

,

AXL

, ja

PDGFR

) ilmaus sallitaan syrjintä BCA kudosten normaaleista kontrollisilkkipaperia ja näytti ennustaa huono taudin etenemistä ei-lihas- invasiivisia BCA potilaiden ja huono kokonaiselossaolo lihasten invasiivisia BCA potilaille. Nämä tulokset viittaavat siihen, että

c-MET

verkko geeniekspressiota on uusi prognostinen merkkiaine ennustettaessa, mistä BCA potilailla on suurentunut riski sairastua aggressiiviseen tauti. Nämä geenit voivat olla käyttökelpoinen merkkiaine yhteistyön kohdistamista hoito, ja niiden odotetaan olevan tärkeä rooli parantaa sekä hoitovastetta ja selviytymisen BCA potilaista.

Citation: Kim YW, Yun SJ, Jeong P, Kim SK, Kim SY, Yan C, et ai. (2015)

c-MET

verkoston Novel Prognostiset Marker ennustamiseen virtsarakon syövän Potilaat, joilla on lisääntynyt riski sairastua Aggressiivinen Disease. PLoS ONE 10 (7): e0134552. doi: 10,1371 /journal.pone.0134552

Editor: Renato Franco, Istituto dei Tumori Fondazione Pascale, ITALIA

vastaanotettu: 26 maaliskuu 2015; Hyväksytty: 13 heinäkuu 2015; Julkaistu: 30 heinäkuu 2015

Copyright: © 2015 Kim et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tätä työtä tukivat National Research Foundation of Korea (NRF) se rahoitettiin Korean hallitus (MSIP; http: //www.msip.go .kr /web /main /main.do) (nro NRF-2014R1A2A1A09006983) että Basic Science Research Program kautta National Research Foundation of Korea (NRF) rahoittama opetus-, Science and Technology (http: //www.moe.go.kr/main.do)(2012R1A1A4A01008753). Myös tämä työ oli osittain tukee R01DK100974; U01 DK103260; U24 DK097154; NIH NCATS UCLA CTSI UL1TR000124; Steven Spielberg Discovery Fund Eturauhassyöpä Research urakehityssuunnitelmaan Award; IMAGINE NO IC tutkimusohjelma Award (JK). JK on amerikkalainen Urologisessa Association Foundation Research Scholar ja Harvard Medical School Eleanor ja Miles Shore Scholar. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

yli-ilmentyminen reseptorin (RTK: t) esiintyy tapauksissa aggressiivinen virtsarakon syöpä (BCA); Näin RTK-kohdistaminen hoitoja suositellaan näille potilaille [1, 2]. Farmakologinen esto RTK aktiivisuuden (esim gefitinibin kanssa) on kultakantaan hoito BCA potilaille, vaikka se on saavutettu sangen vähäistä menestystä [3, 4].

c-MET

proto -oncogene, joka sijaitsee kromosomissa 7q21-31 [5], on yli-ilmentynyt BCA.

c-MET

aktivoidaan sen ligandin, hepatosyyttikasvutekijän (HGF), ja indusoi lisääntynyt leviäminen, maahanmuutto, liikkuvuus, ja invaasion BCA solujen [6]. Kun stimulaatiota ja dimerointi

c-MET

, tyrosiinin fosforylaatio tapahtuu spesifisissä kohdissa sisällä solunsisäinen domeeni (eli Y1234, Y1235, Y1349, ja Y1356), joka lisää luontaista tyrosiinikinaasien aktiivisuutta ja johtaa rekrytointi monia signalointi proteiineja, mukaan lukien kasvutekijän reseptorin sitoutunut proteiini 2 (Grb2), Grb2 liittyvä sideaine-1 (GAB1), Src homologia 2 domain sisältävä (SHC), fosfolipaasi C1 (PLC1), ja fosfoinositidi 3-kinaasi (PI3 -K) [7]. Ras /Erk-MAPK, PI3-K /Akt /mTOR [8], ja STAT3 signalointireitteihin aktivoidaan myös, aiheuttaen siten useita biologisia vasteita [6, 9].

yli-ilmentyminen

c- MET

korreloi BCA etäpesäkkeitä [7, 10]; todellakin,

c-MET

on yli-ilmentynyt yli 60% paikallisesti edenneen ja metastasoituneen BCA tapauksissa [5], ja on yhteydessä heikkoon säilymiseen [11]. Ottaen huomioon, että dimeroitumisesta RTK on tärkeää valvoa niiden biologinen toiminto yhteydessä syövän, ylikuulumisen

c-MET

ja muut RTK olisi tutkittava huolellisesti, jos aiomme ymmärtää rooli

c- MET

ihmisen syövän etenemiseen. Osiot primaarituumorin potilailta, joilla on harvinainen BCA, nimeltään neuroendokriininen (NE) BCA, näyttää

c-MET

ilmaisun [12]. Tämä viittaa siihen, että NE BCA voi olla sopiva kohde

c-MET

estäjät. Aiemmassa tutkimuksessa on osoitettu, että jäsen

c-MET

perhe, RECEPTEUR d’origine Nantais (RON), muodostaa heterodimeerin epidermaalisen kasvutekijän reseptorin (EGFR) [13]. Lisäksi RTK microarray analyysi paljasti, että RTK kuten

AXL

ja

PDGFR

ylikuulumisen kanssa

c-MET

[11].

