Krooninen sairaus

tiivistelmä

Frizzled homologia 3-reseptori oli säädelty useilla ruoansulatuskanavan syöpien, kuten ruokatorven ja mahalaukun syöpiin. Lisäksi frizzled homologi 3 on hiljattain raportoitu ekspressoituvan suolen kasvainten yksilöitä. Esillä olevassa tutkimuksessa tutkimme kliinistä merkitystä frizzled homologin 3 proteiinia peräsuolen syöpäpotilailla. Käyttämällä immunosytokemiallisessa värjäys, frizzled homologi 3 ilmentymistä tutkittiin 186 peräsuolen syövän yksilöitä, 79 suolen kasvainten yksilöitä, 133 peräsuolen polyyppi yksilöitä, 127 kolorektaalisyöpä yksilöt imusolmuke ja /tai etäinen etäpesäke, 310 yksilöitä erilaisia ​​ei-peräsuolen syöpä metastasoitunut karsinoomia ja 40 yksilöt samanaikainen esiintyminen paksusuolen syövän, peräsuolen adenooman ja peräsuolen polyyppien. Tilastollinen analyysi käytettiin korreloida frizzled homologia 3-proteiinin ilmentymä clinicohistopathological tekijöistä, uusiutuminen /etäpesäke ja selviytymisen jälkeen seurannan 42 kuukautta peräsuolen syöpäpotilailla. Frizzled homologin 3 ekspressoitiin 100% peräsuolen syövän yksilöitä, 89% suolen kasvainten yksilöitä, 75% paksusuolen ja peräsuolen polyyppi yksilöitä ja 69% tavallista peräsuolen epiteelin kudoksia. Lisäksi frizzled homologi 3 immunosolukemiallisten tulokset korreloivat voimakkaasti kanssa peräsuolen syövän etenemisessä. Lisäksi frizzled homologi 3 ilmaistiin suhteellisen alhaisempi metastasoituneen maksasyövän ja metastasoitunut munuaisten selkeä karsinooma kanssa polttoväli ja erittäin heikkoa värjäytymistä kuin muut etäpesäkekasvainkudoksen tyyppejä. Sitä vastoin frizzled homologi 3 immunosytokemiallisessa tulokset peräsuolen adenoomia synkroniseen peräsuolen karsinoomat olivat huomattavasti korkeammat kuin puhdasta peräsuolen adenoomien. Tilastollinen analyysi osoitti, että frizzled homologi 3 immunosolukemiallisten tulokset liittyi Dukes vaiheessa ja imusolmuke tila. Lopuksi ositettu ryhmiä kolorektaalisyövän potilaista oli merkittäviä eroja niiden toistuminen /etäpesäke ja selviytymistä. Johtopäätöksenä on, että esillä oleva laajamittainen tutkimus on selvästi osoittanut, että frizzled homologi 3 proteiini voi tuottaa kliinisesti tärkeitä tietoja peräsuolen syövän potilaille.

Citation: Wong SCC, hän CW, Chan KML, Chan AKC, Wong HT, Cheung MT, et al. (2013) kliinistä merkitystä Frizzled Homologi 3 Proteiini peräsuolen syövän Potilaat. PLoS ONE 8 (11): e79481. doi: 10,1371 /journal.pone.0079481

Editor: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japani

vastaanotettu: 05 toukokuu 2013; Hyväksytty 23 syyskuuta 2013 Julkaistu: 08 marraskuu 2013

Copyright: © 2013 Wong et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Direct Grant The Chinese University of Hong Kong (Project Code: 2041412) ja yksityinen lahjoitus. Kuitenkin rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on kolmanneksi eniten diagnosoitu syöpä maailmanlaajuisesti, mikä vastaa yli 1 miljoonaa tapausta ja 600000 kuolemantapausta vuosittain [1]. Kehittäminen CRC on monivaiheinen prosessi, ja tätä tautia voidaan hallita, jos havaitaan varhaisessa vaiheessa, kun se on useimmiten oireeton [2-4]. Huolimatta huomattavia parannuksia havaitsemiseen, diagnosointiin ja hoitoon CRC viime vuosikymmeninä pitkän aikavälin ennusteen metastaattisen CRC potilaista on edelleen heikko [5,6]. Kliiniset todisteet osoittavat, että nykyinen lavastus kriteerit, jotka perustuvat kliinisiin ja patologisten havaintojen vaikka äskettäin tarkistettu, eivät heijasta vaihtelua ennustetta ja selviytymisen metastasoineeseen CRC [7]. Siksi tarkka ennustetekijöitä markkeri, joka 1) määrittää biologinen luonne ja käyttäytyminen CRC, ja 2) heijastaa selviytymisen eroja ja kliinisiä kokemuksia, olisi erittäin tärkeää optimoida yksilöllistä hoitoa CRC potilaista.

