Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoite

tutkimiseksi esiintyvyyttä, genotyypit, sekä varoituksia arvot Epstein-Barrin virus (EBV) ja ihmisen papilloomaviruksen (HPV) infektioiden Japani potilailla, joilla on erilaisia ​​pään ja kaulan alueen syöpä (HNC).

menetelmät ja materiaalit

HPV ja EBV-DNA, EBV genotyypit ja

LMP-1

variantteja, ja HPV mRNA ilmaisun havaittiin PCR: llä makean pakastetut HNC näytteitä. HPV-genotyyppien määritettiin suoralla sekvensoinnilla, ja EBV koodattu RNA (

Eber

) tutkittiin in situ -hybridisaatiolla.

Tulokset

Näistä 209 HNC potilaat, 63 (30,1 %) oli HPV-infektio, ja HPV-16 oli yleisin alatyyppi (86,9%). HPV

E6 /E7

mRNA: n ekspressio havaittiin 23 60 (38,3%) HPV-DNA-positiivisten tapausten havaittu. Sivusto korkeimman esiintyvyyden HPV oli nielu (45,9%). Niistä 146 (69,9%) HNCs jossa EBV-DNA tunnistettiin, 107 (73,3%) ja 27 (18,5%) sisälsi A ja B, vastaavasti, ja 124 (84,9%) osoitti

del-LMP- 1

. Kuitenkin vain 13 (6,2%) HNCs olivat positiivisia

Eeberin

, 12 (92,3%), josta on johdettu nenänielun. Co-infektio HPV ja

Eber

havaittiin vain 1,0% HNCs ja 10,0% NPC. Kaplan-Meier selviytymisen analyysi osoitti merkitsevästi paremmin taudin aiheuttamaa ja yleistä selviytymistä HPV-DNA + /mRNA + nielusta levyepiteelisyöpä (OPC) potilailla kuin muissa OPC potilaat (

P

= 0,027 ja 0,017, tässä järjestyksessä). Monimuuttuja-analyysi osoitti, että vaiheessa T1-3 (

P

= 0,002) ja HPV mRNA-positiivisuuden (

P

= 0,061) ennustivat parempaa tautikohtaisia ​​selviytymistä. Ei ole merkittävää eroa taudin aiheuttaman eloonjäämisen välillä havaittiin

Eber

positiivisten ja -negatiivinen NPC potilaat (

P

= 0,155).

Johtopäätökset

Meidän tulokset osoittavat, että co-HPV ja EBV on harvinaista HNC. Suunielun SCC aktiivisen HPV-infektio liittyi erittäin myönteiseen tulokseen, kun taas EBV tila ei ennustetekijöitä NPC kohortissa.

Citation: Deng Z, Uehara T, Maeda H, Hasegawa M, Matayoshi S, Kiyuna , et ai. (2014) Epstein-Barr-viruksen ja HPV-infektiot ja Genotyyppi jakelu pään ja kaulan alueen syövät. PLoS ONE 9 (11): e113702. doi: 10,1371 /journal.pone.0113702

Editor: Jeffrey Chalmers, Ohio State University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 18 heinäkuu 2014; Hyväksytty: 28 lokakuu 2014; Julkaistu: 18 marraskuu 2014

Copyright: © 2014 Deng et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperin.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat avustus KAKENHI 26462610 (Japan Society for Promotion of Science) Dr. Suzuki, myöntää KAKENHI 26462611 (Japan Society for Promotion of Science) Dr. Deng, avustusta Okinawa Lääketieteen Research Foundation Dr. Deng, ja avustusta tieteen ja teknologian kehityksen keskus, Opetusministeriö kansantasavallan Kiinan Dr. Deng. Tutkimus myös tuettu ja toteutettu yhteistyössä Ryukyu Society for edistäminen Oto-Rhino-kurkkutaudit. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Pään ja kaulan alueen syöpä (HNC) on kuudenneksi yleisin syöpä maailmassa, yli 600.000 uutta tapausta raportoitu vuosittain [1]. Liiallinen alkoholin ja tupakan kulutus ovat kaksi perinteistä ja suurimmista riskitekijöistä HNC. Viimeisten kahden vuosikymmenen aikana, esiintyvyys HNC, kuten syöpä kurkunpään tai hypopharynx, on vähentynyt merkittävästi johtuen ennaltaehkäisystrategioihin kohdentamalla näistä riskitekijöistä. Kuitenkin ilmaantuvuus nielun okasolusyöpä (OPC) on lisääntynyt voimakkaasti, erityisesti nuorten ilmaantuvia HNC puuttuessa näiden perinteisten riskitekijöiden, mikä viittaa siihen mukaan muita tekijöitä. Ihmisen papilloomavirus (HPV) on nyt myös vakiintunut etiologic tekijä ilmenemisestä ja kehittymisestä HNC, erityisesti OPC. Nostamalla osuus HPV liittyvien nielusta syöpä havaittiin Yhdysvalloissa 1973-2004 [2]. Samoin kaksi retrospektiivinen kohorttitutkimukset Tukholmasta, Ruotsista, suurentunut osuus HPV-positiivisten nielurisojen syöpä 23,3% vuonna 1970 93%: iin kaudella 2006-2007 ja että HPV-positiivisten pohjan kielen syövän 58 % for 1998-2001 84% vuosina 2006-2007 [3], [4]. Lisäksi se seikka, että HPV on havaittu ei-nielun HNC viittaa siihen, että sen asema kehittymistä ja etenemistä HNC ei rajoitu nielu [5], mutta sisältää nenänielun, jossa Epstein-Barr-virus (EBV) on johdonmukaisesti havaittu syöpäsolujen alueilta korkean ja matalan esiintyvyyden [6].