AXL

ja

PDGFR

liittyy aggressiiviseen rintojen [14], munuaisen [15], keuhko [16, 17], ja eturauhasen syöpiä [18, 19], mikä viittaa siihen, että

c-MET

–

AXL

–

PDGFR

voi olla kliinisesti merkityksellisiä BCA [11].

tavoitteena läsnä oli tutkia kliinistä yhdistys välillä ilmaus

c-MET

verkon geenejä (

c-MET

–

AXL

–

PDGFR

) ja sairauden lopputuloksen BCA potilaille, ja tutkia, onko

c-MET

verkko geenejä voidaan käyttää tunnistamaan BCA, joilla on kasvanut riski sairastua aggressiiviseen tauti.

Materiaalit ja menetelmät

potilaiden ja kudosnäytteiden

Ensisijainen kasvain näytteissä potilailta, joille tehtiin höyläysleikkaus (TUR) tai radikaali cystectomy at Chungbuk National University Etelä-Koreassa histologisesti todennettu urothelial karsinooma. Normaali virtsarakon limakalvon kerättiin, joilla on hyvänlaatuinen sairauksia, kuten eturauhasen hyvänlaatuisen liikakasvun (BPH), virtsanjohdin kiviä, ja ponnistusinkontinenssi, kun tietoon perustuvan suostumuksen. Kaikki kontrollisilkkipaperia histologisesti vahvistettiin normaalisti. Potilaat, joilla on samanaikainen karsinooma

in situ

(CIS), CIS vaurioita yksin, lyhyen seurantajakson aikana (alle 6 kk), tai joille tiedot olivat puutteellisia, ei otettu antavan paremman homogeeninen tutkimuspopulaatiosta. Kaikkiaan 165 (135 mies- ja 30 naaras, keski-ikä 65 vuotta) BCA potilasta ja 34 ohjaa (19 mies- ja 15 naaras, keski-ikä 54 vuotta) otettiin. Kaikki kasvaimet olivat makro-leikellään (tyypillisesti 15 minuutin sisällä kirurginen resektio), ja kukin BCA näytteestä vahvistettiin patologinen analyysi tuore kudosleikettä johdettu TUR tai cystectomy yksilöitä. Kasvaimen Sitten näytteet jäädytettiin nestemäisessä typessä ja säilytettiin -80 ° C: ssa käyttöön asti. NMIBC potilaalle tehtiin toinen TUR 2-4 viikon kuluessa alkuperäisen resektiota jos BCA yksilö ei sisältynyt asianmukaista lihaksen kerros tai kun korkea-asteen kasvain havaittiin. Potilaat, joilla on T1 kasvain, useita kasvaimia, suuria kasvaimia ( 3 cm), tai korkea-asteen Ta NMIBC sai yhden syklin rakkoon hoito [Bacillus Calmette-Guerin (BCG) tai mitomysiini-C]. Hoitovaste arvioitiin kystoskopian ja virtsan sytologia. Potilaat, jotka olivat taudista vapaan 3 kuukauden kuluessa hoidon Potilaita seurattiin 3 kuukauden välein 2 ensimmäisen vuoden aikana ja sen jälkeen 6 kuukauden välein sen jälkeen. MIBC potilaalla on kliinisesti paikallinen tai paikallisesti edennyt kasvaimia ja hyvä Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) toimintakykyluokka (0 tai 1) tehtiin radikaali cystectomy ja täydellinen lantion imusolmuke leikkelyn. Potilaat eivät voi saada radikaali cystectomy takia etäpesäkkeitä, väestön odotettavissa oleva elinaika, tai huono ECOG-toimintakykyluokka (≥2) koki TUR tai biopsia histopatologista diagnoosia. Potilaat, joilla pT3, pT4 tai paikallisiin imusolmukkeisiin tauti (perustuu analyysiin radikaalin cystectomy yksilöt) ja ne, joilla etäpesäkkeitä, mutta hyvän suorituskyvyn tila sai vähintään neljä sykliä sisplatiini-kemoterapian. Potilaat, jotka evätty tai eivät suorittaneet kuvantamisen työstämisen [tietokonetomografia (TT) tai magneettikuvaus (MRI)] vähintään 3 kuukauden välein arvioida vastauksia jätettiin pois lisäanalyysiä.