Wnt tekijät käsittävät suuren perheen eritettyjen glykoproteiineja, jotka osallistuvat alkion kehitykseen säätelemällä kudoksen kuviointi, organogeneesin, erittely kehon suunnitelman ja edistää kudosten homeostaasin aikuisten [8]. Solutasolla, Wnt tekijät ohjaavat lisääntymistä, erilaistumista, selviytyminen, liikkuvuuteen ja napaisuus [9]. Tiukka valvonta Wnt signalointi on ratkaisevaa oikean orkestrointi kehitys ja poikkeava konstitutiivisen aktivoitumisen Wnt-signalointireitin johtaa hallitsemattomaan soluproliferaatioon, kasvua ja selviytymistä, siksi edistää syövän kehittymistä [9]. Frizzled homologin proteiini (FZD) on seitsemän pass transmembraanisen tyypin reseptorin ja kymmenen jäsentä (FZD1-FZD10) on tunnistettu ihmisellä [10]. Wnt on ligandi, FZDs ja koostuu 19 perheen geenien ihmisillä [11]. Sitoutumisen Wnt-ligandien niiden solupinnan reseptorit transdusoi solunsisäisiä signaaleja joko kanonisen tai ei-kanoninen Wnt-signalointireitin. Kanonisessa Wnt-signalointireitin aktivaatio, Wnts sitoutuvat kompleksin FZD ja low-density lipoprotein liittyvät reseptorit 5 ja 6 [12-14]. Tulokseksi saadut signaalit estää β-kateniinin fosforylaation multiproteiinikompleksissa koostuu adenomatoottisen polypoosin coli, glykogeenisyntaasikinaasi 3β, casin kinaasi 1 ja axins, ja edistää vakauttamista sytosolin β-kateniinin, joka osa siitä translokoituvat tumaan [12- 14]. Ydinvoima β-kateniinin yhdistävät T-solujen tekijä /lymfosyyttien tehostajana transkriptiotekijöitä aktivoida kohdegeenien osallisena solujen selviytymistä, proliferaatiota tai invaasio [12-14]. Ei-kanoninen Wnt-signalointireitin koostuu Wnt /Ca

2+ polku ja Wnt /c-Jun N-terminaalisen kinaasin (Planar solun polariteetti) reitti ja Wnts sitoutuvat kompleksin, joka koostuu FZD, reseptorityrosiinikinaasi-like orporeseptoria 2 /reseptori liittyvät tyrosiinikinaasi aktivoimiseksi alavirran signalointia [12-14]. In Wnt /Ca

2+ reitin, Wnt aktivoi solunsisäistä Ca:

2+ signalointi, samoin kuin Ca

2+ – riippuvaisten proteiinikinaasien, kuten proteiinikinaasi C: n ja kalmoduliinin riippuvaisen proteiinikinaasin II [12- 14]. Vuonna Wnt /JNK-reitin, reseptorin stimulaatio aktivoi Dishevelled, joka puolestaan ​​aktivoi Rho perheen GTPaaseja kuten RhoA ja Rac [12-14]. RhoA stimuloi c-Jun ilmaisun fosforylaation c-Jun Rho liittyvät kinaasin [12-14]. Yhteenvetona FZD on keskeinen rooli sekä kanoninen ja ei-kanoninen reittejä.

Human

FZD3

kartoitettiin kromosomiin 8p21 [10,15].

FZD3

mRNA ilmentyy erilaisissa normaaleissa kudoksissa (luustolihasten, munuainen, haima, pikkuaivot ja aivokuori) [10] katsoo, että on säädelty useilla syöpiä (ruokatorven syöpä, keuhkosyöpä okasolusyöpä, ensisijainen akuutti ja lymfaattinen leukemia, myelooma, lymfooma ja Ewingin sarkooma) [16-19]. Tuoreessa raportissa on todettu, että