EBV on kaikkialla läsnä herpesvirus, joka vaikuttaa yli 90% maailman aikuisväestöstä ja liittyy erilaisia ​​pahanlaatuisia sairauksia kuten Hodgkinin tauti, Burkittin lymfooma, B-solulymfooma [7], [8], [9], ja mahalaukun karsinooma [10]. Pään ja kaulan, perustaminen piilevä transformoivan EBV-infektio ja mahdolliset viruksen geneettisen tapahtuvat muutokset epiteelisolujen voi edistää kehitystä, kasvua, ja invasiivisia valmiudet nenänielusyöpä (NPC) [6]. Plasma EBV DNA-analyysi on osoittautunut hyödylliseksi havaita varhaisessa NPC yksilöissä, kun ei ole kliininen epäily kasvain [11]. Useita virusproteiineja EBV ovat latenssi liittyvien proteiinien, piilevä kalvoproteiineja-1 ja -2 (

LMP-1

ja

LMP-2

), ja EBV ydin- antigeenien (

EBNA1-6

) [9], [12]. EBV on luokiteltu A- tai B perustuu liittyy polymorfismin

EBNA

–

2

,

3a

,

-3B

, ja

-3C

[13].

LMP-1

on havaittu olevan EBV onkogeenin [14]. Se käsittää lyhyen aminohapon sytoplasminen N-pään (aminohapot 1-23), kuusi transmembraani- ulottuvaa domeenia (aminohapot 24-186), ja C-pää (aminohapot 187-386). C-terminaalisen pään ja transmembraaninen ulottuvat domeenit on

LMP-1

tarvitaan maksimaalisen aktivaation tumatekijä-kappa B (NF-kB) aktivoituminen, joka liittyy apoptoosin [15 ], [16], [17]. Deleetio 30 emäsparin (bp) klo 3’C-terminaalista aluetta

LMP-1

geeni (

del-LMP-1

) on raportoitu NPC Kiinan potilaille . Tämä poisto voi johtaa menetykseen aminohappojen 346-355

LMP-1

proteiinia. Poistaminen proteiini on pidempi puoliintumisaika ja antaa tuotteelle parannettu NF-kappa B ja JNK /AP1 signalointi aktiivisuutta epiteelisolujen. Nämä ominaisuudet

del-LMP-1

variantti on lokalisoitu transmembraani- sivuavia alueita ja voi edistää entistä pahanlaatuinen fenotyyppi NPC [18]. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet,

del-LMP-1

olla läsnä enemmän kuin 75% NPC potilaista Kaakkois-Aasiassa ja Pohjois-Afrikassa [19], [20], [21]. Hallitsevuus tietyn

LMP-1

variantit NPC voi heijastaa eroja biologisen tai molekyylitason ominaisuudet

LMP-1

variantteja. Lisäksi

del-LMP-1

on pienempi immunogeenisyys kuin ei-del variantti, joka saattaa johtaa kasvaimen kehitystä immunokompetenteilla isäntien kautta pakenevat immuunitutkimusohjelmasta [22]. Kuitenkin esiintyvyys ja rooli EBV in HNC muissa kohdissa kuin nenänielun ovat kiistanalaisia. Vaikka EBV-DNA on tunnistettu polymeraasiketjureaktiolla (PCR) in 72-92% suun SCC, kurkunpään SCC ja nielun SCC tapauksissa [23], [24], [25], [26], esiintyvyys EBV-infektion perustuu in situ -hybridisaatio (ISH) kohdistaminen EBV koodattu RNA (

Eber

), kulta-standardin määrityksen, onko koepalana otetulle kasvain on EBV liittyviä, on merkittävästi epäjohdonmukainen näissä syövissä [23], [27 ], [28], [29]. Lisäksi NPC esiintyvyys vaihtelee eri maantieteellisten alueiden ja huolimatta EBV-infektio esiintyy laajalti ympäri maailmaa, tämä osoittaa, että alatyyppi EBV on mukana NPC.