kasvaimia järjestetään ja porrastettu 2002 TNM luokittelu ja

European Association of Urology (EAU) B ohjeet perustuvat 1973

WHO

pisteytysjärjestelmä [20, 21]. Toistuminen määriteltiin toistumisen ensisijaisen NMIBC alemman tai saman patologinen vaiheessa ja eteneminen määriteltiin tunnistamisen T2 tai korkeamman vaiheessa sairauden yhteydessä uusiutumisen. Kun kyseessä on MIBC, etenemisen määriteltiin Paikallista toistumisen tai uusi etäpesäkkeiden in cystectomized potilailla ja ≥20% lisäys massaan primaarikasvaimen tai uusi etäpesäkkeiden ei-cystectomized potilailla.

RNA ja käänteistranskriptio cDNA: ksi

RNA eristettiin kudoksista homogenointi 1 ml TRIzol-reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA), 5 ml: n lasiputkeen. Homogenaatti siirrettiin sitten 1,5 ml: n putkeen ja sekoitetaan 200 ml: lla kloroformia. Kun oli inkuboitu 5 minuutin ajan 4 ° C: ssa, homogenaattia sentrifugoitiin 13 minuutin ajan 13000 g: llä 4 ° C: ssa. Ylempi vesifaasi siirrettiin puhtaaseen putkeen, joka sisälsi 500 ml: aan isopropanolia. Seosta inkuboitiin 60 minuutin ajan 4 ° C: ssa ja sentrifugoitiin sitten 8 min 13000 g: llä 4 ° C: ssa. Ylempi vesipitoinen faasi heitettiin pois, ja sekoitetaan 500 ml: lla 75% etanolia ja sentrifugoitiin 5 min ajan 13000 g: llä 4 ° C: ssa. Ylempi vesipitoinen kerros heitettiin pois, ja pelletti kuivattiin huoneenlämpötilassa, liuotettiin DEPC-käsiteltyä vettä, ja sen jälkeen säilytettiin -80 ° C: ssa. Laatu ja luotettavuus RNA vahvistettiin käyttäen Nanodrop laitetta. cDNA valmistettiin 1 mg kokonais-RNA käyttäen First-Strand cDNA Synthesis Kit (Amersham Biosciences Europe GmbH, Freiburg, Saksa) mukaan valmistajan protokollaa.

Soluviljely ja transfektio

T24 BCA-solut saatiin, ja viljeltiin ohjeiden mukaisesti antaa ATCC. Media oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia, 2% glutamiinia ja 1% antibiooteilla (Invitrogen, Carlsbad, CA), ja soluja ylläpidettiin kostutetussa atmosfäärissä, 5% CO2, 37 ° C: ssa. Sillä Knockdown kokeissa soluja transfektoitiin ohimenevästi 200 pmol siRNA altaan vaientaa MET (MET siRNA: t, Life Technologies, luettelonumero 103545, 103551, 103557, 103767 ja 103769) tai negatiivinen kontrolli siRNA käyttäen Lipofectamine 2000 (Invitrogen).

Proliferaatiomääritys

siRNA-transfektoituja soluja siirrostettiin 24-kuoppalevyille tiheydeksi 1 x 10

4 /kuoppa. Sitten solut värjättiin kristallivioletilla ja lasketaan 7 päivää myöhemmin. [22]

Anchorage riippumaton pehmytagarissa kasvu määrityksessä

siRNA-transfektoiduissa soluissa (1 x 10

4) ympättiin 3 ml: aan 0,35% agaria FBS sisältävään viljelyalustaan ​​ja päällekkäin päälle 2 ml 0,7% agaria FBS sisältävään viljelyalustaan ​​6-kuoppaisille levyille. Kuvat 3- (4, 5-dimethylthiaz-113 olyl-2) -2, 5-difenyylitetratsoliumbromidi (MTT) -stained pesäkettä jää alle Zeiss avulla kuten aiemmin on kuvattu [22].

Invasion määritys

solut (3 x 10

5 solua /ml) laskettiin ja ympättiin kollageenilla päällystetyille insertit (Millipore Corp., Billerica, MA). 16 tunnin kuluttua solut, jotka vaelsivat alapintaan inserttien värjättiin kristalliviolettiliuoksella. Väriaine uutettiin soluista käyttäen 10% etikkahappoliuos, ja absorbanssi luettiin Fluostar Omega mikrolevylukijalla (BMG Labtech, Cary, NC), kuten aiemmin on kuvattu [22].