FZD3

mRNA ilmentyi pienessä kohortin satunnaista adenooman ja familiaalinen adenomatoottisen polypoosin adenooma kudoksissa [20]. Merkitys ei tiedetä vielä, joten on mielenkiintoista tutkia ilmentymistä FZD3 proteiinin suuren ikäluokan ensisijaisen ja metastaattisen CRC näytteitä ja suolen kasvainten (CAD) näytteet. Saadut tiedot on erittäin hyödyllistä, että tutkia ennustetekijöiden mahdollisuuksia FZD3 proteiinia potilailla, joilla on CRC. Lisäksi ilmaus FZD3 proteiinin muunlaisia ​​metastasoituneen syöpien tutkittiin myös, jotta voidaan tutkia, onko FZD3 proteiinia voidaan käyttää lisänä diagnostinen merkkiaine metastaattisen CRC.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Tutkimus suoritettiin periaatteiden mukaisesti ilmaistu Helsingin julistus. Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta tai lähiomaiset käytettäväksi näiden näytteiden tutkimuksessa. Koska potilas suostumusta ei ollut mahdollista arkistointia kudoksia kuten jotkut potilaat kuollut aikaan tutkimuksen, eettisen komitean nimenomaan luopuneet tarvetta suostumusta niille potilaille. Tutkimuksen hyväksyi Clinical Research Ethics komitean Queen Elizabeth Hospital, Hong Kongin erityishallintoalue (HKSAR).

kudosnäytteiden

Seitsemän kohortteja formaliinia kiinteiden, parafinoidut (FFPE ) näytteet otettiin palvelukseen: 1) CRC Dukes luokitusjärjestelmän vaiheessa A (43), vaihe B (48), vaihe C (63), vaihe D (32), yhteensä: 186, 2) CAD lievää dysplasia (25), kohtalainen dysplasia (28), -kar- (26), yhteensä: 79, 3), ja peräsuolen polyyppien, joka on erityisesti määritelty ei-adenomatoottisen tai ei-neoplastisia polyypit, jotka koostuvat nuorten (35), hyperplastinen (40), Peutz-Jeghersin ( 28) ja tulehduksellinen polyypit (30), yhteensä: 133, 4) yksi FFPE lohko imusolmuke etäpesäke kustakin Dukes C näytteestä, yhteensä: 63, 5) yksi FFPE lohkon jokaisessa on imusolmuke ja etäpesäkkeiden kustakin Dukes D näytettä, yhteensä: 64, 6) kolmesataakymmenen kuin CRC metastasoitunut karsinoomia joka primaarikasvaimen oli vastaavasti maksasolusyövän (HCC) (23), munuaisten kirkas cell carcinoma (RCCC) (25), levyepiteelisyöpä (SCC1) (30) , keuhkojen adenokarsinooma (LAC) (25), keuhkojen ei-pienisoluinen karsinooma (LNSCC) (27), papillaarinen kilpirauhasen karsinooma (PTC) (24), rintasyöpä (BC) (28), munasarja kirkas cell carcinoma (OCCC) ( 30), kohdunkaulan ei-pienisoluinen karsinooma (CNSCC) (20), munanjohtimen vakavien adenokarsinooma (FTSAC) (22), siirtymäkauden cell carcinoma (TCC) (23), pienisoluinen karsinooma (SCC2) (15) ja syövän kanssa neuroendokrii- erilaistumiseen (CND) (18), 7) yksilöt neljäkymmentä CRC potilaista (10 Dukes A, 10 Dukes B, 12 Dukes C, 8 Dukes D) samanaikainen esiintyminen CRC, adenooma ja polyyppi (120), haettiin arkistoista (2005-2008) on Anatomical patologian ja sytologian laboratorio, Patologian osasto, Queen Elizabeth Hospital, Hongkongin, sillä FZD3 immunosytokemiallisia (ICC) värjäys.

Useimmat tapaukset peräsuolen adenokarsinooman ensimmäisen kohortin olivat kohtuullisesti erilaistunut (78%), kun taas loput joko hyvin eriytetty (5%) tai huonosti eriytetty (17%). Sukupuoli jakauma adenokarsinooma potilaista oli 58% oli miehiä ja 42% naisia. Ikä vaihteli 42-89 vuotta vanhoja. Niistä 79 adenooma näytteet tutkitaan kohortissa 2, 59% oli putkimainen, 35% oli tubulovillous, ja 6% oli villous adenoomia. Prosenttiosuudet lievä, keskivaikea ja vaikea dysplasia adenoomissa olivat 32, 35 ja 33, tässä järjestyksessä. Sukupuoli jakauma adenooma potilaista oli 53% oli miehiä ja 47% naisia. Ikä vaihteli 28-85 vuotta vanhoja. Polyypit arvioidaan kohortissa 3 oli nuoruusiän (26%), hyperplastisessa (30%), Peutz-Jeghersin (21%), ja tulehduksellinen polyypit (23%). Niistä 133 polyypit, sukupuoli jakauma oli 51% oli miehiä, 49% naisia ​​ja ikä vaihteli 23-76 vuotta vanhoja. Kliinistä tietoa potilailla, joilla on samanaikainen esiintyminen CRC, adenoomien ja polyypit seitsemännessä kohortin olivat kohtuullisesti erilaistunut (75%), samoin eriytetty (7%) tai huonosti eriytetty (18%). Sukupuoli jakauma adenokarsinooma potilaista oli 60% oli miehiä ja 40% naisia. Ikä vaihteli 45-87 vuotta vanhoja.

