Krooninen sairaus

tiivistelmä

resveratrolin (trans-3,4,5 ’-trihydroxystilbene) on aktiivinen yhdiste elintarvikkeissa, kuten punainen viinirypäleitä, pähkinöitä, ja marjoja. Resveratrol osoittaa syövän vastainen vaikutus eri ihmisen syöpäsoluja. Kuitenkin mekanismi resveratrol aiheuttaman syövän vaikutusta molekyylitasolla vielä selvittämättä. Tässä tutkimuksessa, taustalla oleva mekanismi syövän vastaisen vaikutuksen resveratrolin ihmisen munasarjan syöpäsolujen (OVCAR-3 ja Caov-3) tutkittiin käyttämällä erilaisia ​​molekyylibiologian tekniikoita, kuten virtaussytometrialla, Western blotting, ja RNA-interferenssi, jossa on pääpaino mahdollisesta roolista autophagy resveratrol aiheuttama apoptoottisen solukuoleman. Olemme osoittaneet, että resveratroli aiheuttama reaktiivisia happiradikaaleja (ROS) tuotanto, joka laukaisee autophagy ja myöhemmät apoptoottisen solukuoleman. Resveratrol aiheuttama ATG5 ilmaisun ja edistettävä LC3 pilkkominen. Apoptoottisen solukuoleman aiheuttama resveratroli on heikennetty sekä farmakologisen ja geneettisen inhibitio autophagy. Autophagy estäjä klorokiini, joka toimii on loppuvaiheessa autophagy, vähensi merkitsevästi resveratrol solukuolema ja kaspaasi 3: n aktiivisuuden ihmisen munasarjasyövän soluja. Olemme myös osoittaneet, että kohdistaminen ATG5 siRNA myös tukahdutti resveratroli aiheuttama apoptoottisen solukuoleman. Niinpä pääteltiin, että yhteinen polku välillä autophagy ja apoptoosin olemassa resveratrol aiheuttama solukuolema OVCAR-3 ihmisen munasarjasyöpäsoluja.

Citation: Lang F, Qin Z, Li F, Zhang H, Fang Z Hao E (2015) apoptoottinen solukuolema mukaan resveratrolin osittain välittyy Autophagy Pathway in Human munasarjasyöpäsoluja. PLoS ONE 10 (6): e0129196. doi: 10,1371 /journal.pone.0129196

Academic Editor: Dominique Delmasissa UMR INSERM U866, FRANCE

vastaanotettu: 31 lokakuu 2014; Hyväksytty: 7. 2015 Julkaistu: 11 kesäkuu 2015

Copyright: © 2015 Lang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: Kaikki tiedot ovat annetaan käsikirjoitus.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukee Promotive tutkimusrahasto nuorille ja keski-ikäisten tutkijat Shandongin maakunnassa (Grant nro 07-21). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Munasarjasyöpä on yksi suurimmista johtavista syövän syiden liittyvä kuolema naisilla ja korkea toistumisen leikkauksen jälkeen [1] [2]. Useimmiten diagnoosi tehdään myöhäisessä vaiheessa syöpä, ja se tulee haastava poistettu kirurgisella ja talteenotto [2]. Niinpä tutkimukset vaikuttavat aineet elintarvikkeiden voisi tarjota käyttökelpoinen vaihtoehto hoitomenetelmät tälle maligniteetti.

Resveratrol on vaikuttava aine meidän elintarvikkeiden lähteistä, kuten viinirypäleitä, pähkinöitä, ja marjat, joka on pitkään käytetty perinteisen kiinalaisen lääketieteen. Lukuisat tutkimukset ovat osoittaneet edulliset vaikutukset resveratrolin sydän- ja verisuonitautien, hermosairauksien, lihavuus, ja tulehdussairauksien [3-5]. Yksi tärkeimmistä alueista resveratrolin tutkimuksen kärjessä syövän tutkimuksen [6, 7]. On hyvin tunnettua, että suuri annos resveratrol johtaa apoptoottisen solukuoleman munasarjasyövän solujen [8-10]. Useita mekanismeja munasarjasyövän solukuoleman on ehdotettu. Fosforylaatio Cdc2-tyr15 by resveratrolin hoitotulos solusyklin pysähtymiseen of OVCAR-3 [9]. Down-regulation Akt /GSK ja ERK signalointireitteihin on osoitettu olevan kriittinen resveratroli-välitteisen solukuoleman [10]. Äskettäin, Lin et ai. kuvattu tärkeä rooli keramidin ja COX-2 in apoptoottisen solukuoleman resveratrolin OVCAR-3 [8].