Cell apoptoosimäärityksessä

T24-soluja transfektoitiin ohimenevästi siRNA inkuboitiin väliaineessa, jossa oli tai ei ollut 10 uM sisplatiinia 8 tunnin ajan. Solujen elinkelpoisuus mitattiin MTT-määritys aikaisemmin kuvatulla [23]. Solujen apoptoosin kvantifioitiin mittaamalla metabolisesti aktiivinen massa käsiteltyjen solujen normalisoinnin jälkeen vastaan ​​käsittelemättömät solut.

haavan paranemista (in vitro scratch) määritys

T24 soluja kasvatettiin poly-L-lysiiniä kotransfektoitiin plasmidilla koodausta GFP. Ne alistettiin sitten

in vitro

tyhjästä määrityksessä otetut kuvat 0 ja 16 tunnin inkuboinnin jälkeen käyttäen fluoresenssimikroskooppia. Solut siirrettiin reunasta tyhjästä kohti keskustaa tyhjästä (merkitty keltaisella katkoviivat).

Western blot-analyysi

Transfektoidut T24 solut nopeasti korjattu, flash jäädytettiin nestetypessä, ja säilytettiin -80 ° C: ssa. Kokonaisproteiinista uutettiin lyysipuskuria [1% Nonidet P-40, 50 mM Tris (pH 7,4), 10 mM NaCl, 1 mM NaF, 5 mM MgCI2, 0,1 mM EDTA, 1 mM fenyylimetyylisulfonyylifluoridia, ja täydellinen proteaasiestäjäseostabletit tabletti (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Saksa)] on osoitettu olosuhteissa ja sentrifugoitiin 12500

g

15 minuuttia. 25 ug proteiineja per kukin olosuhteissa altistettiin SDS-PAGE-geeli käynnissä, jotka siirrettiin nitroselluloosakalvoille Western blot-analyysi. Sen jälkeen kun esto 10% BSA /PBST 1 h, kalvoja inkuboitiin erityisten vasta-aineiden

c-MET

, MMP2, MMP9 tai β-aktiini. Täplät visualisoitiin tehostetulla kemiluminesenssin.

Computational analyysi

Tutkia yhdistyksen välillä

c-MET

verkon geenejä ja kliiniset parametrit BCA potilailla, tutkimme ekspressioprofiileja näiden geenien BCA käyttävillä potilailla aiemmin saatua microarray data (hakunumero GSE13507). Microarray oli saatavilla 165 potilasta. Kliiniset tulokset, mukaan lukien ilman taudin etenemistä (PFS), kokonaiseloonjääminen (OS), ja syöpä-erityisiä eloonjäämisen (CSS) saatiin potilastietoja. Korrelaatio geenien ilmentymisen ja sairauksien lopputulos tutkittiin käyttäen Coxin suhteellisten riskien regressioanalyysiä. Kaplan-Meier (KM) eloonjääminen käyrä analyysillä käyttäen osajoukon geeni-ilmentymisen profiilit potilailla, joilla on ”matala” ja ”korkea” ilmentymisen kunkin geenin käytettiin tunnistamaan vaikutukset

c-MET

verkon geenin ilmentymisen BCA. 50

persentiili (mediaani) geenien ilmentyminen käytettiin mansetin-off-arvo. Log-rank-testi suoritettiin merkityksen arvioimiseksi erot kahden eloonjäämiskäyrien.

Eettinen

Tutkimus hyväksynyt eettinen komitea Chungbuk National University. Kaikki koehenkilöt edellyttäen kirjallinen lupa. Näytteiden kerääminen ja analysointi oli hyväksynyt Institutional Review Board of Chungbuk National University.

Tulokset

kliiniset ja patologiset ominaisuudet BCA potilaiden

keskimääräinen ikä 165 potilasta tutkimuksen kohortti oli 65,2 ± 12,0 vuotta ja keskimääräinen seurantajakso oli 48,4 kuukautta. 165 potilasta, 62,4% (103/165) oli NMIBC ja 37,6% (62/165) oli MIBC. Keskimääräinen ikä 34 potilasta normaaliin säätelyyn kohortissa oli 54,0 ± 10,4 vuotta. Perustaso ominaisuudet potilaiden ja verrokkien on esitetty taulukossa 1.