Vasta

Monoklonaalinen hiiren anti-humaani FZD3-vasta-ainetta (1: 100 laimennos, klooni 169310, MAB1001, R 1 = heikko; 2 = kohtalainen; 3 = voimakas; ja 4 = erittäin vahva. ICC pisteet vaihtelivat 0 400. pisteytystä prosenttiosuuden ja värjäytymisen intensiteetti oli suunnattu 1) CRC-solut, 2) CAD soluihin ja 3) viereisten normaali epiteelisolujen. Kalvomainen värjäys olisi odotettu tulos. Kuitenkin kokemuksemme osoitti, että ICC värjäytymistä käyttäen diaminobentsidiiniä kromogeenina tuottaisi paksuuntunut kalvo värjäys, joka oli samanlainen kuin sytoplasminen värjäys. Lisäksi vasta-aine käytetään tässä tutkimuksessa oli paras suoritus vasta-aineet, jotka oli testattu.

Tilastollinen

Ero ICC tulokset FZD3 proteiinin keskuudessa CRC, CAD ja viereisen normaalit peräsuolen epiteelisolujen tutkittiin epäparametrinen Kruskal-Wallisin testiä. Lisäksi epäparametrinen Spearmanin testiä käytettiin tutkimaan, FZD3 ICC tulokset korreloivat CRC etenemisen ja Dukes luokitus vaiheissa. Mann Whitneyn U-testiä käytettiin tutkimaan, ICC tulokset CAD synkroniseen peräsuolen karsinoomat oli merkittävä ero niille puhdasta CAD. Korrelaation kliinisiin parametreihin, monimuuttuja regressio käytettiin analysoimaan, FZD3 ICC pistemäärät korreloi kliinis-histopatologinen tekijät potilaista ja Khin neliö testiä käytettiin tutkimaan yhdistyksen välillä FZD3 ICC tulokset ja toistuva tai metastaattinen CRC. Yleinen eloonjääminen määritettiin, että alkaen operaation kuolinpäivä johtuu syövästä. Kaplan-Meier-menetelmää käytettiin määrittämään eloonjäämistodennäköisyys ja log-rank testiä käytettiin vertaamaan selviytymisen ryhmien välillä ja Coxin suhteellisten riskien mallia käytettiin määrittämään riippumaton ennustetekijöiksi selviytymistä. (Statistical Package for Social Sciences Version 16.0 Windowsille, IBM SPSS tilastot, Chicago, IL., USA).

P

arvo 0,05 pidettiin tilastollisesti merkittävä kaikissa analyyseissä. Kaikki

P

arvot kaksisuuntaisia.

Tulokset

ICC värjäystä

Kuten ICC värjäystä ja arviointia jakso, paksuuntunut kalvo värjäys jotka muistuttivat sytoplasminen värjäys havaittiin. Niistä 955 diat olemme tutkineet, yksilöiden välisiä eroja havaittiin vain 16 diat (1,7%) ja päästiin keskustelun jälkeen käyttäen multi-johdossa mikroskoopilla.

ICC värjäys osoitti, että FZD3 ekspressoitiin 100% (186/186) ja CRC näytteistä, 89% (70/79) CAD-näytteistä, 75% (100/133) ja peräsuolen polyypit yksilöiden ja 69 % (129/186) normaaliin peräsuolen epiteelikudosten vieressä CRC kudoksiin. Edustaja mikrovalokuva kunkin yksilön tyyppi ensimmäiselle kohortti kuvassa 1. Positiivinen kontrolli ruokatorven syöpä osoitti voimakasta positiivista sytoplasmista värjäytymistä taas negatiivinen kontrolli ei ole ICC värjäytymistä (kuviot 1E ja 1F). Yksityiskohtainen analyysi osoitti, että immunoreaktiivisuus FZD3 proteiinin, kuten ICC tulokset, oli merkittävä ero keskuudessa CRC, CAD, peräsuolen polyyppi ja normaali peräsuolen epiteelin kudosten (kuvio 2,