Autophagy on konservatiivinen itsestään hajoamisreitit jossa sytosolin komponentit erottautuvat lysosomeihin heikentymisen ja kierrätykseen [11]. Terveillä kudoksissa, tämä on prosessi clearing vahingoittuneiden organelles. Se on kuitenkin monimutkainen prosessi syöpäsoluissa, joissa se voi joko estää tai indusoivat syöpäsolujen kasvua riippuen solujen mikroympäristössä [12].

Esillä olevassa tutkimuksessa olemme tutkineet mahdollista roolia autophagy vuonna resveratroli aiheuttama apoptoottisen solukuoleman OVCAR-3 syöpäsoluja. Olemme havainneet, että resveratroli indusoi ROS ja apoptoosin, sekä aktivointi autophagy väylän OVCAR-3-soluihin. Inhibitio autophagy farmakologisella estäjää tai siRNA vastaan ​​ATG5 vaimensi merkittävästi resveratrol-välitteisen apoptoottisen solukuoleman. Siten meidän tutkimus osoitti tärkeä rooli autophagy resveratrol aiheuttaman apoptoosin ihmisen munasarjasyöpäsoluja.

Materiaalit ja menetelmät

reagenssit

resveratrolin, NAC (N asetyylikysteiini ), klorokiini, kaspaasi 3 iinianalyysikitissä, ja LC3 vasta-hankittiin Sigmalta (USA). Resveratrol liuotettiin DMSO: hon (Sigma, USA) ja valmistettiin tuoreena joka kerta ennen solujen käsittelyä. Anti-ATG5 vasta-aine hankittiin Beijing Biosynthesis Biotechnology, ATG5-ATG12 Complex Vasta oli peräisin ABD Serotec, ja anti-pilkkoutuu kaspaasi 3-vasta tilattiin Cell Signal teknologioita. siRNA vastaan ​​ATG5 saatiin Shanghai GenePharma Co. Ltd. Z-VAD-FMK ostettiin R 0,05.

Tulokset

resveratrolin indusoiman apoptoottisen solukuoleman ihmisen munasarjasyövän soluja annoksesta riippuvaisella tavalla

OVCAR-3 on kemoterapia kestävä tasyöpäsolulinja perustetaan munasarjojen adenokarsinooma potilaalle. Hyödynsimme OVCAR-3 soluja kuin

in vitro

syöpäsolujen malli testata syöpää ehkäisevistä vaikutuksista resveratrol. Kuten on esitetty kuviossa 1A, käsittely resveratrol 1 100 um: ssa 48 tuntia aiheutti annoksesta riippuvan solun elinkyvyn menetykseen, kuten määritettiin käyttäen MTT-määrityksissä. Hoito 30 uM ja 100 uM resveratrolin osoitti tilastollisesti merkittävää vähenemistä solujen elinkelpoisuuden 48 h.

. OVCAR3 soluja käsiteltiin 1-100 uM resveratrol 48 tuntia. Solujen elinkelpoisuus määritettiin käyttäen MTT-määrityksissä. Tiedot saatiin keskimäärin neljä toisistaan ​​riippumatonta koetta. * P 0,05 verrattuna ajoneuvon hallinnan, n = 4 /ryhmä. B. Edustavia virtaussytometriselle pistekuvioita mittaamiseksi apoptoosin OVCAR-3-soluissa. Resveratrol indusoiman apoptoosin mitattiin värjäämällä Sytox Green väriainetta (Y-akseli, FL1) ja anneksiini V-APC (X-akseli, FL4). C. kvantitatiivinen määritys alussa apoptoottisen solukuoleman, kuten määrä anneksiini V-positiivisten solujen kanssa Sytox vihreä-negatiivisia soluja, ja myöhäinen apoptoottiset /nekroottinen solukuolema, koska määrä anneksiini V-positiivisia ja Sytox vihreä-positiivisia soluja.