Menetys

c-MET

tukahduttaa BCA solujen lisääntymistä ja invaasiota ja lisää herkkyyttä sisplatiinin indusoiman apoptoosin

Aiemmat tutkimukset viittaavat siihen, että strooman HGF signalointi kautta

c-MET

polku lisää invaasio ja etäpesäkkeiden BCA solujen [6, 11, 13]; Näin ollen, pyrimme määrittämään vaikutukset

c-MET

hiljentäminen proliferaatioon ja invaasio, ja apoptoottisen vasteen sisplatiinia (merkittävä kemoterapeuttinen aine, jota käytetään hoitoon BCA: lla potilaista). Huomasimme, että BCA solut, joissa

c-MET

pudotettiin muodostivat vähemmän (ja pienempi) pesäkkeitä kuin negatiivisen kontrollin soluissa, mikä viittaa väheneminen soluproliferaation pehmeässä agarissa (kuvio 1A). Solu invaasiomääritys osoittivat, että BCA -solut ehjänä

c-MET

olivat invasiivisia kuin ne, joissa

c-MET

joka pudotettiin.

c-MET

-silenced T24-solut olivat paljon vähemmän invasiivisia kuin valvonta-soluja (ei-transfektoituja soluja ja soluja, jotka on transfektoitu ohjaus siRNA) (kuvio 1B). Olemme ensi tutkinut seurauksena

c-MET

tappio solujen apoptoosin MTT-määritys.

c-MET

pudotus solut osoittivat lisääntynyt herkkyys sisplatiinin indusoiman apoptoosin (kuvio 1C).

Kaikki kokeet suoritettiin käyttäen kolmea

c-MET

pudotus solulinjoja (si

c-MET

-1, si

c-MET

-2, ja si

c-MET

-3) transfektoitu eri

MET

siRNA: illa , ja kaksi säätimet solulinjoissa (Ctrl ja NT). Ctrl, valvonta; NT, ei-transfek-. * P 0,05.

Menetys

c-MET

estää solun migraatio BCA solujen vähen- tämisessä MMP2 ja MMP-9

tutkitaan solujen vaeltamiseen ja MMP2 ja MMP-9 ilmaisun BCA soluissa. Haavan paranemista määritys (kutsutaan myös in vitro scratch määritys) osoittivat, että

c-MET

-knockdown solut vaelsivat tehottomammin kuin kontrolli-soluissa (kuvio 2A). Olemme myös havainneet, että kaatamalla

c-MET

vaimentua ilmaus MMP2 ja MMP-9 in BCA soluissa (kuvio 2B).

(A) haavan paranemista määritys osoittaa, että knockdown c-MET inhibitsthe migraatio T24 soluja. (B) menetys

c-MET

vaimentua ilmentymisen matriksin metalloproteinaasien (MMP) -2 ja MMP-9. Kaikki kokeet suoritettiin käyttäen kahta

c-MET

taintumisen solulinjoissa (si

c-MET

-1 ja si

c-MET

-2) transfektoitu eri MET siRNA: illa , ja kaksi kontrolli solulinjoissa (Ctrl ja NT). Ctrl, valvonta; NT, ei-transfek-.

ilmentäminen

c-MET

korreloi OS MIBC potilailla

Voit vastata kysymykseen, onko

c-MET

verkon geenit ovat mukana BCA etenemiseen ja aggressiivisuutta, analysoitiin mRNA: n ilmentämistä varten näiden geenien DNA-mikrosirulla, ja verrattiin tuloksia taudin ominaisuuksien, kuten kasvaimen (G), kasvaimen vaiheesta (T, N ja M ), kasvaimen koon, toistuminen, eteneminen, ja CSS. Edelleen vertailut suoritettiin sitten sen jälkeen, kun potilaat luokitellaan NMIBC ja MIBC ryhmiä. Tulokset paljastivat, että

c-MET

mRNA: n ekspression MIBC potilailla korreloivat merkitsevästi OS (p = 0,023; HR, 2.107; 95%: n luottamusväli (CI), 1,110-3,998) (taulukko 2). Nämä tiedot vahvistettiin KM eloonjäämisen käyräanalyysi (kuvio 3). BCA potilailla, joilla on korkea

c-MET

ilme näytti huonompi selviytyminen kuin ne, joilla on alhainen ilmentyminen (log-rank testi, p = 0,020).

ilmentymistä

AXL

pystyy erottamaan NMIBC ja MIBC potilaiden ja terveiden verrokkien

vieressä tutki kliininen yhteydestä tunnetun

c-MET

kumppanit,

AXL

ja

PDGFR

, ja BCA etenemistä. Tulokset osoittivat, että

AXL

ilmaisu selvästi korreloi sekä NMIBC ja MIBC. Rakkokasvaimista (NMIBC ja MIBC) osoitti 0,471-kertainen ilmentymä

AXL

mRNA kuin kontrollisilkkipaperia.

AXL

mRNA ilmentyminen NMIBC (p 0,0001, vääriä löytö määrä (FDR) 0,0001) ja MIBC (p = 0,0001, FDR = 0,0006) oli merkittävästi korkeampi kuin terveillä (taulukko 3) .