P

0,0001, Kruskal-Wallis testi) ja valikoima ja mediaani ICC tulokset eri näytteestä tyyppejä on esitetty taulukossa 1. FZD3 ICC tulokset korreloivat voimakkaasti kanssa vaiheiden etenemistä CRC (

P

0,0001, Spearmanin ). Lisäksi ICC tulokset FZD3 proteiinin CRC yksilöitä korreloi merkitsevästi Dukes vaiheessa (kuva 3,

P

0,0001, Spearmanin testi). Lisäksi meidän havainnot osoittivat, että FZD3 ekspressoitiin 100% metastasoituneen CRC soluja imusolmukkeisiin tai /ja kaukana elinten Dukes 3 ja 4 yksilöitä, vastaavasti (kuva 4). Mukaisesti näitä tuloksia, jatkoimme tutkia FZD3 voidaan käyttää lisänä diagnostinen markkeri metastasoineeseen CRC suorittamalla FZD3 ICC värjäytymistä 310 ei-CRC metastasoitunut yksilöitä. Tulokset osoittivat, että FZD3 ekspressoitiin 17% (4/23) HCC, 12% (3/25) ja RCCC, 80% (24/30) ja SCC1, 84% (21/25) LAC, 82% (22/27) ja LNSCC, 88% (21/24) PTC, 86% (24/28) BC: n, 80% (24/30) ja OCCC, 85% (17/20) ja CNSCC, 82% (18/22) ja FTSAC, 74% (17/23) ja TCC, 100% (15/15) ja SCC2 ja 100% (18/18) CND (kuviot 5A ja 5B). Tapauksissa, joissa positiivisia tuloksia, yksityiskohtainen tutkimus osoitti, että värjäytyminen oli keskeinen ja erittäin heikko HCC, RCCC verrattuna kuin muissa elimissä (kuviot 5B ja 6).

Paksusuolisyöpä

peräsuolen adenooman

peräsuolen polyyppi

Vieressä normaalin epiteelikudoksen

määrä specimens18679133186Range ICC scores243 4000 ja 3470-3600 ja 279Median ICC tulokset 32724119297.5Table 1. valikoima ja mediaani ICC tulokset eri näytteestä tyyppejä.

CSV Lataa CSV

(A) Prosenttia erilaisia ​​ei-CRC metastasoitunut karsinoomia kanssa FZD3 ICC värjäys ja (B ) ICC tulokset FZD3 eri kuin CRC metastasoitunut karsinoomia. (HCC = maksasyövän, RCCC = munuaisten kirkas cell carcinoma, SCC1 = okasolusyöpä, LAC = keuhkojen adenokarsinooma, LNSCC = keuhkojen ei-pienisoluinen karsinooma, PTC = papillaarinen kilpirauhassyövän, BC = rintasyöpä, OCCC = munasarja- kirkas cell carcinoma , CNSCC = kohdunkaulan ei-pienisoluinen karsinooma, FTSAC = munanjohdin vakavien adenokarsinooma, TCC = siirtymäkauden cell carcinoma, SCC2 = pienisoluinen karsinooma ja CND = karsinooma kanssa neuroendokriininen erilaistuminen).

Samankaltaisia havainnot löydettiin yksilöiden kanssa samanaikainen esiintyminen kolorektaalikarsinooma, CAD ja peräsuolen polyyppien. ICC värjäys FZD3 havaittiin 100% (40/40) CRC, 93% (37/40) ja CAD, 70% (28/40) paksusuolen polyyppi. Lisäksi FZD3 ICC tulokset korreloivat voimakkaasti kanssa vaiheiden etenemistä CRC (

P

0,0001, Spearmanin testi). Kiinnostaa, ICC tulokset CAD synkroniseen peräsuolen karsinoomat olivat huomattavasti korkeammat kuin puhdasta CAD (

P

0,001, Mann Whitneyn U-testi, kuva 7).

monimuuttuja regressioanalyysi

monimuuttuja regressioanalyysiä käytettiin tutkimaan, FZD3 ICC tulokset korreloivat kanssa clinicohistopathological tekijät 186 Dukes AD CRC potilaille. Merkitseviä löydettiin Dukes vaiheessa (

P

0,001) ja imusolmukkeesta tila (

P

0,05), mutta ei ikä (

P

= 0,547) , sukupuoli (

P

= 0,813), kasvain vaiheessa (

P

= 0,284) ja eriytyminen (

P

= 0,462).