Co-infektio virukset ja virusten /virus suoraan tai epäsuorat vuorovaikutukset ovat olleet todettu joitakin pahanlaatuisia ja tyypillinen esimerkki pahanlaatuinen kasvain, koska virus /virus vuorovaikutukset on Kaposin sarkooma liittyvä herpesvirus (KSHV) aiheuttama Kaposin sarkooma aIDS-potilailla [30], [31]. Viimeaikaiset todisteet osoittavat, että yksilöiden HPV ovat huomattavasti suurempi riski hankkia ihmisen immuunikatovirus (HIV) -infektio [32], [33]. Co-infektio HPV ja herpes simplex virus 1 (HSV-1) on myös nähtävissä osajoukko HNC tapauksissa [5]. Koska HPV ja EBV ovat kaksi yleisintä viruksia HNC olisi selvitettävä yhteistyössä infektio johtaa niiden vuorovaikutusta HNC ja miksi HPV esiintyvyys on noussut viime vuosikymmeninä.

Tämä ennakoiva tutkimus tutki taajuus EBV genotyyppien,

del-LMP-1

variantteja, ja HPV genotyyppien makean pakastetut näytteet potilaalla on HNC, jotta voidaan analysoida vaikutuksia EBV ja HPV-infektio erityyppisillä HNC. Havainnot tutkittiin sitten yhdistysten kliinisiä piirteitä ja ennusteen.

Materiaalit ja menetelmät

Kliiniset näytteet ja solulinjoissa

rekrytoitiin 209 potilasta, joilla HNC patologisesti vahvistettu Department Otorinolaryngologian-, pään ja kaulan kirurgian yliopiston ja Ryukyus, Japani, joulukuun 2006 ja maaliskuun 2014 Kirjallinen, tietoon perustuva suostumus saatiin kunkin potilaan ja tutkimuksen protokollan hyväksyttiin eettisen komitean yliopiston Ryukyus. Kudosnäytteiden saatu biopsialla tai kirurginen oli snap-jäädytettiin nestetypessä ja varastoidaan, kunnes tarkempaa analyysiä.

solulinjat CaSki- (ECACC, Salisbury, UK) ja Raji (ATCC, Tokio, Japani) käytettiin säätimet monistamiseen HPV

L1

ja

E6 /E7

geenit ja EBV

LMP-1

ja

EBNA-3C

geenejä, tässä järjestyksessä ja viljeltiin mukaan toimittajan ohjeiden.

DNA: n uutto ja PCR HPV-DNA: n ja EBV-DNA

DNA uutettiin näytteistä ja solut käyttämällä Gentra Purification Tissue Kit (Qiagen, Germantown, MD) mukaan valmistajan protokollaa. Läsnäolo ja eheys DNA kaikissa näytteissä varmistettiin PCR-globiinigeenin monistus käyttämällä alukkeita PC04 ja GH20 [34].

läsnäolo HPV-DNA analysoitiin PCR: llä käyttämällä yleinen konsensus alukesarjoista

GP5 + /GP6 +

ja

MY09 /11

[35], [36]. DNA-näytteitä negatiivisia HPV käyttämällä

GP5 + /GP6 +

tai

MY09 /11

otettiin uudelleen monistettiin (auto-) nested PCR käyttämällä

GP5 + /GP6 +

alukeparia kuin aikaisemmin kuvatulla tavalla [37]. Vettä (negatiivinen kontrolli) ja DNA-HPV-16-positiivisia CaSki-solujen (positiivinen kontrolli) sisällytettiin kullekin vahvistusta sarjassa. PCR-tuotteet puhdistettiin ja sekvensoitiin suoraan ABI PRISM 3130 × l Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Carlsbad, CA). Sekvenssejä linjassa ja verrattiin tunnettujen HPV-tyyppien GenBank tietokantaan käyttäen ohjelmaa BLAST.

EBV-DNA läsnäoloa ja tyypitys suoritettiin PCR: llä käyttäen alukkeita ulottuu

EBNA-3C

geeni kuten edellinen kuvattu [13]. Johtuen alukekohtia vierusalueita tyyppihyväksynnän vaihtelua, saatua PCR tuotteet olivat kaksi eri kokoa johdettu

EBV-A

(153 emäsparia) ja

EBV-B

(246 bp) ( Kuvio 1). Positiivisiksi kontrolleiksi kaksi EBV positiiviset näytteet A-tyypin ja B-tyypin, varmistettiin PCR: llä ja suoralla sekvensoinnilla sisällytettiin kuhunkin PCR-reaktiossa.

Middle paneeli: erityinen 316 emäsparin kaistan osoitti villityypin

LMP -1

(näytteet 3, 4, 6, 7, ja positiivinen kontrolli PC-1) ja spesifinen 286 bp: n vyöhyke osoitti 30 bp: n poistuman

LMP-1

(näytteet 1, 2, 5, ja PC-2). Tuotteet positiivisten kontrollien varmistettiin suoralla sekvensoinnilla. Alempi paneeli: 30 emäsparin poistamisen sekvenssin

del-LMP-1

villityypin LMP-1 sekvenssianalyysillä.

tutki myös

LMP-1

geenin, kuten aiemmin on raportoitu [19]. Prototyyppi Raji-solulinja (ATCC), joka säilyttää karboksipään 30 emäsparia, tuottaa 316 emäsparin fragmentti ja sitä käytettiin positiivisena kontrollina villityypin

LMP-1

. Näytteet, joissa on lyhyempi PCR-tuote pituus kuin mitä havaittiin Raji uskottiin sisältävän

LMP-1

poisto (

del-LMP-1

, 286 bp: n fragmentti). Lisäksi, näyte, jossa on 30 bp: n poistuman varianttia varmistettiin PCR: llä ja suoralla sekvensoinnilla on myös kaikissa PCR-reaktiossa.