AXL

mRNA: n ekspression NMIBC kudoksessa oli noin 1,532-kertainen vuonna MIBC kudoksessa (taulukko 3).

ilmentäminen

PDGFR

isoformit on muuttunut merkittävästi BCA, ja korkea ilmentyminen

PDGFRL

ennustaa huono selviytyminen

Voit testata, onko

PDGFR

on käyttökelpoinen diagnostisena luokittelija, tutkimme ilmentymistä kolmessa eri isoformeja (eli

PDGFRA

,

PDGFRB

, ja

PDGFRL

). Olemme havainneet, että ilmentyminen

PDGFR

isoformeja voidaan käyttää erottamaan NMIBC ja MIBC näytteitä normaaleihin kontrolleihin. Ilmaisu on

PDGFRA

mRNA selvästi syrjiä rakkokasvaimista (NMIBC ja MIBC) normaaleista kontrollisilkkipaperia (p 0,0001, FDR 0,0001), jossa

PDGFRA

ilmaisun NMIBC ja MIBC ollessa noin 0,274-kertainen kontrolleissa. Ilmaisu on

PDGFRB

oli myös selvästi toisistaan ​​kasvainten ja normaaleissa kudoksissa (p = 0,0001, FDR 0,0001).

PDGFRB

ilmaisun NMIBC oli merkittävästi suurempi kuin normaalissa (p 0,0001), mutta mitään merkittävää eroa osoitettiin välillä MIBC ja normaalit kontrollit (p = 0,0698). Vastaavasti

PDGFRL

oli differentiaalisesti ilmaistu NMIBC ja normaalit kontrollit, joiden vaatimaton lisäys (0,804-kertainen) (p 0,0001) entisessä. Näin ollen on todennäköistä, että

PDGFR

ilmentyminen lisääntyy kaikentyyppisissä BCA. On huomattava, että ilmaus

PDGFR

isoformien kudoksissa NMIBC potilailla oli yleensä korkeampi kuin kudoksissa MIBC potilaista (taulukko 4).

Seuraavaksi ymmärtää kliinisen merkityksellisyys lisääntynyt

PDGFR

ilmaisun BCA, selvitimme kliininen korrelaatio

PDGFR

isoformin ilmentyminen ja sairauden etenemistä. Huomasimme, että

PDGFRL

ilmentyminen korreloi merkitsevästi NMIBC etenemiseen (p = 0,046; HR, 3.675; 95% CI, +1,024-13,188) (taulukko 5). KM selviytyminen analyysi osoitti, että NMIBC potilailla, joilla on korkea ilmentymisen

PDGFRL

osoitti köyhempi PFS kuin ne, joilla on alhainen ilmaus

PDGFRL

(log-rank testi, p = 0,032) (kuvio 4).

Expression tasot

c-MET

verkko geenien merkittävästi korreloivat sairauden etenemistä NMIBC potilaalla ja OS MIBC potilailla

tunnistamiseksi kliinisestä tärkeys

c-MET

verkon geenejä, tutkimme yhdistyksen välillä

c-MET

verkon geenin ilmentymistä (

c-MET

,

AXL

, ja

PDGFR

) ja BCA ennustetta. Expression of

c-MET

verkko geenien perustui riskin arviointiin pisteet kullekin potilaalle lasketaan yhdistämällä ekspressiotasot kaikkien kolmen geenin. Huomasimme, että ilmaus

c-MET

verkon geenit korreloivat merkittävästi sairauden etenemisen NMIBC potilailla (p = 0,023; HR, 4,386; 95% CI, +1,221-15,757) ja OS MIBC potilailla (p = 0,038; HR, 1,976; 95% CI, 1,039-3,759) (taulukko 6). KM selviytyminen analyysi osoitti, että NMIBC potilailla, joilla on korkea ilmentymisen

c-MET

verkon geenit osoittivat köyhempi PFS (log-rank testi, p = 0,013) kuin ne, joilla on alhainen ilme. Vastaavasti MIBC potilaat (log-rank testi, p = 0,034) korkea ilmentyminen c-MET verkon geenit osoittivat huonompi OS kuin ne, joilla on alhainen ilmentyminen (kuvio 5).

Keskustelu

tulokset tämän tutkimuksen mukaan menetys

c-MET

tekee BCA solut vähemmän invasiivisia ja alttiimpia sisplatiinia. Myös ekspressiokuviota

c-MET

verkon geenejä mahdollistaa erottelun BCA kudosten normaaleista kontrollisilkkipaperia ja näyttää ennustaa huono hoitotuloksia on korealainen potilasryhmässä.