vaikutukset resveratrolilla apoptoottisen solukuoleman OVCAR-3 soluja tutkittiin virtaussytometrialla käyttämällä Sytox Green (FL1H) ja anneksiini V- allofykosyaniini (FL4H). Hoito 100gM resveratrolin 48 tuntia aiheuttama merkittävä aikaisin apoptoottiset ja myöhäinen apoptoottiset /nekroottinen solukuolema (kuvio 1 B ja 1 C). Käsittely 30 uM resveratrolia 48 tuntia aiheutti myös merkittävät aikaisin apoptoottisten ja myöhäisten apoptoottisten /nekroottinen solukuolema (kuvio 2A ja 2B), mutta vaikutus oli pienempi kuin 100 uM.

. Edustavia western blotting-analyysit OVCAR-3 kokosoluliuotteista kanssa ATG5, LC3, ja P62-vasta-aineita. β-aktiini ja GAPDH käytettiin lastaus valvontaa. Kolme samanlaiset näytteet ladattiin kussakin testiryhmässä. B. Caspase 3 aktivaatio mitattiin solulysaateista ja ilmaistaan ​​kertaluokkamuutos. * P 0,05 verrattuna ajoneuvon ohjaus, n = 4 /ryhmä.

Resveratrol aiheuttama autophagy ihmisen munasarjasyöpäsoluja

arvioidaan myös vaikutusta resveratrolin autophagy. Tärkeimmät merkkiaineiden autophagy arvioitiin. Kuten kuviossa 2C ja kuviossa 3A, resveratroli ainduced LC3-II ja p62 on OVCAR-3-soluihin. Western blotting analyysit paljastivat lisääntyminen tietyn autophagic markkeri ATG5, joka on välttämätön autophagosome muodostumista (kuviot 2A ja 3A). Lisäksi kaspaasi 3 lisääntyi merkitsevästi resveratrol saaneilla OVCAR-3-solut (kuviot 2D ja 3B).

. OVCAR-3-soluja käsiteltiin 30 uM resveratrolin 48 tuntia, ja solukuolemaa määritettiin virtaussytometrialla. B. kvantitatiivinen tulos virtaussytometrialla. C. tyypillisen western blotting-analyysit OVCAR-3 kokosoluliuotteista kanssa ATG5, LC3, ja p62-vasta-aineiden kanssa β-aktiini latauskontrollina.

resveratrolin aiheuttamaa oksidatiivista stressiä OVCAR-3 ihmisen munasarjasyöpä solut

Seuraavaksi tutki resveratrolin hoito ollut vaikutusta oksidatiivista stressiä syöpäsoluissa. Ensimmäisessä lähestymistavassa, käytimme solun läpäisevä 2 ’, 7’-dichlorodihydrofluorescein diasetaatti (H2DCFDA) väriaine mitata solunsisäisten ROS, ja totesi, että resveratroli 30 uM johti significantincrease solunsisäisen ROS tuotannon OVCAR3-soluissa (kuvio 4A). Edelleen vahvistaa tämän seurauksena olemme myös käyttää ilmainen tapa mitata oksidatiivista jalanjälki mittaamalla HNE proteiini addukteja (4-hydroksinonenaalia). Yhdenmukainen solunsisäisten ROS tietojen HNE proteiini additiotuotteet korotettiin merkittävästi verrattuna apuaineella hoidettuun OVCAR soluissa (kuvio 4B ja 4C). Lisäksi osoitimme, että resveratrol myös merkittävästi vähentynyt mitokondrion elektronin potentiaali (kuvio 4D).

. Solunsisäinen ROS of OVCAR-3 mitattiin virtaussytometrialla käyttämällä H

2DCFDA ja ilmaistaan ​​kertaluokkamuutos. Resveratrol 30 pM indusoi tilastollisesti merkittäviä ROS. * P 0,05 verrattuna ajoneuvon hallinnan, n = 4 /ryhmä.