HPV

E6 /E7

mRNA: n käänteistranskriptiota, PCR

Kokonais-RNA uutettiin tuumorinäytteistä käyttämällä täysin RNA ™ -kittiä (Ambion, Austin, TX) valmistajan mukaan protokollia suspendoitiin 50 ul: erittäin korkealaatuisia dietyylipyrokarbonaatilla käsiteltyä vettä.

Ennen cDNA-synteesi, jäljelle jäänyt DNA poistettiin inkuboimalla 1 U DNaasi I (Ambion) huoneenlämpötilassa 25 min. cDNA syntetisoitiin sitten DNA-free kokonais-RNA käyttäen RETROscript® Kit (Ambion) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Tutkia läsnäolon kontaminoivien DNA: RNA-näytteet, kaikki määritykset suoritettiin sekä ilman käänteistranskriptaasia.

havaita korkean riskin

E6 /E7-

mRNA-transkriptien, PCR suoritettiin cDNA saatu HPV-DNA-positiivista näytettä käyttäen TaKaRa PCR ihmisen papilloomaviruksen kirjoittaminen Set (Takara Bio Inc., Otsu, Japani), joka voi tunnistaa korkean riskin HPV-tyypit 16, 18, 31, 33, 35, 52, ja 58. tarkistaa HPV-16

E6 /E7-

mRNA-transkriptien, HPV-16 DNA-positiiviset näytteet tutkittiin myös käyttäen puoli-nested-PCR lähestymistapa cDNA, kuten aiemmin on kuvattu [38].

ISH varten

Eber

läsnäolo EBV syöpäsoluissa vahvistettiin ISH varten

Eber

. Lyhyesti, 4 pm paksu osastoja formaliini-tallenteen parafinoidut lohkot poistettiin parafiini, uudelleen sammutettua, ja esidigestoitiin proteinaasi K: hybridisaatioliuosta sisältävä fluoreseiini-isotiosyanaatti (FITC) konjugoitua EBV oligonukleotidikoettimen (

Eber

PNA koetin, cocktaileja

Eber 1

ja

2

; Dako, Glostrup, Tanska) levitettiin 90 min ajan 55 ° C: ssa. Dako ISH detektioreagenssipakkaus (koodi nro S5201) kaniinin F (ab ’) 2 anti-FITC-vasta-aine ja entsyymi-substraatti (5-bromi-4-kloori-3-indolyylifosfaattia ja nitrosinitetratsoliumia) käytettiin visualisoimaan hybridisaatio tuotteita. Stained diat vastavärjättiin Nuclear Fast Red (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Tummansininen signaalit esiintyvät tumassa tunnustettiin

Eber

positiivinen.

Tilastollinen

Tarkempi tilastoja käytetään kuvaamaan potilaan lähtötilanteen ominaisuudet. Mann-Whitneyn U-testiä tai Kruskal-Wallisin testiä käytettiin jatkuvien muuttujien ja Pearsonin khiin neliö -testi tai Fisherin testiä käytettiin kategorisen muuttujia.

uusiutuminen elinaika määriteltiin aika hoidon päättyessä syövän uusiutuminen tai Viimeisimmässä seurannassa. Tautikohtaiset eloonjääminen määritettiin aika lopusta hoito vajoaminen sairauden tai Viimeisimmässä seurannassa. Survival käyrät arvioitiin Kaplan-Meier menetelmällä, ja elossapysymisaikajakaumat verrattiin käyttäen log-rank-testi.

P

arvot alle 0,05 pidettiin merkittävinä. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen SPSS ohjelmistoa (SPSS for Windows-versio 12.0, SPSS, Inc., Chicago, IL).

Tulokset

kliinis ominaisuudet potilaista

Sijainti primaarikasvaimen oli nasopharynx 20 potilaalla (9,6%), nielu 74 (35,4%), hypopharynx 50 (23,9%), kurkunpään 28 (13,4%), ja suuontelon 37 (17,7%). Niistä 209 potilasta, 168 sai parantavaa hoitoa (samanaikainen kemosädehoito 73, leikkaus ja leikkauksen jälkeinen säteilyä tai chemoradiation hoito (säteilyannoksen, 50-54 Gy) 51, leikkaus yksin 27, ja sädehoito yksin 17), 30 potilasta sai lievittävä hoito, ja 11 ei ollut hoitoa. Demografiset ja kliiniset ominaisuudet on koottu taulukkoon 1.