Toistuva tai metastaattinen CRC

Mediaani määrä FZD3 ICC pisteitä 154 Dukes A-C CRC potilaille oli 321,5. Käyttämällä tätä mediaani numero kuin cut-off-piste, 27 potilasta, joilla FZD3 ICC pisteet 321,5 ja 8 potilaalla on FZD3 ICC pisteet ≤ 321,5 ollut toistuvia tai metastasoitunut CRC jälkeen seurannan 42 kuukautta ja yhdistyksen välistä FZD3 ICC tulokset ja uusiutuva tai metastaattinen CRC oli erittäin merkitsevä (Chi-square test: χ

2 = 13,34

P

0,001).

eloonjäämisaste CRC potilaiden

Kokonaiselossaoloaika -käyrät piirrettiin CRC potilaalla on FZD3 ICC tulokset 327 ja ne, joilla FZD3 ICC pisteiden ≤ 327, jossa 327 on mediaani määrä FZD3 ICC pisteitä 1

st kohortin 186 Dukes A-D CRC potilaille. Tuloksemme osoittivat, että selviytyminen niille 2 potilasryhmille oli merkitsevästi erilainen (

P

0,0001, log-rank testi, kuvio 8A). Jotta analysoida tietoja tarkempi tavalla FZD3 ICC pisteet jaettiin 4 ryhmään kohdistamisen jälkeen se alenevassa järjestyksessä: 1) korkea FZD3 lauseke: korkein 25% (76%: sta 100%) ICC tulokset, 2) kohtalaisen korkea FZD3 ilmaus: toiseksi korkein 25% (51%: sta 75%) ICC tulokset, 3) kohtalaisen alhainen FZD3 ilmaus: toiseksi alhaisin 25% (26%: sta 50%) ICC tulokset ja 4) alhainen FZD3 lauseke: alin 25% (0 %: sta 25%) ICC tulokset. Kuten kuvioissa 8B ja 8C, selviytyminen ryhmien välillä 1 ja 4 sekä ryhmän 2 ja 3 olivat merkittäviä (

P

0,0001 A vs D ja

P

0,05 B vs C, log-rank-testi). Lopuksi riippumaton ennustetekijöiksi kokonaiselinaika tunnistetaan Coxin suhteellisen vaarat regressiomallin todettiin FZD3 ICC pisteet (

P

= 0,016) ja imusolmukkeesta tila (

P

= 0,037) .