B

. Oksidatiivisen stressin markkeri 4HNE modifioidut proteiinit määritettiin käyttäen ELISA-solulysaateista ajoneuvon ja resveratrolin-käsitelty (30 uM) OVCAR-3-soluihin. Määrällisiin modifioidut proteiinit ilmaistiin% ajoneuvon hallinnan näytteitä. * P 0,05 verrattuna ajoneuvon hallinnan, n = 4 /ryhmä. C. Edustavia Western blotting osoittaa resveratrolin aiheuttama korkeus HNE additiotuotteiden. D. Mitokondrioiden elektronin potentiaali muutos seuraava resveratroli hoidon määritettiin kvantitatiivisen virtaussytometrialla ja immunofluoresenssilla.

resveratrolin samalla aiheuttaman apoptoosin ja autophagy ihmisen munasarjasyöpäsoluja Caov-3

Voit selvittää resveratrol vaikutus on solulinja erityinen, käytimme toisen ihmisen munasarjasyövän solulinja Caov-3. Yhdenmukainen vaikutus havaittiin OVCAR-3 soluja, resveratrol myös indusoi apoptoosia ja autophagy in Caov-3-soluissa (kuvio 5). Kuitenkin resveratrol samalla annoksella ja aikataulu ei aiheuttanut alussa apoptoosin ensisijainen ihmisen munasarjan pintaan epiteelisolujen HOSEpiC vaikka on hieman lisääntyvän myöhään apoptoottiset /nekroottinen solukuolema (S1 Kuva).

. Caov-3-soluja käsiteltiin 30 uM resveratrolin 72 tuntia, ja solukuolemaa määritettiin virtaussytometrialla. B. kvantitatiivinen tulos virtaussytometrialla. C. tyypillisen western blotting-analyysit Caov-3 kokosoluliuotteista kanssa LC3, ja p62-vasta-aineita.

farmakologinen esto autophagy heikennettyjen resveratrol-indusoituvaa solukuolemaa OVCAR-3 solujen

testata onko autophagy on linkki apoptoottisen solukuoleman, käsittelimme OVCAR-3 soluja klorokiinin (CQ), farmakologinen estäjä autophagy, ennen resveratrol hoitoa. Apoptoosi ja solukuolema määritettiin käyttäen Sytox Green ja anneksiiniV-allofykosyaniini. Kuten on esitetty kuviossa 6A, solukuoleman resveratroli 30 uM lievensi merkittävästi esikäsittely 2 uM SA. Resveratrol merkittävästi vähentänyt solujen kuolemaan autophagy esto. analysoi myös resveratroli aiheuttaman apoptoosin markkereita kaspaasi 3 aktiivisuutta ja PARP-aktiivisuuden ja molemmat vaimennetaan CQ käsittely (kuvio 6C). Lisäksi havaitsimme, että resveratroli aiheuttama autophagosome markkereita LC3II ja p62 myös lieventyneet SA käsittely (kuvio 6D).

. Edustavia virtaussytometrillä piste kaaviot edustavat kutakin OVCAR-3-soluissa. Cellular apoptoosi mitattiin samalla menetelmällä kuin kuviossa 1. Chloroquine vähensi solujen tappaminen resveratrolilla. B. kvantitatiivinen määritys yhteensä solukuoleman, joka ilmaistiin prosentteina koko soluja. * P 0,05 verrattuna ajoneuvon valvonta; # P 0,05 verrattuna resveratrolin-käsiteltyjen näytteiden. n = 4 /ryhmä. C. Caspase 3 ja PARP toimintaa tutkittiin ja piirrettiin kertainen muutos. D. tyypillisen western blotting-analyysit OVCAR-3 kokosoluliuotteista kanssa LC3, ja p62-vasta-aineita.

esto autophagy mukaan ATG siRNA lievittää resveratroli aiheuttama solukuolema OVCAR-3 solujen

ATG5 on tunnusomaista autophagy ja keskeinen toimija muodostumiseen autophagosomes. Lisäksi farmakologinen estäjä, käytimme geneettistä lähestymistapaa kaatamalla ATG5 ilmaisun käyttämällä erityistä siRNA ja tutkitaan sen vaikutus resveratrol aiheuttama syöpä solukuolemaa. Kuten on esitetty kuviossa 7, solukuoleman resveratrolin (30 uM) väheni 27,9%: sta 16,22%: iin ATG5 siRNA. Samanlainen kuvio on havaittu myös kaspaasi 3: n aktiivisuuden ja LC3 western blot (kuvio 7B ja 7C). Teho siRNA teknologian vahvistettiin käyttäen western blotting analyysejä, joka osoitti merkittävää vähentämistä ATG5 proteiinin tasot (kuvio 7A). Kiinnostavaa kyllä, huomasimme, että käsiteltyjen solujen ATG5 siRNA yhdessä Z-VAD-FMK (50 uM) on lisää merkittävästi suojattu resveratroli-solukuolema verrattuna hoidettiin joko inhibiittorin (Kuva 7E). Olemme myös työssä uusia elävien solujen kuvantamisen tekniikkaa käyttäen Cyto ID väriaine autophagy vuon ja edellä esitetyt tulokset vahvistettiin.