Aberrant

c-MET

ilmentymistä esiintyy erilaisissa syövissä ja liittyy huonoon ennusteeseen [24]. Yliekspressio

c-MET

in BCA liittyy huono OS ja etäpesäkkeiden elinaika [5, 7, 10]. Yeh et ai. kertoi, että yli-ilmentyminen

c-MET

on positiivisessa yhteydessä lihas hyökkäys ja huono säilyminen pitkällä aikavälillä (p 0,001) [11]. Aiemmat raportit viittaavat siihen, että

c-MET

ilmentyminen liittyy läheisesti sekä kasvaimen aggressiivisuus ja potilaan eloonjääminen [5, 7, 10, 11, 18]. Tässä esitetyt tulokset ovat yhtäpitäviä aikaisemmissa tutkimuksissa. Huomasimme, että yliekspressio

c-MET

merkitsevästi yhteydessä huonoon säilymiseen, erityisesti OS MIBC potilailla. Tämä viittaa siihen, että estämällä

c-MET

ilmentyminen voi olla tärkeä rooli ehkäisyssä BCA etenemistä ja parantaa potilaan selviytymistä.

In vitro

analyysi osoitti, että

c- MET

knockdown tukahdutetaan solujen lisääntymistä, invaasiota, ja muuttoliike sekä vähensi ilmaus MMP2 ja MMP-9. Tämä liittyi lisääntynyt herkkyys sisplatiinin indusoiman apoptoosin. MMP2 ja MMP9 hajottavat soluväliaineen proteiineja, mikä helpottaa solujen invaasiota ja etäpesäkkeiden [25, 26]. Nämä tulokset osoittavat, että

c-MET

esto vähentää todennäköisesti syövän eteneminen ja metastaasit ja parantaa selviytymisen syöpäpotilailla. Siten enemmän keskittynyt ymmärrystä merkityksestä

c-MET

esto tarvitaan, jos haluamme kehittää estäjiä, jotka kohdistuvat

c-MET

erilaisissa kasvaimissa. Viime aikoina useat

c-MET

-targeting huumeita testattiin kliinisissä tutkimuksissa, ja kaikki näyttää lupaavalta kliinistä hyväksyttävällä sivuvaikutuksia [27]. Esimerkiksi tivantinib (kutsutaan myös ARQ197) ja kaksi estäjä

c-MET Twitter /VEGFR2 (foretinib) tutkittiin vaiheen I II kliinisissä tutkimuksissa potilailla, joilla papillaarisen munuaissolukarsinooma ja kehittyneet maksasyövän, vastaavasti [24]. A novel multikinaasi estäjä

MET

,

VERFR1

,

AXL

,

TIE2

,

KIT

,

FLT3

, ja

RET

, kutsutaan cabozantinib (tunnetaan myös XL184), estää niiden kasvun, metastaasin, ja angiogeneesin haimasyöpä ja glioblastooma, ja vähentää resistenssin gemsitabiinia. Erityisesti kliinisissä tutkimuksissa metastasoituneen kastraatio kestävä eturauhassyöpä (mCRPC) potilaista ilmoitti lupaava vaikutus PFS, luumetastaasin, ja kipu [28]. Kuitenkin kasvaimia että aluksi näyttää hyvä vastaus MET estäjät saattavat myöhemmin kehittyä vastustuskyky [24]. Kehittynyt resistenssi MET estäjien kehittyy useiden eri mekanismien myös geneettiset muutokset (esim toissijainen

EGFR

T790M mutaatio), MET vahvistus, ja aktivoitu signalointireittejä [29]. Siten useita yhdistelmä tavoite terapian tai yhteistyössä kohdistaminen hoito saattaa olla tarpeen estää lääkeresistenssin ja saavuttaa myönteisiä tuloksia [24].

On tärkeää tutkia välinen ylikuuluminen

c-MET

ja muut RTK koska ylikuulumisen kumppanit

c-MET

voivat olla tärkeitä biomarkkereita yhteistyön kohdistaminen terapia ja auttaa estämään vastustuskyvyn yksittäisille MET estäjiä.

RON

,

AXL

ja

PDGFR

on ylikuulumisen kanssa

c-MET

. Yliekspressio

AXL

ja

PDGFR

liittyy aggressiivisuutta ja ennusteeseen kasvaimen sarjan [14-19]. Tässä esitetyt tulokset ovat yhdenmukaisia ​​aiempien tutkimusten tässä suhteessa; oli kuitenkin joitakin eroja. Toisin kuin tutkimuksen Silti et al., Jossa arvioitiin yhdistyksen välillä

PDGFRA

ja BCA etenemistä, tutkimme kaikki kolme

PDGFR

isoformia:

PDGFRA

,

PDGFRB

, ja

PDGFRL

. Kuitenkin vain

PDGFRL

liittyi NMIBC etenemiseen. Useimmat tutkimukset, jotka pyrittiin tunnistamaan korrelaatio BCA etenemistä ja