Keskustelu

FZD3 on reseptori Wnt-signalointireitin ja FZD3 proteiinin kehittämisen vaatimien suurten kuitujen yhtymäkohtaan rostraalisen keskushermostossa [22], hermostopienan [23] ja karvatupen kehittämiseen [24]. Lisäksi FZD3 proteiini on hallitseva rooli Wnt-indusoidun neuriittien Ewing sarkooma kasvainsoluissa [25], ja se on erittäin ilmaistaan ​​huonosti eriytetty okasolusyöpä ruokatorven karsinooma kudoksissa [16]. Parhaan tietomme mukaan tämä tutkimus on ensimmäinen tutkia kliinistä merkitystä FZD3 proteiinin ilmentymisen suuren kohortin CRC ja sen premaligneja CAD ja peräsuolen polyyppien yksilöitä. Huolimatta siitä, että FZD3 ekspressoitiin 100% CRC yksilöitä, 89% CAD yksilöitä, 75% paksusuolen ja peräsuolen polyypit yksilöiden ja 69% viereisen normaalin paksusuolen ja peräsuolen epiteelikudosten, immunoreaktiivisuus FZD3 oli merkittävä ero joukossa 4 ryhmien yksilöitä. Lisäksi FZD3 proteiinin ilmentymistä CAD mikä näkyy meille ottelujen kuin aikaisemmassa tutkimuksessa, joka FZD3 mRNA ilmaistaan ​​79% (11/14) CAD yksilöitä mediaani kertainen muutos 6,5 [26]. Kuitenkin FZD3 mRNA vasta havaittiin olevan merkittävä ylössäätöä 39% (9/23) CRC yksilöt samassa tutkimuksessa [26]. Syyt osuus tästä ristiriitaisten tulos voidaan selittää seuraavista syistä: 1) pieni määrä (23) CRC yksilöt palvelukseen verrattuna meidän, 2) mRNA havaittiin taas proteiini havaittiin tutkimuksessamme, 3) vieressä normaali kudokset olivat sekoitettu CRC kudoksiin ei mikrodissektion suoritettiin tutkimuksessaan. Viimeinen kohta on erityisen merkittävä, koska vaihteleva astetta vierekkäisten normaaleissa kudoksissa yleensä löytyy kirurgisista näytteistä ja meidän Tulosten mukaan FZD3 ekspressoitiin paitsi 69% vierekkäisten normaalista peräsuolen epiteelin kudoksia, mutta myös fibroblasteissa, endoteelisolujen, lymfosyyttien ja histiocytes (tietoja ei ole esitetty). ICC värjäys kudosleikettä antaa meille mahdollisuuden tutkia yksittäisen solun mikroskoopilla ja siksi FZD3 proteiinin ilmentyminen kasvainsoluissa ja normaaleissa soluissa voidaan erikseen mitata. Todellisuudessa ICC värjäys FZD3 proteiinia oli paitsi voimakkaampaa leviämisrintamassa kuin kasvain keskustassa, mutta myös erittäin tiukkana kaikilla metastaattisen imusolmukkeisiin ja kaukaisiin elimiin. Tämä huomattava havainto voi osoittaa, että FZD3 proteiini on tärkeä rooli paitsi alussa CRC Karsinogeneesin mutta myös CRC metastaattisen koulutusjakson imusolmukkeisiin ja kaukaisiin elimiin. Kuitenkin polttoväli polarisoitunut jakelu FZD3 mikä näkyy Pourreyron et al. ei löytynyt meidän kohortin yksilöiden [27]. Jatkoimme tutkimaan mahdollisuuksia FZD3 proteiinin lisänä diagnostinen markkeri metastaattisessa CRC suorittamalla ICC värjäystä erilaisia ​​ei-CRC metastasoitunut karsinoomia. Tuloksemme ovat erittäin mielenkiintoisia, sillä ICC värjäyksen FZD3 oli positiivinen vaihtelevassa määrin kaikissa metastaattisen karsinoomia. Kuitenkin positiivista värjäytymistä vain 17% HCC ja 12%: RCCC osoittaa, että FZD3 proteiini voi olla niin olennaisia, että metastaattisen prosessin näiden 2 karsinoomien (kuviot 5A ja 5B). Yhteenvetona FZD3 ICC värjäystä voi olla hyödyllistä sulkea kyseisiä 2 karsinoomat kun patologinen diagnoosi koska värjäytyminen oli keskeinen ja erittäin heikko näissä FZD3 värjäystä positiivinen HCC ja RCCC tapauksissa verrattuna kuin muissa elimissä. Toisaalta, FZD3 ekspressoitiin metastasoitunut karsinoomia, jotka sisältävät SCC1, LAC, LNSCC, PTC, BC, OCCC, CNSCC, FTSAC, TCC, SCC2 ja CND. Nuo uudet tulokset voivat osoittaa, että FZD3 proteiini voi olla mukana metastaattisen prosessin näiden karsinoomien. Itse asiassa, voimakas värjäytyminen FZD3 proteiinin kaikissa tapauksissa CND ja SCC2 ei ole yllättävää, koska FZD3 proteiini on hyvin tiedetään olevan osallisena keskushermoston kehityksen [22,23,28]. Mukaisesti näitä tuloksia, tällä hetkellä tutkia FZD3 proteiinin ilmentymistä omilla primaarikasvainten niille 11 tyyppisiä metastasoivaa ei-CRC karsinoomia, joilla on korkea FZD3 proteiinin ilmentymistä, jotta on enemmän ymmärrystä roolista FZD3 proteiinin eri karsinogeneesissä väyliä.

Toinen mielenkiintoinen havainto tässä tutkimuksessa on, että mediaani ICC pisteet CAD liittyy synkroninen peräsuolen karsinoomat on paljon suurempi kuin ryhmästä, joka koostuu puhtaasta CAD, mikä viittaa siihen, että suuri FZD3 proteiinia ilmentyminen CAD voi merkitä korkeampaa maligniteetti potentiaali.