. ATG5 proteiinin ilmentyminen määritettiin solulysaateista saatujen OVCAR-3 solujen ladattu joko ohjata random siRNA tai ATG5 siRNA. B. Caspase 3 toiminta määritettiin solulysaateista saatujen OVCAR-3 solujen ladattu joko ohjata random siRNA tai ATG5 siRNA. Toiminta ilmaistiin kertaiseksi muutoksen. * P 0,05 verrattuna ajoneuvon hallinnan, # P 0,05 verrattuna resveratrolin-käsiteltyjen näytteiden. n = 4 /ryhmä. C. tyypillisen western blotting-analyysit OVCAR-3 vehikkeliä (Veh) tai resveratrolin 30 uM (RV) kanssa ja ilman siATG5 ja kokosoluliuotteista olivat anlyzedwith LC3 ja β-aktiini D. elävien solujen kuva -konfokaalimikroskoopilla (20x tavoitteena) käyttäen Cyto-Id väriaine ladattu 15 minuuttia käsittelyn jälkeen resveratrol 30 uM OVCAR-3, jotka on transformoitu satunnaisia ​​tai ATG5 siRNA. E. kvantitatiivinen määritys solukuoleman OVCAR-soluissa käyttäen virtaussytometriaa. Resveratrolia solukuolema vaimennetaan siATG5-käsiteltyjen ja siATG5 plus Z-VAD-FMK (50 uM) käsiteltiin OVCAR-3-soluihin. * P 0,05 verrattuna ajoneuvon valvonta; # P 0,05 verrattuna resveratrolin-käsiteltyjen näytteiden. n = 4 /ryhmä.

Käytimme elävien solujen kuvantamiseen autophagic vuon ja kaspaasi 3 alustan väriaine (markkeri varhaisen apoptoosin) käyttäen mikroskopia (kuvio 8A ja 8B). Oli selvää, että autophagic vuon aloitettiin aiemmin (12h) kuin apoptoosin (24h) hoidetuilla 30M resveratrol, joka on yhtä mieltä edellä mainitun ATG5 siRNA tiedot. Olemme myös suorittaa aikaa tietenkin tutkimuksen Western blot -analyysit käyttämällä kahta näytettä itsenäisen kokeen kunakin mainittuna ajankohtana (kuvio 8C), ja havaitsivat, että autophagy on aktivoitu aikaisemmin apoptoosia, mikä viittaa siihen, että autophagy on ylävirtaan apoptoosin munasarjasyövän käsiteltyjen solujen resveratroilla. Kuitenkin on olemassa päällekkäisyys näiden kahden prosessin välillä, joka on tyypillinen malli syöpä solupopulaation.

. Elävien solujen kuvantamisen konfokaalimikroskopiaa (10 x tavoite) kanssa Cyto ID väriaineen OVCAR-3 soluja käsiteltiin 30 uM resveratrolin 0, 12, 24 ja 48 tunnin ajankohtina. B. Elävät solukuvauksessa konfokaalimikroskopiaa (10 x tavoite) kaspaasi 3 vihreä havaitseminen väriaineen OVCAR-3 solujen 0, 12, 24 ja 48 tunnin ajankohtina. C. OVCAR-3-soluja käsiteltiin 30 uM resveratrolin 12 h, 24 h, ja 48 h. Western blotting kokosolulysaateille suoritettiin anti-ATG5-ATG12, LC3, ja kaspaasi-3-vasta. O pilkkominen ATG5 havaittiin. Tulokset esitetään edustavat kokeen, jossa jokainen kerta-pisteen hoito toistettiin.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa osoitimme, että resveratroli-solukuolema ihmisen munasarjasyöpä solujen välittämä sekä apoptoosin ja autophagy. Resveratrol indusoi merkittävää solunsisäistä ROS: n syntyminen ja oksidatiivisen stressin syöpäsoluissa, mikä johti aloittamisen solukuolemareitin. Tunnusmerkkejä autophagy, LC3 ja ATG5, molemmat yläreguloituja resveratrol käsiteltyjen syöpäsolujen. Olemme myös osoittaneet, että farmakologinen inhibitio autophagy klorokiinikäsittely heikennettyjä resveratrol-indusoituvaa solukuolemaa OVCAR-3, ja samanlaisia ​​tuloksia saatiin estämällä ATG5 ilmaisua käyttäen siRNA.