HPV-infektion ja genotyyppien HNC

HPV-DNA havaittiin 30,1% (63/209) ja 209 potilasta, ja nielu oli paikalla korkein esiintyvyys (45,9%, 34/74). Genotyypitys kasvainten osoitti, että suurin osa HPV-DNA-positiivisissa näytteissä sisälsi korkean riskin HPV-16 (86,9%; 53/63 kasvaimet). Toinen HPV nimikkeet HPV-33 (4 tapausta), HPV-35 (2 tapausta), HPV-56 (1 tapaus), HPV-58 (2 tapausta), ja HPV-67 (1 tapaus). Ei useita infektio tai matalan riskin HPV-tyyppien havaittiin (taulukko 1).

Niistä 63 HPV-DNA-positiivista näytettä, 60 olivat käytettävissä RNA ja HPV

E6 /E7

mRNA ilmaisun löydettiin 23 (38,3%) niistä. Kiinnostavaa kyllä, suurin osa HPV

E6 /E7

mRNA-positiivisia kasvaimia (87,0%, 20/23), jotka ovat peräisin nielu. Vaikka 60,6% (20/33) HPV-DNA-positiivinen OPCs olivat positiivisia viruksen HPV mRNA ilmaisu, HPV

E6 /E7

mRNA-transkriptien havaittiin vain 3 27 (11,1%) kuin suun ja nielun HNCs, johtuvat nenänielusta, kurkunpään, tai suuontelon (taulukko 2).

analyysi tilastollinen korrelaatio HPV-infektion tilan ja histoclinical ominaisuuksia ei paljastanut mitään merkittäviä suhteita läsnäolo HPV-DNA ja sukupuolen, iän , TNM tai solmukohtien vaiheessa. HPV-DNA oli todennäköisemmin löytyy tupakoimattomilla tai kevyen tupakoitsijoita (ts Brinkman indeksi 400;

P

= 0.030). Lisäksi merkittäviä korrelaatioita ei havaittu HPV- statuksesta ja kasvaimen sijainti (

P

= 0,002) sekä HPV aseman ja kasvaimen erilaistumiseen (

P

0,001).

EBV-infektio, genotyypit, ja 30 bp: n poistuman

LMP-1

muunnos HNC

Kuten taulukosta 2, PCR-monistus

EBNA-3C

geenin osoitti EBV DNA 146 (69,9%) ja 209 HNC näytteet: 107 (73,3%) sisälsi tyyppiä A, 27 (18,5%) sisälsi tyypin B ja tyypin A ja tyypin B havaittiin yhdessä 12 (8,2%) tapauksista. Tutkimme myös esiintyvyys

LMP-1

variantin ja löysi

del-LMP-1

in 124 (84,9%) ja 146

EBNA

-positiivisille tapauksissa. Lähes kaikki tyyppi A EBV tapauksessa (98,1%; 105/107) sisälsivät

del-LMP-1

, kun taas vähän yli puolet B-tyypin tapauksista (63,0%; 17/27) sisälsi villityypin

LMP-1

(

P

0,001).

esiintyvyys EBV DNA alisivustoasi oli 95,0% (19/20), 79,7% (59/74), 64,0 % (32/50), 50,0% (14/28), ja 59,5% (22/37) kasvaimissa nenänielusta, nielu, hypopharynx, kurkunpään, ja suuontelon, vastaavasti. Niistä 17 NPC näytteitä sisältävän tyypin A EBV, 16 (94,1%) osoitti

del-LMP-1

, mukaan lukien 6 WHO tyypin I tapauksissa 6 WHO tyypin II tapauksissa ja 4 WHO tyyppi III tapauksissa.

määrittämiseksi läsnäolon EBV-infektion kasvainsoluissa,

Eber

tutkittiin myös ISH kaikissa HNC näytteissä (kuvio 2). Toisin kuin korkea esiintyvyys EBV-DNA tunnistettiin PCR, vain 6,2% (13/209) ja HNCs oli positiivinen

Eber

. EBV-infektio HNC pääasiassa lokalisoitu nenänielussa (92,3% [12/13] on

Eber

positiivisia kasvaimia; nasopharynx vs ei-nasopharynx HNC,

P

0,001).

Eber

havaittiin 60,0% (12/20) potilaista, joilla NPC, kuten 2 (22,2%, 2/9) ja WHO tyyppi I, 6 (100%, 6/6) WHO tyypin II ja 4 (80%, 4/5) WHO tyyppi III, mutta vain 1,4% (1/74) potilailla, joilla on OPC. Mikään

Eber

positiivisia tapauksia peräisin hypopharynx, kurkunpään, tai suuontelon.

Micrograph V: useimmat kasvaimen solut olivat positiivisia (nenänielun karsinooma, × 100, bar = 100 um), kuten on osoitettu nuolella suurella suurennuksella (x 200). Micrograph B: vaikka jotkut positiiviset lymfosyytit ovat ilmeisiä (nuoli), ei kasvain solut olivat positiivisia. Micrographs C ja D: Osat värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla (HE).