perimmäisenä tavoitteena Tämän tutkimuksen tarkoituksena on tutkia kliinistä merkitystä FZD3 proteiinia potilailla, joilla on CRC. Koska tällä hetkellä ei niukka patologisesti käytetään ennustetekijöitä merkkiaine CRC ja siksi se on arvokasta tutkia ennustetekijöiden mahdollisuuksia FZD3 proteiinia, joka on osoitettu tässä tutkimuksessa merkitsevä korrelaatio FZD3 ICC tuloksesi Dukes vaiheessa imusolmuke tilan uusiutuminen tai etäpesäke. Lisäksi pitkän aikavälin seurannassa näiden CRC potilaista osoitti, että potilas, jolla on korkea FZD3 ICC pisteet voi olla vähemmän selviytymismahdollisuudet. Oikeastaan ​​yksilöt jossa FZD3 ICC tulokset 327 olivat pääasiassa vaiheiden III ja IV potilaat taas ne, joilla on FZD3 ICC tulokset ≤ 327 olivat enimmäkseen vaiheiden I ja II potilaat. Tämä voi olla yksi selitys, miksi vaiheiden III ja IV potilailla on suurempi riski syövän uusiutumiselle, etäpesäke ja lyhyempi selviytymistä kuin vaiheissa I ja II potilaat. Tarkempi analyysi tietojen luokittelemalla sen 4 ryhmään niiden ekspressiotaso voi antaa meille enemmän tietoa ennustetekijöiden merkityksestä FZD3 proteiinin CRC potilailla. Merkittävä ero selviytymisen korkean ja matalan ilmaisun ryhmien odotetaan taas marginaalinen merkittävää eroa (

P

0,05) eloonjäämisen välillä kohtalaisen korkea ja kohtalaisen heikkoa ilmentymistä ryhmät muodostavat vankan näytön siitä, että FZD3 proteiini on tärkeä prognostisia teho. Toteuttanut kaikki nämä toteamukset yhdessä, FZD3 ICC värjäys voi mahdollisesti olla arvokas väline ennusteeseen CRC. Voidakseen vahvistaa nämä toteamukset, iso monikeskustutkimus, jossa pitkän aikavälin seurannassa tutkimaan sen ennustetekijöiden merkitys valmistellaan parhaillaan. Ihmisen Wnt5A, Wnt5B ja Wnt11 edustavat kaanoniin Wnts transdusoivat Wnt /Planar solun polariteetti signaaleja FZD3 reseptorien [10,29-31]. Tuore tutkimus on osoittanut, että Wnt vastaus polut järjestettiin uudelleen alussa ja peräsuolen syövän synnyn negatiivisena säätelijänä Wnt-signalointireitin, alasti kynsivalliin homologi 1 induktio oli mukana ajan sääntely β-kateniinin riippumaton FZD3 reseptorin CAD ja CRC [26]. Lisäksi FZD3 ei vastannut vakauttamiseen β-kateniinin

in vitro

ja edellytti Wnt ligandia signaalin [26]. Siksi FZD3 voi antaa viitteitä aste Wnt ligandin signalointia peräsuolen kasvain. Itse asiassa pieni kohortin yksilöt (20), jossa vahvaa ja heikkoa positiivista FZD3 rekrytoitiin ja suora vertailu FZD3 immunovärjäyksen kuin beeta-kateniinin tehtiin ja havaittiin, että ei ollut korrelaatiota FZD3 ja beeta-kateniinin immunovärjäyksellä (tuloksia ei ole esitetty). Tämä havainto voi roolin vahvistamiseksi FZD3 ei-kanoninen Wnt-signalointireitin. Yhdessä päätuloksia, ilmentymistä FZD3 proteiinin eri kliinisissä vaiheissa CRC voidaan edelleen osoittaa kliinistä merkitystä FZD3 potilailla, joilla on CRC. Seuraava askel on tutkia taustalla molekyylitason mekanismeja, jotka säätelevät FZD3 ilmaisun ja suoran transkription kohdegeenien FZD3 käyttämällä erityisiä knockdovvn FZD3 mukaan Sirna CRC solulinjoissa koska täsmähoitoihin käyttäen molekyylimarkkereina on tärkeä tavoite parantaa tuloksia potilailla, joilla on CRC. Lisäksi havaitseminen FZD3 proteiinin potilaan seerumi käyttämällä entsyymi-immunologinen määritys tutkitaan myös, jotta voidaan arvioida, onko seerumin FZD3 proteiinia voidaan käyttää ei-invasiivisia merkki. Kuitenkin merkittävä rajoitus tämän tutkimuksen on, että meillä ei ole kliinistä tietoa arvioidakseen suorituskykyä FZD3 proteiinin vertaamalla sen ilme tavanomaisiin CRC markkeri, kuten seerumin karsinoembryonaalisesta antigeeni.

Yhteenvetona FZD3 proteiinin ilmentyminen, kuten on esitetty ICC värjäys läheisesti korreloi peräsuolen syövän synnyn ja etenemisen, ja voi mahdollisesti toimia uutena prognostinen markkeri. Lisäksi FZD3 ICC värjäystä voi olla hyödyllistä jättää HCC ja RCCC metastaattisessa sivustoja.

Kiitokset

Olemme kiitollisia professori Benjamin Y. M. Yung ja Mr. Chiu Ka Yue erinomaisesta tuesta.