Useat viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet joitakin mielenkiintoisia reittejä, jotka välittävät resveratrol aiheuttama apoptoottisen solukuoleman. Vergara et ai. kuvataan roolia ERK signalointi ja AKT /GSK reittejä apoptoottisen solukuoleman käyttämällä proteomic lähestymistapaa [10]. Toisessa tyylikäs tutkimuksessa, Lin et al. osoittivat, että resveratroli indusoiman apoptoosin jaettu vastaavia väyliä, joissa keramidin aiheuttama COX-2-riippuvaista apoptoosia munasarjasyöpäsoluja [8]. ere, olemme osoittaneet, että apoptoottista solukuolemaa OVCAR-3 aiheuttama resveratroli on paljon monimutkaisempi ja autophagy on ratkaiseva rooli tässä prosessissa.

Yksi keskeisimmistä havaintojen oli tuotantoa solunsisäisten ROS ja oksidatiivisen stressi resveratrol aiheuttaman solukuoleman OVCAR-3-soluissa. ROS on mukana moduloinnissa eri reittejä, mukaan lukien ERK signalointireitille [14-16]. Kiehtovan, ROS voi aiheuttaa autophagy resveratrol saaneilla OVCAR-3-soluissa [17]. Resveratrol tiedetään olevan suotuisia antioksidantti vaikutuksia terveiden solujen [18], mutta nämä antioksidantti toimilla on erilaiset seuraukset erittäin lisääntyvissä syöpäsoluissa. Antioksidantit, mukaan lukien resveratrol, on osoitettu myötävaikuttavan ROS-indusoituvaa solukuolemaa muissa syöpäsolutyyppien [19, 20]. Tuloksemme viittaavat siihen, että ROS tuotanto resveratrolin OVCAR-3 solujen liittyy syöpäsolujen apoptoosin, mikä on johdonmukaista Saatu tieto aikaisemmissa tutkimuksissa keskityttiin peräsuolen ja koolonkarsinoomasoluille.

Yleisesti autophagy estää apoptoosin induktio, ja apoptoosiin liittyvän kaspaasin aktivaatio sammuttaa autophagy prosessi. On kuitenkin olemassa monia tapauksia, joissa molemmissa prosesseissa tapahtua samanaikaisesti tai yhdessä aktivoituu ROS indusoidun sekä autophagy ja apoptoosin syöpäsoluissa [21]. Autophagy itse voivat indusoida solukuoleman, prosessi tunnetaan autophagic solukuolemaa [22]. On myös raportoitu, että induktio autophagy helpottaa aktivointi apoptoosin [23]. Puissant ym todettiin, että sekä autophagy ja apoptoosin osallistuvat resveratrol aiheuttaman solukuoleman myelooinen leukemia solulinjassa [24-26]. MCF7-rintasyöpäsoluja, resveratroli indusoi beclin-1 riippuvia ja riippumattomia autophagy [27] .Here, myös havaittiin sekä kaspaasi riippuvainen ja riippumaton reitti on olemassa resveratrol indusoiman solukuoleman munasarjasyöpäsoluja. Joko kaspaasi tai autophagy inhibiittorit eivät kyenneet palauttamaan resveratrol solukuolema. Yksi tärkeimmistä proteiinien mukana tässä prosessissa on tuumorisuppressoriproteiinia p53 ja sen proteiinin tasot sytosoliin moduloida aktivointia tai inhibitiota autophagy [28, 29]. Tumaansiirtymiseen p53 on myös tärkeä apoptoottisen induktioon. On osoitettu, että p53 on ratkaiseva resveratrol-välitteistä solukuolemaa OVCAR-3 soluja [8]. Muita yleisiä välittäjiä sekä autophagy ja apoptoosin useita BH3-only (BCL-3 homologia 3) proteiineja. Apoptoosin aikana BH3 vain proteiineja suoraan vuorovaikutuksessa BCL-2 perheen, mikä hiljentää antiapoptoottinen rooli ja stimuloiva apoptoosin. Useita BH3 vain proteiineja, kuten BAD ja BNIP3 voi myös edistää autophagy estää kilpailevasti välillä Beclin1 ja apoptoottisten proteiinien BCL-2 [30-32]. Mielenkiintoista, sekä BCL2 ja Bad on osoitettu olevan väärin säädellystä in OVCAR-3-soluissa [8].