HPV ja EBV-infektio in HNC

Sekä HPV-DNA ja EBV-DNA havaittiin PCR: llä 45 (21,5%) koko 209 potilasta. Kuitenkin on 13

Eber

-positiivinen HNCs, vain 2 oli HPV-16 positiivisia ja molemmat johdettu nenänielun. Koska EBV-infektion HNC määritellään

Eber

positiivisten tuumorisolujen ISH, co-tartuntojen määrä HPV ja EBV in HNC ja NPC oli vain 1,0% ja 10,0%, vastaavasti (taulukko 3). Vaikka HPV-infektio oli yleisintä OPCs yksikään 34 HPV-DNA-positiivinen OPC tapauksia oli koinfektoidun EBV, mikä vahvistetaan

Eber

ISH.

Survival analyysi

Koska ei ollut riittävästi kudosta mRNA havaitsemiseen yhdessä tapauksessa, arvioimme hoitotuloksiin 73 OPC potilaiden perustuvat HPV asemasta. Viisikymmentäneljä potilailla, joilla on aiemmin hoitamaton ensisijainen OPC oli täydellinen remissio saatuaan ensisijainen parantava hoito, 5 osoitti pysyviä sairauden jälkeen parantava hoito, 10 tehtiin lievittävää hoitoa, ja 4 ei ollut hoitoa. Seuranta-ajan mediaani potilaille, joiden tiedot sensuroitiin oli 41 kuukautta (vaihteluväli, 3-86 kuukautta). Viimeistään seurannassa, 18 (24,7%) ja 73 OPC potilasta oli kuollut sairauden ja 2 olivat kuolleet liity sairauksiin. Kaplan-Meier-analyysi osoitti, että mitään merkittäviä eroja taudin aiheuttaman säilymisen tai eloonjäämisaste välillä OPC potilaiden HPV-DNA + ja OPC potilaiden HPV DNA- (

P

= 0,332 ja

P

= 0,378 vastaavasti, Fig. 3). Kuitenkin verrattuna OPC potilailla, joilla on HPV-mRNA- (eli molemmat OPC potilaalla on HPV-DNA + /mRNA- ja OPC potilaiden HPV DNA- /mRNA-), OPC potilailla, joilla on HPV-DNA + /mRNA + oli parempi tautikohtaisia ​​ja yleistä eloonjäämisaste (

P

= 0,027 ja

P

= 0,017, tässä järjestyksessä). 3 vuoden tautikohtaisia ​​eloonjäämisaste oli 95,0% (95% CI = 85,5% -100%) kohortin kanssa HPV-DNA + /mRNA + ja 73,8% (95% CI = 61,4% -86,1%) kohortin HPV DNA + /mRNA- tai HPV DNA- /mRNA-.

tautikohtaisia ​​elossaolo ja kokonaiselossaoloaika olivat merkitsevästi parempia HPV-DNA-positiivinen /mRNA-positiivisia OPC potilailla kuin HPV-DNA-positiivinen /mRNA-negatiivinen ja HPV-DNA-negatiivisia /mRNA-negatiivinen OPC potilailla. Ei kuitenkaan ole merkittäviä eroja taudin aiheuttaman säilymisen tai eloonjäämiseen välillä ei havaittu HPV-DNA-positiivisia ja HPV-DNA-negatiivisia OPC potilailla.

arvioimiseksi riippumaton ennustearvo kaikkien näiden tekijöiden taudista erityisiä hengissä OPC, yhden ja usean analyysit käyttämällä Coxin suhteellisen vaarat malleja tehtiin. Vuonna univariate analyysi, OPC potilaalla on HPV-DNA + /mRNA + tila oli merkittävästi korkeampi tautikohtaisia ​​eloonjäämisen (

P

= 0,029; riskisuhde (HR) = 0,12; 95%: n luottamusväli (CI) = 0,01-0,99) kuin muut OPC potilaista (taulukko 4). OPC potilaat luokiteltu vaiheessa T4, solmukohtien vaiheessa 2-3, ja runsas alkoholin juovat (alkoholi päivässä 50 g) oli huomattavasti pienempi tautikohtaisia ​​eloonjäämisen (T4,

P

= 0,002, HR = 0,15, 95 % CI = 0,04-0,50; solmukohtien vaiheessa 2-3,

P

= 0,040, HR = 3,49, 95% CI = 1,01-12,03; raskas alkoholi juomari,

P

= 0,040, HR = 3,49, 95% CI = 1,01-12,03) verrattuna potilaisiin luokiteltu vaiheessa T1-3, solmukohtien vaiheessa 0-1, ja kevyt tupakoitsijoiden ja tupakoimattomien. Lopullinen malli monimuuttujamenetelmin käyttämällä Coxin suhteellisten riskien mallia tunnistamiseen reilun tautikohtaisia ​​selviytymisen OPCs osoittivat, että vaiheessa T1-3 (