PDGFR

tutki

PDGFRA

ja

PDGFRB

isoformeja. Siksi tässä tutkimuksessa on ensimmäinen tunnistaa Merkitsevä yhteys

PDGFRL

ilmaisun ja BCA ennustetta. Lisäksi, vielä et ai. vain tutki roolit

AXL

ja

PDGFR

kehittyneissä tapauksissa [11]. Täällä, osoitimme, että ilmaus

AXL

ja

PDGFR

erottaa NMIBC ja MIBC peräisin terveiden verrokkien. Erityisesti, geenien molempien näiden geenien oli suurempi NMIBC potilailla kuin MIBC potilailla. Siten

AXL

ja

PDGFRL

voi olla spesifinen NMIBC kuin MIBC. Suuri validointi tarvitaan selvittämään rooleja ja vaikutuksista

PDGFR

isoformit on BCA (NMIBC ja MIBC) ennustetta.

Olemme myös havainneet, että

c-MET

verkon geeni (

c-MET

,

AXL

, ja

PDGFR

) ilmentyminen tiiviisti taudin etenemistä NMIBC potilaalla ja huono selviytyminen (erityisesti OS) in MIBC potilailla. Nämä tulokset viittaavat siihen, että estämällä

c-MET

reitti voi estää taudin etenemistä NMIBC potilailla ja parantaa selviytymisen MIBC potilaista. Myös multi-yhdistelmä tai co-kohdistaminen hoitoja saatetaan tarvita estämään hankitun lääkeresistenssin. Yeh et ai. osoittivat, että 21,5% (14/65) potilaista koekspressoivan

c-MET Twitter /

AXL Twitter /

PDGFR

oli huono säilyminen pitkällä aikavälillä (p = 0,015) [11]. Ne kuitenkin vain tunnistaa kliininen korrelaatio

c-MET

verkon geenejä potilailla, joilla on paikallisesti edennyt ja metastaattinen BCA. Täällä tunnistimme kliininen korrelaatio potilailla, joilla NMIBC tai MIBC. Siten esillä tutkimus viittaa siihen, että

c-MET

verkko on lupaava biomarkkereiden ja tavoitteeksi yhteistyön kohdistaminen lääkkeet; Tämän pitäisi testata kliinisissä tutkimuksissa sekä NMIBC ja MIBC potilaita.

Yhteenvetona nämä tiedot viittaavat siihen, että (1)

c-MET Twitter /

AXL Twitter /

PDGFR

tasoja voidaan käyttää erottamaan syöpäpotilaille normaalista valvontaa ja erottaa NMIBC alkaen MIBC; ja (2) ilmentymistä

c-MET

verkko geenien liittyy merkittävästi huonompi eloonjäämisasteesta BCA potilaille.

tunnistaminen signalointi verkot, voivat antaa tietoja, jotka kehittävät käsityksemme mekanismit tuumoribiologiassa ja auttavat ennakoimaan mahdollisia lääkeresistenssin [30]. Uskomme, että

c-MET

verkko geeniekspressiota on uusi prognostinen merkkiaine ennustettaessa, mistä BCA potilailla on suurentunut riski sairastua aggressiiviseen tauti. Nämä geenit voivat olla käyttökelpoinen merkkiaine yhteistyön kohdistamista hoito, ja niiden odotetaan olevan tärkeä rooli parantaa sekä hoitovastetta ja selviytymisen BCA potilaista.

tukeminen Information

S1 Taulukko. Dataset uusiutui, eteneminen, ja 5 geenien NMIBC potilailla.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0134552.s001

(PDF)

S2 Taulukko. Dataset etenemiseen, kokonaiselinaika, syöpä erityisiä selviytymisen, ja 5 geenien MIBC potilailla.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0134552.s002

(PDF)

S3 Taulukko. Dataset uusiutui, eteneminen, ja

C-MET

verkon geenien NMIBC potilailla.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0134552.s003

(PDF)

S4 Taulukko. Dataset etenemiseen, kokonaiselinaika, syöpä erityisiä selviytymisen, ja

C-MET

verkon geenien MIBC potilailla.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0134552.s004

(PDF) B

Kiitokset

Tätä työtä tukivat National Research Foundation of Korea (NRF) se rahoitettiin Korean hallitus (MSIP) (nro NRF-2014R1A2A1A09006983) että Basic Science Research Program kautta National Research Foundation of Korea (NRF) rahoittama opetus-, Science and Technology (2012R1A1A4A01008753). Myös tämä työ oli osittain tukee R01DK100974; U01 DK103260; U24 DK097154; NIH NCATS UCLA CTSI UL1TR000124; Steven Spielberg Discovery Fund Eturauhassyöpä Research urakehityssuunnitelmaan Award; IMAGINE NO IC tutkimusohjelma Award (JK). J. K.