osallistuminen p62 resveratrol indusoi solukuoleman -leukemiasolulinjan on kriittinen [25]. Havaitsimme myös induktion p62 munasarjan syöpäsolujen vasteena resveratrol hoitoon.

Tutkimuksessamme havaitsimme, että inhibitio autophagy vaimentaa (mutta ei kokonaan poistetaan) resveratrol aiheuttama munasarjasyövän solukuolemaa. Olemme myös suorittaa aika kurssin tutkimuksessa, ja totesi, että resveratroli aktivoi autophagy aikaisintaan apoptoosin, mikä viittaa siihen, että autophagy on ylävirtaan apoptoosin. Yhdessä nämä tiedot tukevat että resveratroli indusoi apoptoosia osittain läpi autophagy. Olemme samaa mieltä siitä, että jotkut enemmän klassinen mekanismit todennäköisesti mukana myös resveratrol aiheuttamaa apoptoosia.

Autophagy on ratkaiseva selviytymisen mekanismi syöpäsoluissa tiukoin edellytyksin täyttämään ravinteiden vaatimukset. Samanaikainen inhibitio autophagy aikana syövän hoito on hyödyllistä urologinen syövän [33]. Tässä tutkimuksessa käytimme myöhäisessä vaiheessa autophagy estäjä klorokiini ja totesi, että autophagy välittää OVCAR-3 solukuoleman aiheuttama resveratroli, joka vahvistettiin transfektion siRNA vastaan ​​ATG5. Tuloksemme viittaavat siihen, että se ei olisi hyödyllistä hoitaa munasarjasyöpä kanssa autophagy inhibiittorin lisäksi resveratrol. Yhdistelmä resveratrolin kanssa autophagy laukaista voisi mahdollisesti parantaa syövän vastaista vaikutusta. Tämä olisi mielenkiintoinen ja tärkeä aihe kannattaa lisätutkimusta. Tärkeää on, aiemmat tutkimukset ruokatorven okasolusyöpä osoitti päinvastainen vaikutus estämällä autophagy resveratrol solukuolema [34]. Tämä saattaa olla osittain johtuen erilaisia ​​annoksia ja syöpäsolujen tässä tutkimuksessa käytetyt, ja autophagy on monimutkainen prosessi, joka toimii kuten kaksiteräinen miekka, kun valjastettu keinona torjua syöpää [35-39].

tukeminen Information

S1 Kuva. Resveratrol ei aiheuttanut apoptoosia terveillä munasarjojen pinnan epiteelisolujen.

Flow rianalyysit Human Munasarjojen pintaepiteelisolujen (HOSEpiC) soluja, jotka kasvatettiin Munasarjojen epiteelisolujen Medium edellyttäen valmistajalta (ScienCell Research Laboratories). Resveratrol käsittely suoritettiin 100 uM 48 tuntia. Sitten solut värjättiin anneksiiniV ja sytox vihreä varhaisen apoptoosin ja myöhäinen apoptoosia /nekroottinen solukuolema markkereita vastaavasti. Kvantitatiivinen määritys virtaussytometrillä tiedot osoittivat merkitsevää eroa alussa apoptoottisen solukuoleman markkereita mutta vähän merkittävää kasvua myöhään apoptoosin /nekroottinen solukuolema markkereita. * P 0,05 verrattuna ajoneuvon valvonta; n = 3 /ryhmä.

doi: 10,1371 /journal.pone.0129196.s001

(TIFF) B