P

= 0.002; oikaistu HR = 0,22; 95% CI = 0.08- 0,56) ja HPV mRNA-positiivisuuden (

P

= 0,061; oikaistu HR = 0,15; 95% CI = 0,02-1,10) ennusti paremmin tautikohtaisia ​​eloonjäämisen (taulukko 4).

lisäksi arvioimme ennusteita on 54 OPC potilailla, joilla oli täydellinen remissio saatuaan ensisijainen parantavaa hoitoa. 3 vuoden uusiutumista elinaika oli 100% OPC potilaille, joilla on HPV-DNA + ja 75,1% (95% CI = 59,1% -91,2%) OPC potilailla, joilla on HPV DNA- (

P

= 0,002) ( kuvio 4A). Siten 3-vuoden tautikohtaista selviytymisen HPV-DNA + OPC potilailla oli merkitsevästi parempi kuin HPV DNA- potilaalla (100% vs. 88,9%,

P

= 0,015) (kuvio 4B). Mielenkiintoista, HPV mRNA + OPC potilailla oli myös merkitsevästi parempi uusiutumista elinaika kuin HPV mRNA- OPC potilailla (

P

= 0,032) (kuvio 4C), ja 3 vuoden uusiutumista elinaika hinnat olivat 100% ja 80,4%, vastaavasti. Kuitenkin OPC potilaiden HPV mRNA + osoittivat vain hieman voimakkaampaa taipumusta reilun tautikohtaisia ​​eloonjääminen verrattuna OPC potilailla, joilla on HPV mRNA- (100% vs. 91,2%,

P

= 0,080) (kuvio 4D).

Kun parantava hoito, HPV-DNA-positiivinen OPC potilailla havaittiin merkitsevästi parempi uusiutumista elinaika ja sairauksien eloonjäämisaste tietyissä verrattuna HPV-DNA-negatiivisia OPC potilailla. Samanlaisia ​​tuloksia havaittiin HPV mRNA-positiivisia OPC potilailla.

arvioimiseksi vaikutuksen EBV eloonjäämiseen potilaille NPC, potilaat stratifioitiin havaitsemiseen

Eber

. Niistä 20: llä NPC, 18 hoidettiin paikallisesti ja hoidon yksityiskohdat ja tulokset olivat saatavilla diagnoosia tehtäessä näille potilaille. Mediaani seuranta-aika oli 21 kuukautta (vaihteluväli, 3-63 kuukautta). Vaikka potilaalla on

Eber

positiivisten NPC osoitti suuntaus kohti parempaa tautikohtaisia ​​eloonjäämisen verrattuna potilaisiin, joilla

Eber

-negatiivinen NPC, ei havaittu merkittävää eroa näiden kahden ikäryhmät (

P

= 0,155) (kuvio 5A). Vastaavasti 16 tapauksesta parantava samanaikaista sädehoitoa varten primäärikarsinoomaan, eikä merkittävää eroa taudin aiheuttaman eloonjäämisen välillä havaittiin

Eber

positiivisten NPC ja

Eber

-negatiivinen NPC ikäryhmät (

P

= 0,381) (kuvio 5B).

Ei merkittäviä eroja määrien tautikohtaisia ​​eloonjäämisen välillä ei havaittu

Eber

-positiivinen (kasvain EBV-infektio) ja

Eber

-negatiivinen NPC potilailla.

keskustelu

yleinen HPV esiintyvyys HNC oli hieman suurempi tässä tutkimuksessa (30,1%) kuin kansainvälisissä tutkimuksissa, jotka ovat raportoineet 25,9% HPV-DNA-positiivisia tapauksia näiden kasvainten yksiköt [39]. Lisäksi tutkimuksemme tulokset olivat yhdenmukaisia ​​aiempien raporttien osoittavat, että nielu oli alisivustoa korkein esiintyvyys HPV HNC, ja yleisin viruksen genotyypin HPV: hen liittyvän HNC oli HPV-16 [39], [40]. Toisin kohdunkaulan syöpä, jossa HPV

E6 /E7

selostukset tunnistetaan useimmissa HPV-DNA-positiivista näytettä [41], vain 38,4% HPV-DNA-positiivinen HNC tapaukset osoittivat HPV

E6 /E7

mRNA positiivisuus tässä tutkimuksessa.

E6 /E7

mRNA pidetään merkkinä HPV pahanlaatuisiksi, ja osoittaa, onkogeeninen

E6 /E7

transkriptio saattaa ehdottaa, että HPV-odotuksiin carcinogensis on mekanistisesti mahdollista, kun taas HPV-DNA-positiivinen /RNA-negatiivisia tuloksia voi yksinkertaisesti heijastaa joko matalan tason transkription tai ei-transkription aktiivisia, ja mahdollisesti ”matkustaja” infektio. Se, että noin 90%: ssa tapauksista, joissa kopioinnin suhteen aktiivisia HPV alkunsa suunieluun kannatti käsite läheinen suhde HPV ja OPC. Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että viruskuorma HPV-DNA esiintyy suurta vaihtelua pään ja niskan alueella, ja kopioi määrä DNA OPCs olivat paljon suurempia kuin ei-nielu HNCs. Suhteellinen alhainen moninaisuus HPV-infektion kuin suunieluun pään ja kaulan sivustoja, kuten hypopharynx, kurkunpään, ja suuontelon, voi korreloida alhaisen

E6 /E7

mRNA: n ekspression kasvaimissa näillä paikoilla [42], [43]. Lisäksi, Wiest raportoitu, että useimmat kasvaimia, jotka eivät ilmennä

E6 /E7

sisältävät mutatoidun

p53

geenin, jossa E6-geeni on usein häiriintynyt. Puute

E6 /E7

ilmaisu voi johtua E6-geenin rikkoutumisen tai muutoksia transkription valvonta [38].

Aiemmissa tutkimuksissa potilailla, joilla NPC Taiwanissa yleisesti osoitti muita yleisemmin HPV (35-51%) [44], [45], [46] kuin Euroopassa ja Yhdysvalloissa (9-27%) [47], [48], [49]. Lisäksi noin 22% suuontelon SCC tapauksissa Taiwan satama korkean riskin HPV-DNA [50], [51]. Mielenkiintoista on, että tässä tutkimuksessa suhteellisen korkea HPV löydettiin myös joitakin ei-nielun HNCs, kuten NPC (30,0%) ja suuontelon SCC (29,7%). Suurin osa potilaista rekrytoitiin Okinawa, eteläinen saari Japanissa hyvin lähellä Taiwan, mikä saattaa viitata siihen maantieteellisesti ja rodullisesti erillisiä HPV ominaisuuksia ja että onkogeeniset HPV voi liittyä osajoukon karsinoomien joihin nenänielun ja suuontelon. Koska alhainen detektiomäärät

E6 /E7

mRNA-transkriptien kuitenkin roolin HPV näissä ei-nielu HNCs on selkeytettävä.

Tutkimus käyttäen PCR tuoreisiin-pakastetut näytteet NPC osoitti, että EBV tyyppi A on hallitseva ja

del-LMP-1

on yleinen Japanin väestöstä, havainnoista, jotka yhtyä saatuja tietoja samanlaista kerätyt näytteet Kaakkois-Aasiassa ja Pohjois-Afrikassa [19], [20], [52], [53]. Päinvastainen on havaittu näytteissä Euroopan EBV-NPC potilaiden ja terveiden luovuttajien, jossa villityypin

LMP-1

-bakteerit ovat näkyvämpiä kuin

del-LMP-1

variantteja [54 ]. 30 emäsparin poisto

LMP-1

variantit osoittavat muuntamiseen ja aiheuttaa tuumorigeenisemmiksi muutoksia, ja poisto-proteiini on pidempi puoliintumisaika ja suurempi kyky aktivoida NF-kB ja JNK /AP1 epiteelisolujen, mikä edistää entistä pahanlaatuinen NPC fenotyyppiin [18], [55]. Jakauma ominaisuudet EBV variantteja voi ehdottaa suurempaa Tuumorigeenisuustutkimuksissa

del-LMP-1

endeemisillä alueilla Kaakkois-Aasiassa ja Pohjois-Afrikassa verrattuna villin tyypin EBV. Kuitenkin ristiriitaiset havainnot ole merkittäviä eroja taajuus

del-LMP-1

kurkussa pesun näytteiden välillä endeemisiä ja ei-endeemisillä alueilla Kiinassa [56] korostetaan tarvetta tulevaisuuden tutkimusta selvittämään, onko

del-LMP-1

on todellakin NPC fenotyyppi-korrelaatio polymorfismi eikä Maantieteellisesti tai etnisen liittyvä polymorfismi.

Vaikka hieman yli puolet tapauksista EBV-tyypin B sisälsi villityypin

LMP-1

, useimmissa tapauksissa EBV-tyypin sisälsi

del-LMP-1

. Meidän havainnot ovat yhdenmukaiset aiemman tutkimuksen Koreasta [19], jossa suurin osa (87%) A-tyypin EBV osoitti

del-LMP-1

muunnos ja B-tyypin EBV näytteillä villin tyyppi

LMP-1

useammin. Mielenkiintoista, villityypin

del-LMP-1

ei löytynyt vain 64,3% B-tyypin EBV mutta oli hallitseva (64,1%) vuonna tyypin EBV ääreisveren mononukleaarisissa soluissa terveiltä kantajia [57]. Lisäksi Correa et al tutki 7 AIDS primaarisessa keskushermoston lymfooma ja totesi, että

del-LMP-1

oli aina havaittu tyypin B EBV [58], joka oli erilainen kuin havainnot NPC. Yhdessä vahvan yhdistys EBV tyyppi ja

LMP-1

variantit saattavat johtua ominaispiirteet EBV. [19].